基于高通量测序技术的9种铁线莲属药材混合粉末分子鉴定

目的建立基于高通量测序技术的9种铁线莲属混合粉末分子鉴定方法。方法采用高通量测序技术,对9种铁线莲属药材混合粉末样品中的总DNA经提取,对ITS2片段进行PCR扩增,利用Illumina MiSeq平台对DNA片段进行双端测序,最后采用FLASH、QIIME、GraPhlAn及MEGA 7.0软件对序列进行整理并聚类分析,鉴定混合粉末中的物种。结果混合粉末样品中得到高质量的ITS2序列共496条,铁线莲属物种含有序列72条,比对出棉团铁线莲、女萎铁线莲、短尾铁线莲、灌木铁线莲、单叶铁线莲、黄花铁线莲、粗齿铁线莲等7个物种,未能比对出东北铁线莲和芹叶铁线莲。结论以ITS2作为DNA条形码,采用高通量测序技术,可以鉴定出铁线莲属药材混合样品中的7个物种,为混合药材的鉴定提供依据。

经典名方旋覆代赭汤乙酸乙酯部位指纹图谱及化学模式识别研究

目的:建立旋覆代赭汤乙酸乙酯部位UPLC指纹图谱,结合化学模式识别分析不同产地饮片对旋覆代赭汤质量的影响。方法:采用Waters UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×150 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-0.4%甲酸水溶液,体积流量0.1 mL·min^(-1),梯度洗脱,检测波长350 nm;建立13批不同产地饮片提取的旋覆代赭汤样品指纹图谱,进行相似度评价,并结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),对旋覆代赭汤指纹图谱数据进行分析。结果:13批旋覆代赭汤指纹图谱确定22个共有特征峰,指认出12个多酚类成分,其中11个多酚类成分来自于旋覆花,其相似度均在0.9以上;通过CA发现,13批样品可按旋覆花产地分为三类;PCA与CA结果基本一致,并提取出4个主成分;OPLS-DA筛选出影响分类的差异性质量标志物,其中已指认出的成分有异绿原酸、异槲皮苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、异绿原酸B、1,5-二咖啡酰奎宁酸、绿原酸、槲皮万寿菊苷、槲皮素。结论:通过指纹图谱结合化学模式识别技术的分析策略,可快速有效地筛选不同批次旋覆代赭汤中多酚类成分中的差异质量标志物,为后续旋覆代赭汤的药效物质基础研究和质量评价提供参考。

参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱建立

本文旨在建立参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱。本研究采用Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05%三氟乙酸水溶液;流速为0.8 mL/min,进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为288 nm。建立10批参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱,利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”软件对其进行相似度评价。建立了参柏舒心颗粒HPLC指纹图谱,共确定了25个共有峰,鉴定了5个成分,分别为丹参素钠,原儿茶醛,黄柏碱,丹酚酸B,欧前胡素;10批样品相似度均大于0.93,方法可靠。本研究分析方法具有较强的可行性,达到良好的分离效果,可为提高参柏舒心颗粒生产质量控制提供一定的科学依据。

不同产地玉叶金花质量比对研究

目的:对湖南桃源、广西玉林、广东茂名三地的玉叶金花中药材进行质量比对研究。方法:根据各地玉叶金花中药材质量标准,通过状性鉴别、薄层鉴别、显微鉴别、理化鉴别、含量测定等方法,鉴定各地玉叶金花药材质量。结果:三地的玉叶金花在薄层鉴别、理化鉴别、显微鉴别方面差别不大,外观性状方面叶面有稍微差别。湖南桃源玉叶金花中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C的总量最低,为0.598%,而广西玉林和广东茂名玉叶金花中这些成分总含量较高,分别为0.986%和1.098%。结论:通过对三地玉叶金花中药材质量进行比对,可为玉叶金花中药材的鉴别、种植、质量评价提供参考。

芪归养血颗粒质控标准研究

目的研究建立芪归养血颗粒质控的标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对黄芪、淫羊藿、菟丝子进行定性鉴别,通过超高效液相色谱-蒸发光散射检测器(UPLC-ELSD)测定制剂中黄芪甲苷含量:色谱柱:Acclaim RSLC 120 C_(18)(100 mm×2.1 mm,2.2µm),ELSD,流动相为乙腈-水(32∶68),流速为0.4 ml/min;柱温30℃;进样体积为1μl。结果TLC能特异性鉴别黄芪、淫羊藿、菟丝子。黄芪甲苷的注射量与峰面积具有良好的线性关系,线性范围为0.0826~0.8260µg,r=0.9996;平均回收率为99.19%,相对标准偏差(RSD)为0.74%。结论采用TLC法和UPLC-ELSD检测对芪归养血颗粒分别进行了定性鉴别和定量分析,所建立的方法专属性强,结果准确,可作为芪归养血颗粒的质控方法进行应用。

复方冬凌草含片微生物限度检查方法学研究

目的建立适用于复方冬凌草含片的微生物限度检查方法,以保证其质量和安全性。这个方法要能测量需氧菌的数量、霉菌和酵母菌的数量,并且限制菌中的肠道埃希菌。方法根据《中华人民共和国药典(2020年版)》第四部分中通用规则1107的规定,本研究对该方法的适应性和回收效率进行了评估和测试。试验中,本研究采用常规法和稀释法,对复方冬凌草含片样品进行菌落计数。结果复方冬凌草含片具有显著的抑菌作用。利用标准方法进行测试,结果显示,复方冬凌草对各种细菌如青色链状真菌(pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)及白色念珠菌(candida albicans)等有良好的抑制作用。同时,对黑色发霉体与酿酒酵母也有较好的控制能力。然而通过降低浓度的方法检测时,无论是需要空气的微生物还是发酵类生物都呈现出了较低水平,即低于或接近于0.5的比例值上限。在控制菌检查中,采用常规法检出了阳性菌。结论成功地建立了一种适用于复方冬凌草含片微生物限度检查的稀释法。该方法能可靠地评估复方冬凌草含片的微生物质量,并为其合规生产提供了可行的检测方案。

多组分定量联合化学计量学及灰色关联度分析骨力胶囊质量评价

目的建立骨力胶囊多组分定量检测方法,探索化学计量学及灰色关联度分析模型在其质量评价中的应用。方法采用HPLC法,乙腈-0.2%醋酸为流动相梯度洗脱;检测波长为270、430和250 nm;以葛根素为内参物,建立多组分定量分析模式。再通过化学计量学及GRA评价其综合质量。结果外标法方法学验证结果均符合要求;相对校正因子法和外标法的定量结果显示二者差异无统计学意义。化学计量学分析结果显示淫羊藿苷、葛根素、朝藿定、补骨脂素和姜黄素为骨力胶囊的代表性差异成分;GRA模型稳定,相对关联度在0.3095~0.6145。结论所建立的方法简便实用,化学计量学和GRA可用于评价骨力胶囊的整体质量。

中药鉴定学课程思政教学探索

在专业框架下进行思政教育是实现高校“三全育人”模式的重要抓手。引导学生将专业知识内化为个人素养,在育才过程中实现育德。笔者对中药鉴定学教学实践融合课程思政进行总结,为实现专业教育与思政教育的有机融合与统一提供借鉴。

酸枣仁与理枣仁鉴别方法研究

目的 建立酸枣仁及常见伪品理枣仁的鉴别方法,为酸枣仁的质量控制和市场监督提供依据。方法 对酸枣仁和理枣仁进行性状及显微鉴别,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定其中6’’’-芥子酰斯皮诺素的含量,色谱柱为Phenomenex C18柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸铵水溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL,离子源为电喷雾离子源,正离子、多反应监测模式扫描,电喷雾电压为3.5 kV,离子源温度为150℃,去溶剂气温度为500℃,扫描范围为50~1 000 amu。结果 酸枣仁和理枣仁在性状上外种皮纹理存在差异,在显微特征上外种皮栅状细胞、种皮内表皮细胞存在差异。6’’’-芥子酰斯皮诺素的质量浓度在0.205 2~6.156μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.997 5,n=6),检测限为21.13 pg。酸枣仁和理枣仁样品的精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均低于3.0%(n=6);加样回收率分别为97.01%和97.80%,RSD分别为2.15%和2.09%(n=6)。10批酸枣仁和理枣仁中6’’’-芥子酰斯皮诺素的含量分别为0.23,3.70μg/mL。拟订酸枣仁中掺伪理枣仁限度为5%,样品中6’’’-芥子酰斯皮诺素测得含量大于0.5μg/mL时可视为掺伪理枣仁。结论 所建立的方法操作简便、结果准确、重复性和稳定性均良好,可有效鉴别酸枣仁和理枣仁。

基于指纹图谱和网络药理学对经典名方五味消毒饮质量标志物的预测分析

目的 基于HPLC指纹图谱和网络药理学对五味消毒饮中的质量标志物(Q-marker)进行预测。方法 建立15批五味消毒饮的指纹图谱,并对其进行峰指认和峰归属,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析;通过网络药理学对核心靶点及通路进行筛选,构建“成分-靶点-通路”网络图;以Q-marker“五原则”为核心预测五味消毒饮的质量标志物。结果 15批五味消毒饮指纹图谱相似度大于0.95,标定13个共有峰,对其中11个特征峰进行指认,分别为新绿原酸、绿原酸、秦皮乙素、隐绿原酸、马钱子苷、断氧化马钱子苷、菊苣酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、蒙花苷;通过网络药理学分析,推测绿原酸、秦皮乙素、断氧化马钱子苷、菊苣酸、蒙花苷5个成分可能为五味消毒饮的潜在Q-marker,其可能通过调节肿瘤抑制因子p53/癌蛋白Mdm2、酪氨酸蛋白激酶SRC等多个基因以及胰腺癌、前列腺癌等多条癌症疾病通路来发挥抗肿瘤、抗癌功效;同时还对五味消毒饮可用于治疗新型冠状病毒肺炎进行预测分析。结论 建立的五味消毒饮HPLC指纹图谱分析方法灵敏、快速且稳定;结合网络药理学筛选出具有溯源性和可预测性,且与五味消毒饮临床应用相关的5个化合物作为其潜在Q-marker,为今后五味消毒饮的进一步研究提供参考。

QuEChERS/气相色谱-质谱法同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量

目的建立同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的QuEChERS/气相色谱-质谱(QuEChERS/GC-MS)法。方法样品用无水乙醇提取,经N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、石墨化炭黑和硫酸镁吸附净化处理。色谱柱为HP-5 MS型色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),程序升温,流速为1.0 mL/min,分流进样,分流比为20∶1,电子轰击离子源,选择性监测、全扫描模式,定量特征离子质荷比为95。比较QuEChERS/GC-MS法和气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)法含量测定结果的相对相差值,考察方法的可靠性。结果樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的质量浓度分别在50~2000μg/mL、5~200μg/mL、100~5000μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.997,n=6);检测限均为0.005 mg/kg,定量限均为0.015 mg/kg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均低于3.0%;50%,100%,200%水平的加样回收率为93.37%~105.37%,RSD为1.38%~2.85%(n=6)。QuEChERS/GC-MS法和GC-FID法测定樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的相对相差值分别为4.76%,4.64%,3.67%。结论该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量测定。

不同产地及树龄厚朴“发汗”过程中厚朴酚与和厚朴酚的含量变化

目的探讨厚朴“发汗”过程中厚朴酚与和厚朴酚的含量变化趋势。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定彭州20年树龄及雅安20年、40年树龄厚朴“发汗”过程中厚朴酚与和厚朴酚的含量。色谱柱为Wondasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(80∶20,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为294 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果厚朴酚与和厚朴酚的质量浓度分别在0.0061~0.1940 mg/mL、0.0018~0.0560 mg/mL范围内与各自峰面积线性关系良好(r≥0.9998,n=6);检测限分别为0.00097,0.00224 mg/mL,定量限分别为0.01210,0.00350 mg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均回收率分别为98.79%,99.29%,RSD分别为1.71%,1.20%(n=6)。彭州和雅安20年树龄厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量在“发汗”第7天达峰值,分别为3.48%,3.83%;雅安40年树龄厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量在第5天达峰值,为12.14%。结论所建立的方法快速高效、准确度高、专属性强,可用于厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量测定。树龄是厚朴“发汗”过程中厚朴酚与和厚朴酚含量变化的主要影响因素。

接骨丹片质量标准提升研究

目的 提升接骨丹片的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中的制马钱子和大黄;采用高效液相色谱法同时测定马钱子碱和士的宁的含量,色谱柱为Kromasil 100-5-C_(18)柱(250 mm×4.6 cm,5μm),流动相为乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果 制马钱子、大黄的薄层色谱图斑点清晰,分离度高,且阴性对照无干扰。马钱子碱和士的宁的质量浓度分别在1.46~116.73μg/mL和1.60~128.30μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 5,0.999 7,n=6);精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率分别为97.28%和96.23%,RSD分别为1.16%和1.36%(n=6)。结论 该方法专属性好,结果准确、可靠,可用于接骨丹片的质量评价。

HPLC法测定栀子药材中栀子苷含量的能力验证研究

目的开展栀子药材中栀子苷含量测定的能力验证研究,评价药品相关领域检验检测实验室开展中药材中指标成分含量测定的能力,提高相关实验室含量测定的质控能力。方法依据CNAS-RL02《能力验证规则》和国际标准ISO/IEC 17043《合格评定能力验证的通用要求》进行实验室能力验证活动。根据CNAS-GL003《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》对自制样品均匀性和稳定性试验结果进行分析,试验结果合格后作为能力验证样品,随机分发给参加者,回收结果,并对测定结果进行稳健统计分析,以Z比分数对各实验室结果进行判定,评价结果分为满意、可疑、不满意。结果共有403家实验室提交试验结果,其中能力验证结果为满意的有367家,满意率为91.07%;可疑的有17家,占4.22%;不满意的有19家,不满意率为4.71%。结论403家实验室中,大多数具备HPLC法测定栀子中栀子苷含量的能力,其中药品监管系统实验室检测能力和质量管理水平较高。本次能力验证为了解我国药品检验检测实验室的技术储备能力、管理水平提供依据,为今后的政府监管提供技术支撑。

高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法评价诃子药材质量

目的评价诃子药材的质量。方法建立诃子药材的高效液相色谱指纹图谱,采用相似度计算、聚类分析和主成分分析法对其质量进行评价。以柯里拉京为内参物,建立测定诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸含量的一测多评法,并将计算结果与外标法测定结果进行比较。结果18批诃子药材的指纹图谱有23个共有峰,指认出2号峰为莽草酸、7号峰为没食子酸、11号峰为没食子酸甲酯、14号峰为柯里拉京、15号峰为没食子酸乙酯、16号峰为诃黎勒酸、20号峰为鞣花酸、22号峰为诃子酸,相似度均大于0.95。聚类分析结果显示,18批诃子药材聚为2类,其中产地为青海的2批药材聚为一类,其余药材聚为一类。主成分分析结果显示,主成分特征值大于1的5个成分累积方差贡献率为84.088%。采用一测多评法计算的18批诃子药材中莽草酸、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、诃黎勒酸、鞣花酸、诃子酸的含量与外标法测定结果无显著差异(P>0.05)。结论高效液相色谱指纹图谱结合一测多评法可有效评价诃子药材的质量。

淫芎颗粒质量标准研究

目的建立淫芎颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中川芎、白芍进行定性鉴别;采用高效液相色谱法同时测定制剂中芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的含量,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.3%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为30℃,进样量为10µL。结果薄层色谱斑点清晰,分离度良好,且阴性对照无干扰。芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、淫羊藿苷、甘草酸铵的质量浓度分别在8.886~222.156µg/mL、3.935~98.385µg/mL、3.805~95.118µg/mL、4.457~111.416µg/mL、4.574~114.360µg/mL、3.512~87.794µg/mL、4.274~106.850µg/mL范围内与各自峰面积线性关系良好(r≥0.9991,n=7);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为99.68%,99.19%,100.31%,100.70%,99.74%,98.77%,98.99%,RSD分别为1.57%,1.89%,2.77%,1.52%,1.58%,1.27%,2.18%(n=9);平均含量分别为5.743,0.547,0.472,1.426,1.376,1.982,1.480µg/mL(n=2)。结论该方法操作方便、结果准确、专属性和重复性好,可用于淫芎颗粒的质量控制。

午时茶颗粒微生物限度检查方法的验证

按照《中华人民共和国药典》(2020年版四部)要求,采用平皿倾注法(1∶10,1∶20,1∶50,1∶100)和常规培养基体积直接接种法对午时茶颗粒进行微生物计数方法和控制菌检查方法适用性试验,通过计算3批次的试验菌回收比值筛选需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数方法.当采用平皿倾注法(1∶10)时,各试验菌回收比值均在0.5~2.0范围内.控制菌阳性对照组生长良好,经革兰氏染色显微镜检查和生化鉴定试验,符合试验菌形态学和生化特性.研究建立的方法准确可行,重现性好,可用于午时茶颗粒的微生物限度检查.

高效液相色谱法测定益肾排石颗粒中黄芩苷含量

目的建立益肾排石颗粒中黄芩苷含量的HPLC测定方法,为益肾排石颗粒的质量控制提供科学、可靠依据。方法采用高效液相色谱法,岛津ODS-2C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.2%磷酸水(A)-甲醇(B)梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长280 nm,进样量均为10μL。结果该方法黄芩苷峰面积和浓度之间线性关系良好,r=1.0000;精密度、稳定性均符合要求;平均加样回收率为103.29%,RSD为2.38%;三批样品中黄芩苷的平均含量为6.12 mg/g,RSD值为1.71%。结论本研究方法重复性好,准确度高,可用于复方益肾排石颗粒中黄芩苷的含量测定。

土培和水培条件下两种党参有效成分含量的比较

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了室内土培和水培条件下渭党和纹党中紫丁香苷、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ3种活性成分的含量,以期比较室内不同栽养方式对2种党参有效成分积累水平的影响.色谱流动相采用乙腈(A)-0.3%磷酸水溶液(B),体积流量为1 mL·min^(-1),检测波长为220 nm,柱温为30℃.结果表明,3种受测成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(R 2>0.9998),土培纹党中紫丁香苷、苍术内酯Ⅲ含量较高,分别为0.025,0.020 mg·g^(-1);水培渭党中党参炔苷含量较高,为3.944 mg·g^(-1).实验重复性和稳定性良好,精密度和准确性可靠.2种栽养条件下,纹党和渭党中3种活性成分含量差异显著,研究结果可为党参栽培方式的选择和优良品种的筛选提供数据参考.

HPLC法测定安普胶囊中红景天苷的含量

目的建立在安普胶囊中以红景天苷为指标性成分的含量的测定方法。方法选用甲醇-水(15∶85)为流动相,流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为275nm,柱温为30℃。结果确定了安普胶囊的含量测定方法,在色谱条件下红景天苷回归方程为y=33.998x+2.9436(R2=0.9998),表明红景天苷在0.5~5mg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好。结论该方法简便、快捷,重现性好,能够满足实际质量控制的要求,可以用于安普胶囊中红景天苷含量的测定。