884例性染色体异常胎儿产前诊断结果分析

目的 对884例无创产前筛查(NIPS)提示性染色体异常的羊水样本进行核型分析、荧光原位杂交技术(FISH)和拷贝数变异测序(CNV-seq)检测,探讨不同方法在产前诊断中的价值。方法 选取2015年1月—2022年12月天津市中心妇产科医院孕早期NIPS提示胎儿为性染色体异常的孕妇884例,于孕中期采集羊水样本,进行羊水细胞核型分析和FISH检测,对结果不一致或培养失败的样本进一步行CNV-seq检测。结果 884例孕妇中,有341例(38.6%)检出异常核型,11例(1.2%)羊水细胞培养失败。NIPS性染色体阳性预测值为39.2%(341/873)。341例核型分析异常样本中,最常见的核型异常类型是47,XXY(108例),其次为47,XXX(80例)、47,XYY(68例)、45,X(18例),共检出51例嵌合体。884例孕妇中,有862例FISH检测结果与核型分析或CNV-seq结果一致,FISH的阳性预测值为97.5%;24例与核型分析结果不一致,进一步行CNV-seq检测,有22例CNV-seq结果与核型分析结果一致,并能相互补充分析;2例不一致样本中,1例核型分析结果为46,~+mar,FISH和CNV-seq结果均为45,X;1例核型分析结果为嵌合Y染色体异染色质区缺失,FISH和CNV-seq结果均为嵌合体,结构未见异常。结论 NIPS提示性染色体异常时,建议首选FISH和核型分析联合检测,可快速、准确地诊断染色体异常。对于疑似染色体特殊结构异常,建议进行FISH、核型分析和CNV-seq联合检测,可明确遗传学病因。

COPD患者lncRNA MIR155HG表达与肺功能的相关性及其对AECODP的辅助诊断价值

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者长链非编码RNA(lnc RNA) MIR155HG与肺功能的相关性,及其对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)的辅助诊断价值。方法 选取2018年10月—2021年3月南阳市中心医院COPD患者117例,其中稳定期患者60例(稳定期组)、AECOPD患者57例(AECOPD组),以60名健康体检者作为正常对照组。收集所有研究对象一般资料,并检测肺功能[第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC),计算FEV1/FVC%和外周血单个核细胞(PBMC)中lnc RNAMIR155HG的表达。采用Logistic回归分析评估AECOPD的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断AECOPD的效能。结果 AECOPD组、稳定期组、正常对照组白细胞(WBC)计数、中性粒细胞百分比(NEUT%)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、纤维蛋白原(Fib)、PBMC中lnc RNA MIR155HG相对表达量依次降低(P<0.05),FEV1和FEV1/FVC%依次升高(P<0.05)。稳定期组和AECOPD组PBMC中lnc RNA MIR155HG相对表达量与WBC计数、NEUT%、PCT、CRP和Fib水平均呈正相关(P<0.001),与FEV1和FEV1/FVC%均呈负相关(P<0.001)。Logistic回归分析结果显示,lnc RNAMIR155HG表达升高、FEV1降低是发生AECOPD的危险因素[比值比(OR)值分别为2.381、0.682,95%可信区间(CI)分别为1.526~3.715、0.531~0.876]。ROC曲线分析结果显示,FEV1、lnc RNA MIR155HG单项和联合检测诊断AECOPD的曲线下面积(AUC)分别为0.826、0.854、0.939。结论 COPD患者PBMC中lnc RNA MIR155HG水平升高,且与炎症指标和肺功能相关,或可作为AECOPD的早期诊断标志物。

101例胎儿性染色体非整倍体异常核型分布特征及妊娠结局分析

目的分析101例胎儿性染色体非整倍体(sex chromosome aneuploidy,SCA)异常核型分布特征及妊娠结局。方法回顾性收集2016年1月~2021年12月7821例于广西壮族自治区人民医院成功进行产前核型诊断孕妇的临床资料,均行细胞培养染色体核型分析与拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)检测,对检出的101例SCA异常胎儿病历进行分析。结果SCA共检出101例,检出率为1.29%。其中克氏综合征占比33.66%,超雌综合征占比17.82%,超雄综合征占比12.87%,特纳综合征占比10.89%,其他非整倍体异常(包括:48,XXXY 1例,69,XXY[80%]/68,XXY,-22[20%]1例)占比1.98%,嵌合体占比22.77%。101例SCA产前指征结果为:年龄≥35周岁占比53.47%(54/101),血清生化指标筛查高/临界风险占比4.95%(5/101),胎儿超声检测异常占比17.82%(18/101),无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)异常占比51.49%(52/101),不良孕产史占比12.87%(13/101),其他原因(孕妇脑瘫1例、双方珠蛋白生成障碍性贫血4例)5例行产前诊断,占比4.95%(5/101),部分病例并发多项产前诊断指征。23例诊断为性染色体嵌合体的胎儿,其中有22例通过核型与CNV-seq双向验证,11例孕妇选择终止妊娠,其余选择继续妊娠。结论产前核型诊断联合血清学检测、孕期超声等不同产前筛查手段,有利于提高SCA检出率。而CNV-seq可对性染色体嵌合体孕妇的遗传咨询提供更多临床依据。

Sin3A基因变异致Witteveen-Kolk综合征遗传学分析

目的 探讨开关不敏感3转录调节因子家族成员A(Sin3A)基因变异导致的Witteveen-Kolk综合征临床表型和遗传学特点。方法 收集1例发育迟缓患儿的临床资料,对患儿及其父母进行全外显子基因测序,采用Sanger测序验证可疑变异,并进行家系分析。结合文献分析Witteveen-Kolk综合征的临床特征和基因变异特点。结果 Witteveen-Kolk综合征患儿临床表现主要为轻中度智力障碍或发育迟缓、特殊面容(长脸、前额突出、鼻梁凹陷、长人中等)、身材矮小。颅脑磁共振成像(MRI)显示不同程度的脑畸形。全外显子基因测序结果显示,患儿Sin3A基因存在移码变异c.803dupC(p.Leu269Thrfs*37)(杂合)。Sanger测序证实存在变异位点,患儿父母该位点均为正常基因型。gnomAD等对照人群数据库未收录该变异位点,根据美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)/美国分子病理学学会(AMP)指南归类为“致病性”变异。结论 Sin3A基因变异可导致Witteveen-Kolk综合征。基因检测可明确生长发育迟缓伴特殊面容患儿的病因。

MYH7基因c.1574A>G突变致扩张型心肌病1S型家系分析

目的 采用全外显子组测序分析1例左心系统扩张患儿的基因变异情况,并进行家系分析,确认扩张型心肌病1S型(DCMIS)的病因。方法 收集1例左心系统扩张患儿的临床资料。采用染色体拷贝数变异测序(CNV-seq)检测患儿染色体结构缺失和重复情况。采用全外显子组测序分析患儿基因变异情况,采用Sanger测序对患儿及其父母、异卵双生姐姐变异位点进行验证。通过生物信息学分析评估变异位点的危害性。结果 患儿心脏彩色多普勒超声示左心功能降低,左心系统明显扩张增大,肺动脉高压,二尖瓣和三尖瓣反流。CNV-seq结果为seq[hg19]46,XN,未发现染色体异常。全外显子组测序分析结果显示,患儿β-心肌肌肉球蛋白重链7(MYH7)基因发生杂合变异[c.1574A>G(p.Glu525Gly)]。检索OMIM、ClinVar数据库,未见相关报道;检索ESP数据库、千人基因组数据库、ExAC数据库和gnomAD数据库,该变异位点未被收录,属于新发变异。Sanger测序证实变异存在,患儿父母、姐姐MYH7基因均正常。MYH7基因c.1574A>G(p.Glu525Gly)变异导致蛋白侧链O端与第484位赖氨酸侧链N端之间形成的氢键侧链相互作用消失。结论 c.1574A>G(p.Glu525Gly)为新发现的MYH7基因变异,是造成患儿左心系统明显扩张的原因。新发变异的检出丰富了DCMIS致病机制研究数据。

羊水产前诊断胎儿性染色体异常362例分析

目的分析产前诊断胎儿性染色体异常结果,探讨无创产前检测(NIPT)、荧光原位杂交技术(FISH)、染色体核型分析、微阵列芯片技术(CMA)等联合应用的优势。方法收集2018-2022年于我中心行孕中期羊膜腔穿刺术的孕妇资料,对性染色体异常的结果进行统计分析。结果行羊水分析15224例,检出性染色体异常362例(2.4%),包括非整倍体异常305例(84.3%)与结构异常(含嵌合异常)57例(15.7%)。不同产前诊断指征孕妇染色体异常检出率差异具有统计学意义(P<0.001),其中NIPT提示性染色体异常孕妇的检出率为48.37%。47,XXY的检出率在不同年龄组间的差异有统计学意义(χ^(2)=4.97,P<0.05)。多种技术联合应用将复杂异常检出率由2.1%提高到了2.4%。结论NIPT检测对于筛查胎儿性染色体异常具有显著意义。羊水产前诊断性染色体异常主要为数目及嵌合体异常,其中47,XXY与年龄因素显著相关。染色体核型分析联合FISH及CMA检测有助于复杂性染色体异常的明确诊断。

LZTR1基因Arg284His变异致Noonan综合征10型病例报道和遗传学分析

目的 对1例Noonan综合征10型(NS10)患儿进行临床特征和遗传学分析。方法 对患儿及其父母进行家系全外显子组(trio-WES)检测,采用生物信息学方法对基因变异进行危害性分析,预测变异蛋白结构功能,采用免疫印迹法检测变异蛋白的表达量。结果 患儿年龄为8岁9个月,临床表现为生长发育迟缓、先天性心脏病和特殊面容等。基因检测结果提示患儿亮氨酸拉链样转录调控因子1(LZTR1)基因发生杂合变异c.851G>A(p.Arg284His)(NM_6767.4),其父亲携带该变异,母亲为野生型。Pubmed数据库和HGMD数据库未检索到相应变异的报道,属LZTR1基因新变异。SIFT、Polyphen-2和MutationTaster在线软件分析结果显示到LZTR1 c.851G>A(p.Arg 284His)变异存在生物危害性。蛋白结构模型分析结果显示,LZTR1 c.851G>A(p.Arg 284His)变异可导致LZTR1蛋白局部结构改变。免疫印迹法结果显示,与野生型LZTR1蛋白比较,变异型LZTR1蛋白的表达量降低了81.20%。结论 LZTR1基因c.851G>A(p.Arg 284His)变异可能是NS10的致病原因。

耐药肺结核患者血清miR-129-3p、miR-144-3p检测的临床价值

目的探讨血清miR-129-3p和miR-144-3p检测在耐药肺结核中的临床价值。方法收集2021年1月—2022年6月川北医学院附属三台医院行新辅助放化疗的140例耐药肺结核患者(耐药肺结核组),根据治疗6个月的疗效,分为有效组(92例)和无效组(48例);另选取同期与耐药肺结核患者一般资料相匹配的140名体检健康者作为对照组。比较各组血清miR-129-3p、miR-144-3p表达的差异。采用多因素Logistic回归分析评估耐药肺结核患者疗效的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗2个月后血清miR-129-3p、miR-144-3p水平和白蛋白、白细胞计数预测耐药肺结核患者疗效的效能。结果与对照组比较,耐药肺结核组血清miR-129-3p、miR-144-3p水平显著降低(P<0.05)。治疗2个月,无效组血清miR-129-3p、miR-144-3p水平均显著低于有效组(P<0.05)。血清miR-129-3p、miR-144-3p、白蛋白和白细胞计数是耐药肺结核患者疗效的影响因素(P<0.05)。治疗2个月后血清miR-129-3p、miR-144-3p、白蛋白、白细胞计数联合预测耐药肺结核患者疗效的曲线下面积为0.956,敏感性为87.50%,特异性为92.39%,优于4项指标单独检测(P<0.05)。结论耐药肺结核患者血清miR-129-3p、miR-144-3p水平显著降低。miR-129-3p、miR-144-3p联合白蛋白、白细胞计数对预测耐药肺结核患者疗效有较高的参考价值。

食管癌患者血清miR-134和miR-149表达及其临床意义

目的探讨食管癌患者血清miR-134和miR-149的表达及其临床意义。方法选取2020年4月—2022年10月合肥市第三人民医院食管癌患者132例(食管癌组)、食管良性疾病患者125例(良性对照组)和健康体检者130名(正常对照组)。收集所有研究对象的一般资料,并检测血清miR-134、miR-149相对表达量和癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)125、CA72-4水平。采用Pearson相关分析评估血清miR-134、miR-149与CEA、CA125、CA72-4的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-134、miR-149单项检测和联合检测诊断食管癌的效能。结果食管癌组血清miR-134相对表达量和CEA、CA125、CA72-4水平均高于良性对照组、正常对照组(P<0.05),良性对照组均高于正常对照组(P<0.05);食管癌组miR-149相对表达量均低于良性对照组和正常对照组(P<0.05),良性对照组miR-149相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。食管癌组CEA、CA125和CA72-4阳性率均高于良性对照组和正常对照组(P<0.05)。不同肿瘤直径、分化程度和有无淋巴转移的食管癌患者之间血清miR-134、miR-149相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。食管癌患者血清miR-134与CEA、CA125、CA72-4均呈正相关(r值分别为0.425、0.419、0.457,P<0.001),血清miR-149与CEA、CA125、CA72-4均呈负相关(r值分别为-0.529、-0.534、-0.458,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-134、miR-149单项检测诊断食管癌的AUC分别为0.768、0.773,miR-134+miR-149的AUC为0.910,CEA+CA125+CA 72-4的AUC为0.901,5项指标联合检测的AUC为0.916。结论食管癌患者血清miR-134、miR-149均呈异常表达,且与病情密切相关,或可作为食管癌辅助诊断和病情监测的指标。

宏基因组高通量测序诊断假体周围关节感染Meta分析

目的 系统评价高通量测序(mNGS)对假体周围关节感染(PJI)的诊断价值。方法 检索PubMed等7个数据库所有评估mNGS对PJI诊断价值的研究,截至2022年3月。采用QUADAS-2工具评估研究质量,采用RevMan 5.3软件和Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析。结果 共纳入8项研究,涉及402例PJI患者。mNGS诊断PJI的合并敏感性(SEN)、合并特异性(SPE)、诊断比值比(DOR)、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(-LR)和受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.93、0.90、10.19、0.07、109.20和0.971 4。结论 mNGS诊断PJI效能较高。

妊娠合并抗凝血酶缺陷症的基因检测和分析

目的 对1例妊娠合并遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症患者进行基因检测和分析。方法 收集患者的临床资料,检测其血浆抗凝血酶活性(AT:A)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、蛋白C活性(PC:A)、蛋白S活性(PS:A)等凝血指标。对患者的PROC、PROS1、SERPINC1、SERPIND1、PLG、PROCR、THBD、ADAMTS13、HRG、TFPI、CPB2、HABP2、PLAT、PLAU、SERPINA10、SERPINE1、SERPINF2、CALR、GP6、JAK2、MPL和凝血因子相关基因的转录起始点、5'-非翻译区(UTR)、编码区、剪切点8 bp内含子序列区域、转录终止子点突变、小缺失/重复和剪切位点进行突变检测。采用Sanger测序验证变异位点。对变异位点进行生物信息学分析,以明确致病性。结果 患者AT:A降低。基因检测结果显示,患者SERPINC1基因第2号外显子发生c.380G>A(p.Cys127Tyr)杂合突变,JAK2基因第10号外显子发生c.1324G>C(p.Glu442Gln)杂合突变,SERPINA10基因第2号外显子发生c.389T>G(p.Leu130Trp)杂合突变。SERPINC1基因c.380G>A(p.Cys127Tyr)变异在正常人群公共SNP数据库(ExAC数据库、1000G dbSNP13数据库和gnomAD数据库)中未被收录,ClinVar数据库、OMIM数据库和HGMD数据库中均未见该变异位点的相关报道,PolyPhen-2、MutationTaster和CADD在线软件预测其为致病性变异。JAK2基因c.1324G>C(p.Glu442Gln)变异和SERPINA10基因c.389T>G(p.Leu130Trp)评级均为意义不明确的变异。Sanger测序结果显示3个变异均存在。蛋白模拟结构分析结果显示,SERPINC1基因c.380G>A(p.Cys127Tyr)变异可导致蛋白结构改变,从而影响蛋白功能。结论 SERPINC1基因c.380G>A(p.Cys127Tyr)变异可能导致遗传性AT缺陷症。监测凝血相关指标,及时进行分子诊断,有助于改善遗传性AT患者的妊娠结局。

缺血性心力衰竭患者血清miR-9-5p、miR-185-5p表达与心功能及心室重构的关系

目的探讨缺血性心力衰竭(IHF)患者血清miR-9-5p和miR-185-5p表达与心功能和心室重构的关系。方法选取2021年2月—2023年2月南阳市中心医院IHF患者108例(IHF组),参照美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将IHF患者分为Ⅰ~Ⅱ级组(35例)、Ⅲ级组(42例)和Ⅳ级组(31例)。另选取同期南阳市中心医院轻度冠心病缓解期且无心力衰竭的患者50例作为疾病对照组。收集所有研究对象的一般资料和实验室常规生化项目检测结果,并检测血清miR-9-5p、miR-185-5p、B型钠尿肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)、左室前后径(LAD)和左室舒张末期内径(LVEDD)。采用Pearson相关分析评估血清miR-9-5p、miR-185-5p与心功能和心室重构的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-9-5p、miR-185-5p诊断IHF的效能。结果IHF组血清miR-9-5p、miR-185-5p相对表达量和BNP、LAD、LVEDD均显著高于疾病对照组(P<0.05),LVEF显著低于疾病对照组(P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组血清miR-9-5p、miR-185-5p相对表达量和LAD、LVEDD、BNP均依次升高(P<0.001),LVEF依次降低(P<0.001)。血清miR-9-5p、miR-185-5p水平与LAD、LVEDD、BNP均呈正相关(P<0.05),与LVEF均呈负相关(P<0.05)。miR-9-5p、miR-185-5p均为IHF发生的危险因素[比值比(OR)值分别为2.114、2.224,95%可信区间(CI)分别为1.129~3.958、1.297~3.813,P<0.05]。miR-9-5p、miR-185-5p、LVEF、BNP单项检测诊断IHF的AUC分别为0.806、0.789、0.734、0.751;miR-9-5p+miR-185-5p+LVEF、miR-9-5p+miR-185-5p+BNP和4项指标联合检测的AUC分别为0.879、0.876、0.936。结论IHF患者血清miR-9-5p、miR-185-5p表达升高,且与心功能损伤程度有关,可能参与了心室重构过程。血清miR-9-5p、miR-185-5p、BNP和LVEF联合检测对IHF有较高的诊断效能。

DosR抗原Rv2626c通过lncRNA MacORIS诱导巨噬细胞活化的结核潜伏感染机制研究

目的 探讨结核潜伏感染(LTBI)表达的DosR抗原Rv2626c在巨噬细胞活化中的作用和长链非编码RNA(lncRNA)MacORIS对其的调控作用。方法 将人急性单核细胞白血病细胞系THP-1诱导为巨噬细胞,根据转染物的不同分为4组:阴性对照(NC)组[转染NC-小干扰RNA(siRNA) 24 h]、MacORIS-siRNA组(转染MacORIS-siRNA 24 h);NC-siRNA+重组蛋白Rv2626c(rRv2626c)组(转染NC-siRNA 24 h,再用3μg·mL^(-1)rRv2626c刺激24h)、MacORIS-siRNA+rRv2626c组(转染MacORIS-siRNA24h,再用3μg·mL^(-1)rRv2626c刺激24h)。检测各组细胞lncRNAMacORIS、Toll样受体(TLR)2、TLR4、表面共刺激分子(CD80、CD86、CD163、CD206)、吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β的表达情况。采用生物信息学方法预测并构建lncRNA MacORIS的竞争内源RNA(ceRNA)网络,对lncRNA MacORIS潜在的靶微小RNA进行验证。结果 rRv2626c可有效促进巨噬细胞lncRNA MacORIS和IDO1上调(P<0.05)。rRv2626c可依赖于lncRNA MacORIS诱导THP-1细胞中TLR2的表达(P<0.05)。rRv2626c可依赖于lncRNA MacORIS上调巨噬细胞中CD80、CD86、TNF-α、IL-1β的表达(P<0.001)。与NC组比较,MacORIS-siRNA组miR-141-3p、miR-150-5p、miR-33-5p、miR-200-3p和miR-203-3p相对表达量均显著升高(P<0.05)。结论 rRv2626c可促进巨噬细胞极化到M1表型,并促进TLR2和炎症因子表达,这些变化均依赖于lncRNA MacORIS。lncRNA MacORIS可负调控miR-141-3p、miR-150-5p、miR-33-5p、miR-200-3p和miR-203-3p的表达。

脆性X综合征遗传学诊断方法研究进展

脆性X综合征(FXS)是导致智力障碍和发育障碍的主要单基因病之一,呈X连锁不完全显性遗传。FXS的病因是FMR1基因内(CGG)n重复序列的不稳定扩展及其上游CpG岛的异常甲基化,进而导致脆性X智力低下蛋白(FMRP)减少或缺乏,FMRP的水平直接关系到临床表型的严重程度。临床表现和基因检测是诊断FXS的主要依据。然而,FMR1基因分子结构和遗传模式的特殊性使得FXS的分子诊断和遗传咨询面临挑战。因此,如何简便而准确地进行FMR1基因检测一直是临床关注的焦点。文章针对FXS遗传学诊断方法的研究进展进行综述,旨在促进FXS的规范诊断,为临床提供帮助。

尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病诊断中的价值

目的探讨尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病(DN)诊断中的价值。方法选取2021年1月—2022年12月金华市人民医院2型糖尿病(T2DM)患者260例,根据其就诊时的微量尿蛋白排泄率(UAER)分为单纯T2DM组(135例)、早期DN组(82例)、临床期DN组(43例)。另选取同期金华市人民医院健康体检者50名作为正常对照组。收集所有研究对象的一般资料,并检测尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c和尿液肌酐(UCr)、尿液尿素氮(UUN)、尿液转化生长因子-β1(TGF-β1,以UCr校正)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))、血清尿酸(UA)。采用Pearson相关分析评价各项指标之间的相关性。采用多元逐步回归分析评价尿液TGF-β1的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c诊断早期DN的效能。结果正常对照组、单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c相对表达量依次升高(P<0.001),miR-29c相对表达量依次降低(P<0.001)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、校正TGF-β1和HbA_(1c)、UA水平均高于正常对照组(P<0.05)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、UA、校正TGF-β1水平和UAER依次升高(P<0.001)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c与UCr、校正TGF-β1均呈显著正相关(P<0.01),miR-29c与UCr、校正TGF-β1均呈显著负相关(P<0.001),与UUN、UA均无相关性(P>0.05)。HbA_(1c)、UCr和尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c是尿液校正TGF-β1水平的独立影响因素(P<0.01)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c单项检测和联合检测诊断早期DN的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.855、0.799、0.557、0.923。结论尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c联合检测对早期DN有较好的诊断价值。

CYP2C19基因多态性、miR-374b-5p与ACI患者神经功能缺损和近期预后的关系

目的探讨细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因多态性、血清miR-374b-5p水平与急性脑梗死(ACI)患者神经功能缺损和近期预后的关系。方法选取2019年1月—2022年12月郑州市第七人民医院ACI患者164例,收集所有患者的一般资料,并检测CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p相对表达量。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估ACI患者神经功能缺损程度。根据治疗15 d后的NIHSS评分将ACI患者分为预后良好组和预后不良组。采用Spearman相关分析评估miR-374b-5p与入院时NIHSS评分的相关性。采用多因素Logistic回归分析评估ACI患者近期预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估CYP2C19基因型和血清miR-374b-5p判断ACI患者近期预后的效能。结果164例ACI患者CYP2C19基因型中,GG型(野生纯合子)26例(15.86%)、GA型(突变杂合子)66例(40.24%)、AA型(突变纯合子)72例(43.90%)。A等位基因频率为64.02%,G等位基因频率为35.98%。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ^(2)=2.620,P=0.106)。GG基因型、GA基因型、AA基因型的ACI患者入院时NIHSS评分依次升高(P<0.001)。血清miR-374b-5p相对表达量与入院时NIHSS评分呈负相关(r_(s)=-0.510,P<0.001)。ACI患者预后不良发生率为19.51%(32/164)。预后不良组与预后良好组之间年龄、梗死体积、发病至就诊时间、白细胞(WBC)计数、CYP2C19基因型为AA型所占比例和血清miR-374b-5p相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。梗死体积、发病至就诊时间、WBC计数、CYP2C19基因型为AA型均是ACI患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-374b-5p相对表达量为保护因素(P=0.007)。AA基因型和血清miR-374b-5p单项检测和联合检测判断ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.631、0.730、0.802。结论CYP2C19基因多态性、血清mi R-374b-5p相对表达量均与ACI患者神经功能缺损有关,或可作为ACI患者近期预后的评估指标。

miR-155-5p靶向ARID2对口腔鳞状细胞癌有促进作用

目的 探讨miR-155-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用和机制。方法 收集人口腔癌细胞系CAL-27、HN4、HN6、SCC4、TCA8113和正常口腔上皮角质细胞系HOK,检测miR-155-5p表达。根据转染质粒的不同分为miR-NC组(转染miR-155-5p模拟物阴性对照)和miR-155-5p组(转染miR-155-5p模拟物)、anti-NC组(转染miR-155-5p抑制物阴性对照)、anti-miR-155-5p组(转染miR-155-5p抑制物)、Vector组(转染空质粒载体)、pc-ARID2组(转染ARID2过表达质粒)、miR-NC+Vector组(共转染阴性对照和空质粒载体)、miR-155-5p+Vector组(共转染miR-155-5p模拟物和空质粒载体)和miR-155-5p+pc-ARID2组(共转染miR-155-5p模拟物和ARID2过表达质粒)。采用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖情况,分别采用划痕实验和侵袭实验检测CAL-27细胞、HN4细胞的迁移、侵袭情况,采用免疫印迹法检测ARID2蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-155-5p与ARID2的靶向关系。结果 与正常口腔上皮角质细胞系HOK比较,OSCC细胞系(SCC4、HN6、HN4、CAL-27、TCA8113)miR-155-5p表达均显著上调(P<0.01)。与anti-NC组比较,anti-miR-155-5p组miR-155-5p相对表达量显著降低(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-155-5p组ARID2蛋白表达显著下调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著升高(P<0.01);anti-miR-155-5p组ARID2蛋白表达显著上调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,与共转染miR-NC和pmiR-ARID2野生型质粒(pmiR-ARID2-wt)比较,共转染miR-155-5p mimic和pmiR-ARID2突变型质粒(pmiR-ARID2-wt)后荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。与Vector组比较,pc-ARID2组ARID2 mRNA表达显著上调(P<0.01),增殖活性、克隆形成数、划痕闭合率和侵袭细胞数均显著降低(P<0.01)。与miR-NC+Vector组比较,miR-155-5p+Vector组增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和划痕闭合率均显著升高(P<0.01);与miR-155-5p+Vector组比较,miR-155-5p+pc-ARID2组增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和划痕闭合率均显著降低(P<0.01)。结论 OSCC细胞中miR-155-5p表达上调,并可通过靶向抑制ARID2表达促进OSCC细胞增殖、迁移和侵袭,进而发挥致癌基因作用。

KIT突变与核心结合因子急性髓系白血病患儿临床特征和预后的关系

目的 分析核心结合因子急性髓系白血病(CBF-AML)患儿KIT位点表达及其与患儿临床特征和预后的关系。方法 选取2014年2月-2022年8月郑州大学附属儿童医院初诊确诊CBF-AML患儿72例,收集其相关临床资料。根据细胞遗传学分析结果分为RUNX1-RUNX1T1组(60例)和CBFβ-MYH11组(12例);根据KIT基因突变情况分为KIT阳性组(31例)和KIT阴性组(41例)。比较KIT阳性组和KIT阴性组相关临床特征和预后差异。结果 KIT阳性组和KIT阴性组性别、年龄、初诊白细胞计数、初诊外周血和骨髓原始细胞比例、髓外白血病、第一疗程完全缓解(CR)率,以及5年无事件生存率和5年总生存率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 KIT突变对CBF-AML患儿临床表现和预后无明显影响。

分子检测技术在儿童罕见遗传病中的临床应用

近年来,随着分子检测技术的发展,儿童罕见遗传病的检出率不断提高。根据染色体受影响的范围,遗传变异可分为4类:染色体水平变异、亚染色体水平变异、小尺度水平变异和特殊类型变异。对于不同类型的遗传变异,如何选择合适的检测方法至关重要。文章对4类遗传变异及其相应的分子检测技术进行总结,并指出分子检测技术在儿童罕见遗传病诊疗中的应用需结合患儿家庭实际情况和检测准确率综合考虑。另外,发布基于循证数据的相关指南或专家共识,有利于推动临床规范应用分子检测技术。

CYP2D6基因分型影响因素研究进展

细胞色素P450家族2亚科D成员6(CYP2D6)是细胞色素P450酶家族中的重要药物代谢酶,是抗抑郁药物、抗精神病药物和阿片类镇痛药物等主要的代谢酶。CYP2D6基因位点的复杂性和诸多等位基因突变体造成了CYP2D6表型的多态性,目前已报道170余种等位基因突变体。CYP2D6酶活性变化很大,从无活性到超快代谢均存在,根据酶活性可将不同表型携带者分为超快代谢者、正常代谢者、中间代谢者和弱代谢者。随着个体化医疗的发展,CYP2D6基因分型试验可以辅助药物遗传学和基因分型技术的研究和临床应用。然而,由于CYP2D6基因存在复杂的突变,包括单核苷酸突变、插入、缺失、基因拷贝数变异和基因重组。CYP2D6基因不仅存在个体化差异,且在不同种族之间等位基因的频率也明显不同。另外,人体内同时存在与CYP2D6同源性很高的非功能性基因CYP2D7,通过基因检测分析CYP2D6表型是一项非常具有挑战性的工作。文章总结了CYP2D6基因的多态性和基因分型的复杂性,并分析了部分不同的基因型突变对CYP2D6基因分型的影响,以帮助临床通过基因分型方法对CYP2D6酶活性进行预测。