原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南亚急型克山病的关系

用光敏生物素标记的柯萨奇 B_3病毒 cDNA 探针,与云南病区20例经临床和病理检查确诊为亚急型克山病的心肌组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果有18例出现阳性杂交信号,阳性率达90%。说明云南亚急型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在。提示云南亚急型克山病的发生与柯萨奇 B 组病毒的持续感染密切相关。

贫硒富锰致大鼠心肌损伤及其保护因素的实验研究

缺硒与克山病发病密切相关,但不能完全解释克山病的发病,因此,硒与其它因素在克山病发病中的作用成为进一步探讨的课题。我所从云南省病区儿童发元素连续几年测定结果看到,病区儿童除发硒低于非病区儿童外,还发现发锰高于非病区儿童。动物实验表明,动物体内锰的蓄积能促进硒的排泄。

低硒致乳鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的 为进一步探讨低硒与心肌损伤的关系，以及细胞凋亡是否参与心肌损伤及其机制。方法 用低硒合成饲料喂养昆明鼠，五周后交配，取其子代 ３ 周龄乳鼠心肌组织，采用ＴＵＮＥＬ法、透射电镜及免疫组化法等技术检测凋亡细胞及其相关基因。结果 低硒乳鼠心肌细胞有凋亡现象存在，而补硒组却未见类似现象。

克山病患者心肌组织细胞凋亡及结构蛋白Desmin异常表达的研究

目的探讨细胞凋亡及结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常表达与亚急型、慢型克山病的关系。方法应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）及免疫组化技术在亚急型和慢型克山病患者心肌石蜡包埋组织切片上进行细胞凋亡及Ｄｅｓｍｉｎ双重荧光染色，并应用共聚焦显微镜观察结果。结果克山病患者心肌组织中可见结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ的异常荧光染色及细胞凋亡，有Ｄｅｓｍｉｎ荧光染色变浅甚至消失，慢型克山病多表现为染色增强，或呈团状聚集于心肌细胞中间，或呈块状附于细胞膜下。凋亡细胞多见于有Ｄｅｓｍｉｎ异常改变的心肌细胞、浸润的炎细胞、血管内皮细胞及一些间质细胞。结论细胞凋亡与结构蛋白Ｄｅｓｍｉｎ异常参与克山病的发生与发展。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。

克山病的研究进展

本文从流行病学、病理学、发病机理、临床防治及病因学研究等方面介绍了克山病的研究近况，并提出今后应加强发病机理及病因学研究，同时要投入人力和物力开展病区“扩心病”的调查工作，为病区疾病的防治寻找有效的办法。

克山病区和非病区居民蛋白质营养状况与抗氧化能力的对比调查

１９９５年从克山病区和非病区居民蛋白质营养调查中发现病区居民除血硒含量显著低于非病区居民外，血浆中胱氨酸、色氨酸和赖氨酸均显著低于非病区居民，而血浆脂质过氧化物含量则显著高于非病区居民。此结果提示克山病病区居民硒缺乏以及含硫氨基酸和色氨酸摄入不足，导致机体抗氧化能力下降，可能是引起克山病发病的一个重要因素。文中还着重讨论了含硫氨基酸在机体内抗氧化作用机理。

克山病及大骨节病人群与非病人群膳食对比调查

目的进一步探讨营养因素与克山病、大骨节病的关系。方法采用询问法对克山病、大骨节病病户及其对照组进行回顾性膳食对比调查。结果克山病患者、大骨节病患者对蔬菜、水果、肉蛋禽类的摄入量明显低于对照组。从而导致维生素Ａ、Ｂ１、Ｂ２、尼克酸缺乏，微量元素钙及硒摄入量不足，这种现象在两病共存的病户中更为明显。结论营养素缺乏是克山病、大骨节病共同的危险因素。

铬对低硒状态下心肌损伤的保护作用

用克山病病区低硒（Ｓｅ）粮加铬（Ｃｒ）加Ｓｅ喂养大鼠，观察Ｃｒ对低Ｓｅ状态下心肌损伤的保护作用，超微结构观察发现病区粮组大鼠心肌细胞膜有轻度损伤，核畸形，有切迹，多数线粒体凝聚变性，部分线粒体嵴破坏，甚至消失成空泡变。心肌纤维疏松、纵向和横向断裂、有部分溶解现象，Ｚ带扭曲变性，有的肌丝Ｚ带消失。病区粮加Ｃｒ组、加Ｓｅ组及加Ｃｒ加Ｓｅ组病变明显减轻。心电图及心肌细胞内玻璃微电极检查，病区粮组ＱＲＳ时限、Ｑ－Ｔ间期及动作电位时程ＡＰＤ_（５０）、ＡＰＤ_（９０）延长，其他各组无变化。证实Ｃｒ对低Ｓｅ状态下心肌损伤有保护作用，并能逆转ＱＲＳ时限、Ｑ－Ｔ间期及ＡＰＤ的改变。Ｃｒ的保护作用对于克山病防治具有重要意义。

发硒与克山病发病率心电图和心胸比例异常相关分析

1976年克山病高发年易患人群发硒0.126mg/kg,1989年低发年发硒0.167mg/kg,1991年和1993年基本控制年发硒分别为0.179mg/kg 和0.284mg/kg。应用微机进行多元逐步回归分析显示:发硒与克山病发病率、潜克检出率、心电图异常和心胸比例异常检出率呈负相关。

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇 B 组病毒感染与云南慢型克山病的关系,本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇 B_3病毒的 cDNA 探针与云南慢型克山病尸检心肌组织15例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织10例石腊切片及引产胎儿心肌组织10例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克16例中有11例出现阳性杂交信号,即有柯萨奇 B 组病毒(CVB)RNA 存在,阳性率达73.3%。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克山病与 CVB 的感染高度相关。

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇 B 组病毒的关系,用缺口平移法制备生物素标记 CoxB_3病毒的 cDNA 探针与慢型克山病14例尸检心肌组织及10例脑外伤,CO 中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及10例非病区7～8个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交,14例慢克中有9例检测到柯萨奇 B 组病毒的 RNA,阳性率达64%,而对照组均为阴性。提示柯萨奇 B 组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。

豆油对饲克山病病区粮大鼠抗氧化能力的影响

以非病区粮对照、克山病病区粮及其添加豆油（６０ｇ豆油／ｋｇ饲料）饲料喂养大鼠７０ｄ，测定各组织中维生素Ｅ及血浆中脂质过氧化物含量。结果显示：无论是病区粮饲料组，还是非病区粮饲料组，在饲料中添加豆油后，动物血浆中α－生育酚（α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）含量均增加，而心肌线粒体中α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ含量则下降，肝线粒体中α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ和γ－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ含量均下降，红细胞膜中α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ含量亦有降低趋势。另外，饲料中长期添加豆油，可使大鼠血浆中脂质过氧化物含量显著增加。说明，随着多不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡｓ）摄入量的增加，膜系统α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ的消耗量亦增加，ＰＵＦＡｓ长期负荷，可使饲克山病病区粮（低硒低维生素Ｅ）饲料动物体内的抗氧化能力下降。

过量锰对病区粮饲养大鼠心肌损伤作用的实验研究

大白鼠喂饲克山病区粮和非病区粮,并分别加 1000ppm 锰。实验分4组,A 组非病区粮,B 组病区粮,C 组非病区粮+锰,D 组病区粮+锰,喂8周后处死。结果表明,B 和 D 组大鼠全血、心肌和肝脏的 GSH—Px 活性均明显下降,心肌、肝脏和血清脂质过氧化物含量升高,该两组间比较无明显差异。而 C 组大鼠的 GSH—Px 活性和脂质过氧化物含量与 A 组比较也无明显差异,提示过量锰(1000ppm)对动物体的 GSH—Px 活性和脂质过氧化物水平无明显影响。加锰组(C 和 D)大鼠心肌的线粒体肿胀和空泡变明显,电镜细胞化学显示心肌线粒体的细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性降低,D 组降低更明显、提示过量锰引起心肌损伤的主要环节可能是损害线粒体的功能与结构。并使喂饲病区粮大鼠心肌损害加重。

克山病患者心脏功能与血清、尿及发中化学元素含量变化关系的探讨

本文用原子吸收法测定了克山病患者血清、尿、发中铜、锌、铬、钴、镍、钙、镁含量,结果表明各元素含量均有显著改变,其变化方向各异。按不同心脏功能分组分析发现血清铜随心衰加重逐渐升高,锌/铜比逐渐变小,尿铜、镍及发锌、钙、镁也有随心功能不同而改变的趋势。认为这一规律性变化对于评价克山病患者心脏功能有一定意义。

缺硒对离体大鼠工作心脏心肌收缩性能的影响

用克山病患区粮饲喂大鼠,使心肌 Se 含量减少,肝脏 GSHpx 活性降低,LPO 含量升高;dp/dt_(max)降低,自然衰竭出现快。向饲料中加硒使上述指标逆转。提示缺硒可使心肌收缩性能减弱。

克山病病因研究

目的 探索克山病病因。方法 现场流行病学调查 ,实验病理学研究。结果 1克山病分布在我国内陆从西南 (四川 )到东北 (黑龙江 )的狭长地带 ,迄今尚未见国外报告 ;2农业户发病 ,非农业户不发或甚少发病。3在病区 ,农业户食用自产粮 ,非农业户从国家粮库购粮 ;4病例发病前有食用过呈浅绿色霉焐粮食的明确历史 ;5霉变粮食 10 0 %为真菌污染 ,其中 P.citreo- viride约占 10 % ;6实验室检验证明 ,此菌株可产生大量 citre-oviridin;7实验病理观察可见类似人类克山病的心肌变性、坏死改变。结论 克山病病因是 citreoviridin,经病区产谷物传播 。

低硒大鼠心肌细胞的钾通道

以含硒量低于０．０１２μｇ／ｇ的饲料喂养Ｗｉｓｔａｒ大鼠，形成低硒动物模型，用膜片箝技术记录动物模型心肌细胞的钾通道活动。用丹酚酸Ａ或亚硒酸钠可激活钾通道开放。用黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶产生氧自由基作用于细胞膜可明显抑制钾通道开放。

饮食中硒、锰含量与心肌损伤关系的实验研究

用人工合成饲料控制硒、锰含量,实验动物随机分4组:A组常硒常锰;B组低硒常锰;C组常硒高锰;D组低硒高锰。喂8周后处死。实验结果表明,除A组外,B、C、D各组均检出不同程度的心肌坏死,D组坏死率最高,C组次之,B组较低,4组间坏死检出率有显著差异。心肌电镜所见,B、C、D各组心肌和膜系统均呈现不同程度损伤,低硒高锰组(D)损伤较重。上述各实验组心肌细胞色素氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性与A组比较均有不同程度下降。而低硒高锰组其酶活性减弱或明显减弱者居多。