丙型肝炎病毒的血清抗体检测及基因组cDNA扩增

采用抗HCV-N14和抗HCV-C100-3抗体试剂盒检测丙型肝炎(丙肝)高危人群血液标杯1544人份。丙肝抗体阳性率为:输血后肝炎64.5％、血液透析病人28.6％、肝硬变19.1％、肝细胞癌10.5％、临床非甲非乙型肝炎7.3％、献血员4.1％和医院工作人员2.6％,表明丙型肝炎病毒(HCV)感染在我国相当严重。抗HCV-N4抗体出现较早,且与多聚酶链反应PCR的基因诊断有较好的相关性,是判定HCV感染及其传染性的重要指标。

慢性乙型病毒性肝炎免疫耐受的研究进展

慢性乙型肝炎是一种危害人类健康的常见病、难治性疾病。感染乙肝病毒后,机体的免疫系统不能及时、有效、彻底地清除病毒导致乙型肝炎的免疫耐受,目前被认为是乙型肝炎慢性化的一个主要机制。免疫耐受包括了宿主和病毒两方面的因素,而宿主免疫功能紊乱是其主要原因。因而调整紊乱的免疫系统,打破HBV感染后的免疫耐受状态,将是治疗慢性乙型肝炎的关键所在。对近年来关于慢性乙型病毒性肝炎免疫耐受的临床病理特征、形成机制的研究进行综述。

丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达

目的 :为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略 ,构建具有 2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体。方法 :分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有 2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游 ,称为pRSC HBV/HCV ,转染SP2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达 ,免疫Balb/c小鼠 ,用酶联免疫小鼠体液免疫应答。结果 :pRSC HBV/HCV转染SP2 / 0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞 ,SDS Page电泳显示在 14kD及 2 1kD处均可见蛋白条带 ,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致 ,Western印迹分析显示在 14kD及 2 1kD处可见特异性的蛋白条带。 5只免疫鼠中全部出现抗 HCV及抗 HBV抗体 ,而对照组全阴性。结论 :pRSC HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白 ,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答 ,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础。

静脉吸毒者肝功能和细胞免疫功能及丙型肝炎感染状况

目的探讨毒品对人体肝功能和细胞免疫的影响。方法按常规抽血测定静脉吸毒组和健康对照组人员血常规、肝功能、免疫球蛋白IgG、IgA和IgM含量及CD4+细胞绝对值、CD8+细胞绝对值和CD4/CD8比值。结果(1)静脉吸毒组肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)为(71.59±45.00)U/L,高于对照组(19.39±8.59)U/L,差异有统计学意义(P<0.05),但天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白含量(TP)和总胆固醇(CHOL)却低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)静脉吸毒组白细胞(WBC)绝对值为(5.99±1.74)×109/L,淋巴细胞(LYM)绝对值为(1.79±0.55)×109/L,低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);静脉吸毒组红细胞(RBC)计数、血小板(PLT)计数与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(3)静脉吸毒组CD8+细胞数绝对值低与对照组,差异有统计学意义(P<0.05),CD4+细胞数绝对值和CD4/CD8比值两组间差异无统计学意义(P>0.05);(4)静脉吸毒组免疫球蛋白IgM含量为(1.70±0.71)g/L高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而免疫球蛋白IgG、IgA差异无统计学意义。(5)41例静脉吸毒者中丙型肝炎抗体(抗-HCV-IgG)阳性者34例,阳性率是82.9%。结论静脉注射毒品导致人体肝功能受损和丙肝感染率增高,降低了人体的免疫力。

HIV/AIDS与肝炎病毒感染者CD4^+、CD8^+淋巴细胞数的比较

探讨ＨＩＶ携带者或ＡＩＤＳ病人（简称ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）与肝炎病毒感染者的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞变化，并进行比较。方法：用免疫磁珠法（ＤＹＮＡｂｅａｄｓ）检测ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞数，用双侧ｔ检验进行统计学处理。结果：全部ＨＩＶ／ＡＩＤＳ的ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞降低，且幅度大，８３．４％低于５００细胞／ｕｌ。在病毒性肝炎中降低的百分比和幅度均明显低于前者，只有２８．８％低于５５细胞／ｕｌ，且２４．２％大于８００细胞／ｕｌ。与同一水平ＣＤ４＋细胞相对应的ＨＩＶ／ＡＩＤＳＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平显著高于病毒性肝炎，ＣＤ８＋细胞水平随ＣＤ４＋Ｔ细胞增加而升高。ＣＤ４＋细胞平均水平较高的ＨＩＶ感染者自觉症状与ＣＤ４＋Ｔ细胞数之间无直接相关关系，说明只用ＣＤ４＋Ｔ细胞数来估计病人机体状态或只根据病人症状估计机体免疫状态是不太准确的。结论：ＨＩＶ／ＡＩＤＳ与病毒性肝炎存在不同程度的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞异常；ＣＤ４＋Ｔ细胞是ＨＩＶ／ＡＩＤＳ的重要指标，但不是绝对指标；ＣＤ８＋Ｔ细胞与病人病情的变化及预后之间可能存在着很重要的关系，需进一步研究。

肝肽素治疗病毒性肝炎观察肿瘤坏死因子前后水平的变化

本文观察了27例病毒性肝炎肝肽素治疗前后外周血单核细胞(PBMCs)诱生的肿瘤坏死因子(TNF)水平及血清TNF水平,发现急黄肝、慢活肝、重症肝炎患者PBMCs的TNF及血清TNF水平均明显升高,(与对照组比较p<0.001),其中以重症肝炎患者的TNF水平最高。肝肽素治疗2月后,各肝炎组的TNF均下降(前后比较p<0.05),且PBMCs TNF与血清TNF有明显相关性。实验证明肝肽素能减少TNF的产生,阻断TNF对肝细胞的损伤。

肝病患者血清sIL-2R水平测定及意义

用酶联免疫吸附法测定了７９例肝病患者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平，结果显示慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌患者明显高于对照组，且慢性肝炎患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与ＡｌＴ相关，肝癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与有无明显转移相关，提示测定血清ｓＩＬ－２Ｒ水平有助于了解肝病患者的免疫功能、慢性肝炎有无活动、估计肝癌的严重程度和预后。

广州地区成人急性肝炎病原学分析

对我院感染科的191例成年急性肝炎进行了甲、乙、丙、丁、戊和度型肝炎的血清标志物检测，结果表明：44．5％为乙型肝炎病毒感染，16．2％为戊型肝炎病毒感染，12．0％为甲型肝炎病毒感染。另外，18．9％为2种或2种以上肝炎病毒重叠感染，感染的比例较高。同时还发现了2例庚型肝炎病毒感染。提示广州地区仍然以乙型肝炎病毒感染为主，两种或两种以上肝炎病毒重叠感染的情况也比较多见，并出现了庚型肝炎病毒感染。

HBV感染肝病的细胞免疫功能观察

为探讨ＨＢＶ感染所致的急性肝炎（ＡＨ）、慢性肝炎［慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）和慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）］、肝硬化和肝癌中机体免疫能力的改变，以期从调理免疫角度防止该病的进一步恶化。测定了经临床确诊的无症状的ＨＢｓＡｇ携带者２５例，急性病毒性肝炎２０例，慢性活动性肝炎１８例，慢性迁延性肝炎１６例，肝硬化５２例（代偿期２２例，失代偿期３０例），原发性肝癌晚期３２例和正常对照２０例的白细胞介素－２（ＩＬ－２），Ｔ淋巴细胞亚群，可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）和自然杀伤（ＮＫ）细胞活性。结果：无症状ＨＢｓＡｇ患者以上指标与正常对照相比无统计学差异，急性肝炎患者ＣＤ４／ＣＤ８、ＩＬ－２、ＮＫ细胞活性、ｓＩＬ－２Ｒ均明显增高，ＣＡＨ、ＣＰＨ、肝硬化和肝癌患者ｓＩＬ－２Ｒ明显增高，增高趋势为ＣＡＨ＞ＣＰＨ＞肝硬化＞肝癌；ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８、ＩＬ－２及ＮＫ细胞活性明显降低。在所有患者中，ＩＬ－２与ＣＤ４／ＣＤ８、ＮＫ细胞活性呈正相关，而与ｓＩＬ－２Ｒ除肝硬化和肝癌患者外均呈负相关。认为感染所致的免疫功能破坏，特别是ＩＬ－２产生的降低可能与ＨＢＶ所致的慢性化及肝癌有一定联系。

慢性肝炎患者IL-2及其受体与IL-6、T细胞亚群的关系

目的研究慢性肝炎与肝硬化患者IL 2、sIL 2R、IL 6、T细胞亚群的变化和意义。方法分别采用双抗体夹心ELISA法、ABS ELISA法和红细胞花环实验对 74例慢性病毒性肝炎与肝炎肝硬化进行IL 2、sIL 2R、IL 6和T细胞亚群的测定 ,并与 6 6例健康献血员进行对照。结果慢性肝炎轻度 (CH Ⅰ )IL 2水平高于正常对照(NC)组 ,慢性肝炎中度 (CH Ⅱ )、慢性肝炎重度 (CH Ⅲ )、肝炎肝硬化 (LC)患者血清IL 2水平、CD+ 4/CD+ 8比值明显低于CH Ⅰ和NC组 (P <0 .0 1) ;而IL 6、sIL 2R水平显著高于CH Ⅰ和NC组。在慢性乙型肝炎 ,HBV DNA阳性组的IL 2水平显著低于HBV DNA阴性组。在各组病例 ,IL 2与CD+ 4/CD+ 8比值、IL 6与sIL 2R正相关 ,而IL 6与CD+ 4/CD+ 8比值显著负相关 ,IL 2与sIL 2R、IL 6无相关关系。结论慢性肝炎与肝炎肝硬化患者存在免疫功能紊乱和低下、淋巴因子网络失衡 ,此与其病理生理机制有关 ,为临床上慢性肝病应用IL 2及其诱生剂治疗提供了理论依据。

戊型肝炎病毒重组疫苗的初步实验研究

应用重组大肠杆菌表达的代表HEVORF2C端约 1 /3长度基因片段的重组蛋白作为疫苗 ,进行了猕猴接种及HEV攻击实验。结果显示 ,猕猴接种疫苗后可产生高效价的抗体 ;在同株HEV攻击后 ,疫苗组 3只猕猴除 1只出现 1次粪便标本HEVRNA阳性外 ,其他未见粪便排毒和HEV血症 ,而对照组 3只猕猴均出现粪便排毒 ,并持续 9～ 1 3天 ;其中 2只外周血单个核细胞可检测到HEVRNA ,且 1只出现ALT异常。上述结果表明 ,该疫苗可有效地保护猕猴对同株HEV的攻击 。

各型肝炎肝组织内T淋巴细胞亚群的免疫组织化学分析

应用抗人T细胞单克隆抗体(COKT_3、OKT_4、OKT_8)检查了各型肝炎肝组织内T细胞亚群构成及相互比例。在慢性活动型肝炎(CAH)和肝炎肝硬化患者肝组织内浸润的单个核细胞以OKT_3^+细胞为主。其中HBeAg阳性的CAH患者OKT_8^+细胞占大多数,OKT_4^+细胞较少见;在HBeAb阳性的CAH和肝硬化患者中,OKT_8^+阳性细胞虽未减少,但OKT_4^+细胞相对增多。在慢性迁延性肝炎(CPH)和急性肝炎肝组织中,浸润的单个核细胞大多是非T细胞。并讨论了上述分布特点与病变关系。

重症肝炎肝组织坏死与补体系统激活关系的探讨

通过对110例重症及各型肝炎患者血清补体活化片段C_(3d)、C_(4d)及C_3、C_4和肝组织补体C_3及免疫球蛋白IgG的局部组织沉积的检测,探讨补体系统激活与肝损伤、坏死发生的关系。结果发现,重症肝炎患者血清补体C_3过量活化,而各肝炎组的血清C_(3d)/C_3比值与各组病情严重程度呈正相关。85.0%以上的重症肝炎有坏死区肝组织C_3和IgG异常沉积,慢性活动性肝炎组织C_3异常沉积检出率为37.5%。初步证实,补体系统的活化与肝炎组织的损伤坏死有直接的关系,而血循环中补体的活化可看做是肝组织中补体活化或肝组织损伤的反映。因此,C_(3d)/C_3,比值和C_3血清水平可做为肝炎治疗与预后的重要参考指标。

慢性病毒性肝炎患者自身抗体及干扰素抗体的检测

目的；分析自身抗体和干扰素抗体在慢性病毒性肝炎患者干扰素治疗时的检出情况及其与治疗效果的关系。方法：自身抗体的检测为间接免疫荧光法；应用酶免疫法测定干扰素抗体之总抗体。结果：（1）与正常人相比，患者自身抗体及干扰素抗体阳性率明显增高（P＜0．01），而且干扰素抗体在慢乙肝及慢丙肝患者中存在显著性差异（P＜0．05）；（2）自身抗体的存在与否和疗效无相关性（P＞0．05），干扰素抗体在治疗前已阳性和治疗后才转阳的患者，对干扰素治疗的反应可能有一定差异。结论：对于慢性病毒性肝炎患者来说，自身抗体及干扰素抗体的出现并不绝对意味着干扰素治疗效果的好坏。

应用S基因转染的Sp2/0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫苗的细胞免疫应答

构建编码ＨＢｓＡｇ 蛋白的重组真核表达质粒ｐＣＲ３－１Ｓ作为ＨＢＶ 基因疫苗， 免疫接种Ｂａ１ｂ／ｃ 小鼠。以重组质粒ｐＣＲ３－１Ｓ转染的Ｓｐ２／０ 细胞作为靶细胞， 采用５１Ｃｒ ４ｈ 释放法， 体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示， 与空载体对照组相比较， ＨＢＶ基因疫苗可诱导Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠产生ＨＢＶ 特异性细胞毒性Ｔ 细胞应答（ Ｐ＞ ０－０５） ， 提示以Ｓｐ２／０ 基因转染的细胞作为靶细胞， 检测免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠淋巴细胞的杀伤功能是可靠的。

人TCA-12-2/TCB-7.1真核双表达载体的构建与表达

目的:将T细胞抗原受体基因TCA-12-2和TCB-7.1共同构建在真核表达载体pDC315,用于哺乳动物细胞293转染研究。方法:将分离得到的淋巴细胞总RNA反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到TCA-12-2基因;以实验室保存含TCB-7.1基因的质粒为模板,扩增得到TCB-7.1基因。随后酶切,连入载体pIRES2-AcGFP1,通过亚克隆连入载体pDC315,得到重组质粒pDC315-TCA-12-2-TCB-7.1。重组体质粒经酶切鉴定后,并对插入的TCA-12-2和TCB-7.1基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染293细胞,并通过RT-PCR和流式细胞仪检测TCA-12-2和TCB-7.1基因的表达情况。结果:TCA-12-2和TCB-7.1可以同时构建在载体pDC315上,RT-PCR和流式细胞仪检测发现TCA-12-2和TCB-7.1基因可以成功在293细胞上表达。结论:成功构建了含TCA-12-2和TCB-7.1基因的双表达载体。

慢性活动性肝炎患者肝组织内TNF—α免疫组化研究

本研究用ABC免疫组织化学法(免疫组化法)研究了9例慢性活动性肝炎(CAH)患者肝组织内肿瘤坏死因子—α(TNF—α)含量;同时测定血清及外周血单个核细胞(PBMC)的TNF—α含量及肝组织学活动指数(HAI)分数。结果显示TNF—α单抗主要染色浸入肝组织内的单个核细胞(mononuclear cells,MNCs);部分肝细胞也染色阳性。肝内TNF—α阳性细胞MNCs数量与肝组织HAI分数和PBMC的TNF—α水平呈正相关。提示肝组织内的TNF—α主要由MNCs产生;肝脏内TNF—α水平可以反映肝损害的严重程度。肝组织内异常升高的TNF—α水平可导致免疫病理反应,介调肝细胞损害。

采用SPRIA、分子杂交、多聚酶链反应(PCR)研究肝脏刺激生长因子(HSS)对HBV-M HBVDNA的抑制作用

本文采用PCR、分子杂交、SPRIA技术观察肝脏刺激生长因子(HSS)对100例HBV-M、HBVDNA抑制的作用,实验结果,HBsAg的阴转率29%,HBeAg39%、抗-HBcIgM45%、HBVDNA38.4%(分子杂交法)、31.25%(PCR),双份血清结果证实,HSS对HBV-M、HBVDNA均有一定的抑制作用,与对照组相比,有显著差异,其作用机理有待进一步研究。

病毒性肝炎患者血清生长激素浓度的变化及其临床意义

本文应用放射免疫法检测９０例病毒性肝炎患者空腹血清中生长激素浓度，同时测定了肝功能及血糖。结果表明，不同肝病组生长激素含量均值与对照组比较，前者明显升高，（ｐ＜０．０１），且生长激素含量与肝功能损害程度密切相关，慢活肝及肝硬化组血糖与对照组相比，前二组明显升高（ｐ＜０．０５）；慢活肝组及肝硬化组生长激素含量与血糖成正相关。