孕妇外周血中胎儿细胞富集纯化在产前诊断中的初步研究

探讨对Ｘ连锁隐性伴性遗传者进行无创伤产前性别基因诊断的可行性，应用密度梯度离心技术对４１例不同孕周的孕妇外周血中胎儿细胞进行富集纯化，并采用高度敏感和特异的巢式ＰＣＲ技术扩增人类Ｙ染色体锌指结构基因（Ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ－Ｙｇｅｎｅ，ＺＦＹ），同时以正常男性和女性各２０名为阳性、阴性对照，并对扩增产物进行核酸序列分析鉴定。结果表明：４０例胎儿性别诊断准确，且孕妇早期外周血中即有胚胎细胞产生，提示该技术可作为无创伤性产前诊断新技术用于Ｘ连锁隐性遗传的诊断。

孕妇血浆Amelogenin基因6bp差异检测对产前胎儿性别的鉴定价值

目的建立一种可靠性强的非创伤性鉴别胎儿性别的方法。方法根据Amelogenin基因第3内含子在XY染色体上6bp的差异,采用PCR技术扩增孕妇血浆游离DNA,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳、溴化乙锭染色鉴定其基因型,从而判断胎儿性别。结果32例孕妇血浆DNA标本中,19例被诊断为男性,13例被诊断为女性,所得结果与产后胎儿实际性别相比较,符合率为96.88%。结论通过检测孕妇血浆DNAAmelogenin基因6bp差异产前诊断胎儿性别方法可行,结果可靠。

运用单细胞聚合酶链式反应进行植入前诊断的性别鉴定

目的 :建立一种高效、快速、可靠的植入前诊断的性别鉴定方法。方法 :取成人外周血单个淋巴细胞和人胚胎单卵裂球 ,采用多重荧光PCR和多重巢式PCR同时扩增性别识别位点Amelogenin和 5号染色体上的基因IL 3。结果 :男性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为 72 % ,巢式PCR扩增效率为 6 4 .7% ;女性单个淋巴细胞荧光PCR扩增效率为 76 % ,巢式PCR扩增效率为 6 5 % ,两者与供体外周血gDNA扩增结果的一致性均达 10 0 %。单卵裂球荧光PCR扩增效率为 86 .9% ,巢式PCR扩增效率为 85 .7% ,来源于同一胚胎的不同单卵裂球扩增结果的一致性达 10 0 %。巢式PCR与荧光PCR的扩增效率比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :巢式PCR和荧光PCR各有优劣 ,但荧光PCR操作简便 ,耗时短、灵敏度高 。

孕妇血浆胎儿DNA定量分析在产前性别诊断中的应用

目的 探索一种早期、快速、非创伤性的围生期胎儿性别的诊断方法。方法 应用即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测61例妊娠8～39周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因,并有针对性的对部分孕妇检测妊娠过程中及产后母体血浆中代表母体与胎儿DNA总和的β-珠蛋白基因和代表胎儿DNA的SRY基因的变化关系。结果 妊娠第8周可在母体外周血浆中检测出胎儿游离DNA,其数量随妊娠时间增加而增高;30例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性,经证实均为男性胎儿,31例SRY基因阴性,经证实均为女性胎儿,符合率为100％,分娩6个月后,SRY基因基本从母体血浆中消失。结论 即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA,能早期鉴别胎儿性别,为早期诊断某些选择性遗传性疾病开拓了一条新的途径。

单细胞PCR对种植前胚胎的性别鉴定

目的：用单一胚胎细胞进行人类种植前胚胎的性别鉴定。方法：巢式ＰＣＲ技术同时扩增单个活检细胞Ｙ染色体上的ＳＲＹ序列及位于７号染色体上的ＺＰ３基因。结果：卵裂期胚胎活检所得的２４个单细胞中５个已变性，无ＤＮＡ扩增，其余１９个中１１个显示ＳＲＹ和ＺＰ３基因阳性，８个显示ＺＰ３基因阳性而ＳＲＹ阴性。

AFP、uE3、freeβ-HCG联检对孕中期妇女胎儿缺陷筛查有效性及影响因素分析

目的探讨孕中期妇女检查AFP、uE3、freeβ-HCG三项对筛查胎儿缺陷的意义,并探讨影响风险值的相关因素。方法用化学发光法,采用美国Beckman Coulter Access2全自动化学发光仪测定1633例在我院建卡产检的35周岁以下孕中期(16～20周+5天)孕妇血清中AFP、uE3、freeβ-HCG的浓度,并使用厂家提供的风险计算软件评估风险。结果唐氏综合症、18-三体综合症和神经管缺陷高风险发生率分别为:1.7%、0.5%、3.5%;重度溶血标本与孕周差异对高风险筛查有一定影响。结论产前筛查应该作为孕妇产科常规检查之一[1],重度溶血,有可能对风险预测值有影响,建议工作中采用新鲜无溶血标本及时检测。

关于产前诊断中性别选择的伦理学研究

产前诊断是妊娠期一项重要的检查措施 ,其目的是查明婴儿在发育期间是否存在异常 ,从而采取终止妊娠或宫内治疗等方法达到优生优育的目的。但随着产科医学技术的不断进步 ,更多的问题浮出水面 ,由于生育者已经可以根据自己的意愿选择后代的性别 ,势必造成人类男女性别比失衡 ,从而给人类社会的发展带来诸多弊端 ,所以在性别选择方面人类又将面临更多伦理道德方面的问题。

生物素标记DNA探针快速诊断胎儿性别

本文用生物素代替同位素标记人Y染色体特异性DNA探针PY3.4和人男、女性均具有的ALu探针,进行正常人外周血和胎儿绒毛DNA样本的性别诊断,减少同位素特有的放射性损害和污染以及半衰期短等缺点,此种技术较常规的染色体核型分析周期短、特异性强,可用于性连锁遗传病的产前基因诊断。

高龄孕中晚期孕妇焦虑现状及影响因素分析

探讨高龄中晚期孕妇焦虑状况及影响因素。选取门诊进行常规产前检查的高龄中晚期孕妇499例,采用自编孕妇一般情况调查表进行问卷调查,选用焦虑自评量表(SAS)对其焦虑状况进行问卷调查。478例纳入研究对象,焦虑阴性为355例(74.2%),焦虑阳性为123例(25.7%)。单因素分析结果显示,高龄中晚期孕妇焦虑在婚姻状况、妊娠准备、宗教信仰、社会支持的发生率,差异具有统计学意义(P<0.05);高龄中晚期孕妇焦虑在受教育程度、妊娠失败史,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素分析结果显示,婚姻状况、宗教信仰、社会支持为高龄中晚期孕妇焦虑的影响因素。婚姻状况中未婚、不满意为高龄中晚期孕妇焦虑的危险因素;孕期形象满意、有宗教信仰、有社会支持等因素为高龄中晚期孕妇焦虑的保护因素。高龄中晚期孕妇焦虑现象普遍存在,应加强妇幼保健程度、围产期心理咨询和干预。

围生儿死亡的简易临床病理诊断探索研究(摘要)

众所周知,世界卫生组织(WHO)曾在二次国际性专题会议上提出19种围生儿死亡及发病主要原因,本文以此为基础,结合我院1661例围生儿死亡的病理资料进行研究,现简要报道如下。

144例巨大胎儿分析

目的 探讨巨大胎儿的产前诊断及分娩方式,降低母儿并发症。方法 回顾分析14 4例巨大胎儿诊断、分娩方式及并发症,并与胚胎正常体重及分娩情况进行比较。结果 巨大胎儿中剖宫产组较阴道分娩组新生儿窒息率及产伤机会均明显降低,巨大胎儿与正常体重儿相比难产率明显升高。结论 对巨大胎儿应避免困难的阴道助产,适当放宽剖宫产指征。

一起非法行医罪与5起非医学需要胎儿性别鉴定案的法律思考

介绍了一起非法行医罪及由此引发的5起非医学需要胎儿性别鉴定案的调查取证经过,并就非法行医罪的特征、判处、非医学需要胎儿性别鉴定案的认定和一事不再罚等相关问题进行了有益的探讨。

孕妇外周血中胎儿细胞基因扩增及核酸序列分析鉴定

目前对性连锁遗传病采取遗传咨询、产前胎儿性别鉴定、选择性流产为主要预防方法，传统的细胞遗传学方法存在费时、费力的缺点。本研究利用半巢式ＰＣＲ技术扩增Ｙ染色体上锌指结构基因（ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ－Ｙｇｅｎｅ，ＺＦＹ）［１］，并进行核酸测序判定胎儿性别...

多重置换扩增在植入前胚胎性别诊断中的应用

目的用多重置换扩增(MDA)方法,对植入前胚胎的单个卵裂球全基因组扩增后进行植入前胚胎性别的遗传学诊断。方法用单细胞多重置换扩增方法对20个胚胎共20个单卵裂球进行全基因组扩增,用荧光PCR检测SRY、AMEL、XHPRT及X22 4个性别相关的基因座,检测胚胎性别,同时用同一胚胎另一卵裂球FISH结果作为对照。结果 20个卵裂球MDA均扩增成功,扩增成功率100%。20个胚胎均得到诊断,性别诊断成功率100%,其中12例为男性胚胎,8例为女性胚胎,与FISH结果一致率100%,诊断准确率100%。结论可以用单卵裂球MDA后荧光PCR检测多个基因座的方法对胚胎性别进行快速、准确的植入前诊断。

孕妇外周血血浆胎源性牙釉质蛋白基因和DYS19位点检测

目的:检测孕妇外周血血浆胎源性牙釉质蛋白(Amelogenin)基因和DYS19位点,探讨其对男性胎儿性别诊断的可能性与准确性,为伴性遗传病的产前诊断提供参考。方法:采集22例正常孕妇外周血2mL,以1例未婚无妊娠史女性为阴性对照、1例正常男性为阳性对照。提取血浆DNA作为PCR模板,以巢式PCR技术分别扩增Amelogenin基因和DYS19位点,并将实验结果与娩出后的新生儿实际性别比较。结果:孕妇外周血血浆中Amelo-genin基因检测与娩出后新生儿实际性别符合率为95.5%,DYS19位点检测符合率90.9%,2指标检测结果与胎儿实际性别符合率较高(kappa=0.909,P=0.088;kappa=0.820,P=0.120)。Amelogenin基因与DYS19位点检测的一致率为95.2%。结论:Amelogenin基因和DYS19位点预测胎儿性别符合率无差异。联合检测Amelogenin基因和DYS19位点,可以提高诊断结果的可信度。

体外扩增人类性别决定基因作产前性别测定的初步研究

根据位于人类Ｙ染色体短臂的性别决定区ＳＲＹ基因的序列，人工合成一对引物。以正常男、女性白细胞ＤＮＡ为对照，以ＰＣＲ技术体外扩增了１６例绒毛ＤＮＡ样本，结果有９例出现Ｙ特异性扩增带，余为阴性，说明这９例为男性胎儿，另７例为女性胎儿。用扩增性别决定基因的方法作产前性别测定，在临床上可用于Ｘ连锁遗传病的辅助诊断和性异常的研究。

PCR扩增孕妇外周血DNA进行胎儿性别诊断

采用密度梯度离心技术对40例孕妇外用血中胎儿细胞进行富集,并用PCR技术扩增了Y染色体特异重复序列,以产前基因诊断胎儿性别,结果38例胎儿性别诊断准确,证明此技术可作为无创伤性方法用于X连锁遗传病的产前诊断.

用聚合酶链反应快速诊断胎儿性别

我们用聚合酶链反应(PCR)技术以及Y染色体特异性的引物对绒毛组织的DNA进行基因扩增,用于产前诊断胎儿性别。扩增产物直接用琼脂糖凝胶电泳观察结果,男性胎儿有149bP的特异性扩增带,而女性则无。此种技术较常规的染色体技术简单、快速、准确,临床上可用于性连锁遗传病的辅助诊断。

应用流式细胞术从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞并进行DYS14基因扩增与检测

目的 从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞 ,对 DYS基因进行扩增 ,并对扩增准确率进行分析。方法 应用流式细胞术 (flow cytometry,FCM)从孕妇外周血分选胎儿有核红细胞 (Nucleated red blood cells,NRBCs) ,应用套式PCR特异性扩增 DYS14基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测。结果 30例受检者中 ,共有男婴 18例 ,有核红细胞组 DYS14基因的检出率为 5 0 .0 % (9/18)。结论 NRBCs分选技术的建立使非创伤性产前基因诊断成为可能 ,但如何进一步改进方法提高分选率 ,确保诊断的灵敏性 ,降低漏诊率 ,仍是需要进一步解决和完善的问题。

DNA体外PCR扩增鉴定胎儿性别方法的应用

本实验采集4例X连锁遗传病高危中孕胎儿羊水,从中抽提DNA,进行体外Y染色体特异片段扩增鉴定胎儿性别。结果其中2例胎儿为女性,2例为男性,均在引产或足月分娩后证实。