TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌

建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。

2020-2023年辽宁省小肠结肠炎耶尔森菌表型分布和分子特征研究

目的通过研究表型分布和分子特征的关联性,了解辽宁省小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,YE)的流行趋势,为辽宁省YE病的监测和防控提供数据支撑。方法对2020-2023年辽宁省60株YE分离株进行血清分型、生物分型、毒力基因检测和PFGE、MLST分子分型研究。结果60株YE分离株可分为4个血清型、2个生物型、8个毒力基因型和29种ST型。2023年40株YE分离株分为8组PFGE优势带型A-G,A组为2023年沈阳市地区流行分子型。PFGE的分辨力(DI)为0.954,MLST分辨力(DI)为0.948。ST3、ST252位于树状图核心位置向四周发散。PFGE较MLST方法分辨力稍高。结论2020-2023年辽宁省YE分离株流行致病血清型是O∶3,毒力基因型和ST型均呈现多样化状态。沈阳市YE污染较严重。应重点加强对于生物1A型菌株的研究工作。猪是辽宁省地区重要的宿主和传染源。PFGE和MLST对YE分离株分型均是可行的,ST分型与PFGE分型具有一致性。

2018—2019年辽宁省副溶血性弧菌临床和食品分离株分子流行病学分析

目的了解辽宁省副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VP)的流行特征,为辽宁省食源性疾病的防控和应急事件的处置提供可靠的技术支持。方法对2018—2019年辽宁省301株临床和食品VP分离株进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、毒力基因(tlh、tdh、trh)鉴定及耐药试验。结果除了59株VP分离株不能进行血清学分型外,其他分离株共分为17个血清型,血清型以O3群、O1群和O2群为主。血清型O3与O1群分离株相似度高。PFGE主要分成11组优势带型,A-K组,其中A-G组为主要流行致病分子型。临床分离株毒力基因携带情况主要为tlh+、tdh+、trh-,食品分离株毒力基因携带情况主要为tlh+、tdh-、trh-。VP分离株主要对β-内酰胺类(CFZ和AMP)、大环内酯类抗菌药物(ERY)耐药。即食食品分离株耐药率远高于非即食食品分离株。结论由于即食食品的特殊性和来自于国外的特性,这些菌株具有引起食源性疾病暴发流行的高风险,应高度重视。部分食品分离株也具有引起食源性疾病的风险,应给予关注。相关部门除了应加强对国内海产品及其抗菌药物使用管控外,更应加强对进口海产品的监管。

生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组序列分析

目的了解生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的全基因组序列特征,分析其耐药基因和毒力基因的分子特征差异。方法采用全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定;通过肉汤微量稀释法进行药物敏感性检测;利用生物信息学工具对全基因组测序结果进行分子特征分析。结果SJ23319菌株和SJ23506菌株经鉴定均为MRSA;SJ23319菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX,SJ23506菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX-CC,耐药基因分析结果显示两个菌株均携带耐药基因mecA和blaZ,这与耐药表型结果基本一致;2个菌株染色体基因组大小、结构和功能蛋白相似,SJ23319菌株为ST59-t437-SCCmecIVa型,SJ23506菌株为ST398-t034-SCCmecV(5C)型;2个菌株功能蛋白均分布于21个直系同源簇(cluster of orthologous group,COG)条目中,携带13种相同的耐药基因,SJ23319菌株还携带有四环素类耐药基因tet(K);2个菌株携带毒力基因多达67种,SJ23319菌株携带更多的细菌黏附相关基因(fnbA/B、sdrD/E)和外毒素基因(Seb、Selk、Selq、set16-26)。结论SJ23319(ST59)菌株比SJ23506(ST398)菌株携带更多的耐药基因和毒力基因,致病性更强,进一步证明在牲畜相关的MRSA(livestock-associated MRSA,LA-MRSA)菌株中,ST59型比ST398型更容易导致社区流行和感染,应当在MRSA流行监测中更加重视。

宜春市2015—2017年食品中金属污染物检测结果分析

目的了解宜春市2015—2017年食品中铝、铅、镉、汞等金属的污染状况,发现食品安全隐患,为制订相应控制措施提供实验依据。方法按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中《食品中元素全分析的标准操作程序》,对9种食品进行铝、铅、镉、汞等金属检测。结果采集各类食品共303份,其中检测铝含量样品236份,超标15份,超标率6.36%;检测铅含量样品269份,超标3份,超标率1.12%;检测镉含量269份,超标15份,超标率5.58%;检测汞含量样品269份,没有超标样品。结论宜春市食品金属含量合格率较高,但个别食品仍然有不同程度的金属污染,尤其是油条中铝污染较为严重,相关部门应加强监督管理。

淮安市218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因检测和耐药性分析

目的 了解淮安市婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染现状及其对药物敏感、主要毒力基因携带情况。方法2022~2023年抽取淮安市七个县区的婴幼儿奶粉及婴幼儿辅助食品共218批,根据GB4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》蜡样芽胞杆菌平板计数法(第一法)进行检测,并进行药物敏感性试验,采用荧光定量PCR对检出的蜡样芽胞杆菌进行溶血性(hblC)基因、非溶血性基因(nheB)、呕吐毒素基因(ces)检测。结果 218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌检出39批次,检出率达17.89%。在23种药物敏感性试验中,蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、阿米卡星、替考拉宁、万古霉素、氯霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、诺氟沙星敏感率100%,对环丙沙星、米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、莫匹罗星高浓度、复方新诺明、苯唑西林敏感率分别为97.44%、92.31%、89.74%、82.05%、38.46%、23.08%、20.51%、5.13%,对达托霉素非敏感,对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药。溶血性hblC基因携带率高达100%,非溶血性基因nheB携带率为58.97%,本次试验未检出呕吐毒素基因ces。结论 婴幼儿食品蜡样芽孢杆菌检出率较高且检出菌中携带至少一种毒力基因的概率高达100%。对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药,对达托霉素、苯唑西林等药物敏感性差,可为临床用药方案提供指导。

2014—2022年北京市肠道门诊分离的肠出血性大肠埃希菌分子分型特征分析

目的 了解北京市肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)分子特征及流行趋势。方法 收集2014—2022年北京市肠道门诊分离到的肠出血性大肠埃希菌,通过药敏试验及全基因组测序及数据分析,以了解病原的药物敏感性及分子特征。结果 共收集到14株EHEC,其中4株为多耐药菌株;多位点序列分型(multi-locus sequence type, MLST)分析ST11型占比最高(5/14);血清分型O157:H7占比最高(6/14);全基因组单核苷酸分型(whole genome single nucleotide polymorphism, wgSNP)结果显示6株O157:H7菌株分成一簇,其他菌株分成一簇;14株北京分离到的EHEC和美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站下载的678株中国及周边国家分离的大肠埃希菌全基因组数据wgSNP分型,没有形成明显的地域性聚集,均以散发分布为主。结论 EHEC仍是北京市肠道传染病重要的病原菌,需要进一步加强EHEC监测。

呼和浩特市居民日常食用蔬菜中高氯酸盐污染调查

为掌握呼和浩特地区蔬菜高氯酸盐污染的基本情况,分析其对人体的健康风险,在呼和浩特市随机采集92份蔬菜样品,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定高氯酸盐含量,计算危害商数,评价蔬菜中高氯酸盐对人体的健康风险。结果发现,92份蔬菜样品中有53份检测出高氯酸盐,检出率57.6%,浓度范围为ND~1.076 mg·kg^(-1)。白菜类蔬菜是高氯酸盐检出浓度最高的蔬菜类别,且高氯酸盐检出率为72.7%;种植环节蔬菜高氯酸盐检出率为81.0%,流通环节为38.0%,根据欧盟蔬菜高氯酸盐限量值判定,其超标率为27.2%。呼和浩特地区经蔬菜途径摄入高氯酸盐对人体的危害商数小于1,高氯酸盐污染水平可接受,相对安全。

2022年潍坊市食品中微生物监测结果分析

目的:通过监测分析潍坊市2022年食品中微生物的污染状况,为完善食品安全监管提供依据。方法:按照相关监测方案的要求在不同场所随机采样,对所获样品进行微生物检验,并分析检测结果。结果:在222份样品中,微生物阳性检出率为22.52%,主要包括即食生制水产品、直饮水、流动摊档、外卖配送餐等食品种类。食源性致病菌中蜡样芽孢杆菌(32.00%)及副溶血性弧菌(24.00%)的检出率较高。阳性检出率较高的场所主要包括社区制水点、学校、农贸市场、餐饮店等。不同采样时间、地点样品的阳性检出率差异不显著。结论:潍坊市食品中微生物阳性检出率,尤其是食源性致病菌检出率较高,提示潍坊市食品污染情况较为突出,存在引起食源性疾病的可能性,需进一步加强监管。

2022—2023年合肥市市售花生黄曲霉毒素B_1污染状况及膳食暴露风险评估

目的了解合肥市市售花生中黄曲霉毒素B_1(aflatoxins B_1,AFT B_1)污染情况,进行相应的膳食暴露和健康风险评估,为相关防控措施的制定提供参考。方法2022—2023年通过随机抽样的方式采集合肥市9个县(市、区)中的花生样品,使用同位素稀释液相色谱-串联质谱法对样品中AFT B_1的含量进行测定;通过问卷调查的方式了解合肥市人群的坚果消费情况,以坚果消费量代替花生消费量。分析不同特征人群经花生AFT B_1暴露的情况,估算暴露限值(margin of exposure,MOE)和肝癌发病风险。结果2022—2023年共对合肥市79份花生样品开展AFT B_1检测,检出率为45.57%(36/79),超标率为13.92%(11/79)。男性、女性坚果消费量分别为(4.61±6.12)g/d和(5.21±6.44)g/d,差异无统计学意义(t=1.279,P>0.05);6~17岁、18~59岁以及≥60岁人群的坚果消费量分别为(4.90±6.28)g/d、(3.53±5.66)g/d和(3.90±6.14)g/d,差异有统计学意义(F=7.134,P<0.01)。6~17岁、18~59岁和≥60岁人群经花生的AFT B_1每日膳食暴露量分别为1.70、0.99和1.04 ng/(kg·d),MOE分别为236、403和385,引发的肝癌发病风险分别为每年0.04例/10万人、0.03例/10万人和0.03例/10万人;当严格执行AFT B_1限量标准后,MOE分别为7003、11961和11438,发病风险可分别降至每年0.0015例/10万人、0.0008例/10万人和0.0009例/10万人。结论合肥市售花生样品中AFT B_1检出率较高,建议对合肥市花生中AFT B_1污染水平开展更加全面和持续性的监测工作,并积极采取有效的控制措施,以保障居民的食品安全。

2021—2023年淄博市活禽市场及规模养殖场禽流感病毒监测分析

目的:通过对淄博市外环境禽流感样本的检测结果进行分析,探讨淄博市禽流感病毒的分布特点、传播途径及其影响因素,为禽流感防控工作提供科学依据。方法:采集2021—2023淄博市辖区内4个区县的家禽规模养殖场和城乡活鸡活鱼市场的6类外环境禽流感样本,采用实时荧光定量分析法对样本进行病毒核酸检测,分析禽流感病毒在不同场所、标本中的分布情况,比较不同监测年度禽流感病毒阳性检出率的差异。结果:2021—2023年淄博市共采集外环境禽流感样本401份,A型阳性64份,阳性率为15.96%。其中,H9型57份(14.21%),占比最高,H5型1份(0.25%),H7型2份(0.50%),H5、H9型混合阳性4份(1.00%)。不同年度阳性检出率差异无统计学意义,不同监测场所和不同样本类型阳性检出率差异有统计学意义。结论:淄博市外环境中存在的禽流感病毒以H9亚型为主,其中城乡活禽市场是人感染禽流感的高危场所。

济南市食品和腹泻病人来源副溶血性弧菌分子分型及毒力基因分析

目的:了解济南市动物性海产品、腹泻患者来源副溶血性弧菌的脉冲场凝胶电泳分子分型特征以及菌株携带毒力基因的情况。方法:按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》的方法采集动物性海产品150份,依据《山东省食源性疾病主动监测工作手册》采集腹泻病人样本771份,对上述两类样本进行副溶血性弧菌分离。用脉冲场凝胶电泳对129株副溶血性弧菌进行分子分型和聚类分析,利用多重荧光PCR检测菌株毒力基因的携带情况。结果:动物性海产品来源副溶血性弧菌的总检出率为41.3%,腹泻病人副溶血性弧菌的检出率为6.1%~14.2%。动物性海产品和腹泻患者来源的129株副溶血弧菌可分为93个脉冲场凝胶电泳型别,相似性系数为35.1%~100.0%。患者来源的菌株带型相似系数高于85.0%的占比为90.4%,89.3%动物性海水产品来源的菌株带型相似系数低于85.0%。73株患者来源的菌株携带tdh基因的菌株占比为95.9%,携带trh基因的菌株占比为6.8%,4.1%的菌株同时携带两个毒力基因。动物性海产品来源的56株菌均不携带毒力基因tdh,携带耐热相关溶血素的菌株占比为3.6%。结论:两种来源的菌株在分子分型和毒力基因携带方面存在差异,动物性海产品携带副溶血性弧菌的比例较高,有必要进一步加强对动物性海产品副溶血性弧菌的监测,扩大采样量并增加菌落挑取数量以进一步明确该菌株的传播、流行特征,为制定防控策略提供科学依据。

2022年青岛市食品安全风险监测结果分析

目的:了解青岛市食品中的主要污染物以及有害因素的污染现状,及时发现食品安全隐患。方法:按照《2022年青岛市食品安全风险监测实施方案》及《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中的相关规定进行采样、检测。结果:2022年共监测8大类食品,采集共980份样品,合格率为95.00%。其中,化学污染物与有害因素监测合格率为91.30%,食源性致病菌监测合格率为98.01%。结论:青岛市食品安全水平保持稳定向好,但仍然存在食品安全隐患,较为突出的问题为海产品中的重金属污染。

山东省沿海地区市场销售贝类诺如病毒、甲肝病毒、轮状病毒和星状病毒污染状况调查

目的:为了解山东省沿海地区市场销售贝类肠道病毒污染情况,对贝类病毒污染进行初步风险排查和安全性分析。方法:采集山东省滨州、东营、威海、日照、烟台、潍坊共6个地市市场销售的贝类,包括牡蛎、贻贝、扇贝等7种,进行诺如病毒、甲肝病毒、轮状病毒和星状病毒实时荧光RT-PCR检测,并针对阳性样品的区域分布、种类分布、病毒分型和混合感染情况等进行分析。结果:GI型诺如病毒阳性率为3%,GII型诺如病毒阳性率为20%,其中东营、烟台和潍坊阳性率较高,烟台1份样品为GI/GII型诺如病毒合并感染;甲肝病毒、轮状病毒、星状病毒阳性率分别为4%、3%、3%,其中日照有2份合并感染样品,分别为甲肝/GII型诺如病毒合并感染、轮状/GII型诺如病毒合并感染。结论:山东沿海地市市场销售贝类存在肠道病毒感染的情况,尤以诺如病毒阳性率较高,且存在病毒合并感染。

2019—2023年潍坊市售蜂蜜中氯霉素、甲硝唑分布趋势分析

目的:了解潍坊市近5年市售蜂蜜中氯霉素、甲硝唑的分布趋势,为食品安全监测提供分析数据。方法:2019—2023年随机采集潍坊市售200份蜂蜜样品,采用超高效液相色谱三重四极杆联用技术进行检测,根据检测结果分析样本中氯霉素、甲硝唑分布趋势。结果:200份蜂蜜样本中,氯霉素、甲硝唑检出率均为4.5%。2019年与2020年的甲硝唑检出率有显著性差异(P<0.05);2020年与2021年、2023年的氯霉素检出率均有显著性差异(P<0.05);商品化包装和散装样品的氯霉素检出率有显著性差异(P<0.05);春、夏季采集样品中氯霉素检出率有显著性差异(P<0.05)。结论:潍坊市售蜂蜜样品中,甲硝唑和氯霉素检出率逐年下降。

2021年到2022年广州市某医院常见病原菌临床分布情况及耐药性分析

调查分析2021年到2022年广州市某医院常见病原菌临床分布情况及耐药性。方法 通过医院信息系统调取广州市某医院2021年1月至2022年12月存档的病原学标本检测数据,分析其病原菌检出数量、分布情况及前五种病原菌耐药性。结果 2021年到2022年医院共发现常见病原菌2572株,其中分布前五名的病原菌分别为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌,依次占据了总病原菌的16.02%、14.42%、14.27%、11.47%、10.89%;分析结果显示,分布前五名的病原菌对多种抗生素的耐药率均超过一半,仅对少数抗生素未产生耐药性。结论 分析医院常见病原菌临床分布情况及耐药情况,再以此为依据进行抗生素用药选择,掌握用药注意事项,能够明显减轻耐药性,进而保证感染控制效果。 。

2019—2023年泰州市稻米中4种元素污染特征及健康风险评估

目的:了解泰州市生产的稻米中总铬、总砷、镉、铅4种元素含量及污染状况,评估居民食用稻米引起的健康风险。方法:2019—2023年,每年采集40份新鲜成熟的稻米,共采集200份稻米。稻米自然晾干后去壳打碎,利用电感耦合等离子质谱法同时测定总铬、总砷、镉、铅4种元素的含量。结果:2019—2023年,泰州市生产的稻米中总铬、总砷、镉、铅含量均值分别为0.385 mg·kg^(-1)、0.136 mg·kg^(-1)、0.0289 mg·kg^(-1)、0.0114 mg·kg^(-1)。200份稻米样品中镉和铅元素含量均低于国家标准限量值,通过单因子污染指数值和内梅罗综合污染指数值判断稻米中镉和铅元素处于优良水平,稻米中镉和铅对人群健康的影响风险处于可接受水平;8份稻米样品中总铬含量超标,总铬含量整体处于轻度以下污染水平,总铬对人群健康的影响风险处于可接受水平;2份稻米样品中总砷含量超标,2021年总砷处于轻度以下污染水平,总砷对成人和儿童群体的健康具有一定的影响,但慢性毒效应较低。结论:泰州市新鲜稻米中总铬和总砷略有污染,砷对人体健康具有慢性影响,需进一步对稻米中砷含量进行精细化分析和评估。

调理鸡肉中沙门氏菌污染状况调查及抗生素耐药监测

目的:了解近年来潍坊市调理鸡肉中沙门氏菌污染状况,并进行抗生素耐药监测,为食品安全风险评估、安全标准修订提供依据。方法:2023年采集潍坊市市售调理鸡肉35份,按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》(GB 4789.4-2016)进行沙门氏菌分离鉴定,采用微量肉汤法开展耐药性监测。结果:35份调理肉样品中共有11份检出沙门氏菌,总检出率为31.4%;耐药实验结果显示,调理肉中沙门氏菌对多种抗生素产生耐药性,对氨苄西林、链霉素、头孢唑啉的耐药率最高,分别为93.3%、73.3%和73.3%。结论:潍坊市市售调理鸡肉中存在沙门氏菌污染,分离株对多种抗生素耐药。

鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

目的:对鸡源产气荚膜梭菌进行分离、鉴定和耐药性研究,以深入了解其生物学特性和潜在威胁。方法:利用TSC琼脂、血琼脂、硫酸亚铁牛乳培养基等进行分离培养,通过形态观察、生化特性鉴定,以及PCR鉴定和耐药性试验等多种方法,系统性地分析产气荚膜梭菌的性状和特性。结果:分离得到的3株产气荚膜梭菌经PCR鉴定均确认为A型。生化鉴定结果显示了其在碳源代谢上的多样性。毒素分型和16S rRNA基因分析验证了其种属身份,同时揭示了它们在分子水平上的相似性。耐药性试验结果表明,这些分离株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素、多黏霉素B和复方新诺明表现出耐药性,对头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋辛、氨苄青霉素和哌拉西林等抗生素则表现出高度敏感性。结论:本研究全面研究了鸡源产气荚膜梭菌的分子生物学特性,强调了其在碳源代谢和抗药性方面的多样性,为防控鸡源产气荚膜梭菌感染提供了重要的基础数据,同时为未来深入探究其致病机制和合理使用抗生素提供了科学依据。

市售肉品产志贺毒素大肠杆菌污染情况与耐药性分析——以泰安市为例

产志贺毒素大肠杆菌(STEC)是一类产生一种或一种以上志贺毒素的具有强致病能力的食源性病原菌,现已是威胁人类健康的重要公共卫生问题之一。本文以山东省泰安市为调查点,对商超和农贸市场零售肉中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的污染情况进行调研,170份零售肉样品中9份样品检出STEC阳性,检出率为5.3%;其中商超和农贸市场的检出率分别为3.1%和6.7%,无显著性差异(P>0.05)。通过聚合酶链式反应(PCR)研究24株STEC分离菌株的血清型、毒力基因的携带情况。24株STEC中12株确定O血清型,分别为O26(10株)和O45(2株)。主要携带的毒力基因为stx1,hlyA(62.5%,15/24)和stx2(37.5%,9/24)基因,eaeA基因未检出。通过纸片扩散法对24株产志贺毒素大肠杆菌菌株进行耐药性检测,分离株对麦迪霉素的耐药率最高91.7%,对阿莫西林、氨苄西林的耐药率均为37.5%,对头孢西丁和多粘菌素敏感。综上所述,泰安市零售畜禽肉品中存在STEC不同程度的污染,其中猪肉、牛肉引起食源性疾病风险较大。本研究为相关部门加强市售肉品中STEC的监控提供一定的指导。