肝纤维化发病机制及中医药抗肝纤维化的研究进展

肝脏疾病已经成为当今影响人类身体健康和生活质量的重要因素,也是全球健康领域所面临的重大挑战,需要引起足够的重视。肝纤维化的进一步发展可导致肝硬化、肝癌等重症肝病。虽然许多科学研究都表明,肝纤维化早期具有可逆性,但这个逆转过程非常缓慢,甚至在并发症影响下,其逆转显得极为渺茫。因此,深入研究其发病机制并积极寻找有效药物对肝纤维化的治疗具有深刻意义。肝纤维化的病因主要包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、胆汁淤积、寄生虫病以及自身免疫性疾病等。目前,其发病机制尚未完全明确,关键环节表现为肝星状细胞活化,并进一步转化为肌成纤维细胞。特征表现为大量细胞外基质过度增生与异常沉积,导致肝脏结构破坏和假小叶生成。同时肝纤维化伴随着多种细胞因子的紊乱与氧化应激反应等,这一过程涉及机体内多条重要的信号传导通路。在治疗肝纤维化方面,由于其复杂的发病机制,目前尚未找到确切有效的西药。而传统中医药,因其具有多靶点、辨证论治的优势,在肝脏疾病包括肝纤维化的研究与治疗方面已经取得了较为不错的进展。部分单味中药、中药复方以及中药单体在抗肝纤维化治疗中发挥了积极作用,但其抗肝纤维化具体的药理作用机制仍有待进一步探索。就肝纤维化的病因、发病机制以及中医药抗肝纤维化的研究进展进行了综述。

四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的建立

目的 建立四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化动物模型。方法 用体积分数为 2 0 %四氯化碳皮下注射 3mon ,诱导昆明种小鼠肝纤维化形成。在造模 30d、6 0d、90d时 ,检测肝纤维化程度、肝脏羟脯氨酸和丙二醛含量、以及血清氨基转换酶和血清白蛋白水平。结果 小鼠肝脏纤维化程度和肝脏羟脯氨酸含量随造模时间延长而逐渐增加 (P <0 0 5～0 0 1) ,肝匀浆丙二醛含量和血清丙氨酸氨基转换酶明显升高 (P <0 0 1) ,造模后期血清白蛋白比例下降 (P <0 0 1)。结论 长期给予四氯化碳可导致小鼠肝纤维化形成 ,并有较明显的阶段性变化。

肝硬化糖代谢异常的研究

２６ 例肝硬化患者按口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ） 分为糖代谢正常组和异常组，用放射免疫法测定血浆胰岛素、胰高血糖素、生长激素、皮质醇。结果：糖代谢异常组在糖负荷后０－５ ～２ｈ 血糖明显升高，空腹及糖负荷后２ ～３ｈ 血浆胰岛素显著增高，空腹及糖负荷后０－５ｈ 血浆胰高血糖素显著增高，血浆皮质醇明显降低，血浆生长激素两组比较差异无显著性，两组患者肝功能指标及胰岛素敏感性指数（ＩＳＩ） 均有明显差异。提示肝硬化糖代谢异常的发生与胰高血糖素增高、肝功能降低、组织胰岛素敏感性下降等因素有关。

层粘蛋白与肝硬化的动物实验研究

对四氯化碳诱导的肝硬化大鼠作不同期肝组织匀浆和血清中层粘蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）含量的动态分析，并用免疫组化法观察ＬＮ在肝内的分布。结果发现，血清ＬＮ含量在大鼠肝脏受损后早期即开始升高，并与肝脏组织学改变及肝功能变化相平行。肝匀浆ＬＮ含量在肝硬化晚期才升高，免疫组化也显示ＬＮ在肝硬化晚期沉着加深。本文提示，血清ＬＮ变化能反映早期肝脏损伤和肝组织病变的活动进程，对早期诊断肝硬化有价值。肝组织内ＬＮ大量增多，预示慢性肝病发展到晚期肝硬化。

促肝细胞生长素、IFN及IL－2对成纤维细胞增殖和分泌作用

本文探讨了促肝细胞生长素（ＰＨＧＦ）、重组干扰素ａ－２ｂ（ＩＦＮ）及白细胞介素２（ＩＬ─２）对体外培养成纤维细胞增殖的作用。结果表明，ＩＦＮ和ＩＬ─２可促进细胞的增殖和核分裂，发挥丝裂原作用。ＰＨＧＦ则抑制细胞增殖和核分裂，线粒体和粗面内质网变性，其培养上清羟脯氨酸（ＨＹＰ）水平降低。提示ＰＨＧＦ通过抑制成纤维细胞增殖和细胞产生ＨＹＰ的分泌作用，而发挥抗纤维化作用。Ｐ＜０．０１。讨论肝纤维化早期，细胞因子网络异常可导致肝纤维化的发生和发展〔２〕。据ＣｇａｊａＭＪ氏研究，ＩＦＮγ可减少胶原ｍＲＮＡ水平，抑制肝内纤维的产生〔３〕高春芳等报道，ＩＦＮ可促进体外培养肝细胞和Ｔ３细胞增殖，其机制不清〔４〕。ＩＬ─２是由Ｔ细胞产生的淋巴因子，在机体免疫调节中发挥重要作用。已有报道，慢性乙肝病人ＩＬ─１活性增强，与肝纤维化程度有关。其ＩＬ─２活性低下，与肝纤维化无相关性。〔５〕。本文结果表明，ＩＦＮ和ＩＬ─２单独作用于成纤维细胞，均促进细胞分裂，使其数量增多，核分裂明显增多，并使线粒体数量增多。线粒体的增生，可活跃细胞的生物氧化功能和蛋白质合成，促进其代谢和分化，从而发挥丝裂原的作用。ＨＹＰ是体内胶原纤维的主要成分，其含?

IFN、IL-2、IL-6及生育酚对贮脂细胞增殖和胶原形成的调节

贮脂细胞具有成纤维细胞和肌原纤维细胞的特性,参与肝脏胶原及非胶原蛋白代谢,在肝纤维化形成中有重要作用。本文报告在分离、培养贮脂细胞的基础上,研究r-IFIN、IL-2、IL-6和生育酚对贮脂细胞增殖及合成胶原影响,提示γ-IFN、生育酚具有抗肝纤维化作用;IL-2促进胶原及非胶原蛋白的合成和沉积;IL-6可使胶原合成量增加。

慢性肝病患者血清TGF-β1与肝纤维化指标和肝组织病理的关系

目的观察慢性乙肝、肝硬变患者血清转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）与血清肝纤维化指标和肝组织病理的关系．方法采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定７６例慢性乙肝、肝硬变患者（其中慢性轻度２０例、中度２０例、重度１８例、肝硬变１８例）血清ＴＧＦβ１．同时检测血清ＰＣⅢ，ＬＮ，ＨＡ．２９例作肝活检，行ＨＥ染色．结果慢性乙肝轻、中、重度及肝硬变患者血清ＴＧＦβ１水平（ｍｇ／Ｌ，１４４±５７，３５０±１０８，５０８±１３３，５７９±２２５）明显高于对照组（ｍｇ／Ｌ，９５±３４，Ｐ＜００１），按慢乙肝轻、中、重度、肝硬变依次升高（Ｐ＜００１或Ｐ＜００５）；ＴＧＦβ１与血清ＰＣⅢ，ＬＮ，ＨＡ呈正相关（Ｐ＜００１或Ｐ＜００５）；血清ＴＧＦβ１，ＰＣⅢ，ＬＮ，ＨＡ水平随着肝组织纤维化程度的加重而增长（Ｐ＜００１或Ｐ＜００５）．结论慢性乙型病毒性肝炎、肝硬变患者血清ＴＧＦβ１与肝纤维化的血清标志以及肝组织病理改变相一致．

血清纤维化指标与肝组织病理和肝组织纤维定量关系的实验研究

目的 本研究观察实验大鼠血清纤维化三项指标与肝组织病理和纤维定量之间的确切关系，探讨其临床应用价值．方法 利用人血清蛋白免疫损伤Ｗｉｓｔａｒ 大鼠造成肝纤维化模型，综合分析模型组、促肝细胞生长因子治疗组和正常对照组之间血清肝纤维化指标、肝组织病理改变、肝组织胶原纤维和网状纤维病理图象定量分析等变化．结果 模型组血清肝纤维化指标（ＰＣⅢ，ＨＡ，ＬＮ） 均高于对照组，差异有显著意义（ Ｐ＜ ０－０５ 或Ｐ＜ ０－０１） ． 光镜下肝组织病理变化，肝组织胶原纤维和网状纤维病理图象定量分析模型组结果均高于对照组（ Ｐ＜ ０－０５） ．结论 血清三项指标与肝组织病理和纤维定量呈现一致性改变，显示良好的正相关．

花生四烯酸和亚油酸对肝星状细胞增殖的影响

目的探讨花生四烯酸和亚油酸对大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ）增殖的影响．方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流，ｎｙｃｏｄｅｎｚ密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞，并以ＭＴＴ比色法观察花生四烯酸和亚油酸对ＨＳＣ增殖效应．结果花生四烯酸和亚油酸可影响ＨＳＣ的增殖．花生四烯酸２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ有增殖作用（Ｐ＜００１），而５０，１００ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖有抑制作用（Ｐ＜００１），倒置显微镜观察可见ＨＳＣ增殖非常缓慢，ＨＳＣ细胞轮廓非常明显，胞质粗糙，内有颗粒沉积，１２５，６２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖无影响．亚油酸６２５，１２５，２５ｍｇ／Ｌ对ＨＳＣ增殖无明显影响（Ｐ＞００５），但随着浓度增大，５０，１００ｍｇ／Ｌ则促进ＨＳＣ增殖（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）．结论花生四烯酸和亚油酸在一定浓度下可促进肝星状细胞增殖，高浓度对ＨＳＣ有毒性作用。

肝纤维化启动期大鼠血清对肝星形细胞TGF-β1表达的影响

目的 研究大鼠血清与肝星形细胞表达 TGF- β1的关系 ,为临床的早期诊断和中医药治疗肝纤维化提供新的思路。 方法 制备正常大鼠血清、免疫性肝纤维化大鼠血清和益气活血复方药物血清 ,培养肝星形细胞(HSC) ,激光共聚焦显微镜定量分析其 TGF- β1的表达。 结果 (1)造模 3周时大鼠血清使培养的 HSC中 TGF- β1表达显著增强 ,正常鼠血清、造模 5周和 7周 (即纤维化形成后 )血清没有此作用 ;(2 )添加益气活血药物血清可使造模 3周鼠血清刺激 HSC高水平表达的 TGF- β1作用消失。 结论 (1)造模 3周鼠血清中含有强烈的刺激 HSC激活的物质 ;(2 )活血化淤方剂的作用靶点是血液中的活性物质 ,通过拮抗血液中

肝硬化血浆过氧化脂质及红细胞超氧化物歧化酶测定的临床意义

探讨52例肝硬化病人血浆过氧化脂质(LPO)及红细胞超氧化物歧化酶(SOD)的水平及临床意义。发现肝硬化血浆LPO值平均为7.23±3.67mol/L,明显高于正常对照组的3.53±1.20,P<0.001。红细胞SOD水平肝硬化者平均为4245.22±1448.0u/g Hb,而对照组为4991.88±1726.7,二组差异无显著性。肝硬化病人用抗氧化剂维生素E治疗后,62.5％病人的血浆LPO较治疗前平均下降2.1μmol/L,而SOD水平改变不大。本文对LPO增多与肝硬化损伤间的关系作了扼要讨论。

肝硬化脾功能亢进患者骨髓病理的某些特点

本文对４２例肝硬化＂脾功能亢进＂患者进行了骨髓病理活检，其结果表明，３２例病人的骨髓中存在不同程度的骨髓脂肪化、纤维化、肉芽肿及浆细胞异常增多现象。这些骨髓组织病理上的改变使得骨髓造血床明显减少，以致骨髓的有效造血量降低。提示，骨髓本身的异常病理变化是肝硬化＂脾功能亢进＂患者全血细胞下降的重要原因之一。

血清Ⅲ型原胶原含量与肝纤维化的关系（附102例肝活检分析）

为进一步研究血清Ⅲ型原胶原（ＰＣⅢ）含量与肝纤维化的关系，对肝炎患者血清ＰＣⅢ含量与肝炎组织学变化进行对比分析．方法：用ＲＩＡ法测定６１６例急、慢性肝炎及肝硬化患者的血清ＰＣⅢ含量，其中１０２例同时做肝活检，按照Ｋｎｏｄｅｌｌ肝组织炎症活动性指数标准记分．结果：急、慢性肝炎及肝硬化患者血清ＰＣⅢ含量明显高于正常人，差异有显著性（Ｐ＜ｏ．０５～０．０１）．其升高的血清ＰＣⅢ含量与肝细胞坏死范围及门管区炎症程度无相关性（ｒ＝０．４９４，Ｐ＞０．０５），而与肝纤维化程度呈正相关（ｒ＝０．６６８，Ｐ＜０．０１）．结论：血清ＰＣⅢ测定是判断慢性肝炎及肝硬化时肝纤维化程度的有用指标．

肝硬化患者血浆降钙素原与肠黏膜损伤的关系

为探讨肝硬化患者血浆降钙素原( procalcitonin ,PCT)与肠黏膜损伤的关系 ,应用免疫发光法测定 78例肝硬化患者血浆PCT水平 ,分光光度法检测内毒素 (endotoxin ,ET)水平和肠黏膜损伤标志物———二胺氧化酶(diamineoxidase,DAO)活性 ,TNF α和IL 6水平采用ELISA法检测。结果显示 ,肝硬化患者各项指标均显著高于正常对照组 ,自发性细菌性腹膜炎(SBP)组显著高于非SBP组 (P <0 0 1) ,以血浆PCT的升高幅度最大。随Child分级的增加 ,各项指标水平逐渐升高 ,血浆DAO活性与分级的相关性最好。血浆PCT水平与ET、TNF α、IL 6水平和DAO活性均呈正相关 (r分别为 0 60 3、0 5 5 6、0 5 12和 0 412 ,P均 <0 0 1)。提示PCT通过对ET、TNF α和IL 6的放大效应参与肝硬化患者肠黏膜损伤的病理过程 。

重组人肝再生增强因子可逆转免疫损伤性肝纤维化

目的：了解重组人肝再生增强因子（ｈＡＬＲ）抗免疫损伤性肝纤维化的活性。方法：建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。模型完成后予ｈＡＬＲ腹腔注射。观察肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果：重组人肝再生增强因子（ｈＡＬＲ）可降低肝纤维化大鼠的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平；肝组织胶原蛋白含量的测定表明ｈＡＬＲ治疗组大鼠肝组织胶原含量明显低于模型组及阴性对照组；病理组织切片也发现ｈＡＬＲ治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组及阴性对照组明显减轻。结论：重组人肝再生增强因子（ｈＡＬＲ）可逆转免疫损伤性大鼠肝纤维化。

实验性肝纤维化时MMP-1、TIMP-1的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化的关系

为了观察实验性肝纤维化时MMP - 1、TIMP - 1的表达与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化之间的关系 ,本文制备了免疫性大鼠肝纤维化模型 ,运用定量RT -PCR检测肝脏内MMP - 1、TIMP - 1的表达 ,通过免疫组化检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。运用相关理论作统计学分析。结果发现在肝纤维化发生时 ,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量的变化有显著相关性 ;MMP - 1的表达在肝纤维化组与正常对照组之间未见显著差异 ,与Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量变化之间也未见有相关性 ;TIMP - 1的表达在肝纤维化发生时显著增高 ,与Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化也有显著相关性。结果表明肝纤维化发生时MMP - 1的表达未见明显改变 ,而TIMP - 1的表达显著增高 ,且与Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的增高呈显著相关 ,提示TIMP - 1的表达增高在肝纤维化的发生。

肝硬化形成过程中血小板活性因子及其受体在门脉高压形成中的意义

目的 了解血小板活性因子 (PAF)及其受体在肝硬化门脉高压形成中的作用。方法 采用CCl4腹腔注射 8周 (2次 /周 )诱导大鼠肝硬化 ,利用ELISA、RT PCR及受体饱和结合实验检测PAF水平及其受体表达。结果 与对照组相比 ,肝硬化时肝内PAF、肝脏输出PAF及血清内PAF分别增高了 4 4 0 %、87 7%和 5 4 5 % (P <0 0 1,P <0 0 5 ,P <0 0 5 )。肝硬化大鼠肝内PAF受体mRNA表达及PAF结合高于对照组近 3倍 ,门脉压高于正常大鼠 2 31倍 (P <0 0 1)。结论 肝硬化时PAF系统上调节肝血流动力学和代谢异常是门脉高压形成的重要因素 ,肝内PAF释放入循环系统的增加是影响系统血流动力学异常改变的关键因子。

酒精性肝纤维化动物模型的建立

在参阅中外相关文献的基础上，结合国内实验条件成功地建立了酒精性肝纤维化动物模型，本文就造模方法进行了详细论述，并从形态学等方面进行了模型的验证，经Ｍａｓｓｏｎ三色染色证实造模组肝组织中央静脉及汇管区周围胶原纤维明显增生。肝细胞索排列紊乱，肝细胞空泡样变性，肝血窦增宽，窦壁增厚，少数有小叶间隔形成。本模型的建立将为验证抗酒精性肝纤维化药物的疗效打下良好的实验室基础。

肝硬化门静脉血流动力学改变与肝功能状况的关系

目的 :观察肝硬化患者门静脉血流动力学的改变及其与肝功能Child -Pugh分级的关系。方法 :对 31例肝硬化患者于空腹静息状态下取仰卧位应用彩色多普勒超声检测门静脉直径、流速及门静脉血流量。结果 :肝硬化组的门静脉直径增宽 (1.46± 0 .2 1vs 1.0 8± 0 .12 )cm (P <0 .0 1) ,血流速度显著低于正常对照组(16 .43± 7.33vs 2 5 .5 0± 8.31)cm/s(P <0 .0 1) ,门静脉血流量无显著性改变。Child -PughC级患者门静脉流速及门静脉血流量明显低于A级、B级。结论 :肝硬化患者门静脉直径增宽 ,血流速度显著下降 ;而且门静脉流速及门静脉血流量随肝功能恶化而明显下降。因此 ,动态观测上述指标对判断肝功能状态及预后有重要临床意义。