解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠的保护作用及机制研究

目的观察解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法将30只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、解毒化瘀颗粒组,每组10只。采用D-氨基半乳糖(D-GalN)+内毒素脂多糖(LPS)构建急性肝衰竭大鼠模型。解毒化瘀颗粒组于造模前5 d开始灌胃给药,空白组与模型组分别给予等量蒸馏水,延续至成模后24 h。检测各组大鼠肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)],氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)],炎症因子[白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;HE染色观察各组大鼠肝组织病理变化。结果经解毒化瘀颗粒治疗后大鼠肝组织肝细胞坏死的情况得到明显改善,同时可明显降低模型大鼠ALT、AST、TBil、MDA、IL-6、TNF-α,提高SOD、GSH-PX水平(P<0.05)。结论解毒化瘀颗粒具有良好的抗氧化抗炎作用,能减轻肝衰竭中的肝细胞坏死。

经典名方温经汤研究进展及质量标志物预测分析

经典名方温经汤收载于《妇人大全良方》,具有温经补虚、化瘀止痛之功效,为治疗妇人月经不调、血海虚寒、气血凝滞的常用方剂,该研究整理总结了近些年有关温经汤的现代研究成果,其药理研究表明温经汤具有改善供血、抗炎、镇痛等药理作用。临床主要用于痛经、月经不调、子宫内膜异位症等女性疾病。通过对其化学成分、药理作用以及现代临床应用的分析,并基于质量标志物(Q-Marker)“五原则”,即质量传递与溯源、成分特有性、成分与药效关联、成分可测性及复方配伍环境对温经汤的Q-Marker进行预测分析,初步分析人参皂苷Rg1、Re、Rb1、阿魏酸、丹皮酚、芍药苷、芍药内酯苷、肉桂酸、藁本内酯、莪术醇、莪术二酮、甘草苷、甘草酸等成分与其药效相关,可作为温经汤的Q-Marker,以期为后续建立完整的温经汤质量评价体系提供参考依据。

温胆汤含药血清调控神经元突触可塑性改善精神分裂症认知障碍的机制研究

目的以谷氨酸作用的HT22细胞为精神分裂症细胞模型,通过检测突触可塑性相关蛋白突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)、生长相关蛋白43(growth associated protein-43,GAP-43)、JNK相互作用蛋白3(c-Jun NH2-terminal kinase-interacting protein-3,JIP-3)、连接蛋白43(connexin-43,Cx-43)的变化,并从神经元突触可塑性角度探讨温胆汤改善精神分裂症认知障碍的分子机制。方法将大鼠随机分成4组:温胆汤40、30、20 g/kg组和氯氮平0.02 g/kg组。各用药组灌胃相应的分组剂量药物,1次/d,7 d后取血,制备含药血清。采用CCK8实验确定谷氨酸对HT22细胞的作用浓度和时间点;以10 mmol/L谷氨酸作用24 h的HT22细胞为细胞模型,流式细胞术检测温胆汤含药血清对HT22细胞凋亡率的影响;RT-qPCR检测HT22细胞中Psd95、Gap43、Jip3和Cx43 mRNA表达;WB检测HT22细胞中PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43蛋白表达。结果根据不同浓度谷氨酸对HT22细胞增殖率影响的结果,确定10 mmol/L谷氨酸作用HT22细胞24 h为细胞实验条件。与正常对照组比较,谷氨酸模型组HT22细胞凋亡率显著上升;其PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43 mRNA和蛋白表达也明显下调(P<0.01)。与谷氨酸模型组比较,谷氨酸+温胆汤40、30、20 g/kg含药血清组HT22细胞凋亡率明显下降;并显著上调PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论温胆汤可能是通过降低神经元细胞凋亡,上调其PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43表达水平,进而调控突触可塑性,以期达到有效改善精神分裂症认知缺陷的目的。

大网膜脂肪干细胞旁分泌HGF与加味补阳还五汤抑制腹膜间皮细胞EMT相关性的体外研究

目的通过体外研究,探讨加味补阳还五汤抑制的腹膜间皮细胞(PMC)上皮-间充质转化(EMT)防治术后腹腔粘连(PAA)的作用,是否主要通过促进大网膜脂肪干细胞(ADSCs)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)。方法实验1明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用,是该方对PMC的直接作用,还是通过调控大网膜中的ADSCs旁分泌的间接作用:使用加味补阳还五汤与加味补阳还五汤培养ADSCs后制取其条件培养基(以下称“中药培养基”)分别干预EMT模型的PMC,Western Blot法检测EMT相关的蛋白E-钙黏蛋白(E-Cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。实验2明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用,是否与大网膜中的ADSCs旁分泌HGF相关:用低表达HGF的ADSCs条件培养基(以下称“低HGF培养基”)、正常ADSCs条件培养基(以下称“普通培养基”)、中药培养基等3种培养基干预PMC,并检测以下指标:(1)用ELISA法检测在干预PMC之前和之后,3种培养基中HGF的含量。(2)Western Blot法、qPCR法、免疫荧光(IF)法检测干预后各组PMC的EMT相关蛋白表达水平,划痕实验检测各组PMC的迁移能力。结果实验1:加味补阳还五汤与中药培养基对EMT相关指标的影响。与模型组相比,加味补阳还五汤组上调E-Cad的蛋白表达(P<0.05),下调α-SMA的蛋白表达(P<0.05);中药培养基组显著上调了E-Cad的蛋白表达(P<0.01),显著下调α-SMA的蛋白表达(P<0.01)。与加味补阳还五汤组相比,中药培养基组上调E-Cad的蛋白表达(P<0.05),显著下调α-SMA的蛋白表达(P<0.01)。实验2:(1)作用于PMC前后,3种不同的培养基中HGF含量的比较:作用于PMC前,相比于普通培养基,低HGF培养基中含量显著降低(P<0.01),中药培养基中含量显著增加(P<0.01);作用于PMC后,各培养基组含量均显著性下降。(2)EMT相关蛋白表达情况:综合Western Blot、qPCR、IF结果,与模型组相比,各培养基组均可升高E-Cad表达(P<0.05或P<0.01),降低α-SMA、VIM表达(P<0.05或P<0.01),各培养基组均可抑制PMC的EMT,效果依次为中药培养基组>普通培养基组>低HGF培养基组。(3)发生EMT的细胞迁移能力变化情况:干预24、48 h后,与模型组相比,各组愈合率均有显著下降(P<0.01),各组培养基均可降低EMT模型的R的迁移能力,效果依次为中药培养基组>普通培养基组>低HGF培养基组。(4)EMT相关蛋白表达与HGF含量相关性分析:E-Cad蛋白表达量与HGF含量呈正相关性(P<0.05),α-SMA、VIM蛋白表达量与HGF含量呈负相关性(P<0.05或P<0.01)。结论加味补阳还五汤抑制PMC的EMT防治PAA的疗效可能是多靶点的,既有对PMC的直接作用,也有通过增强大网膜中的ADSCs旁分泌HGF的间接作用,而后者更为主要。

经典名方防己黄芪汤的历史沿革与关键信息考证

通过系统梳理古今文献,从处方溯源与历史发展、方名与异名、基原与炮制、剂量与剂型、主治与功效、现代临床应用6个方面,对防己黄芪汤的历史沿革与关键信息进行考证与分析,为经典名方防己黄芪汤的研发提供文献与科学双重依据。

六君子汤改善肿瘤环境下C2C12成肌细胞分化的分子机制

目的研究六君子汤改善肿瘤环境下C2C12成肌细胞分化的分子机制,为健脾和胃法治疗肿瘤恶病质肌肉萎缩提供实验基础。方法诱导成肌细胞C2C12分化,倒置显微镜观察分化后肌管长度;成肌细胞C2C12与肺癌细胞Lewis共培养,分为空白组、模型组、叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FoxO1)抑制剂组、六君子汤组、联合用药组,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测C2C12细胞成肌分化抗原(myogenic differentiation antigen,MyoD)的表达及与过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha,PGC-1α)/FoxO1通路相关的蛋白表达;电子显微镜观察C2C12细胞线粒体数量及超微结构的变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)观测C2C12细胞线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测C2C12细胞PGC-1α/FoxO1通路相关分子mRNA。结果C2C12细胞于分化48h肌管横径最长;与空白组比,模型组C2C12细胞MyoD蛋白表达明显减少(P<0.05),线粒体数量减少(P<0.05),线粒体双层膜皱曲不清晰甚至呈C形或基质肿胀,线粒体嵴数量减少、排列紊乱、断裂或溶解消失成空泡状,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,tFAM)的mRNA表达明显降低(P<0.05),FoxO1蛋白表达明显增高,PGC-1α、脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity-associated gene,FTO)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、tFAM蛋白表达明显减少(P<0.05);与模型组比较,六君子汤组C2C12细胞MyoD蛋白表达明显增高,FoxO1抑制剂组、六君子汤组、联合用药组中C2C12细胞线粒体数量显著增多(P<0.05),线粒体双层膜结构正常,线粒体膜电位升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05),联合用药组C2C12细胞mTOR和tFAM mRNA表达明显增加(P<0.05),FoxO1抑制剂组、六君子汤组及联合用药组中C2C12细胞FoxO1蛋白表达明显减少,PGC-1α、FTO、mTOR、tFAM蛋白表达明显增高(P<0.05);与六君子汤组比较,联合用药组C2C12细胞PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论六君子汤通过调控PGC-1α/FoxO1信号通路,能维持线粒体功能,改善肿瘤环境下成肌细胞分化。

消癌解毒方抑制H22荷瘤小鼠移植瘤生长及调控Bcl-2/CytC信号通路诱导凋亡实验研究

目的探讨消癌解毒方对H22荷瘤小鼠肿瘤生长以及Bcl-2/CytC信号通路中关键蛋白表达的影响。方法构建H22肝癌移植瘤模型,将C57BL/6J小鼠随机分为模型组(生理盐水灌胃)、消癌解毒方低剂量组(10 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)、消癌解毒方中剂量组(20 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)、消癌解毒方高剂量组(40 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)及顺铂组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射),另设空白组(生理盐水灌胃),每组10只。给药11 d,记录各组瘤重,计算抑瘤率,苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,TUNEL试剂盒检测凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测瘤体组织中JAK2、STAT3 mRNA表达情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测瘤体组织Bax、Bcl-2、CytC、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果消癌解毒方高、中、低剂量组及顺铂组均能有效抑制H22荷瘤小鼠瘤体生长,抑瘤率分别为59.9%、34.5%、21.5%、67.1%;病理学改变与模型组相比,给药组病理性核分裂像减少,瘤细胞排列稀疏,表现出较好的抑制作用;TUNEL凋亡检测结果示,消癌解毒方处理后瘤体细胞呈典型凋亡征象,以高剂量组最为显著;Rt-PCR检测发现消癌解毒方干预后各组的JAK2、STAT3 mRNA表达水平下调;Western blot检测发现消癌解毒方对H22荷瘤小鼠干预后,可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、CytC、Cleaved Caspase-3蛋白表达,最终激活Caspase-3蛋白,诱导肿瘤细胞凋亡。结论消癌解毒方可抑制H22荷瘤小鼠生长及诱导肝癌细胞凋亡,这可能与调控Bcl-2/CytC信号通路中关键蛋白表达相关,从而发挥抗肿瘤作用。

乌梅丸及其单味药有效成分在消化系统疾病中的研究进展

乌梅丸载于我国东汉时期的一部中医经典《伤寒杂病论》:“蛔厥者,乌梅丸主之。又主久利”,该方由乌梅、细辛、桂枝、黄连、黄柏、当归、干姜、附子、人参、蜀椒10种中药组成,其主要功效为暖肝调中,清上温下。临床研究中多以其加减方或联合西药治疗溃疡性结肠炎、肠易激综合征、慢性萎缩性胃炎、胃食管反流病、胃癌、肠息肉等多个消化系统疾病。现代药理学显示,乌梅丸治疗胃肠疾病发挥着抗炎、抗氧化、保护胃黏膜、抗肿瘤、抗溃疡等重要药理作用。借助文献报道,从该方临床报道、方剂组成中各药物有效成分与消化系统疾病药理研究、动物实验报道等三方面进行归纳总结,根据相关报道中该方的有效成分,总结出该方药物运用于常见消化系统疾病的主要有效成分,并通过其药理成分阐释该方的组方配伍规律,以期为乌梅丸临床应用及相关研究的开展提供参考。

苏合香丸急重症临床应用专家共识

苏合香丸是中医治疗寒闭证的辛温开窍经典名方,也用治因寒闭痰浊导致的心腹卒痛。为了深化苏合香丸在临床实践中的规范化应用,世界中医药学会联合会急症专业委员会及中国中西医结合学会重症医学专业委员会召集国内众多权威专家共同制定了《苏合香丸急重症临床应用专家共识》。本共识对苏合香丸的药学特性、作用机制研究、安全性研究及临床研究进行了阐述,对苏合香丸的适用人群、用法用量和注意事项等给出了明确的指导意见。

葛根素治疗糖尿病文献计量学分析

目的梳理葛根素治疗糖尿病领域研究热点及发展趋势,为后续研究提供参考。方法以中国知网(CNKI)和Web of Science Core Collection(WOSCC)为数据库,检索2003—2023年相关文献,采用CiteSpace对样本文献的发文量、作者、国家/地区、研究机构、关键词等进行可视化分析。结果研究共纳入中文文献755篇,英文文献199篇,中文呈下降趋势,英文呈上升趋势。中、英文发文最多的作者分别是李强翔、Kim Jin Sook和Du Guanhua。中国是发文最多的国家。中南大学湘雅医院内分泌科和北京中医药大学是中文发文量最多的机构,上海中医药大学是英文发文量最多的机构。中文文献的关键词、聚类、突现词图谱显示葛根素制剂、糖尿病及糖尿病并发症、药理作用、临床应用是主要研究方向。英文文献的关键词、聚类、突现词图谱显示其主要围绕葛根素制剂治疗糖尿病及其并发症的药理作用和作用机制研究。结论葛根素治疗糖尿病研究总发文量呈稳定趋势。核心作者、国家/地区、研究机构以中国学者和研究机构为主,交流合作有待加强。中英文研究方向各有侧重,从分子水平深入研究葛根素治疗糖尿病及其并发症的生物学作用机制是共同的研究热点和趋势。

六味地黄丸在儿科中的历史沿革与现代临床应用分析

梳理六味地黄丸在儿科中的历史沿革与现代临床应用。本文采用文献计量学方法,在中华医典、中医典海及中国知网等数据库检索六味地黄丸在儿科应用的文献,分析六味地黄丸历史源流、方药组成、功效主治和现代临床应用等。从宋代至清代,用药剂量上,六味地黄丸中泽泻、牡丹皮、茯苓三味药用量有增加,而熟地黄、山药、山茱萸三味药用量基本不变;功效上,从宋代以补益肝肾为主到明清补益与清热并重;临床适应证上,主治病症越来越广泛。现代临床应用方面,六味地黄丸在儿科治疗呼吸系统疾病较多,其次为泌尿系统疾病、内分泌系统疾病、神经系统疾病等。综上所述,通过对六味地黄丸在儿科应用的古今文献考证研究,以期为六味地黄丸更广泛的临床运用和深入研究提供参考。

杞菊地黄丸调控Raf/MEK/ERK通路改善糖尿病视网膜病变小鼠炎症反应实验研究

目的基于纤维肉瘤蛋白(rapid accelerated fibrosarcoma,Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号通路探讨杞菊地黄丸改善糖尿病视网膜病变炎症反应的价值。方法将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,杞菊地黄丸低剂量组,杞菊地黄丸中剂量组以及杞菊地黄丸高剂量组。通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型。造模12周后,正常组、模型组每天予生理盐水灌胃1次,杞菊地黄丸各剂量组每天予相应杞菊地黄丸药液(11,22以及44 g·kg^(-1))灌胃1次,连续8周。每月测定血糖、饮水量、排尿量、进食量以及体质量变化;影像学检测[眼底血管荧光造影(Fundus angiofluorescence,FFA)、光学相干断层扫描血管成像(Optical coherence tomography angiography,OCTA)以及光学相干断层扫描(Optical coherence tomography,OCT)]评估视网膜病变情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色评估视网膜组织病理学变化;免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测视网膜组织白介素-6(interleukin-6,IL-6),白介素-17(interleukin-17,IL-17)以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)表达;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血中IL-6、IL-17以及TNF-α水平。蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测视网膜组织中Raf、p-Raf、MEK、p-MEK、ERK以及p-ERK表达。结果与正常组相比,模型组小鼠随机血糖高,多饮、多尿、多食以及体质量下降症状明显;视网膜血管密度低,管径增粗,走行迂曲;视网膜各层结构疏松,总体厚度变薄明显;IL-6、IL-17、TNF-α、p-Raf、p-MEK以及p-ERK表达明显增多(P<0.01)。与模型组相比,杞菊地黄丸组小鼠随机血糖高,多饮、多尿、多食以及体质量下降症状明显改善;血管密度低,管径增粗,走行迂曲程度明显减轻;视网膜各层结构疏松,总体厚度变薄显著缓解;IL-6、IL-17、TNF-α、p-Raf、p-MEK以及p-ERK表达明显减少(P<0.01)。结论杞菊地黄丸能有效保护视网膜,延缓DR进展,可能与其调控Raf/MEK/ERK信号通路,发挥抗炎作用相关。

会厌逐瘀汤临床应用研究

以会厌逐瘀汤为研究对象,检索现代临床研究文献,统计分析会厌逐瘀汤治疗的常见疾病及证候分布情况,并按照疾病、兼证、症状三种情况对加味药物进行分类,对会厌逐瘀汤的临床应用情况进行分析。研究发现会厌逐瘀汤加减可治疗咽喉部及全身疾病31种,血瘀为咽喉部疾病的重要病机,并常兼有气虚、气滞、痰凝等证,其主要的加味药物有黄芪、党参、郁金、石菖蒲、木蝴蝶、射干等。研究还提示临床疾病治疗时应注重咽喉的重要性,部分疾病可以尝试从咽论治。

基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒调控线粒体自噬抑制肝星状细胞活化的机制

目的基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒通过调控线粒体自噬来抑制肝星状细胞活化与增殖的影响及其机制。方法HSC-T6分为空白组、H_(2)O_(2)组、miR-135a-NC组、miR-135a-mimic组、miR-135a-in-hibitor-NC+H 2 O2组、miR-135a-inhibitor+H_(2)O_(2)组、柔肝化纤颗粒含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清组、H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-NC组及H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-mimic组。分别采用Real-time PCR、Western Blot、ELISA及流式细胞术检测miR-135a、FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Smad2、p-Smad2、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、NF-κB p65、p-NF-κB p65、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TNF-α表达及线粒体膜电位、活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果给予H_(2)O_(2)及过表达miR-135a可显著上调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);下调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒及抑制miR-135a表达可显著下调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒同时过表达miR-135a可抑制柔肝化纤颗粒对HSC-T6的影响(P<0.01)。结论线粒体自噬可抑制HSC-T6活化,其机制与线粒体自噬抑制ROS生成,进而抑制TGF-β1/Smad2通路及炎症反应有关;柔肝化纤颗粒亦可抑制HSC-T6活化,其机制与柔肝化纤颗粒抑制miR-135a表达,活化FOXO1/PINK1通路,从而促进线粒体自噬有关。

半夏白术天麻汤临床应用及药理机制研究进展

半夏白术天麻汤主要作用为化痰息风,主治风痰上扰。本文整理半夏白术天麻汤临床研究及药理研究文献,分别从半夏白术天麻汤治疗眩晕、偏头痛、脑梗死、癫痫等疾病的临床应用及其抗炎、抗氧化、保护靶器官的作用机制2个方面进行综述,为后续深入研究及临床应用提供参考。

经典名方小柴胡汤抗抑郁研究进展

抑郁症属于中医“郁证”范畴,在新冠疫情背景下的抑郁症发病更是呈逐年上升趋势,中医药因其多途径、多层次、多靶点、多机制的作用方式在治疗抑郁症方面发挥着独特优势。小柴胡汤为治疗少阳证的经典名方,出自东汉张仲景的《伤寒杂病论》,其和解少阳且长于疏肝理气解郁,现代药理学研究也验证了其抗抑郁作用且临床应用广泛,但是关于小柴胡汤抗抑郁的机制还尚未有定论,因此作者基于临床应用、作用机制和化学成分对近十年来现有小柴胡汤抗抑郁的研究进行综述,探究小柴胡汤抗抑郁的机制,发现小柴胡汤抗抑郁的机制与单胺类神经递质及受体、HPA轴、脑源性神经营养因子(BDNF)及炎症反应等密切相关,且可能是协同作用的结果,为深入研究小柴胡汤治疗神经系统疾病及其机制提供理论依据。

个体化中医证候积分与传统中医证候积分在中医临床疗效评价中的应用对比研究

目的评价个体化中医证候积分在中医临床疗效评价中的优势。方法在中药干预双心疾病的临床试验中,分别使用个体化中医证候积分和传统中医证候积分,对患者主观症状进行疗效评价。结果在评价准确性上,两种评价方法整体疗效相似,但分别计算两种评价方法与实际主观感受的符合率,则个体化中医证候积分明显高于传统中医证候积分,差异有统计学意义(P<0.05);在评价全面性上,传统中医证候积分中仅包含7个固定症状,而个体化中医证候积分中出现了74个症状,几乎没有症状群完全相同的患者,两组出现频率均>30次的症状有10个,均与肝郁气滞证及其变证相关,且单个症状疗效试验组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与传统中医证候积分相比,个体化中医证候积分能够更加准确、全面地反映中医药干预前后患者主观感受的变化。

基于NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡探讨痹通方对类风湿关节炎大鼠的保护作用及机制

目的探讨痹通方通过调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体介导的细胞焦亡途径对类风湿关节炎大鼠的保护作用及机制。方法将70只SD大鼠随机分为7组:痹通方低、中、高剂量组分别给予4.2、8.4、16.8 g/(kg·d)灌胃,甲氨蝶呤组按7.5 mg/(kg·d)灌胃,MCC950组30 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予蒸馏水灌胃。于造模后第29天开始灌胃给药,1次/d。在末次给药8 h后取材,HE染色法检测各组大鼠踝关节组织形态学变化;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)相关指标变化;RT-qPCR法检测TNF-α、IL-18、IL-1β、血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1a(MIP-1a)相关基因水平变化,免疫组化法检测IL-1β,NLRP3蛋白水平变化,Western Blot法检测黑素瘤缺乏因子2(AIM2)、凋亡相关点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶前体-1(pro-Caspase-1)、Caspase-1、IL-18、IL-1β、活化的gasdermin D(cleaved-GSDMD)、GSDMD、NLRP3。结果与正常组比较,模型组大鼠踝关节间隙变窄,关节软骨表面不规则增厚,骨质出现轻度破坏,关节内可见炎性细胞和滑膜组织增生(P<0.01),模型组血清TNF-α、IL-18、IL-1β含量均明显升高(P<0.01),模型组TNF-α、IL-18、IL-1β、MCP-1、MIP-1a mRNA表达均明显升高(P<0.01),免疫组化法显示模型组IL-1β、NLRP3蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),WB法显示模型组AIM2、ASC、pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,痹通方高剂量组、甲氨蝶呤组及MCC950组上述各项检测指标均得到明显改善(P<0.05或0.01)。结论痹通方能够改善大鼠类风湿关节炎状态,其机制可能与调控NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡途径相关。

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠血清NSE、Cys-C、5-HT、5-HIAA及NE水平的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠血清神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)、胱抑素C(Cystatin C,Cys-C)、5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-Hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)及去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)水平的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)立体定向注射法制作PD大鼠模型,造模成功的PD大鼠随机分为模型组,西药组,中药高、中、低剂量组,中西药合用组,每组15只,另设假手术组15只。模型组及假手术组给予等容积生理盐水灌胃,其余组给予相应药物灌胃,连续给药28 d。大鼠腹主动脉取血,用酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清NSE、Cys-C、5-HT、5-HIAA及NE的水平。结果模型组大鼠血清NSE及Cys-C水平均明显升高,血清5-HT、5-HIAA及NE水平均明显降低;中药各剂量组、中西药合用组、西药组血清NSE及Cys-C水平均明显降低,5-HT、5-HIAA及NE水平均明显升高。结论龟羚帕安丸具有明显神经保护作用,作用机制与降低NSE及Cys-C水平,增加5-HT、5-HIAA及NE水平,降低脑实质损伤、神经炎症损伤及提高单胺类神经递质有关。

基于NFAT5介导的EMT研究益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制

目的探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响以及益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制。方法SD雄性大鼠20只,随机分成生理盐水组和益糖康组,每组10只。生理盐水组给予1 mL/100 g生理盐水灌胃,益糖康组给予2.10 g/100 g益糖康煎剂灌胃,连续5 d,腹主动脉取血,离心分离上清。通过高糖诱导HK-2细胞构建早期糖尿病肾病体外模型,并加入相应的药物进行干预。分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染NC-siRNA(NC-siRNA组)/NFAT5-siRNA(NFAT5-siRNA组)或生理盐水含药血清处理(NS组)/益糖康含药血清处理(YTK组)以及益糖康含药血清处理同时转染GV492-Empty(YTK+GV492-Empty组)/GV492-NFAT5(YTK+GV492-NFAT5组)细胞中NFAT5、E-cadherin以及Vimentin mRNA和蛋白表达水平的改变。再分别采用划痕和Transwell实验检测各组细胞迁移力和侵袭力的改变。结果转染NFAT5-siRNA能够明显抑制NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达;与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.01)均明显减弱。与NS组相比较,YTK组细胞中NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达水平明显降低。转染GV492-NFAT5能够明显促进NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达;与YTK+GV492-Empty组相比较,YTK+GV492-NFAT5组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)均明显增强。结论在高糖环境下,NFAT5会促进人肾小管上皮细胞发生EMT;益糖康能够通过下调NFAT5表达抑制肾小管上皮细胞发生EMT从而改善高血糖对肾脏的早期损伤。