金合欢素通过调节Sirt1介导的AMPK/Nrf2信号通路改善肺炎链球菌感染引起的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立细胞损伤模型,采用终浓度分别为0、5、25、50、100、150、200μmol/L的金合欢素处理,CCK-8检测各处理组细胞活力并筛选金合欢素最佳作用浓度。体外培养的A549细胞随机分为5组:对照组、模型组、金合欢素(150μmol/L)组、EX527(Sirt1抑制剂,40μmol/L)组、金合欢素(150μmol/L)+EX527组(40μmol/L),对照组不进行处理,其余各组以SP感染建立细胞损伤模型,150μmol/L金合欢素和40μmol/L EX527分别处理,CCK-8、流式细胞术分别检测各组细胞活力与凋亡率;试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IL-10、IL-1β、TNF-α水平;免疫印迹法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白caspase-9、Bax表达、Sirt1与AMPK/Nrf2信号通路蛋白p-AMPK/AMPK、Nrf2表达。结果:与对照组比较,模型组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS水平、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05)。与模型组、金合欢素+EX527组分别比较,金合欢素组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均升高(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均降低(P<0.05);EX527组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05)。结论:金合欢素可通过上调Sirt1表达激活AMPK/Nrf2信号,进而促进抗炎因子分泌,减少ROS和促炎因子产生,减轻炎症与氧化应激,最终缓解神经元损伤。

苏州地区临床分离儿童肺炎链球菌耐药情况分析

目的检测苏州地区2006年临床分离的儿童肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况。方法从新入院患儿鼻咽部采集标本,经实验室分离,并采用奥普托欣和(或)去氧胆酸钠鉴定为肺炎链球菌后,采用纸片扩散法(Kir-by-Bauer法)和E-test法对分离到的89株肺炎链球菌进行抗生素的敏感性试验。结果89株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株47株,为52.8%,红霉素、四环素、克林霉素、复方新诺明和氯霉素的耐药率分别为88.8%,78.7%,86.5%,55.1%和10.1%,多重耐药率为89.9%。对万古霉素,氧氟沙星100%敏感。结论苏州地区儿童肺炎链球菌的耐药情况严峻,本研究结果对肺炎链球菌感染的治疗和抗菌药物的选择具有参考价值。

肺炎克雷伯菌研究进展

近年来由于各种抗菌药物的广泛使用,导致肺炎克雷伯菌多重耐药现象普遍存在,给临床治疗带来极大的困扰,造成医院获得性肺炎感染严重的现状。着重论述了肺炎克雷伯菌流行现状、耐药机制、致病因子及防治措施。

中山市正常人群鼻咽部肺炎链球菌的携带情况调查

目的 :获取本地区正常人群鼻咽部肺炎链球菌携带情况 ,为疾病预防和治疗提供科学依据。方法 :随机抽检正常人群 (按防疫人群监测共分四组 :2～ 4岁、6～ 8岁、9～ 12岁、2 5～ 39岁组 )鼻咽拭子进行培养、分离、鉴定及药敏试验 ,按《全国临床检验操作规程》进行。结果 :2 6 7例标本共分离出 71株肺炎链球菌 ,分离率为 2 6 .6 %。 2～ 4岁组检出 18株 ,检出率 2 5 .8% ;6～ 8岁检出 2 0株 ,检出率 37.0 % ;9～ 12岁组检出 2 2株 ,检出率 2 9.3% ;2 5～ 39岁组检出 11株 ,检出率 16 .2 %。各年龄组鼻咽部肺炎链球菌反携带率经 χ2检验 ,χ2 =7.11<P0 .0 5( 3) =7.82 ,P>0 .0 5相差无显著性意义 ,少年儿童组合并后肺炎链球菌的携带率 2 9.6 % (5 9/ 199)与成人组 17.6 % (12 / 6 8)相比较经 χ2检验 ,χ2 =5 .0 7>P0 .0 5( 1 ) =3.84 ,差异有显著性。耐青霉素肺炎链球菌为 2 6 .8%。结论 :本地区正常人群鼻咽部肺炎链球菌携带率为 2 6 .6 % ,少年儿童鼻咽部携带率较成人高。对青霉素耐药率处于较高水平 ,耐青霉素菌株对其他常用抗生素普遍耐药 。

肺炎克雷伯菌gyrA基因与parC基因的突变研究

目的探讨肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性,及对喹诺酮敏感和耐药菌株中gyrA与parC基因的突变情况。方法收集肺炎克雷伯菌临床分离株231株,采用K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感性,随机选取对环丙沙星和左氧氟沙星均耐药菌株4株和均敏感的菌株3株,分别PCR扩增gyrA基因和parC基因的耐药决定区,扩增片段长度分别为625、319bp,PCR扩增产物经纯化后测序并做序列分析。结果肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为51.1%(118/231)和45.9%(106/231);gyrA和parC基因经序列分析显示,耐药株均有gyrA基因的突变,其中1株出现第83、87和27位氨基酸的改变,2株出现第83位氨基酸的改变,1株出现第47位点的改变;环丙沙星敏感株中未出现gyrA基因的突变。4株耐药株均有parC基因的突变,引起相应氨基酸Ser80→Arg的改变,2株环丙沙星敏感株也发生了同样的改变。结论哈尔滨地区肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性显著,在喹诺酮耐药株中有gyrA和parC基因的同时突变,在敏感株中也发现了parC基因的突变。

肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答

目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;r HSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对r HSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平。结果获得纯度90%以上的r HSP40;r HSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低。结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4。

一所大型教学医院临床分离肺炎链球菌耐药性分析

目的了解一所大型教学医院临床分离的肺炎链球菌临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物,预防和控制感染提供依据。方法收集中南大学湘雅医院2010年11月—2012年11月临床标本分离的肺炎链球菌192株,均经全自动细菌鉴定仪鉴定。采用K-B法检测其对常用14种抗菌药物的敏感性,琼脂稀释法检测青霉素的最低抑菌浓度（MIC）。结果肺炎链球菌主要分离自儿科（36.98%）,标本主要为痰液（64.07%）;患者年龄呈双峰分布,以〈5岁和〉50岁的感染者较多。肺炎链球菌对红霉素、氯霉素、四环素、克林霉素耐药率均〉80%。192株肺炎链球菌青霉素MIC范围为0.015~≥32.0μg/mL,其中MIC50为2.0μg/mL,MIC90为16.0μg/mL。非侵袭性肺炎链球菌耐药性高于侵袭性肺炎链球菌。结论该院肺炎链球菌耐药情况较为严重,在临床上对肺炎链球菌的治疗应重视青霉素耐药菌株的出现。

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性和基因分型研究

目的调查重庆地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型分布。方法采用纸片扩散法测定10种抗菌药物对产ESBLs肺炎克雷伯菌的敏感性,应用PCR方法检测产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因。结果35株产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感,对头孢吡肟耐药率为22.9%;但对其他抗菌药物耐药率均>50%,其中对头孢噻肟、头孢他啶和头孢曲松的耐药率分别为82.9%、68.5%和65.7%;基因型分析显示有26株携带CTX-M基因,24株携带TEM基因,15株携带SHV基因。结论产ESBLs的肺炎克雷伯菌耐药严重,重庆地区以CTX-M型ESBLs多见。

儿童血培养分离肺炎链球菌的耐药性

目的分析某儿童医院临床送检血标本分离的侵袭性肺炎链球菌耐药特点,指导临床合理用药。方法回顾性分析该院2007年4月—2011年6月临床分离的63株侵袭性肺炎链球菌的药敏资料。结果 63株肺炎链球菌对青霉素的敏感率为22.22%,对红霉素和复方磺胺甲口恶唑的敏感率低,分别为8.93%和28.57%;对阿莫西林、头孢曲松和头孢噻肟的敏感率较高,分别为85.71%、80.96%、85.71%;未检出万古霉素或利奈唑胺不敏感菌株。结论侵袭性肺炎链球菌耐药率高,应做好对其的耐药性监测,以指导临床合理用药,积极有效地治疗侵袭性肺炎链球菌疾病。

深圳地区儿童临床分离的711株肺炎链球菌分布及耐药性分析

目的分析某儿童医院临床分离的肺炎链球菌的分布及其对青霉素与其他12种抗菌药物的耐药情况,指导临床合理用药。方法收集2007年4月-2010年2月新住院及门诊患儿各类标本,经实验室培养、分离,采用VITEK Compact鉴定肺炎链球菌711株;全自动药敏分析系统分析肺炎链球菌对上述抗菌药物的敏感性。结果 711株肺炎链球菌主要分离自痰标本(83.26%),其次为鼻咽拭子(8.86%)及静脉血(4.36%);主要分布在呼吸/消化内科(39.94%)和心血管内科(22.50%)。对青霉素敏感率为15.61%,青霉素不敏感率为84.39%(600株);对红霉素、复方磺胺甲(口恶)唑和阿莫西林的耐药率分别为91.98%、86.32%和31.23%;对万古霉素、利奈唑胺耐药率为0.00%。结论儿童肺炎链球菌耐药情况严峻,必须加强对肺炎链球菌耐药性和抗菌药物使用情况的监测。

102株侵袭性肺炎链球菌血清型分布特征及耐药谱分析

目的了解侵袭性肺炎链球菌菌株血清群/型分布特征和菌株耐药性情况。方法选用本科室保存的102株侵袭性肺炎链球菌菌株(来自内蒙古、宁夏、四川及辽宁)。合成23种肺炎链球菌血清群/型特异性引物,采用多重PCR方法扩增进行初筛,扩增阳性的用荚膜肿胀方法进行复核验证。并选用24种抗生素进行药物敏感性实验。结果102株侵袭性肺炎链球菌共分为21个血清群,主要流行血清群/型(株数由高到低)依次为19、6、14、23、35/42、34、3、22A、15、1、18、4、5、7B、8、10A、11A、13、17A、20、33F。含10株以上的是19群、6群、14群。24种抗生素中,莫西沙星、吉米沙星、头孢曲松、多西环素未发现耐药菌株。其余20种抗生素均有耐药菌株出现。耐药率大于90%的抗生素从高到低依次为:阿奇霉素、地红霉素、克拉霉素、红霉素;耐药率小于10%的依次为:万古霉素、青霉素(注射)、利奈唑胺、美罗培南、利福平、左氧氟沙星、阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟。结论我国侵袭性肺炎链球菌分离株以19群、6群、14群最多见;23价肺炎疫苗覆盖血清群但不包含的血清型(6A、6C、6D、15C、23B、22A、18A、7B、17A)和非疫苗相关的13群、34群、35/42群也占有一定比例。治疗由肺炎链球菌引起的感染首选吉米沙星、莫西沙星、头孢曲松、多西环素等抗生素。

肺炎克雷伯菌中整合子的研究进展

整合子是近年来在细菌中发现的一种可移动性基因元件,通过位点特异性重组捕获并表达外源性基因盒,是导致耐药基因在细菌间水平播散的重要原因。本文首先简述病原菌中整合子导致菌株对抗生素耐药的机制,然后从肺炎克雷伯菌中存在的整合子多样性、耐药基因盒种类及其与菌株耐药性的关系方面简述目前肺炎克雷伯菌中整合子的研究进展。

100株肺炎链球菌耐药性分析

目的了解肺炎链球菌耐药情况和β-内酰胺类抗生素MIC浓度检测的意义。方法对我院收治的社区获得性肺炎患者中呼吸道标本分离出的100株肺炎链球菌进行7种抗菌药物MIC浓度检测和苯唑西林(OX)的K-B法检测。结果①100株肺炎链球菌中,耐青霉素肺炎链球菌占13%;头孢噻肟和左旋氧氟沙星的耐药率都为6%;对红霉素、克林霉素和四环素耐药率分别为84%、80%和88%;对万古霉素则全敏感。②K-B法检测出苯唑西林敏感59株(占59%)。结论本院收治的社区获得性肺炎患者中的肺炎链球菌对部分抗生素耐药性比较严重,但青霉素仍具有较好的体外抗菌活性。且β-内酰胺类抗生素进行MIC浓度测定是有必要的。

2012—2021年江西某三甲医院临床分离肺炎链球菌的分布及耐药率变化

目的了解江西某三甲医院肺炎链球菌分布及抗菌药物耐药率变化,为临床的预防与治疗提供参考依据。方法采用回顾性分析,对2012—2021年分离出肺炎链球菌的患者分布及该菌对12种抗菌药物耐药率变化特点进行分析。结果①10年共分离出985株肺炎链球菌,主要分离自呼吸道标本(91.3%),10年间标本分布比较差异存在统计学意义(P<0.001)。不同病区间,内科病区患者总分离率占比较高(38.2%),儿科分布较少(0.6%);病区分布上差异存在统计学意义(P<0.01)。时间上,第三季度肺炎链球菌总分离率较低(15.4%),10年间比较差异有统计学意义(P<0.001)。②944株成人患者临床非脑脊液标本分离出的肺炎链球菌中,对青霉素敏感、中介和耐药的菌株数分别为854株(90.5%)、59株(6.2%)和31株(3.3%)。854株对青霉素敏感的肺炎链球菌10年间对阿莫西林-克拉维酸耐药率从2012年的15.7%下降到2021年的0,对头孢曲松耐药率从2012年的11.8%下降到2021年的5.3%,对红霉素的耐药率从2012年的76.5%上升到2021年的92.9%。未发现对利奈唑胺和万古霉素耐药的菌株。结论该院10年间分离出肺炎链球菌的患者在病区、标本种类和时间分布上存在差异。肺炎链球菌对β内酰胺类及其酶抑制剂复方制剂等抗菌药物耐药率有所下降,在治疗青霉素敏感肺炎链球菌感染时,仍可作为重要选择。

NF-κB和JNK通路调节肺炎链球菌PspA蛋白诱导人类单核细胞分泌炎性细胞因子

目的:研究PspA促人类单核细胞分泌炎性细胞因子和趋化因子的机制。方法:使用炎症相关的信号分子JNK、pI3K、JAK的抑制剂及NF-κB抑制蛋白IκB-α磷酸化的抑制剂预处理人类单核细胞后,观察PspA对细胞因子分泌作用的影响。然后利用流式细胞术和Western blot方法检测PspA对人单核细胞中各信号分子磷酸化水平的影响。结果:IκB-α或JNK的抑制剂预处理人类单核细胞后,可以抑制PspA促细胞分泌IL-6、IL-8、CCL2、CCL4、CCL5的现象;而ERK和JNK的抑制剂无此效果。流式细胞术和Western blot方法均证实PspA可以上调人类单核细胞中的IκB-α和JNK蛋白的磷酸化水平。结论:NF-κB和JNK通路参与肺炎链球菌PspA诱导人类单核细胞分泌炎性细胞因子和趋化因子的过程。

肺炎链球菌转化模型的建立

目的:建立一种更加稳定、高效的肺炎链球菌实验室转化模型,以便于对该菌的各种目的基因进行重组改造.方法:分别用改进方法和既往方法制备肺炎链球菌感受态细胞,转化外源DNA,获取发生了转化的菌株,通过抗生素培养基培养和PCR鉴定是否发生转化;并计数抗生素筛选平板上的转化菌落,比较两者的转化率,以确定更佳的转化模型.结果:肺炎链球菌334菌株、31203菌株用改进方法的转化率分别为(0.89±0.20)%,(0.71±0.10)%,高于既往方法的转化率[分别为(6.2±1.4)×10-3%,(5.7±1.1)×10-3%],构建了肺炎链球菌感受态缺陷菌株,建立了改进的肺炎链球菌实验室转化模型.结论:改进的转化模型实现了稳定的肺炎链球菌实验室转化,能方便研究者对该菌进行各种遗传操作,为深入研究其致病的分子机制提供了一个技术平台.

肺炎链球菌蛋白PspA诱导人类单核细胞生产炎症介质和趋化因子的研究

目的原核表达肺炎链球菌表面的毒性蛋白(pneumococcal surface protein A,PspA)并加入到人类单核细胞的培养基中,检测该蛋白对人类单核细胞释放炎性细胞因子和趋化因子的影响。方法将重组质粒pET-32a(+)/PspA转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白并纯化;通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白。再将PspA蛋白加入到人类单核细胞的培养基中共孵育,ELISA检测培养基上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、CXCL8、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5浓度的差异;最后,将放线菌素D或者放线菌酮也加入到细胞培养基中,ELISA方法检测其对PspA蛋白促单核细胞合成炎性细胞因子的干预作用。结果重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白相对分子质量约为70 000,纯化后用肠激酶切除融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白(相对分子量为50 000);ELISA试验表明PspA蛋白刺激人类单核细胞后,单核细胞系合成和释放到培养基上清的IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5显著增加(P<0.05);而加入了放线菌素D或者放线菌酮后,PspA蛋白刺激人类单核细胞释放IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5的能力明显减弱。结论重组的PspA蛋白可以诱导人类单核细胞重新合成和分泌炎性细胞因子IL-6和趋化因子CXCL8、CCL2、CCL4、CCL5,揭示了天然免疫的效应细胞—单核细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,将有助于制定新的战略来控制肺炎链球菌侵入性疾病。

肺炎链球菌致病机理的最新研究进展

肺炎链球菌致病过程包括粘附 ,炎症反应 ,细菌产物的细胞毒作用。阻止肺炎链球菌粘附到宿主细胞受体和定植在粘膜表面 ,是预防其感染的最有效的途径。综述了肺炎链球菌粘附过程的最新研究进展和肺炎链球菌毒力因子及其可能的致病机理 ,对研制新一代疫苗 ,预防和治疗肺炎链球菌感染有重要意义。

肺炎链球菌对泰利霉素等抗菌药物的体外抗菌活性

目的了解本院分离的肺炎链球菌对泰利霉素等抗菌药物的体外抗菌活性。方法对本院2005—2007年从各种临床标本收集的97株肺炎链球菌,用K-B纸片法进行药敏试验,测定这些菌株对泰利霉素等3种新近上市和其他7种临床常用抗菌药物的耐药性。结果97株肺炎链球菌对泰利霉素和利奈唑胺的敏感率均为100%,对喹奴普丁-达福普汀也未发现耐药菌株,只是有18.8%的菌株表现为中介。其他抗菌药物的耐药情况如下:对红霉素、克林霉素、万古霉素、左氧氟沙星、氯霉素和四环素的耐药率分别为60.8%、58.8%、0%、2.1%、12.8%和64.5%,对青霉素的敏感率为85.6%。结论本院尚未用于临床的3种新近上市的抗菌药物泰利霉素、利奈唑胺和喹奴普丁-达福普汀,对本院分离的肺炎链球菌有良好的体外抗菌活性。而上述细菌对红霉素、林可霉素以及四环素有较高的耐药性。

301株肺炎链球菌的临床分布及耐药性分析

目的了解本地区301株肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SPN)的临床分布及耐药性,为临床用药提供依据。方法回顾性分析我院2014年1月至2016年12月临床分离的301株SPN的临床分布及药敏情况,采用MIC值法进行药敏分析,用WHONET5.4软件进行数据处理及分析。结果 301株SPN主要来源于痰标本,构成比为82.72%;主要来源科室为呼吸内科,构成比为38.21%。SPN对青霉素耐药率为33.85%,对红霉素、克林霉素及四环素的耐药率较高均超过70%。对阿莫西林、氯霉素及左氧氟沙星的耐药率为1.07~16.33%,对阿莫西林/棒酸、喹努普汀/达福普汀、利奈唑烷及万古霉素的耐药率均为0%。结论 SPN对红霉素、克林霉素及四环素耐药严重,对头孢曲松、喹诺酮类抗生素具有较高的敏感性,临床医生应根据药敏结果选用抗生素,减少耐药菌株的产生。