上海市普陀区食品中单核细胞增生李斯特氏菌的监测与分析

目的了解上海市普陀区食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)的污染状况、分子分型特征及耐药性。方法选取2021—2023年从上海市普陀区各采购渠道所采集的8类食品,共计504件,对其LM阳性率进行检测,对分离鉴定所得的阳性菌株进行分子分型,并进行药物敏感性试验。结果504件样品中,共有22件样品检出LM,总检出率为4.4%,其中调理肉制品检出率最高(9.1%)。22株LM获得18个带型,带型相似度为42.11%~100.00%。22株LM对头孢西丁均耐药,部分菌株对克林霉素、苯唑西林、氨苄西林、红霉素、四环素耐药,耐药率分别为27.3%、18.2%、4.5%、4.5%、4.5%,多重耐药率为36.4%。结论上海市普陀区的肉与肉制品受LM污染最为严重,其中菌株PFGE带型呈多样性,且多重耐药比例较高。

常见细菌性食源性疾病研究进展

细菌性食源性疾病在全球范围内非常普遍,并对公共卫生和个人健康造成了影响。常见的3种食源性病原菌分为沙门氏菌、大肠杆菌和志贺氏菌,本文针对其形态特征和食源性致病机制,以及诊断细菌性食源性疾病的方法、有关细菌性食源性疾病治疗方案等进行综述,以期为临床实践和预防措施的制定提供理论依据。

赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.

大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立

目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析。结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好。检测大肠杆菌O157的最低检出浓度为1×105cfu/ml。方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测。结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。

食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒素检测

[目的]对3个可疑食物中毒样品进行金黄色葡萄球菌及肠毒素检测。[方法]按照GB/T4789.10-2003进行金黄色葡萄球菌检测,同时设计4对引物,分别扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc基因)和相关肠毒素基因(SEA、SEB、SECs),建立一种快速检测金葡菌和肠毒素的方法。[结果]3个样品通过增菌接种,均检出有完全溶血环、G+葡萄球菌,血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌;Baird-Parker直接计数菌落结果分别为:9.6×107cfu/g、1.5×105cfu/g、1.7×108cfu/g;PCR检测3个样品均扩增出了金黄色葡萄球菌nuc基因(279bp)和肠毒素A(SEA)基因(288bp)。[结论]3个样品中均检出含有葡萄球菌肠毒素A的金黄色葡萄球菌,是引起该次食物中毒的主要原因。

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布

目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检测方法。从生牛奶中分离的29株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SED和SEG-SEJ基因,没有检测到SEE基因。毒素基因携带率为65.5%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占37.9%。有SEA基因的占51.7%,含其它传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占17.2%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI和SEJ的菌株占41.4%。结论:建立的PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素基因的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,而且携带新发现的肠毒素基因的较多。

T-2毒素对胎儿软骨细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响及硒的保护作用

目的探讨T-2毒素对软骨细胞凋亡的作用,和对凋亡调控蛋白Bcl-2与Bax表达的影响,以及微量元素硒对软骨细胞的保护作用.方法采用电镜,Annexin V/PI法检测T-2毒素致人软骨细胞凋亡的情况,采用流式细胞仪检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变;不同浓度(1～20μg/L)的T-2毒素均可以引起软骨细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加,且在一定范围内呈浓度依赖性,T-2毒素浓度为20μg/L时早期凋亡率最高达5.60%,晚期凋亡率最高达8.61%.生理浓度的微量元素硒可部分减弱T-2毒素引起的凋亡;不同浓度(1～20μg/L)的 T-2毒素都能引起Bcl-2和Bax表达水平提高,浓度为10～20μg/L时,Bax/Bcl-2比值升高;硒能部分对抗T-2毒素引起的Bcl-2和Bax 表达的提高,使Bax/Bcl-2比值下降,以降低凋亡率.结论 T-2毒素在浓度为1～20μg/L时,可以引起软骨细胞凋亡;T-2毒素引起的软骨细胞凋亡与软骨细胞内Bax/Bcl-2比值升高有关,硒对T-2毒素引起的软骨细胞凋亡有一定保护作用.

改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。

荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立

针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。

细菌性痢疾流行特点及志贺菌耐药性研究

目的研究近年来肠道门诊细菌性痢疾流行概况及志贺菌耐药特点,为细菌性痢疾临床治疗和预防控制提供依据。方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养,可疑菌株经VITEK-32细菌鉴定仪及血清凝集鉴定到群,K-B法检测抗菌药物的耐药性,纸片确认试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),三维试验检测AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)。结果 279例细菌性痢疾感染患者主要以宋内志贺菌(201株,占72.4%)和福氏志贺菌(76株,占27.2%)感染为主,且患者主要集中在0～11岁年龄段,占总感染率的71.3%(199/279),高发季节为7-11月。药敏结果显示,志贺菌对氨苄西林、哌拉西林和复方新诺明的耐药率较高,均>60%;对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率较低,均<40%,未发现耐哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南的志贺菌。151株志贺菌纸片确认试验为产ESBLs阳性菌株,占54.1%(151/279);未发现AmpC酶阳性者。结论我院肠道门诊细菌性痢疾以感染宋内志贺菌和福氏志贺菌的婴幼儿为主,且宋内志贺菌有增高趋势,2种志贺菌对部分种类的抗菌药物药敏性差别较大,临床医师应根据菌群鉴定及药物敏感试验结果合理选择抗菌药物。

沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR快速检测体系的初步探讨

目的建立能在12小时内同时快速检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR体系。方法碱性蛋白胨水(BPW)非选择性增菌6h;100℃10min制备DNA模板;根据大肠杆菌O157∶H7的uidA基因、志贺菌的ipaH基因及沙门菌的invA基因序列设计各菌引物,进行PCR扩增及电泳检测。同时优化反应体系,测定体系灵敏度和特异性。结果该多重PCR体系能在12h内同时检测3种目的菌;灵敏度为10～30cfuml;通过对23株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论初步探讨出能在12h内快速、灵敏、特异地同时测定沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR体系。

椰毒假单胞菌酵米面亚种16S rDNA序列测定与分析

本文对３种不同来源样品的４株椰酵假单胞菌的１６ＳｒＤＮＡ的序列进行了测定，以确定其系统发育位置及与其它菌种的遗传进化关系。实验中设计了７条引物，利用聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍａｓｅＣｈａｉｎＲｅ－ａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增４株细菌的１６ＳｒＤＮＡ，通过扩增产物的克隆测序或直接测序，获得了它们的１６ＳｒＤＮＡ序列，将测得的序列与伯克霍尔德氏菌属中其它菌种的１６ＳｒＤＮＡ序列进行了聚类分析，得到了系统发育进化树状图。树状图及不同菌种之间的同源性比值：椰酵假单胞菌（Ｐ．ｃｏｃｏｖｅｎｅｎａｎｓｓｕｂｓｐ．ｆａｒｉｎｏｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）与唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｇｌａｄｉｏｌｉ）、椰毒伯克霍尔德氏菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｏｃｏｖｅｎｅｎａｎｓ）的亲缘关系非常近，与其它菌种的亲缘关系相对较远，椰酵假单胞菌、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌和椰毒伯克霍尔德氏菌可归属于一个独立的系统发育系。

多重聚合酶链反应快速检测嗜水气单胞菌和爱德华菌

目的根据嗜水气单胞菌株和爱德华菌株16S rDNA基因的结构特点,设计合成了二对引物XZAH3、XZAH4和XZE7b、XZE8,建立了一种同时检测鉴别嗜水气单胞菌株和爱德华菌株的多重PCR技术。试验结果表明,用这两对引物对嗜水气单胞菌和爱德华菌株进行多重PCR,嗜水气单胞菌株只扩增出361bp一条带,而爱德华菌株只扩增出576bp一条带,而对其他鱼病病原的扩增不出现任何条带,结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重PCR最低能检出10pg的嗜水气单胞菌株、爱德华菌株的DNA模板。

松茸提取物体外抑制染发剂致突变作用

目的 寻找安全有效的抗突变生物资源 ,为降低染发剂致突变危害提供实验依据。方法 采用修改的Ames试验 ,观察真菌植物松茸提取物对染发剂致突变作用的影响。结果 松茸提取物能显著抑制染发剂的致突变作用 (P <0 0 1) ,对测试菌株TA97、TA98和TA10 0 的诱发回变菌落形成的抑制率最高分别达到 96 9% ,99 6 %和 95 4 % ,其抑制作用间存在明显的剂量 反应关系。

2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌的病原学特征

目的 了解2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌分离株的血清型别、抗菌药物耐药性、毒力基因携带情况以及分子分型特征。方法 对广州市2010—2013年食源性疾病监测中分离到的108株副溶血性弧菌进行血清分型、药敏试验以及耐热直接溶血毒素基因（tdh）、耐热相关溶血毒素基因（trh）的PCR检测,并进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型。结果 2010—2013年广州市副溶血性弧菌的主要血清型为O3：K6（51株,47.2%）、O1：KUT（32株,29.6%）。药敏检测结果显示,分离株对氨苄西林（90.7%）和头孢吡肟（28.8%）耐药率较高,而对复方新诺明、氯霉素则100.0%敏感。多重耐药分析显示,2010—2013年分别有53.6%（15/28）、20.6%（7/34）、18.8%（3/16）、33.3%（10/30）的分离株同时耐受≥3种抗菌药物。毒力基因PCR检测显示,95.4%（103/108）的分离株为tdh＋trh-,4.6%（5/108）的分离株为tdh-trh＋。PFGE显示,108株副溶血性弧菌经NotⅠ酶切后的PFGE图谱可分为3个聚类,55个PFGE型别,相似值为60.2%~100%。优势血清型O3：K6和O1：KUT主要集中于聚类Ⅱ,O4：K8血清型主要集中于聚类Ⅲ。结论 2010—2013年广州市食源性疾病监测副溶血性弧菌优势血清型为O3：K6和O1：KUT型,菌株对多数抗菌药物仍然比较敏感,但存在多重耐药现象,多数菌株携带tdh基因,PFGE结果提示广州市食源性监测副溶血性弧菌存在遗传多样性。

伏马菌素B_1免疫检测方法的研究

本研究建立了用于检测粮食、饲料中伏马菌素Ｂ１（ＦＢ１）的快速、灵敏、简便的免疫检测方法—建立在单克隆抗体基础上的直接竞争性酶联免疫吸附测定方法（ＤＣ—ＥＬＩＳＡ法）；其最低检出浓度为１０ｎｇ／ｍｌ，线性范围在１０ｎｇ～５μｇ／ｍｌ。对新疆、安徽、黑龙江、哈尔滨四省市玉米样品中的ＦＢ１含量进行了测定，结果表明１５６份样品中有３４份检出ＦＢ１，阳性率为２１．７９％，含量在０．１８～３１．３２μｇ／ｇ范围内，平均含量为１２．０４μｇ／ｇ。

椰毒假单胞菌食物中毒尸检3例

1案例 1.1案例1 某镇一家6人（夫妻及子女）于某年3月24日晚至3月26日晨先后5次进食发酵苕渣粑做成的稀饭,3月27日开始相继出现口干、呕吐、腹胀、厌食等症状,经中医治疗,未见好转。

杭州市不同样品中副溶血性弧菌污染状况检测

目的了解杭州市食品和菜肴加工环节副溶血性弧菌污染状况及冷菜间厨师粪便带菌情况,为防制副溶血性弧菌食物中毒提供科学依据。方法依据国家标准GB/T4789.7-2003进行检验。结果431份海产品检出副溶血性弧菌49份,检出率为11.37%;77份冷菜检出2份,检出率为2.60%;403份加工环节采样样品检出24份,检出率为5.96%;300份冷菜间厨师粪便检出1份,检出率为0.33%。结论杭州市海产品、冷菜和菜肴加工环节均存在不同程度的副溶血性弧菌污染;冷菜间厨师粪便带菌率较低。

食源性致病病毒基因芯片方法检测

目的将基因芯片技术用于食源性致病病毒诺如病毒、轮状病毒、甲肝病毒、星状病毒和脊髓灰质炎病毒的检测,达到同时检测2种以上病毒的需求。方法采用基因芯片方法检测贝类食品中引起人类腹泻的5种食源性致病病毒。结果所研制的检测5种病毒的基因芯片具有良好的特异性,在5种病毒之间无交叉反应;其灵敏度与荧光PCR方法基本一致;芯片在4℃条件下,保存7.5个月,性能稳定。结论建立了检测5种食源性病毒的基因芯片方法,同时该方法也可用于医疗检验目的。为基因芯片在微生物检测领域的应用提供基础依据。