3R理论的形成、发展及在生命科学研究中的应用

一、3R理论的形成及发展 3R是Reduction(减少)、Replacement(替代)和Refinement(优化)的简称. Reduction是指在科学研究中,使用较少量的动物获取同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多试验数据的方法. Relacement是指使用其他方法而不用动物所进行的试验或其他研究课题,达到某一试验目的.或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法.

清洁级Wistar大鼠标准指标

目的 :建立清洁级 Wistar大鼠的正常生理、血常规及生化指标。方法 :分别选取 6周龄、 12周龄、18周龄和 3 0周龄的清洁级 Wistar大鼠 ,雌雄各 2 0只。测量动物的主要生理指标 (生长曲线、体重回归方程、脏器系数和大、小肠长度 )、血常规及生化指示。结果 :雄性动物的体重增长趋势比雌性动物高 ;随着年龄的增长 ;脏器系数逐渐降低。相同年龄段动物的 WBC、GR%、AL T、AL P、L DL-CHOL雄性比雌性明显偏高 ( P<0 .0 1) ;而 TP、 AL B、 TRIG比雌性动物明显偏低 ( P<0 .0 1)

年龄因素对Wistar大鼠部分血液学血液生化指标及脏器系数的影响

为探讨年龄对大鼠部分生理指标的影响，本实验分别测定了２（２０只）、５（２０只）和８（２０只）月龄大鼠的１０项血液学、８项血液生化指标和６－７项脏器系数，结果发现，随着年龄的增长，大鼠血液ＲＢＣ、ＨＧＢ及ＨＣＴ值升高，血清ＧＰＴ、ＧＯＴ及ＴＰ值也升高，而血清ＡＬＰ、ＧＬＵ值降低。脏器系数中以脑、肝、肾降低明显。此外，血清ＢＩＬ值的变化为８月龄＞２月龄＞５月龄，而睾丸相对重量的变化为８月龄＞２月龄＞５月龄。

低氧条件下豚鼠肺Clara细胞超微结构的观察和定量分析

本文观察了正常成年豚鼠Clara细胞的超微结构和模拟海拔高度5000m 24h、48h和72h后的改变,并对SER和某些细胞器作了定量分析。正常豚鼠Clara细胞顶部充满大量SER和分泌颗粒,GA较发达,表明该细胞为活跃的分泌细胞。低氧24h后Clara细胞呈现早期应激状态。低氧48h和72h后SER和GA高度囊性扩张,体积密度增加,分泌颗粒数目密度增加,但平均体积在72h组明显下降。这些结果表明低氧导致Clara细胞超微结构改变,功能亢进,分泌增强,提示该细胞可能参与表面活性物质的形成。

在Internet网上动态传递实验动物信息

以实例介绍“广东省实验动物信息网”的动态实验动物信息网页－ 数据查询及远程数据采集系统设计过程，并简介了使用方法。设计结果表明，用Ｗｉｎｄｏｗｓ 和Ｗｉｎｎｔ 作为工作平台，以ＭＳＳＱＬＳｅｒｖｅｒ 作为数据库管理工具，辅以ＷＥＢ 技术、Ｖｉｓｕａｌ Ｂａｓｉｃ 语言及ＭＳ系列软件，可以较为轻松地完成本网中所有数据库管理和调用的设计，形成完整的一套数据处理及应用系统。

利用RAPD标记分析近交系小鼠的遗传多态性

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)标记 ,分析了BALB/c、C5 7BL/6、DBA/2、C3H/He近交系小鼠的遗传多态性。结果表明 ,上述小鼠表现出了各自不同的多态性RAPD标记 ;RAPD可作为近交系小鼠的分子标记 。

大白鼠坐骨神经再生轴突可塑性的研究——辣根过氧化物酶(HRP)示踪观察

用HRP逆行示踪法,对成年大白鼠两侧坐骨神经端端吻合术后,再生轴突可塑性作了研究。术后1—12月不同时间内,在吻合端左侧0.8cm处,再横断坐骨神经,放入HRP,存活2天,取材观察。结果表明:所有动物脊髓腰骶段两侧前角均出现HRP标记细胞。标记细胞数量随吻合术后时间增长而增加。左侧前角较右侧前角标记细胞多。说明受损的坐骨神经轴突能再生,各自进入对侧的坐骨神经,向脊髓方向延伸。但是,仅部分再生轴突能延伸过缝合处的组织痂。本实验提示再生轴突的可塑性,它受环境因素的影响。

“赞育丹”对大鼠LRH模型睾丸和GTH细胞超微结构的影响

以大剂量LRH-A200μg/次,隔日皮下注射持续60天,造成雄性大鼠生殖功能障碍的动物模型。以“赞育丹”进行实验性治疗,以电镜技术为手段,对模型组、中药组和对照组动物的睾丸和垂体促性腺激素(GTH)细胞进行观察。结果表明,“赞育丹”对大剂量LRH类似物的抗精子发生效应有一定的拮抗作用;同时也表明,中医“肾主生殖”理论与下丘脑—垂体—性腺轴有关。

6—8周龄Wistar大白鼠血清谷丙转氨酶的抽样测试与统计分析

对６－８周龄Ｗｉｓｔａｒ大白鼠随机抽样，♂１３６只，♀１３７只，眼底静脉丛抽血，用赖氏法测血清谷丙转氨酶，按统计学原理进行统计，并对总体正常值范围估计。结果，♂：Ｘ±Ｓ＝４０．１３±１４．１３，μ±ＳＸ＝４０．１３±１．２１，μ的可值区间估计为３７．７２－４２．５４（９５％可信度和３６．９５－４３．３１）９９％可信度。正常值范围估计为１３－６９（含９５总体）和９－７７（含９９％总体）：♀：Ｘ±Ｓ＝

人参皂苷Rg_1和Rh_1抗肿瘤作用的研究

目的 :研究人参皂苷 Rh1及其前体 Rg1的整体及离体抗肿瘤作用。方法 :整体实验 4种小鼠移植性肿瘤 :小鼠宫颈癌 - 1 4( U14 )、艾氏腹水癌 ( EAC)、肉瘤 - 1 80 ( S180 )和肝癌腹水型 ( Hep A)腋部皮下接种 ,于接种 1 0 d内 ,每天给药 1次 ,计算各给药组肿瘤抑制率。离体抗肿瘤实验用 3种瘤株 :A375 - S2、T98G 和 He La。结果 :人参皂苷 Rg1( 2 0 0 mg·kg-1,灌胃 )和 Rh1( 4 0和2 0 mg· kg-1,腹腔注射 )对 U14 均具有明显的抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ;人参皂苷 Rh1在较高剂量( 4 0 mg·kg-1)时 ,对 EAC也有明显抑制作用 ( P<0 .0 1 )。但人参皂苷 Rg1和 Rh1对 S180 和 Hep A无抗肿瘤作用。离体实验证明 ,Rg1对 He La细胞的增殖有明显的抑制作用 ,Rh1高剂量组( 1 0 0 mg· L-1)对 3种肿瘤细胞均有明显抑制作用。结论 :人参皂苷 Rh1较其前体

3Rs与生命科学研究

３Ｒｓ与生命科学研究张玉勋第一军医大学实验动物学教研室（广州５１０５１５）从１９９５年动物学家Ｒｕｓｅｌ和微生物学家Ｂｕｒｃｈ在其著作《ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＨｕｍａｎｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅ》中首次提出３Ｒｓ以来，３Ｒｓ－Ｒ...

普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规的测定与比较

目的 测定普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规指标并进行比较。方法 Coulter -JT全自动血常规检测仪自动检测。结果 普通级、SPF级SD大鼠白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度、红细胞平均分布宽度相差非常显著 (P <0 0 1) ;中性粒细胞、单核细胞相差显著 (P <0 0 5 )。普通级、SPF级Wistar大鼠白细胞计数、中性粒细胞、单核细胞、红细胞计数、红细胞平均体积、平均红细胞血色素量相差非常显著 (P <0 0 1) ;血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度相差显著 (P <0 0 5 ) ,其他指标相差不显著。结论 不同微生物学环境对SD。

RP-HPLC法测普鲁托品在大鼠体内分布和排泄

目的 用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定大鼠的尿、粪、肝和脑等组织中普鲁托品 (protopine ,Pro)的药物浓度 ,并对Pro在大鼠体内的分布和排泄过程进行研究。方法 流动相为甲醇、水和体积分数 2 0mol·L- 1 乙酸 (80∶2 0∶2 ) ,以ODS C1 8柱分离 ,紫外检测器检测 ,波长为 2 85nm ,生物样品在碱性条件下 ,经两次乙醚处理 ,可获得良好的分离效果。为全面了解Pro在大鼠体内的代谢过程 ,给大鼠尾静脉注射Pro 1 0mg·kg- 1 后 ,测定不同时间各组织中Pro的含量。结果 静脉给药后 ,Pro快速分布到肺、肾、脾、脑、小肠、心脏、脂肪、睾丸、肝脏、胃壁及骨骼肌、以肺、肾、脾、脑、肠组织中药物浓度较高 ,尤以肺组织浓度最高。药后 3h各组织中药物浓度下降 ,但睾丸中仍维持较高浓度。实验还发现 ,药后 5min即可测得尿中有原形药 ,1 2h尿中累积排泄量为给药量的 30 .2 1 % ,48h尿中累积排泄量为给药量的 36 87%。原形药经胆汁及粪排泄量不足 1 %。药后 5min及 1 5min血浆蛋白结合率均低于 5 %。结论 普鲁托品在大鼠体内广泛分布 ,部分经尿排泄 。

Wistar大鼠插线法局灶性脑缺血/再灌注模型的实验研究

目的：局灶性脑缺血／再灌注模型是研究缺血性脑血管病的重要模型。本文介绍一种简便易行的插线法Ｗｉｓｔａｒ 大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型的制备方法，并通过神经病学评分、ＴＴＣ染色、病理形态学变化的观察，对该模型的可靠性进行评价。方法：用头端处理过的尼龙钓丝，从颈外动脉向颈内动脉插入，可逆性阻断大鼠一侧大脑中动脉（ＭＣＡ）。结果：大鼠ＭＣＡ阻断后１．５ｈ，同时出现Ｈｏｒｎｅｒ＇ｓ征阳性、提尾悬空时梗塞对侧前肢屈曲、内收、自主运动时身体向偏瘫侧划圈的动物，ＴＴＣ染色能清楚地显示梗塞范围，且相对较稳定，光镜下可见脑缺血后的病理改变。阻断后３ｈ及再灌注３、６ｈ时的病理改变加重，神经病学评分同前。结论：该改良法制备的模型简便易行、稳定性好、结果可靠，是用于研究局灶性脑缺血／再灌注的较为理想的实验动物模型。

survivin基因在化疗药物诱导的肺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨survivin基因在化疗药物顺铂 (DDP)和足叶乙苷 (VP16 )诱导的肺癌细胞凋亡中的作用。方法 用肺腺癌A5 4 9细胞株进行培养传代 ,MTT试验检测DDP和VP16不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用 ,实验分为 :DDP、VP16和对照组。DDP和VP16组的肺癌细胞又分为高浓度和低浓度化疗药物处理组。用逆转率PCR检测sur vivin基因的表达。同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果 不同浓度VP16和DDP对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用 ,并有浓度和时间的依赖性。化疗药物组细胞凋亡率和survivin基因表达抑制率高于对照组 ,也有时间依赖性。

利用RAPD技术分析实验用比格犬的遗传背景

目的 运用RAPD技术对实验用比格犬 (Beagle)进行遗传背景分析。方法 筛选的 16个RAPD引物对 4 0个样品的分析 ,共得到 93个扩增条带。结果 所有样品的相似系数 80 4 %到 10 0 %间变动 ,平均相似系数为93 2 8% ,聚类分析得到了这些个体的同源树资料。

Wistar乳鼠中脑黑质器官型脑片的培养

【目的】探索中脑黑质器官型脑片的培养方法 ,寻找一种较好的帕金森病组织模型材料。【方法】选出生 5d～ 7d的Wistar乳鼠 ,制备中脑黑质层面脑片。用Millicell CM微孔膜将脑片放置在培养液和气体界面上培养。分为培养 0d、10d、2 0d和 30d 4组 ,进行倒置显微镜观察、酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化和电镜超微结构观察。【结果】培养 10d和 2 0d的脑片与 0d对照组相比无明显差异。培养 30d脑片发现有部分神经元变性坏死 ,胶质细胞明显增生 ,TH阳性神经元减少。同时发现在脑片长期培养过程中存在“微血流”现象。【结论】Millicell CM膜的中脑黑质器官型脑片培养是一种简便有效的神经组织体外培养方法 。

三七皂苷单体Rg1对D-半乳糖模型鼠学习记忆和免疫功能的影响

目的 :探讨三七皂苷单体 Rg1对 D-半乳糖 ( D- gal)所致衰老模型鼠学习记忆行为和免疫功能的影响。方法 :Balb/c小鼠随机分为 4组 :衰老模型组、正常对照组、实验 组和实验 组。应用跳台和 Y-型迷路方法测定 D-半乳糖衰老模型鼠学习记忆行为 ;采用 3 H- Td R掺入法测定小鼠胸腺、脾细胞的增殖能力 ;生物活性检测法测定 IL- 2和 TNF- α水平的变化。结果 :三七皂苷单体 Rg1能明显提高衰老模型鼠对电刺激的逃避能力 ,改善 D- gal所致学习记忆能力下降。同时三七皂苷Rg1能明显增强衰老模型鼠胸腺和脾细胞增殖能力 ,对 IL- 2水平有所提高 ,血清 TNF- α的细胞毒作用较模型组降低。结论 :三七皂苷单体 Rg1能改善衰老模型鼠学习记忆能力并调节免疫功能。