胞外酸化经ASIC1/RIP1途径抑制TFEB介导的巨噬细胞脂噬

目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞,以pH 6.5培养液与25 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色检测细胞内脂质蓄积;蛋白质印迹(Western blot)检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察脂滴(Bodipy示踪)与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位;透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化;胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较,pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加,p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高,LC3II蛋白减少和p62蛋白增加,脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少,细胞内的脂滴数量显著增加,自噬体和脂噬泡的数量则明显减少,ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而,胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬,ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。

硫化物对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

硫是人体内蛋白质的重要组成元素,参与机体众多代谢与催化过程,为生命所必需。近年来,随着科学家们对骨髓间充质干细胞相关研究的不断深入,含硫化合物对骨髓间充质干细胞的影响日益受到关注。含硫化合物主要包含有机硫化物、无机硫化物、天然含硫化合物以及S-非甾体抗炎药复合体等,这些化合物可能通过影响细胞信号通路、细胞周期或氧化应激反应等,调节人骨髓间充质干细胞的成骨分化能力。因此含硫化合物或许能对后续更好地利用骨髓间充质干细胞分化进行疾病治疗以及干细胞的应用提供新思路。本文作者综述了相关硫化物与骨髓间充质干细胞成骨分化的关系,并对其机制和生物学应用进行了探讨。

膜转运体Megalin、Cubilin在C57小鼠肾发生发育中的时空表达研究

目的观察膜转运体Megalin、Cubilin在发生发育小鼠肾内的分布,从而揭示它们在肾发生发育中相应功能分化的时空规律。方法C57BL/6小鼠按雌雄1∶1合笼饲养,并于胚(胎)龄(Ed)E10、12、14、16、18 d,及生后日龄(Pd)P1、3、7、14、28、42 d,分离胎鼠、仔鼠或成鼠的肾脏。应用改良的块染技术对不同发育阶段的肾脏组织进行整体固定及染色,分别进行常规石蜡包埋,制成连续的石蜡切片(5μm)。选取连续切片中目标切片,采用免疫组织化学技术和免疫荧光技术对不同发育阶段的小鼠肾脏膜转运体Megalin和Cubilin进行定位,观察其在不同发育阶段的表达情况。结果Megalin和Cubilin在E10 d的中肾管上皮细胞开始有表达,E12 d时表达于肾脏输尿管芽上皮细胞的近腔面游离缘,二者主要以共表达模式存在。E14 d以后在发生发育小鼠肾脏的“逗号”小体、“S”型小体上皮细胞的游离缘呈弱表达,于肾脏近端小管的上皮细胞游离缘表达明显,偶尔可见在未发育成熟的血管球有弱表达。Megalin和Cubilin在细段、远端小管、集合管系统以及间质部分都未见表达。结论膜转运体Megalin和Cubilin在中肾管、输尿管芽、“逗号”小体、“S”型小体,以及近端小管的依次表达规律提示小鼠肾脏在中肾形成时期就开始有蛋白或多肽的转运功能。此外,二者稳定地出现在较为成熟的近端小管,较弱地出现在未成熟近端小管,表明其重吸收蛋白质的功能与近端小管结构的成熟度有关。

SREBP1c表达水平对肠道糖异生的影响

目的研究固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP1c)对肠道糖异生的调控作用。方法饥饿处理C57BL/6小鼠、SREBP1c纯合敲除型(SREBP1c-KO)和同窝野生型(SREBP1c-WT)小鼠,通过qPCR、Western blot检测糖异生途径限速酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase catalytic,G6PC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase 1,PCK1)在肝脏、空肠和回肠组织中的表达水平;在肠上皮细胞CaCo-2中过表达或敲低SREBP1c,检测细胞内G6PC和PCK1表达水平。结果饥饿处理后,C57BL/6小鼠空肠、回肠组织中G6PC、PCK1和SREBP1c表达水平均显著增加(P<0.05)。SREBP1c基因敲除后,小鼠空肠、回肠组织中由饥饿诱导的糖异生限速酶G6PC和PCK1的表达明显下调(P<0.05)。在肠上皮细胞CaCo-2中过表达SREBP1c,可显著上调糖异生途径关键酶G6PC和PCK1的表达,促进细胞内葡萄糖的产生(P<0.05);反之,敲低SREBP1c的表达,可明显下调G6PC和PCK1,抑制细胞内葡萄糖的产生(P<0.05)。结论饥饿状态下,SREBP1c可调控肠上皮细胞中糖异生限速酶G6PC和PCK1的表达,进而影响葡萄糖的生成,表明SREBP1c可能参与肠道糖异生的调控,机制有待进一步探索。

高脂饮食通过小肠上皮组织外泌体促进心脏纤维化

目的:研究高脂饮食通过小肠上皮组织外泌体对小鼠心脏成纤维细胞增殖、分化、胶原蛋白合成的影响。方法:分别提取正常饮食/高脂饮食小鼠小肠上皮组织外泌体,与小鼠原代心脏成纤维细胞共培养,PKH26标记外泌体,示踪观察心脏成纤维细胞对外泌体的摄取情况;对心脏成纤维细胞进行荧光定量PCR,观察增殖、分化、纤维化、炎症等基因表达;利用免疫荧光染色观察心脏成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscleactin,α-SMA)、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果:正常/高脂饮食小鼠小肠上皮组织外泌体均可被心脏成纤维细胞摄取,且两者摄取效率无差异。相比正常饮食组,高脂饮食小鼠小肠上皮组织外泌体可显著增加心脏成纤维细胞增殖分化、细胞外基质积聚、炎症等基因表达,合成α-SMA蛋白、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白能力增强。结论:高脂饮食可以通过小肠上皮组织外泌体促进心脏成纤维细胞增殖、分化及胶原产生。

肥胖代谢状态与内脏脂肪免疫细胞的关联分析

目的:探究体重正常(lean)、肥胖代谢正常(metabolically healthy obesity,MHO)与肥胖代谢异常(metabolically unhealthy obesity,MUO)个体内脏脂肪组织(visceral adipose tissue,VAT)中免疫细胞占比差异。方法:内脏脂肪组织标本来源于南京医科大学第一附属医院因肥胖行代谢手术治疗的48例患者及体重和代谢指标正常但因其他非炎症性疾病(疝气、胆结石及肾囊肿等)行腹腔镜手术的11例患者。提取脂肪组织RNA,进行RNA-seq检测,根据RNA-seq结果统计分析3组间内脏脂肪免疫细胞构成比情况和差异基因表达情况,通过单因素方差分析及Pearson相关性分析等分析方法进行数据统计。结果:各组间调节性T细胞,激活的NK细胞及M0、M2型巨噬细胞占比存在差异,P值分别为0.031、0.002、0.004和0.024;与其他两组相比,MUO组M2型细胞占比下降(P=0.014);两组肥胖患者的内脏脂肪中SPP1、CHIT1、ITGAX、CD300LB、IL1RN及DCSTAMP等基因与M0、M1型巨噬细胞占比呈正相关关系,而与M2型巨噬细胞占比多呈负相关关系。C5a受体1(complement fragment 5a receptor 1,C5AR1)及G蛋白偶联受体183(G-protein coupled receptor 183,GPR183)基因在MHO组中表现为与M0及M1型巨噬细胞占比正相关,与M2型巨噬细胞占比负相关;在MUO组中则呈现相反的关联性。结论:与体重正常组相比较,肥胖组人群的内脏脂肪组织存在显著巨噬细胞浸润;肥胖两组间比较,代谢异常者巨噬细胞亚类中M1型巨噬细胞占比升高,提示机体内高炎症水平与代谢能力受损有关;C5AR1、GPR183可能作为预测肥胖患者代谢状态的生物学指标。

氨酰tRNA合成酶非经典作用的研究进展

氨酰tRNA合成酶(ARS)是一类在进化上高度保守且在生物体内广泛表达的必须酶,能将特定的氨基酸连接到同源tRNA,确保遗传信息的正确稳定传递。多种ARS通过蛋白质相互作用形成多tRNA合成酶复合物(MSC)。除了经典的催化合成作用,ARS还参与调控多种生物过程,如细胞凋亡、自噬、细胞衰老、血管生成等。为了更深入了解ARS的功能,该文对ARS的非经典作用进行综述。

莱菔硫烷对ox-LDL诱导血小板活化的抑制作用

目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导血小板活化的影响及其可能的分子机制。方法:在体外实验中,将健康人纯化血小板与不同浓度的SFN(1.0、2.5、5.0μmol/L)共同孵育40 min,然后用ox-LDL激活血小板20 min,并检测血小板活化的指标,包括CD62P的表达、胞内血小板因子4(platelet factor4,PF4)和趋化因子配体5(chemokine ligand 5,CCL5)的释放水平。机制上,用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板肉瘤酪氨酸激酶(sarcoma tyrosine kinase,Src)及其下游的脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)磷酸化水平;用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒测定胞内总ROS水平。结果:ox-LDL诱导的血小板CD62P的表达以及PF4和CCL5的释放水平均可被SFN显著抑制(P<0.05);SFN显著下调ox-LDL诱导的血小板Src和Syk的磷酸化水平以及胞内总ROS水平(P<0.05)。此外,ox-LDL诱导的血小板CD62P的表达、PF4和CCL5的释放可被Src家族激酶抑制剂PP2所抑制(P<0.05),但PP2与SFN联合使用时,无协同抑制效果(P>0.05);Src家族激酶激活剂MLR-1023可逆转SFN对ox-LDL诱导的血小板活化的抑制作用(P<0.05)。结论:SFN可显著抑制ox-LDL诱导的血小板活化,其机制可能是下调Src/Syk/ROS介导的信号通路。

11β-羟化类固醇脱氢酶敲除对高脂饮食喂养小鼠认知功能的影响

目的:探究11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD1)基因敲除对小鼠整体代谢和认知功能的影响。方法:将C57BL/6J为遗传背景的野生对照组及11β-HSD1基因敲除组各15只小鼠高脂喂养20周,代谢笼评估能量代谢,行为学评估观察小鼠认知功能,电镜评估海马体的线粒体结构,免疫荧光及PCR确定其认知功能、线粒体功能相关基因及炎症基因的变化。结果:11β-HSD1基因敲除能够提高高脂喂养小鼠学习和记忆能力,改善握力,改善海马体的微结构、线粒体含量变多,认知相关基因、线粒体呼吸功能相关基因上调,炎症相关基因改变。结论:11β-HSD1敲除后高脂饮食喂养小鼠认知功能显著改善,握力显著提高,可能是治疗认知功能障碍的有效靶点。

白藜芦醇通过PLIN2调控ATGL/CGI58和Rab7/LC3β促进肝脂质分解

目的明确白藜芦醇(resveratrol,RSV)通过围脂滴蛋白2(perilipin 2,PLIN2)增强脂质分解的作用,并从脂解和脂噬途径阐明其作用机制。方法建立HHL-5细胞脂肪变性模型,分为对照组、棕榈酸组、siPLIN2转染组和不同浓度RSV处理组(5、10、20、40μmol/L)。采用CCK-8、细胞内甘油三酯(TG)含量测定、Bodipy染色检测不同浓度RSV对脂肪变性HHL-5细胞活力和脂肪分解的影响,采用Real-time qPCR、Western blot、免疫荧光染色检测肝脂质分解相关分子表达及平均荧光强度变化情况,并联合PLIN2 siRNA转染技术验证RSV促进肝脂质分解的通路。结果与对照组比较,棕榈酸组的甘油三酯含量和脂滴平均荧光强度升高(P<0.05),脂质分解相关分子PLIN2、ATGL、CGI58、Rab7、LC3β表达和平均荧光强度及共定位程度均明显降低(P<0.05)。40μmol/L RSV处理后可以减少脂肪变性HHL-5细胞的脂肪蓄积(P<0.05),并增加脂质分解相关分子的表达和平均荧光强度及共定位程度(P<0.05)。敲减PLIN2后,RSV调控脂解和脂噬相关分子以及改善肝细胞脂肪变性的作用消失(P<0.05)。结论RSV通过上调PLIN2,从而促进ATGL/CGI58和Rab7/LC3β的表达及其相互作用,最终增强肝脂质分解。

转录因子FLI-1通过上调Klotho基因改善心肌细胞肥大

目的探讨转录因子FLI-1通过Klotho介导的IGF-1R/Gi/PLC途径对心肌细胞肥大的影响。方法将大鼠心肌细胞(H9c2)分为对照组、模型组、模型+NC Vector组、模型+pcDNA-FLI-1组、模型+NC Vector+NC siRNA组、模型+NC Vector+Klotho siRNA组、模型+pcDNA-FLI-1+NC siRNA组和模型+pcDNA-FLI-1+Klotho siRNA组等共8组。通过用异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)处理细胞,建立心肌细胞肥大模型,细胞分别转染pcDNA-FLI-1和Klotho siRNA。采用流式细胞术观测细胞凋亡,鬼笔环肽染色观测细胞肥大面积;采用Western blot检测细胞凋亡、肥大及IGF-1R/Gi/PLC途径相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著增加(P<0.05),表明建模成功;与模型+NC Vector组比较,模型+pcDNA-FLI-1组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著降低(P<0.05)。与模型+NC Vector+NC siRNA组相比,模型+NC Vector+Klotho siRNA组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著增加(P<0.05);与模型+pcDNA-FLI-1+NC siRNA组相比,模型+pcDNA-FLI-1+Klotho siRNA组细胞凋亡、心肌细胞表面积及IGF-1R、GNAI1和PLCG1表达显著降低(P<0.05)。结论FLI-1能够通过上调Klotho抑制IGF-1R/Gi/PLC途径,减轻心肌细胞凋亡及心肌细胞肥大面积。

CRABP2在肿瘤发生发展中的作用研究

视黄酸(retinoic acid,RA)是维生素A的代谢中间产物,在胚胎发育和细胞的生长及分化过程中发挥重要作用。细胞视黄酸结合蛋白2(cellular retinoic acid-binding proteins 2,CRABP2)是一组低相对分子质量的胞内蛋白,其主要生理功能之一是将RA运输到细胞核中,与视黄酸受体(retinoic acid receptor,RAR)结合,从而调控特定的下游信号通路来发挥作用。研究发现,CRABP2的异常表达与人类恶性肿瘤密切相关,能通过调节诸多生长或凋亡相关通路或关键生物学分子,影响肿瘤的发生、发展。因此,CRABP2或许可以作为新的肿瘤诊断和预后标志物,并作为恶性肿瘤新的治疗靶点。本文就CRABP2与肿瘤发生发展、耐药及预后的关系作一综述,为后续研究提供参考。

VPS13A在3T3-L1脂肪细胞分化过程中的表达及调控研究

目的:明确囊泡分选蛋白13A(vacuolar protein sorting 13 homolog A,VPS13A)在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embry-onic fibroblast cells,3T3-L1)分化过程中的表达水平;探索VPS13A对3T3-L1细胞的影响。方法:利用Western blot及Q-PCR法检测3T3-L1细胞在分化过程中VPS13A的表达,利用CRISPR/Cas9系统构建VPS13A稳定敲降细胞系,Western blot和油红染色检测VPS13A敲降后对3T3-L1细胞分化的影响。结果:VPS13A的表达在3T3-L1分化过程的早期降低,在分化的后期升高。敲降VPS13A后,3T3-L1细胞中脂滴增多,参与调控脂肪细胞分化基因的表达水平升高。结论:在3T3-L1细胞中VPS13A的表达水平在分化过程中被调控,敲降VPS13A可以促进3T3-L1细胞的分化成熟。

小鼠IL-3的原核表达条件优化及其促肥大细胞分化成熟的活性研究

目的:对小鼠白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)进行原核表达条件筛选和优化,为体外肥大细胞模型的高效率构建奠定物质基础。方法:根据小鼠IL-3的核苷酸序列进行大肠杆菌偏爱密码子优化并构建至p ET-28a(+)质粒中,随后转化至大肠杆菌BL21(DE3)并筛选小鼠IL-3在该体系下表达的最佳条件,结合镍亲和层析和离子交换层析对其进行纯化,验证其促进小鼠骨髓细胞分化为肥大细胞的活性。结果:成功构建pET-28a(+)-IL-3原核表达载体,诱导出在SDS-PAGE中显示约16 kDa的蛋白条带,并通过四因素多水平参数筛选确定了最佳的诱导条件。最终纯化的小鼠IL-3与干细胞生长因子联合诱导小鼠骨髓细胞分化可成功获得表面FcεRI和CD117双阳性的肥大细胞,且具有β-己糖胺酶释放功能。结论:构建了小鼠IL-3的表达载体并筛选了最佳的原核表达条件,所纯化的小鼠IL-3能够成功用于过敏反应研究的体外肥大细胞模型构建。

D-半乳糖脑老化模型的脂质过氧化机理

运用体内、体外相结合的方法观察了Ｄ－半乳糖（Ｄ－ｇａｌ）对脂质过氧化和蛋白质代谢的影响。结果表明：Ｄ－ｇａｌ使大鼠脑组织、家蝇头和培养大鼠神经细胞、人胚肺二倍体成纤维细胞（ＨＢＳ）均出现ＳＯＤ含量下降，ＭＤＡ和脂褐素（Ｌｉｐｏ）水平升高及大鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）水平降低等现象；此外，大鼠脑组织中总ＲＮＡ含量下降，可溶性蛋白减少，不可溶性蛋白增加，这些变化与老年对照相类似，也与黄嘌呤氧化酶－次黄嘌呤系统产生的Ｏ２结果一致。提示，在Ｄ－ｇａｌ的代谢过程中伴有活性氧自由基产生，以Ｏ２为主的自由基介导的脂质过氧化可能是该脑老化模型的主要原因。

肠黏膜上皮细胞的载体分布及功能

目的:谷氨酰胺是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内。研究IEC-6细胞膜上分布的谷氨酰胺载体种类及其功能。方法:体外培养肠黏膜上皮细胞株IEC-6,检测细胞膜上不同谷氨酰胺载体(ASCT2、SN1、SN2、ATA1、ATA2、LAT1、LAT2)的mRNA;检测载体ASCT2蛋白;测定不同载体对同位素标记谷氨酰胺的转运特性。结果:在IEC-6细胞膜上载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2的mRNA均得以表达。细胞外缓冲液中Na+存在时,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(164.07±37.94)fmol/(mg protein.10 min);Na+不存在时,[3H]-谷胺酰胺摄取率为(58.71±10.51)fmol/(mg protein.10 min);饱和剂量甲氨基异丁酸(methylamino-isobutyric acid,MeAIB)阻断A类载体后,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(81.02±19.59)fmol/(mg protein.10 min)。结论:在IEC-6细胞膜上可能存在载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2;Na+依赖性氨基酸载体起主要作用(约64.22%),其中A类载体占50.62%,非A类载体占13.60%,非Na+依赖载体起次要作用(35.78%)

吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变

目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高。结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用。

P物质刺激下脊髓星形胶质细胞活化中磷酸化P38丝裂素活化蛋白激酶和c-fos的表达及作用

目的观察P物质(substance P,SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响。方法采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PCR检测P38MAPK磷酸化和c-fos表达的变化,ELISA法检测SB203580阻断P38MAPK磷酸化对炎性因子TNF-α、IL-1β、NO分泌的影响。结果在SP(10-7mol/L)刺激下,P38MAKP在15、30、45、60min时均明显磷酸化,与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01),磷酸化高峰在45min;SP(10-7mol/L)作用下c-fos表达明显,30min、1、3、6h均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),3h达到高峰;SP(10-7mol/L)刺激脊髓星形胶质细胞明显分泌炎性因子IL-1β、TNF-α和NO(P<0.01),SB203580阻断P38MAKP信号通路后TNF-α和NO的分泌下降(P<0.01),IL-1β的分泌在阻断前后无显著性差异(P>0.05)。结论SP作用下脊髓星形胶质细胞中P38MAPK和c-fos信号通路激活,P38MAPK磷酸化参与了SP作用下脊髓星形胶质细胞的活化及炎性因子的分泌,与星形胶质细胞在脊髓中枢对痛觉的调控有关。

体外培养的成骨细胞中碱性磷酸酶活性的检测方法探讨

检测细胞内碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性是体外研究细胞分化及功能的重要手段。实验根据ＡＬＰａｓｅ活性检测的基本原理，探讨了体外培养的成骨细胞中ＡＬＰａｓｅ活性的检测方法。对９６孔细胞培养成骨细胞，以２００μｌ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００＋超声破碎细胞，以氢氧化钠终止ＡＬＰａｓｅ分解底物的反应。对人胚成骨细胞而言，细胞裂解产物与底物及０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ的配比比例以４０∶１００∶１００（μｌ）为宜，有较好的灵敏性和可靠性。

湖光牛奶脂肪酸的气相色谱-质谱联用分析

[目的]建立简易方法检测湛江市湖光牛奶脂肪酸,并分析其营养价值。[方法]以BF3/MeOH溶液为衍生化试剂,正十七碳饱和脂肪酸(C17:0)为内标,牛奶脂肪酸的抽提和甲酯化一步完成;经DB-WAX石英毛细管柱分离,气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行定性定量分析。[结果](1)本方法重现性试验脂肪酸CV为1.15%～5.68%,仪器重现性CV为2.31%～9.81%,回收率为84.2%～105.0%。(2)湖光牛奶含有16种脂肪酸,平均饱和脂肪酸:单不饱和脂肪酸:多不饱和脂肪酸为11.80:4.38:1,饱和脂肪酸的含量最高,达到69%;多不饱和脂肪酸的含量最低,仅为6%;ω-6/ω-3脂肪酸比率为2.30。[结论]本方法高效易行,准确可靠,节省时间,适合大标本量的检测;湖光牛奶饱和脂肪酸,单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸比例不均衡,有必要优化脂肪酸的组分以提高其营养价值。