长链非编码RNA GC1靶向微小RNA-551b-3p抑制食管癌的作用及分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)鸟苷酸环化酶1(GC1)对食管癌的影响,并探讨其靶向微小RNA-551b-3p(miR-551b-3p)的分子机制。方法建立食管癌荷瘤裸小鼠模型,随机分为GC1、miR-551b-3p上、下调组及其对应对照组与模型组共9组,每组8只。末次给药次日处死裸小鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率;取肿瘤组织检测LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平和细胞周期因子(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x(Bax)基因与蛋白表达水平;观察肿瘤组织病理改变;采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GC1与miR-551b-3p的调控关系。另取人食管癌细胞株Eca109分为9组,每组3个复孔,其中基因干扰组命名同上,另设置空白组,培养48h后观察细胞LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平、形态学改变、凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平。结果动物实验:与模型组和相应对照组比较,GC1上调组与miR-551b-3p下调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均上升,抑瘤率、细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均下降;GC1下调组与miR-551b-3p上调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均下降,抑瘤率和细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均上升;GC1上调组LncRNA GC1基因表达水平上升,GC1下调组LncRNA GC1基因表达水平下降(P<0.05)。与转染野生型GC1的腺病毒载体相比,转染突变型GC1的腺病毒载体的miR-551b-3p荧光素酶相对活性上升(P<0.05)。细胞实验:LncRNA GC1和miR-551b-3p基因表达水平、细胞形态学改变与凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平变化趋势均与动物实验相同。结论下调LncRNA GC1、上调miR-551b-3p表达水平均可抑制食管癌进展,且下调LncRNA GC1可靶向上调miR-551b-3p,并降低CyclinD1和Bcl-2活性、上升p21和Bax活性。

灵芝提取物通过Nrf2/ARE通路对肝硬化小鼠肝功能的保护作用研究

[目的]探讨灵芝提取物(ganoderma lucidum extract,GLE)对肝硬化小鼠的肝保护作用及机制。[方法]将10只雄性C57BL/6小鼠作为对照组,剩余40只小鼠采用四氯化碳橄榄油混悬液诱导肝硬化模型,并随机分为模型组和GLE低(50 mg/kg·d)、中(100 mg/kg·d)、高(200 mg/kg·d)剂量组,对照组及模型组均灌胃等量0.9%氯化钠溶液。计算肝脏指数;以全自动生化分析仪检测小鼠血清中谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)活性和总胆固醇(total cholesterol,TC)、总胆红素(total bilirubin,TB)和肌酐(creatinine,Cr)水平;以苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝组织病理学变化,Masson染色观察肝组织纤维化程度;以脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色观察肝细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;免疫印迹法检测肝组织中总核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)和核Nrf2、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况。[结果]与对照组比较,模型组小鼠肝损伤明显,肝脏指数,血清ALT、AST活性,TC、TB及Cr水平,肝纤维化程度,肝细胞凋亡指数,血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平,α-SMA及CollagenⅠ蛋白相对表达量升高(P<0.05),血清SOD和GSH-Px活性、肝组织总Nrf2和核Nrf2、HO-1、NQO1及E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,GLE低、中、高剂量组小鼠肝损伤逐步减轻,肝脏指数,血清ALT、AST活性,TC、TB及Cr水平,肝纤维化程度,肝细胞凋亡指数,血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平,α-SMA及CollagenⅠ蛋白表达降低(P<0.05),血清SOD和GSH-Px活性、肝组织总Nrf2和核Nrf2、HO-1、NQO1及E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。[结论]GLE可减轻肝硬化小鼠组织病理损伤,改善肝功能,这可能与激活Nrf2/ARE通路,抑制氧化应激和炎症反应,进而干预肝纤维化有关。

热休克蛋白在椎间盘退变中作用的研究进展

椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IVDD)是指椎间盘的结构和功能发生异常变化的病理过程[1]。全球40岁以上人群中,超过60%的人存在IVDD;而在60岁以上的老年人中,IVDD的发生率高达80%以上[2]。IVDD给公共卫生和社会经济带来了巨大负担,但目前医学界对其缺乏特效疗法。

MiR-181c-5p对卵巢癌干细胞样细胞肿瘤血管生成拟态的作用及其机制

目的探讨miR-181c-5p对卵巢癌干细胞样细胞(OCS-LCs)肿瘤血管生成拟态(VM)的作用及其机制。方法采用无血清悬浮培养法将人卵巢癌细胞系OVCAR3细胞诱导形成OCS-LCs。将OVCAR3细胞分为A~C组,各组分别转染NC-miR-181c-5p、siRNA-miR-181c-5p和pRNA-miR-181c-5p。通过成球实验评估A~C组细胞成球能力。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测A~C组细胞miR-181c-5p的相对表达量,采用Western blot实验检测A~C组细胞Oct-4、Nanog、HIF-1α和VEGF蛋白相对表达量。采用CCK-8实验检测A~C组细胞的活性,采用三维立体培养实验检测A~C组的血管形成率。结果OVCAR3细胞成功被诱导形成OCS-LCs。RT-qPCR实验结果显示,B组细胞的miR-181c-5p相对表达量显著低于A组,C组高于A组(t=2.25、8.68,P<0.05)。成球实验结果显示,B组与A组、A组与C组相比,细胞的成球周期显著缩短,最大的细胞球直径显著增大,成球率显著增加(t=5.56~33.66,P<0.05)。Western blot实验结果表明,B组与A组、A组与C组相比,Oct-4、Nanog、HIF-1α和VEGF蛋白相对表达量显著升高(t=4.51~56.15,P<0.05)。CCK-8实验结果显示,B组的细胞活性高于A组,C组低于A组(F=97.70~281.80,P<0.05)。三维立体培养实验结果显示,B组与A组、A组与C组相比较,血管形成率显著性提高(t=3.70、18.67,P<0.05)。结论miR-181c-5p可能通过降低细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达,从而抑制OCS-LCs的VM形成。

METTL3调控miR-301a促进缺氧环境下内皮集落形成细胞血管生成

目的:探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞(ECFCs)血管生成能力的影响及甲基转移酶样3(METTL3)的调控作用。方法:分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L氯化钴(CoCl_(2))的培养基处理细胞24 h,对照组CoCl_(2)浓度为0。CCK-8检测不同浓度CoCl_(2)对ECFCs增殖的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,筛选适宜浓度的CoCl_(2)用于缺氧环境构建。Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力。RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况。构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs,将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组。RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化。结果:与正常对照组比较,50μmol/L和100μmol/L的CoCl_(2)培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖(均P<0.0001),HIF-1α随着CoCl_(2)浓度升高而高表达(P<0.01)。100μmol/L CoCl_(2)组中ECFCs迁移能力和血管生成能力提高(均P<0.01),VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高(均P<0.01),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高(均P<0.01)。与NC-shRNA组比较,METTL3-shRNA组中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA表达降低(均P<0.05),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力,METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成。

转化生长因子-β_(1)诱导多脏器纤维化机制的研究进展

脏器纤维化是多种慢性疾病的共同病理标志,转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))可促进肌成纤维细胞增殖与活化,促进细胞外基质沉积并抑制其降解,并通过介导经典通路参与纤维化的发生。文章结合炎性反应和免疫应答、非编码RNA(ncRNA)以及信号通路之间串扰的相互作用,对TGF-β_(1)诱导各脏器纤维化的具体分子机制进行综述。

补肾法联合常规西医治疗颈动脉粥样硬化疗效的Meta分析

目的:系统评价补肾法联合常规西医治疗颈动脉粥样硬化的临床疗效。方法:计算机检索中国知网、维普数据库、万方数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、EMbase、Cochrane Library等数据库,纳入自建库至2022年8月收录的采用补肾法联合常规西药治疗颈动脉粥样硬化(试验组)对比单纯采用常规西药治疗(对照组)的随机对照试验,由两名评价员独立提取数据,通过RevMan 5.1软件进行文献质量评价和Meta分析。结果:共检查到相关文献465篇,其中中文文献451篇、外文文献14篇,经过筛除后最终纳入11篇随机对照试验,共计1 653例患者,其中试验组828例、对照组825例。Meta分析结果显示,在改善中医证候评分、颈动脉内膜中层厚度、总血脂水平及总胆固醇水平上,试验组均优于对照组。但在改善三酰甘油和低密度脂蛋白水平上,组间差异无统计学意义。在改善Crouse斑块积分水平和颈总动脉血流各项参数上,试验组优于对照组。结论:补肾法联合常规西药治疗颈动脉粥样硬化可以提高临床有效率,降低颈动脉内膜中层厚度和Crouse斑块积分,改善血脂水平与颈总动脉血流参数,降低不良反应发生率。

普鲁士蓝纳米颗粒促进糖尿病皮肤创面愈合

背景:炎症、氧化应激及细菌感染是糖尿病创面难愈合的主要原因,近年来各种无机纳米材料以其抗菌活性被广泛应用于皮肤创面愈合的治疗,但抗氧化和抗炎方面的作用有限。目的:考察普鲁士蓝纳米颗粒在抗氧化、抗炎和光热抗菌多方面的糖尿病创伤修复的效果。方法:制备普鲁士蓝纳米颗粒并进行表征。(1)体外实验:采用MTT法检测不同浓度普鲁士蓝纳米颗粒的生物相容性;在过氧化氢条件下,检测普鲁士蓝纳米颗粒的细胞保护作用及活性氧荧光表达;检测普鲁士蓝纳米颗粒分解过氧化氢和超氧阴离子自由基的能力;考察普鲁士蓝纳米颗粒抑制脂多糖诱导巨噬细胞炎症的作用;采用平板菌落计数法检测普鲁士蓝纳米颗粒的光热抗菌能力。(2)体内实验:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病ICR小鼠模型,使用打孔器在背部建立直径6 mm全厚皮肤创面,分对照组(未给予治疗)、普鲁士蓝组及普鲁士蓝光照组干预,观察创面愈合与组织形态学变化。结果与结论:(1)体外实验:普鲁士蓝纳米颗粒在25-200μg/mL质量浓度下对细胞无毒性;普鲁士蓝纳米颗粒具有极强的抗氧化能力,能够抑制氧化应激条件下过度活性氧的产生及对细胞的杀伤,对过氧化氢有降解活性且具有很强的清除超氧阴离子自由基的能力;普鲁士蓝纳米颗粒还显示出显著的抗炎活性,并且在光照后显示出极强的抗菌能力。(2)体内实验:造模14 d后,普鲁士蓝组、普鲁士蓝光照组创面明显缩小,其中普鲁士蓝光照组创面愈合速度最快。苏木精-伊红和Masson染色显示,普鲁士蓝组、普鲁士蓝光照组创面可见大量的肉芽组织形成及胶原沉积,其中以普鲁士蓝光照组最多;免疫荧光染色显示,与对照组比较,普鲁士蓝组和普鲁士蓝光照组α-SMA和CD31表达明显增多(P<0.05),F4/80表达明显减少(P<0.05),其中以普鲁士蓝光照组改善更明显。(3)结果表明,普鲁士蓝纳米颗粒通过发挥抗炎、抗氧化及抗菌作用促进糖尿病小鼠模型皮肤创面的愈合。

翻译调控在纤维化发生中的作用进展

目前纤维化疾病的治疗仍是世界性难题,其带来的医疗负担不容小觑。纤维化疾病病因涉及创伤、感染、代谢或自身免疫等多方面,研究发现纤维化疾病有着共同的病理基础,但尚未阐明其具体的分子机制。由于蛋白质是生物学行为的重要参与者,因此在翻译水平探究纤维化疾病的分子机制可能是有效的研究方案。本综述基于数据平台(PubMed、Web of science等)检索文献,回顾近5年关于翻译水平调控纤维化的分子机制研究进展,拟通过总结推动人们对纤维化分子机制的认识。我们总结了在翻译的起始、延伸以及终止阶段对纤维化的发生有重要影响的因子。例如翻译起始因子家族的在翻译起始过程中的关键影响,延伸因子在肽链延伸过程中的重要作用,正确识别终止密码子在翻译终止过程中的重要意义。除此之外,我们还总结了其他在翻译水平有重要作用的因子,例如微小RNA、转运RNA、小核糖体RNA及长非编码RNA等。

PDGF与肝素对动脉SMCⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原蛋白合成的作用

目的研究、探讨血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）和肝素对人主动脉平滑肌细胞（ｈｕｍａｎａｏｒｔａｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ｈＡＳＭＣ）增殖、胶原蛋白的合成、分泌以及Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子－β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）ｍＲＮＡ表达的调节作用。方法３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－脯氨酸掺入及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－脯氨酸掺入的比较采用ｔ检验。结果ＰＤＧＦ能促进ｈＡＳＭＣＤＮＡ的合成和胶原蛋白的合成、分泌；能上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达。肝素能抑制ｈＡＳＭＣＤＮＡ合成和胶原蛋白的合成、分泌，还部分拮抗ＰＤＧＦ促进ｈＡＳＭＣＤＮＡ合成和胶原蛋白合成、分泌的作用，以及拮抗ＰＤＧＦ上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达的作用。结论ＰＤＧＦ能通过上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达促进平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＳＭＣ）胶原蛋白的合成、分泌；肝素能抑制ＳＭＣＤＮＡ和胶原蛋白合成，还能拮抗ＰＤＧＦ的促ＳＭＣ胶原蛋白合成?

造影剂肾病发病机制中炎症反应的探讨

目的:通过观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)与核因子κB(NF-κB)在造影剂肾病(CIN)模型大鼠肾组织中的表达,初步探讨CIN发病中是否存在炎症反应机制。方法:将96只雄性SD大鼠随机分成2组:模型组(n=48)和对照组(n=48),分别从尾静脉注射碘造影剂和生理盐水10 mL/kg。在注射后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5d、10 d和15 d各处死6只大鼠,留取血液和肾组织,采用HE染色法观察肾脏病理变化,免疫组化和RT-PCR法分别检测肾损伤分子1(KIM-1)、NF-κB、TNF-α蛋白和mRNA表达情况,并进行相关性分析。结果:(1)对照组血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)各时点变化不大(P>0.05),模型组各时点(除15 d外)SCr和BUN水平明显高于对照组(P<0.05);(2)对照组各时点肾小管无明显损伤,病理评分无显著差异(P>0.05)。模型组的肾小管损伤评分显著高于同一时点的对照组(P<0.05);(3)各因子在造膜后6 h后开始大量表达,KIM-1蛋白及mRNA在24 h达高峰,NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA在48 h达高峰,且与对照组对应时点(除15 d外)比较均有显著差异(P<0.05);(4)模型组肾小管损伤评分与NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达呈正相关(r=0.843、0.758、0.743和0.707,P<0.05);模型组肾组织的NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达与KIM-1蛋白及mRNA表达呈正相关(r=0.863、0.807、0.839和0.855,均P<0.05)。结论:NF-κB和TNF-α在CIN大鼠肾脏中的表达上调,其表达水平与肾小管损伤程度相关。CIN的发生发展中存在炎症反应机制。

染料木素和槲皮素对成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制作用

目的 :研究染料木素 ( genistein,GE)和槲皮素 ( quercetin,QU)对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法 :用结晶紫染色法测定光密度值检测 NIH3T3成纤维细胞增殖 ,用 3 H-脯氨酸掺入法测定 3 H-脯氨酸掺入 NIH3T3细胞的 Bq值表示胶原合成作用。 结果 :GE和 QU都能浓度依赖性抑制血清、血小板源生长因子 ( PDGF )或转化生长因子β1( TGF-β1)刺激的NIH3T3细胞增殖和胶原合成。 结论 :GE和 QU具有体外抑制成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

舒洛地特失活YAP减轻大鼠动静脉瘘新生内膜增生

目的研究舒洛地特(sulodexide,SDX)对慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)大鼠动静脉瘘(arteriovenous fistula,AVF)新生内膜增生的作用及调节机制。方法选取体质量(300±50)g雄性大鼠18只,随机分为3组(n=6):AVF组,对正常大鼠进行AVF手术;慢性肾病组(CKD+AVF),大鼠经诱导慢性肾病后进行AVF手术+生理盐水灌胃2月;舒洛地特组(CKD+AVF+SDX),大鼠经诱导慢性肾病后进行AVF手术+8 mg/(kg·d)SDX灌胃2月。HE染色检测血管内膜增生程度,免疫荧光检测Hippo信号通路相关分子YAP、pYAP、YAP下游靶蛋白间充质细胞标志分子(connective tissue growth factor,CTGF)表达情况。以不同浓度SDX(0、2.5、5、10、20、40μg/mL)处理人脐静脉细胞融合细胞(EAHy926),并以2.5μg/mL SDX分别处理细胞24、48、72 h,用CCK-8法检测细胞存活率。进一步利用CKD大鼠血清处理细胞,并在此基础上用SDX及YAP阻断剂维替泊芬处理,通过Western blot实验检测YAP、pYAP、CTGF及内皮细胞标志分子CD31表达。结果HE染色及免疫荧光结果表明,与AVF组大鼠相比,慢性肾病组大鼠瘘口处内膜严重增生(P<0.05),pYAP表达微弱而CTGF表达增强,舒洛地特组经SDX灌胃处理后内膜增生减轻,pYAP表达增强,CTGF表达水平降低(P<0.05)。CCK-8结果表明,随SDX浓度及处理时间的增加,细胞存活率降低(P<0.05)。Western blot结果发现,SDX促进EAHy926细胞pYAP及CD31的表达,抑制了CTGF的表达(P<0.05),与维替泊芬处理效果一致。结论舒洛地特通过阻止CKD引起的YAP激活,减轻了AVF血管内膜增生。

槲皮素对硅肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1、磷酸化P38MAPK表达及血清TNF-α水平的影响

目的:观察槲皮素对硅肺纤维化大鼠血清TNF-α水平、肺组织TGF-β1和磷酸化P38MAPK(pP38MAPK)表达的影响。方法:将75只大鼠随机分为对照组、模型组和槲皮素组,每组25只。模型组与槲皮素组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)制备硅肺纤维化大鼠模型;自造模后第2天开始,对照组和模型组大鼠每天腹腔注射0.5 mL生理盐水,槲皮素组每天按50 mg/kg剂量腹腔注射槲皮素,连续14 d。造模后第3、7、14、21、28天,每组分别处死5只大鼠,应用ELISA法检测血清TNF-α水平,免疫组化SP法检测肺组织TGF-β1的表达,Western blot法检测肺组织p-P38MAPK的表达。结果:模型组大鼠造模后第7天肺组织为明显的急性炎症表现,第14、28天肺组织炎症较前有所减轻,但纤维化程度增加。槲皮素组肺组织病理变化与模型组相似,但早期炎症反应和晚期纤维化程度都轻于模型组。模型组和槲皮素组大鼠血清TNF-α水平、肺组织TGF-β1和p-P38MAPK的表达均较对照组升高(P<0.05),第7或第14天达高峰,之后逐渐降低(P<0.05),但槲皮素组各指标低于模型组(P<0.05)。结论:槲皮素可能通过抑制P38MAPK通路的激活,抑制细胞因子TGF-β1和TNF-α生成,从而抑制SiO2诱导的大鼠肺纤维化过程。

两种小鼠肺纤维化造模方法的比较

目的 对比研究肺纤维化造模方法 ,探寻出一种较为简便可靠的方法。方法 将雾化吸入不同剂量博莱霉素处理的小鼠及进行气管给药的小鼠 ,分别于 7、14、2 8d处死后 ,取其肺叶制备病理切片 ,染色后镜检。结果 一定时间的博莱霉素雾化吸入给药及气管给药 ,均可造成肺纤维化模型。前者药物在肺内分布均匀 ,而后者分布不均。结论 气管内直接注入药物的造模方法由于药物入肺分布不均 ,造成各肺叶纤维化程度有明显差异 ;雾化吸入法操作简便 ,吸入药物在肺内分布均匀 ,是一种较为理想实用的肺纤维化造模方法。

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景:mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的:验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法:将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论:脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P<0.05),胰岛素样生长因子1的表达较假手术组上升(P<0.05)。与NC组和NC-mimics组比较,mi R-146a-3p mimics组星形胶质细胞凋亡率增加(P<0.01),增殖能力下降(P<0.01),迁移数量减少(P<0.01)。结果表明,脊髓损伤后脊髓组织中mi R-146a-3p表达量下降,胰岛素样生长因子1表达量上升;在星形胶质细胞中mi R-146a-3p靶向调节胰岛素样生长因子1抑制星形胶质细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。

TNF-α拮抗胰岛素样生长因子-1对人α1(Ⅰ)胶原启动子的激活

目的 :探讨 TNF-α对胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)激活人α1( )胶原启动子的作用。 方法 :构建含不同长短α1( )胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体 p COL H1 0 .2 7,p COL H1 2 .5 ;用脂质体法瞬时转染至NIH3T3细胞和人皮肤成纤维细胞中 ,加入 IGF- 1或 (和 ) TNF-α,测定 CAT活性。 结果 :10 0 ng/ m l IGF- 1可使转染至NIH3T3细胞的 p COL H1 0 .2 7和 p COL H1 2 .5表达的 CAT活性分别增高至对照的 (5 .4± 0 .2 5 )倍与 (5 .8± 0 .3)倍 ,使转染至人皮肤成纤维细胞的这两个重组体表达的活性分别增高至对照的 (4 .5± 0 .2 2 )倍与 (4 .9± 0 .2 )倍。而 TNF-α能抑制 IGF- 1诱导的 p COL H1 2 .5活性。 结论 :TNF- α在转录启动水平抑制 IGF- 1对人 α1( )胶原基因表达的促进作用。

乙肝相关肝癌各临床分期中血管新生相关因子的研究

血管新生与成熟在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。其中表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）、血管内皮细胞生长因子受体-1,2（vascular endothelial growth factor receptor 1,2,VEGFR1,2）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）与血管生成密切相关[1-2]。肝癌是血管丰富的肿瘤,并且肿瘤的生长、转移依赖于血管生成调节因子的调控[3]。

胸椎后纵韧带骨化症的临床分型及其意义

目的：探讨基于CT、MRI影像学特征及病理改变部位、范围所制定的胸椎后纵韧带骨化（TOPLL）新的综合分型及其对治疗的指导价值。方法：纳入2007年5月～2013年6月入院诊治的胸椎后纵韧带骨化症患者49例，其中男8例，女41例，平均年龄51.8±8.7岁（36～71岁），平均病程15.2±21.9个月（1～120个月）。根据术前CT及MRI矢状位和轴位影像将TOPLL分为四型：Ⅰ型为上胸椎（T1～T4）局灶压迫型（1～2节段）；Ⅱ型为中下胸椎（T5～T12）局灶压迫（1～2节段），ⅡA型为不合并同节段黄韧带骨化（OLF）者，ⅡB型为合并OLF者；Ⅲ型为连续腹侧压迫（≥3个节段）；Ⅳ型为跳跃型TOPLL，ⅣA型为间隔≥3个节段者，ⅣB型为间隔＜3个节段者。将此分型应用于临床实践，记录患者的分型、手术相关数据、手术前后JOA评分及改善率，记录Frankel分级变化情况。结果：本组Ⅰ型6例，手术方案为经后路的环形减压（360°涵洞塌陷法）；ⅡA型2例，采用侧前方经胸/腹膜外入路减压，ⅡB型3例，采用经后路的环形减压；Ⅲ型30例，13例后纵韧带为平坦型，行单纯后壁切除术，余17例行广泛后壁切除联合局部环形减压；ⅣA型7例，采用经后路的环形减压术，ⅣB型1例，采用单纯后壁切除术。1例术后26个月死于脑干出血，余48例获得大于12个月随访，随访时间12～85个月，平均47±24个月。48例术前JOA评分4.6±1.8分（0～9分），术后JOA评分为8.8±2.1分（4～11分），平均改善率为69%±28%（14%～100%）。依据Hirabayashi法对改善率进行分级，优23例、良9例、中16例。术前1例Frankel A级患者末次随访时改善为B级，22例Frankel B级患者中17例改善为C级，26例Frankel C级中2例改善为D级，余无变化。术后共11（22%）例发生脑脊液漏，其中单纯后壁切除1例，环形减压10例；均等引流液清亮后拔管，深缝伤口后沙袋加压包扎，俯卧位卧床2d，末次随访仅1例（T8～T12后壁切除、T8/9环形减压者） MRI提示T8/9水平筋膜外脑脊液囊肿存在（无症状），余10例MRI提示脑脊液已吸收。49例中无脊髓损伤及感染发生。结论：根据CT、MRI的影像形态学特征及病变所处位置、范围制定的胸椎OPLL临床实用分型方法，初步临床应用显示其对制定合理、安全的手术方案具有良好的指导作用。