基于网络药理学和实验验证探讨二氢杨梅素治疗炎症性肠病的作用机制

[目的]通过网络药理学和体外实验预测并验证二氢杨梅素(DHM)治疗炎症性肠病(IBD)的潜在靶点及作用机制。[方法]使用Pubchem数据库获取DHM作用靶点,通过GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB、Drugbank数据库获取IBD疾病靶点,获取药物与疾病的交集靶点。利用STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络并使用Cytoscape可视化筛选核心靶点。运用R语言进行基因本体(GO)功能分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。体外实验验证DHM的抗炎作用及可能机制。[结果]DHM作用靶点与IBD疾病靶点相交共得到42个交集靶点,并筛选出5个核心靶点凝血因子Ⅱ(F2)、内皮型一氧化氮合酶3(NOS3)、丝氨酸羟甲基转移酶1(SHMT1)、造血细胞激酶(HCK)、二氢叶酸还原酶(DHFR)。GO功能分析和KEGG富集分析显示DHM可能通过黏附连接、趋化因子、Ras信号通路等发挥作用。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)显示DHM能抑制脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)mRNA水平升高。RT-PCR提示在LPS诱导后靶点NOS3、HCK mRNA表达水平升高,而DHM干预后其表达水平下降。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测显示DHM能有效恢复LPS诱导的HT-29细胞连接蛋白的下调。[结论]研究揭示了DHM通过多通路、多靶点治疗IBD,并可能通过恢复细胞间连接改善屏障功能受损有效治疗结肠炎。

藕节炒炭止血有效活性部位及其成分筛选研究

目的:通过藕节炒炭前后提取物、藕节不同提取部位及有效成分对小鼠凝血时间的影响观察,验证藕节炒炭止血的科学性,确定藕节炭止血作用的有效部位,为探讨止血作用机制奠定基础。方法:采用小鼠凝血时间作为主要(毛细玻管法)观察指标,分别对藕节炒炭前后受试液、藕节不同提取部位及有效成分进行了测定,18～22g昆明种小鼠,按体重、性别均衡、随机分组,分别给予相应受试药物。每天给药1次,连续10天。于最后一次给药后60min,用毛细玻璃管自小鼠目外眦采血,自采血开始计时,观察自采血至出现血丝的时间作为凝血时间,比较受试药物组凝血时间的变化。结果:通过凝血时间试验,对生藕节提取物、藕节炭提取物进行了凝血时间影响的筛选,确定藕节炒炭后止血作用优于生藕节的止血作用。在前次实验基础上对藕节石油醚提取部位、醋酸乙酯提取部位、水提取部位进行了凝血时间影响的筛选,确定藕节止血作用的有效部位为醋酸乙酯部位和水提取部位。进一步观察藕节炭醋酸乙酯提取物、3-表白桦脂酸对小鼠凝血时间的影响,提示两组受试药均能缩短小鼠凝血时间。结论:藕节炒炭后止血作用加强,醋酸乙脂提取部位、水提取部位为藕节炭止血作用的主要活性部位3,-表白桦脂酸为藕节炭止血作用的有效成分之一。

山茱萸不同极性提取物降糖作用的研究

目的:对山茱萸不同极性的提取物进行初步药理学评价,探讨其对正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、血脂及胰岛素的影响。方法:(1)将山茱萸的水提取物、醇提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物(浓度皆为1g生药材/mL溶液)以7.5g生药材.kg-1对正常小鼠灌胃,连续7天,观察其降血糖作用。(2)通过灌胃四氧嘧啶(Alloxan)50mg.kg-1×3天分次注射造模建立的小鼠糖尿病模型,以相同剂量的山茱萸不同极性提取物连续7天灌胃,观察其降血糖作用及对胆固醇、甘油三酯和胰岛素水平的影响。结果:山茱萸不同极性提取物对正常小鼠的血糖水平无明显影响。山茱萸醇提取物、乙酸乙酯提取物组与模型组相比,可显著降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的血糖值(P<0.05),其中山茱萸醇提取物可显著提高血清胰岛素水平(P<0.05);山茱萸乙酸乙酯提取物可显著降低糖尿病模型小鼠血清中甘油三酯含量(P<0.01),山茱萸醇提取物对甘油三酯有降低趋势。结论:山茱萸醇提取物、乙酸乙酯提取物对糖尿病模型动物具有较好的降血糖和降血脂作用。

大孔吸附树脂对葛根总黄酮吸附性能的研究

测定分析了AB-8等6种不同极性大孔吸附树脂对葛根总黄酮的吸附特性。静态实验结果表明,树脂的极性和空间结构是影响吸附效果的重要因素。AB-8树脂孔径适当,比表面积较高,葛根黄酮吸附量达74.3 mg/g。进行了静态吸附动力学的研究,并获得总黄酮吸附量与吸附时间之间的定量关系。动态吸附研究表明,在温度为20℃时,以吸附流速4 mL/min和洗脱流速3 mL/min较合适。而重复使用约10次以后,该树脂应进行再生。

苦参碱对脂多糖／痤疮丙酸杆菌诱导的小鼠肝炎及产生肿瘤坏死因子的影响

用小鼠致死性肝炎模型和ＴＮＦ体外诱生的方法，研究苦参碱（Ｍａｔ）对脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）诱导的经痤疮丙酸杆菌（ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｔｔｍａｃｎｅｓ，ＰＡ）预刺激的小鼠产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）以及致死性肝炎的影响。结果表明：Ｍａｔ（１０，５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１），ｉｐ，ｂｉｄ×３ｄ）可降低血清ＴＮＦ和ＡＬＴ水平及小鼠对ＬＰＳ致死毒性的敏感性，并可在体外抑制ＬＰＳ诱导的经ＰＡ预刺激的小鼠腹腔巨噬细胞释放ＴＮＦ。提示Ｍａｔ的保肝作用与其抑制ＴＮＦ释放有关。

荜茇挥发油清除自由基作用及其与分子结构的关系

目的观察海南产荜茇挥发油清除自由基活性,探讨其与分子结构的关系。方法DPPH法检测清除自由基活性;GC-MS法分析其化学成分,并用谱库检索确定各化合物结构。结果①荜茇挥发油具有清除DPPH自由基的能力,且浓度越高,活性越强;②海南产荜茇挥发油含41个化合物,碳碳双键C=C的相对含量占绝对优势。结论碳碳双键C=C可能为荜茇挥发油清除自由基活性的必需官能团。

大孔树脂分离葛根总黄酮工艺优化

目的 :筛选分离葛根总黄酮的最佳树脂 ,并对影响分离的各种因素进行系统的研究 ,使分离工艺达到最优化。方法 :采用静态与动态的吸附 解吸两种方法 ,用紫外分光光度法测定葛根总黄酮的含量对工艺进行评价。结果 :SP70分离效果最好 ,其最佳工艺为药液浓度 0 .5 g·mL-1 (相当于原生药 )、pH为 5～ 6、上样量为 6 0BV(树脂床体积 ) ,以 2BV/h吸附速率进行吸附 ,4BV的 70 %乙醇、2BV/h的流速进行洗脱效果最佳。经SP70处理后的葛根总黄酮可达 80 %以上。结论 :该法简单可行 ,分离效果好 ,能满足于大生产的要求。

含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗流行性乙型脑炎的临床研究

目的观察含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗暑温风痰闭窍证(流行性乙型脑炎)的临床疗效及安全性。方法采用随机双盲和单盲对照法,与含天然牛黄的安宫牛黄丸对照研究,共治疗乙脑患者260例,其中含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗组182例,对照组78例。结果治疗组与对照组的愈显率分别为94.50%,88.46%,总有效率分别为99.45%,97.44%。两种牛黄的安宫牛黄丸均有较好的疗效,两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。ECG及实验室各项检查表明,两种牛黄的安宫牛黄丸对病人均无明显毒副作用。结论含体外培育牛黄的安宫牛黄丸治疗流行性乙型脑炎疗效显著。

大黄黄连泻心汤、理中丸对消炎痛型胃溃疡寒热证模型大鼠脑组织5-HT和NE含量的影响

目的:探讨消炎痛型胃溃疡中医寒热证模型的形成机制及寒热方剂对胃溃疡寒热证模型的基本作用机理和方证相应的客观规律。方法:采用寒热因素结合腹腔注射消炎痛法,建立大鼠胃溃疡寒、热证模型,用酶联免疫法检测大黄黄连泻心汤、理中丸对受试大鼠脑组织5-HT、NE含量的影响。结果:寒消、单寒与空白组比较5-HT含量明显升高(P<0.01),理中丸干预后,其含量明显降低(P<0.01或P<0.05);在NE方面,除单寒组外,各模型组与空白组比较均有不同程度的升高(P<0.01或P<0.05),大黄黄连泻心汤干预后,含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:通过"方证相应"理论验证了"病证结合"的胃溃疡寒热模型复制成功,为消炎痛型胃溃疡中医寒热证模型的成功建立提供了实验支持。

静态顶空进样气质联用法测定白玉兰花和紫玉兰花的头香成分

目的对比分析白玉兰花和紫玉兰花头香的化学成分。方法用静态顶空法收集白玉兰花和紫玉兰花的头香,并用GC-MS法对其进行了化学成分研究。结果从白玉兰花中鉴定出26种化合物,占挥发性成分总量的94.90%,从紫玉兰花中鉴定出25种化合物,占挥发性成分总量的87.62%,两者主要成分均为单萜类化合物。两者共有的化合物有16种,共有的主要萜类化合物有β-侧柏烯、β-蒎烯、β-月桂烯、桉油精、α-蒎烯、β-香叶烯等。在白玉兰花中主要成分依次是β-侧柏烯(21.90%)、β-蒎烯(12.78%)、β-月桂烯(11.89%)、桉油精(10.84%)、α-蒎烯(8.99%)、β-香叶烯(8.76%)。在紫玉兰花中主要成分依次是β-侧柏烯(16.06%)、β-香叶烯(13.24%)、十五烷(12.95%)、桉油精(10.18%)、α-崖柏烯(5.87%)。结论研究结果为进一步开发和利用白玉兰花和紫玉兰花奠定基础。

滴泉胶囊对鼠类前列腺增生影响的实验研究

目的 :观察滴腺胶囊 (萝摹 ,熟地 ,山茱萸 ,车前草 ,甘草 ,冬虫夏草菌丝体等 )对前列腺增生动物模型的影响。方法 :将SD大鼠去势 7天后皮下注射睾酮 4mg·kg- 1 同时给予 93 .8,1 87.5 ,375mg·kg- 1 的滴泉胶囊混悬液灌胃 ,连续 5周后处死检验。将 50只昆明小鼠前列腺处种植 1 6天的鼠胎生殖窦 ,同时给予滴泉胶囊并观察前列腺。结果 :大鼠和小鼠前列腺剂量组和模型组在前列腺指数 ,体积 ,背叶重量 ,腺体上皮高度 ,腺腔管径 ,酸性磷酸酶 ,DNA含量存在显著性差异。结论

HPLC法测定鲜益母草中盐酸水苏碱含量

目的建立测定鲜益母草药材中盐酸水苏碱含量的方法。方法采用HPLC法,色谱柱为氨基色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(80∶20);流速为1.0mLm/in;紫外检测波长192nm;柱温22℃。供试品溶液以乙醇为洗脱液,经活性炭-中性氧化铝层析柱过滤净化。结果选用氨基柱,盐酸水苏碱成分可得到较好的分离,盐酸水苏碱在2.29～11.46μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.26%,RSD为1.52%(n=5)。结论该方法稳定、重现性好,可作为鲜益母草药材中盐酸水苏碱的定量测定方法。

丹参总酚酸对慢性心衰大鼠肌浆网Ca^(2+)-ATP酶、受磷蛋白表达的影响

目的:观察丹参总酚酸对慢性心力衰竭大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase,SERCA)、受磷蛋白(Phospholamban,PLB)的蛋白表达的影响,探讨丹参总酚酸抗心力衰竭的作用机制。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支造成心肌梗死后慢性心力衰竭模型,连续给予丹参总酚酸4周后,采用蛋白印迹(Western Blot)技术检测心肌组织的SERCA和PLB蛋白表达水平及PLB的磷酸化水平。结果:与心力衰竭模型组相比,丹参总酚酸能明显升高SERCA及磷酸化受磷蛋白(phosphorylated Phospholamban,P-PLB)的蛋白表达及PLB的磷酸化水平。丹参总酚酸能明显降低PLB/SERCA比值。结论:丹参总酚酸能升高SERCA的蛋白表达,升高P-PLB的蛋白表达及PLB的磷酸化水平,降低PLB/SERCA比值,减轻PLB对SERCA功能的抑制,这可能是丹参总酚酸抗心力衰竭的机制之一。

附子与人参不同比例配伍对急性心衰大鼠神经—体液因子的影响

目的观察附子与人参不同比例配伍前后对急性心衰大鼠神经—体液因子的影响。方法建立戊巴比妥钠致大鼠急性心力衰竭动物模型,测定药物对大鼠血浆中氨基末端脑钠肽前体(NT-ProBNP)、心房利钠肽(ANP)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆中NT-ProBNP、ANP、AngⅡ的含量显著增加,与模型组比较,各治疗组均可降低三者的含量,其中附子人参配伍后作用明显优于附子单味给药组,尤以附子人参1∶0.5组作用最强。结论附子人参配伍可调节急性心衰大鼠神经—体液因子,从而延缓急性心力衰竭的发展。

药物累积法研究热痹清片的药物动力学

目的:研究热痹清片在小鼠体内的药物动力学过程。方法:采用药物累积法,以小鼠急性死亡率为指标,测定小鼠灌胃给药后不同时间的药物体存量,估算表观药物动力学参数。结果:药物毒性效应呈一级动力学过程,符合二房室模型。其动力学参数为:分布速率常数α和消除速率常数β分别为2.2272h-1及0.2031h-1;其分布半衰期t1/2α和消除半衰期t1/2β分别为0.3112h和3.4121h。结论:热痹清片小鼠灌胃给药易于吸收,毒性较大,分布快,但消除较慢。其表观药物动力学参数可为临床合理用药作参考。

养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏中PPAR-γ及CYP7A1表达的影响

目的:观察养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏PPAR-γ及CYP7A1表达的影响。方法:38只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)和养肝利胆颗粒组(n=13)。其中后两组小鼠采用高脂饮食诱发法建立胆固醇结石模型。造模过程中,养肝利胆颗粒组小鼠予养肝利胆颗粒2.1g/(kg.d)灌胃治疗。8周后观察各组小鼠的成石率,并用Western Blotting法检测肝脏中PPAR-γ及CYP7A1的表达。结果:养肝利胆颗粒组成石率显著降低(P<0.01),小鼠肝脏PPARγ及CYP7A1表达增强。结论:养肝利胆颗粒可通过增强肝脏PPARγ及CYP7A1的表达,从而发挥防治胆石病的作用。

虎杖总蒽醌对肺间质纤维化大鼠上皮间质转化过程中TGFβ1-smad信号通路的影响

目的观察虎杖总蒽醌对肺间质纤维化大鼠上皮间质转化过程中TGFβ1-smad信号通路的影响。方法大鼠随机分为空白组、博来霉素组、虎杖总蒽醌组、Smad3 siRNA+虎杖总蒽醌组、Smad3抑制剂+虎杖总蒽醌组。除空白组外,其余各组大鼠切开气管注入博来霉素(BLM,10 mg/kg)建立肺纤维化大鼠模型。造模后次日虎杖总蒽醌组给予虎杖总蒽醌(400 mg/kg)灌胃,每日1次,Smad3 siRNA+虎杖总蒽醌组给予虎杖总蒽醌灌胃并于造模后次日尾静脉注射Smad3 siRNA质粒(3 mL/kg),Smad3抑制剂+虎杖总蒽醌组每天给予虎杖总蒽醌灌胃基础上于造模后次日腹腔注射Smad3抑制剂(2 mg/kg)。4周后大鼠处死,取右肺,RT-PCR检测肺组织匀浆中上皮细胞标志物(E-cad)、间皮细胞标志物(α-SMA)及信号通路相关分子Smad3、TGF-β1、CTGF的mRNA的蛋白表达变化。取左肺组织匀浆后离心,碱裂解法检测肺组织中羟脯胺酸(HYP),大鼠摘眼球取血,酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、间质胶原蛋白Ⅰ、间质胶原蛋白Ⅲ的表达。结果RT-PCR显示,虎杖总蒽醌可提高模型大鼠肺组织中E-cad水平,降低TGF-β、Smad3、a-SMA、CTGF水平,而SiRNA+虎杖总蒽醌组及Smad3抑制剂+虎杖总蒽醌组与虎杖总蒽醌组形成相反趋势。酶联免疫吸附法显示,虎杖总蒽醌组肺组织HYP、血清CollagenⅠ、CollagenⅢ、TNF-α、VEGF、MMP-2水平均有所降低,SiRNA+虎杖总蒽醌组与Smad3抑制剂+虎杖总蒽醌组与虎杖总蒽醌组形成相反趋势。结论虎杖总蒽醌可能通过阻断TGFβ1-smad信号通路来抑制肺纤维化的发生,并通过抑制TGFβ1-smad信号通路的激活及降低肺组织HYP及血清TNF-α炎症因子达到减轻肺纤维化的作用。

新药临床试验数据管理之我见

新药临床试验数据管理包括收到临床试验单位的填写完整的病例报告表(CRF)至数据库锁定期间全过程,一般可分为工作日志建立、CRF人工审核、数据库建立与数据录入、数据计算机辅助审核、数据盲态审核报告撰写、数据库的调整与数据校正、数据库锁定等。作者对数据管理的步骤以及各步骤中的主要工作内容、方法、基本要求等作一阐述,并具体介绍了SAS审核程序。

螺旋藻蛋白激酶溶栓作用的研究

目的探索螺旋藻蛋白激酶(SPK)的溶栓作用。方法体外用试管法,通过测定血栓溶解率来研究SPK的溶栓作用;用琼脂糖-纤维蛋白平板法检测SPK的纤溶作用;体内采用结扎大鼠下腔静脉的方法复制静脉血栓模型,通过称取血栓重量来研究SPK对静脉血栓的溶解作用。结果 SPK使体外试管法的血栓溶解率显著增加;SPK可以溶解琼脂糖-纤维蛋白平板;使体内实验的静脉血栓重量减轻,各结果均具有明显的剂量-效应依赖关系。结论螺旋藻蛋白激酶具有明显的溶栓作用。