stefins在肿瘤发生发展中作用的研究进展

stefins属于Ⅰ型半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员,具有多种生物学功能活性:调控细胞内外蛋白水解的平衡,参与蛋白质的分解代谢,调控细胞增殖与凋亡,在细胞分化、感染与免疫、血管生成及肿瘤细胞侵袭和转移等方面也发挥着重要的生理功能。近年来在对stefins参与肿瘤发生发展的作用的研究中发现stefins对肿瘤的调控不仅源于stefins与组织蛋白酶(cathepsin)之间的相互影响,许多新的调控机制相继被报道。本文综述了stefins对肿瘤发生发展的调控作用及其相关机制的研究进展,并总结了stefins作为肿瘤生物标记物和预后监测指标的研究现状。

水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响

目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。

小檗碱和XAV939联合应用可抑制骨肉瘤细胞MG-63的迁移与凋亡

目的:探讨小檗碱(BBR)联合XAV939对骨肉瘤MG-63细胞迁移与凋亡的影响及其可能的机制。方法:培养MG-63细胞,分别加入20~120μmol/L的BBR和5~60μmol/L的XAV939,通过CCK-8法测定BBR和XAV939的细胞毒性,采用Chou-Talalay分析法计算两药的联合指数,确定后续实验的干预剂量;将MG-63细胞随机分为空白对照(NC)组、BBR组、XAV939组和BBR+XAV939联合组,采用划痕愈合实验、Transwell小室法检测BBR与XAV939单独或联合处理对MG-63细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色、JC-1染色及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测对细胞线粒体膜电位和凋亡的影响,免疫荧光法检测BAX蛋白的表达,WB法检测对细胞中MMP-2表达的影响,qPCR法检测对MMP-2基因表达的影响。结果:BBR和XAV939以剂量依赖方式抑制MG-63细胞的增殖,选定30μmol/L BBR、7.5μmol/L XAV939用于后续实验。与NC组相比,BBR(30μmol/L)、XAV939(7.5μmol/L)及BBR+XAV939联合处理细胞24 h后,MG-63细胞迁移能力显著降低、凋亡细胞显著增加(均P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.01),MMP-2的基因表达和MMP-2、BAX蛋白水平均降低(均P<0.05),并且,联合组的效应明显强于单药处理且(P<0.05或P<0.01)。结论:BBR和XAV939单独或联合应用可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的迁移、促进凋亡,其机制可能与迁移相关蛋白MMP-2的表达降低,凋亡相关蛋白BAX的水平增加有关。

T细胞耗竭在多发性骨髓瘤中的作用机制及其意义

多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性血液系统疾病,目前仍无完全治愈的方法。T细胞耗竭是MM的重要特征之一,与MM的进展、复发以及耐药密切相关。在MM中可以通过多种途径导致T细胞耗竭,主要包括代谢重编程、细胞因子、转录因子以及肿瘤相关免疫细胞等方式。MM患者中高比例的耗竭性T细胞(Tex细胞)是导致肿瘤细胞免疫逃逸和免疫治疗失败的一个重要因素。因此,针对Tex细胞的免疫治疗,例如靶向免疫检查点、T细胞相关转录因子和细胞因子等方式可成为MM的新型治疗方式。本文综述了T细胞耗竭在MM中的研究进展,为进一步了解MM的耐药机制以及开发新的治疗策略提供理论依据。

骨肉瘤抗血管生成靶向治疗的研究进展

骨肉瘤是常见且高度恶性的原发性骨肿瘤,其治疗面临复发和转移的挑战,迫切需要探索新的骨肉瘤靶向治疗药物。该文聚焦于靶向新生血管形成的治疗策略,特别是针对血管内皮生长因子的抗血管生成治疗。综述了不同骨肉瘤抗血管生成药物在骨肉瘤治疗中的作用机制、临床效果及潜在的副作用。这些药物能有效抑制肿瘤增殖,但存在耐药性和不良反应的问题。通过对现有药物的分析和比较,为临床应用提供指导,并为骨肉瘤的治疗提供新思路。

《中国肿瘤生物治疗杂志》第五届编委会成立大会暨第一次工作会议纪要

2024年7月21日,《中国肿瘤生物治疗杂志》第五届编委会成立大会暨第一次工作会议在北京召开。主编曹雪涛院士及第五届编委会委员、编辑部工作人员,共计89人参加了会议,会议由中国免疫学会副理事长兼秘书长黄波教授主持。主编曹雪涛院士为参加会议的代表作了热情洋溢的讲话(图1),他回顾了《中国肿瘤生物治疗杂志》从1994年创办至今的发展历程,对历届编委及其他专家在提高期刊学术水平中所做出的贡献表示了衷心感谢,提出了新阶段期刊发展的使命和责任,强调了如何准确定位并充分发挥编委的智慧、汇聚力量,进一步更新办刊理念、优化办刊环节,吸引更多的高质量论文,加快提高杂志的学术影响力。他希望通过编委的共同努力,把《中国肿瘤生物治疗杂志》办成业界优秀的学术交流平台;同时希望编辑部能够更好地利用信息化的手段高效开展编辑出版工作,积极举办和参与多样的学术活动增进与专家之间的交流。最后,对各位专家参与第五届编委会的工作表达了感谢和期盼。

FBXW7/MCM7信号轴介导肝癌细胞增殖的研究

目的 探讨FBXW7靶向调控MCM7表达对肝癌细胞增殖的影响。方法 采用免疫共沉淀法(CoIP)和免疫荧光染色法(IF),分析肝癌细胞系MHCC-97H中FBXW7与MCM7的互作关系;通过慢病毒感染过表达FBXW7和(或) MCM7,小干扰RNA技术下调FBXW7和(或) MCM7的表达;采用Western blot检测FBXW7对MCM7蛋白表达的影响,CCK-8实验检测肝癌细胞的增殖活性,EdU细胞增殖检测分析肝癌细胞的增殖能力,平板克隆实验分析肝癌细胞的集落形成能力。结果 在MHCC-97H细胞中,FBXW7与MCM7存在互作关系:过表达FBXW7抑制了MCM7的蛋白表达水平、并抑制了肝癌MHCC-97H细胞的增殖(P <0.05),在过表达FBXW7的基础上增加MCM7的表达后,细胞增殖能力提高(P <0.05);下调FBXW7后细胞中MCM7表达增加、细胞增殖能力增强(P <0.05),而下调FBXW7的同时干扰MCM7表达后,细胞增殖能力减弱(P <0.05)。结论 FBXW7能抑制肝癌细胞增殖,其机制与负向调节肝癌细胞中促癌蛋白MCM7的表达水平有关。

一种溶瘤腺病毒抑制肿瘤细胞的作用机制及特异性研究

研究重组人5型腺病毒(H101)抑制肿瘤细胞增殖的作用机制及特异性。采用体外细胞培养方法及TCID_(50)检测病毒滴度法,发现H101对p53^(−)的肿瘤细胞有显著的选择性复制作用,其活性可以对p53突变的肿瘤组织产生溶瘤作用从而达到治疗效果;采用体外药效学实验检测H101对10种肿瘤细胞株的抑增殖作用,通过计算IC_(50)、IC_(90)进一步得出小鼠肝癌细胞Hepa1-6、小鼠胰腺癌细胞Pan02、小鼠神经胶质瘤细胞GL261对H101较为敏感。研究结果表明H101对已获批的适应证之外的其他肿瘤细胞也有溶瘤作用,具有适应证扩展的潜力。本研究可为后续开展动物模型的体内药效实验和使用剂量的选择提供参考。

5-LOX及其抑制剂对肿瘤影响的研究进展

脂氧合酶(LOX)家族蛋白在恶性肿瘤演进中发挥重要作用,其亚型5-LOX在多种肿瘤组织和细胞中呈高表达,且与淋巴结转移、患者的生存期有关,可通过诱导Src的磷酸化、选择性抑制p53依赖的促凋亡基因转录、促进肿瘤血管形成、刺激上皮-间质转化、形成转移前微环境等,促进肿瘤细胞增殖和转移、抑制凋亡,参与调控肿瘤的恶性演进过程。基于5-LOX及其激活蛋白ALOX5AP的促癌作用,已开发出直接、间接两类抑制剂及COX-2/5-LOX双重抑制剂,有望通过降低5-LOX活性或阻断5-LOX代谢途径发挥抗肿瘤作用。本文概述5-LOX在肿瘤中的调控作用以及5-LOX和其激活蛋白抑制剂的研究现状,以期为后续抗肿瘤药物的开发及临床应用提供参考及新的理论依据。

癸酸能够活化CD8^(+)T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的:探究中链脂肪酸癸酸对CD8^(+)T细胞活化的影响,及其对CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法:建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组(10 mg/kg癸酸灌胃)和对照组(等量溶剂灌胃),观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8^(+)T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8^(+)T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10荷瘤小鼠体内CD8^(+)T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体(TCR)活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果:在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高(均P<0.05),肿瘤浸润CD8^(+)T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高(P<0.01)。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高(P<0.01)。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8抗体清除CD8^(+)T细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低(P<0.0001)。小鼠原代CD8^(+)T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调(均P<0.05)。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率(均P<0.05)。结论:癸酸能够促进CD8^(+)T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。

cRGD修饰负载锌的枝状介孔硅载体递送双硫仑靶向杀伤结直肠癌CT26细胞

目的:制备一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽(cRGD)修饰、Zn^(2+)掺杂并负载双硫仑(DSF)的树枝状介孔硅纳米颗粒,初步研究其对结直肠癌CT26细胞的靶向杀伤作用。方法:采用水热合成法将Zn^(2+)锚定在树枝状介孔硅纳米颗粒的骨架中,再将DSF负载在介孔孔道中,偶联靶向配体cRGD到纳米颗粒的表面,得到具有靶向功能的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD。采用透射电镜(TEM)检测DSF@Zn-DMSN-cRGD的表面形貌,通过能谱面扫得到元素映射图验证其中的元素分布,通过激光粒度仪检测其粒径与电位变化,使用红外光谱仪检测表面主要化学键。通过TEM观察载体Zn-DMSN在pH6.5和pH7.4的模拟体液中共培养后的形态,采用细胞摄取实验检测cRGD修饰的Zn-DMSN靶向CT26细胞的能力,采用CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测DSF@Zn-DMSN-cRGD对CT26细胞的杀伤能力及对细胞凋亡的影响。结果:TEM观察表明DSF@ZnDMSN-cRGD表面具有多孔径,元素映射结果显示Zn元素和DSF成功负载在纳米颗粒表面,红外光谱仪检测结果表明cRGD成功偶联在DSF@Zn-DMSN介孔硅复合载体的表面,电位粒径结果显示粒径较未偶联cRGD前稍大,电位明显增加(P<0.000 1),TEM观察发现Zn-DMSN在微酸性环境中其骨架崩解明显增多,细胞摄取实验结果表明经cRGD修饰后的Zn-DMSN被CT26细胞内吞的效率显著增加(P<0.05)。CCK-8法、Calcein-AM/PI染色法和流式细胞术检测结果说明DSF@Zn-DMSN-cRGD能够高效杀伤CT26细胞(均P<0.000 1)并诱导细胞发生凋亡(均P<0.000 1),而对正常地肠上皮细胞NCM460无明显损伤。结论:成功合成了一种掺杂锌、负载DSF并偶联cRGD的纳米颗粒DSF@Zn-DMSN-cRGD,其载体Zn-DMSN骨架具有良好的pH降解性,其中的c RGD能促进纳米颗粒被CT26细胞靶向内吞;在体外实验中,Zn-DMSN-cRGD能够对结直肠癌CT26细胞产生强烈的靶向细胞毒性。

恶性间皮瘤的靶向与免疫治疗

恶性间皮瘤(malignant mesothelioma,MMe)是一种来源于间皮组织的恶性肿瘤,多发生在胸膜、心包膜和腹膜等处,由于难以治愈的特点,对其治疗的研究一直备受关注。传统的治疗手段包括手术、化疗和放疗,但因疗效有限,患者生存率仍然较低。因此,寻找新的治疗方法对于改善间皮瘤患者的预后至关重要。靶向治疗和免疫治疗作为新兴的癌症治疗手段,通过针对肿瘤细胞或免疫细胞的特定靶点来抑制肿瘤的生长和转移,为间皮瘤的治疗带来了新的希望。本文围绕间皮瘤的靶向治疗与免疫治疗新进展进行综述。

5-Aza-CdR联合EBNA1-DC疫苗诱导的淋巴细胞对鼻咽癌C666-1细胞的杀伤作用

目的:探讨EB病毒核抗原1(EBNA1)mRNA修饰的DC(EBNA1-DC)诱导的淋巴细胞联合甲基化抑制剂5-Aza-CdR对鼻咽癌C666-1细胞的杀伤作用。方法:以构建的EBNA1-pCDNA3.1质粒为模板,体外转录获得EBNA1 mRNA,通过脂质体转染至健康人外周血来源DC,构建EBNA1-DC疫苗。流式细胞术检测转染后DC表型及5-Aza-CdR处理后的C666-1细胞凋亡情况。实时无标记动态细胞分析技术检测EBNA1-DC疫苗诱导的淋巴细胞联合5-Aza-CdR的特异性抗肿瘤活性。结果:转染EBNA1 mRNA后EBNA1-DC表面EBNA1阳性率为(59.3±5.85)%,HLA-DR的表达与未转染DC相比显著升高[(84.9±5.5)%vs(68.0±5.8)%,P=0.026],CD80的表达也显著升高([88.2±3.9)%vs(61.1±4.4)%,P=0.015]。低剂量5-Aza-CdR处理后的C666-1细胞凋亡情况与未处理的细胞相比无显著差异。经低浓度5-Aza-CdR预处理的C666-1细胞中IRF7基因表达与未处理的细胞相比显著升高(P=0.0001)。与空载的DC相比,EBNA1-DC诱导的淋巴细胞对EBV阳性表达的C666-1细胞具有更强的特异性杀伤活性(P=0.049);经低浓度5-Aza-CdR预处理的C666-1细胞对EBNA1-DC诱导的特异性免疫杀伤更敏感(P=0.019)。结论:5-Aza-CdR与EBNA1-DC疫苗联合可显著增强对C666-1细胞的特异性免疫杀伤,本研究为开拓以mRNA为基础的DC疫苗及其在临床综合治疗中的应用转化提供前期研究基础。

铜代谢失衡诱导的铜死亡机制及其在肿瘤治疗中的作用

铜死亡是一种新发现的细胞程序性死亡方式,细胞内的铜代谢失衡尤其是铜离子过载有可能会导致细胞铜死亡的发生。过量的铜积累会靶向结合硫辛酰化三羧酸循环蛋白,使其异常聚集进而触发细胞死亡,铁氧化还原蛋白1(FDX1)等多个分子能够调控铜死亡活性。肿瘤细胞内铜代谢稳态主要靠四组铜相关蛋白质的相互作用来维持,影响受体酪氨酸激酶(RTK)、自噬、Notch等相关信号通路,与肿瘤的发生发展息息相关。合理利用铜离子载体和铜螯合剂等铜配合物以及铜死亡相关生物标志物将有助于开发肿瘤治疗和预后评估新策略,在未来的肿瘤个性化治疗中有着巨大的潜力。

CRISPR/Cas9基因编辑技术在精准肿瘤学研究中的应用

CRISPR/Cas9基因编辑技术通过精准定位和修改基因序列,可以识别与细胞增殖、迁移、侵袭和化疗耐药性相关的基因,不仅为理解肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础,还为实现肿瘤的精准治疗提供了一种方便、高效的方法。由于其具有低成本、高效率的优点,被广泛地应用于精准肿瘤学的基础和临床研究当中,包括用于探寻抗肿瘤药物耐药靶点、筛查驱动基因、优化CAR-T和TCR-T细胞,以及筛选肿瘤靶向基因等。目前,已开展了十余项项使用CRISPR/Cas9技术治疗肿瘤的临床试验,策略多为利用CRISPR/Cas9技术敲除T细胞中的免疫检查点基因后回输患者,以达到免疫激活的效果,大多数研究仍处于Ⅰ期和Ⅱ期阶段。尽管CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤研究与治疗领域展现出了巨大潜力,但仍需面对脱靶效应,以及永久编辑可能带来的弊端等瓶颈,其实际临床效用仍有待更多的深入研究和大规模临床试验的严格验证。

负载MnO_(2)纳米颗粒的可得然复合水凝胶的构建及其联合光热疗法对黑色素瘤B16-F10细胞的杀伤效果

目的:构建负载二氧化锰(MnO_(2))纳米颗粒的可得然(Cur)复合水凝胶MnO_(2)@Cur(简称MGel),研究其对黑色素瘤B16-F10细胞的杀伤效果。方法:采用热诱导法制备Cur水凝胶(Gel),物理负载MnO_(2)构建MGel,表征其宏观和微观形貌,检测其机械性能、降解性能以及光热转换性能等理化性能,并研究其联合PTT对小鼠皮肤黑色素瘤B16-F10细胞的光热杀伤效果。结果:MGel具有优异的机械和可降解性能,抗拉伸强度达(127.97±3.60)kPa、抗压缩强度达(151.44±5.23)kPa,28 d降解率约58.17%。MGel负载MnO_(2)纳米片(粒径约180 nm)获得优异的光热转换性能,负载1.0 mg/mL MnO_(2)的MGel在1.0 W/cm^(2)的808 nm NIR光照4 min后到达最高温度50℃。细胞毒性实验和Calcein-AM/PI荧光双染色实验表明,MGel联合PTT有效杀伤B16-F10黑色素瘤细胞,NIR光照使得MGel组细胞存活率降低至(4.68±0.66)%(P<0.0001)。结论:MGel复合水凝胶具备优异的机械性能、可降解性能以及光热转换性能,其联合PTT能有效杀伤肿瘤细胞,可能成为一种有效治疗黑色素瘤的新手段。

移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后的影响

目的:探讨移植物中单个核细胞(mononuclear cell,MNC)、CD34^(+)细胞及T淋巴细胞亚群剂量对移植后生存的影响。方法:回顾性分析121例行异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo⁃HSCT)的血液系统恶性疾病患者,研究回输移植物中MNC、CD34^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)剂量及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值对移植后造血重建及生存的影响。结果:中性粒细胞成功植入120例,高剂量CD34^(+)T细胞(≥6.90×10^(6)个/kg)(P<0.001)、CD3^(+)T细胞(≥6.24×10^(8)个/kg)(P=0.042)和CD8^(+)T细胞(≥1.05×10^(8)个/kg)(P=0.021)与中性粒细胞更快植入相关。血小板成功植入119例,高剂量CD34^(+)细胞与血小板更快植入相关(P=0.001)。53例(43.8%)患者发生急性移植物抗宿主病,28例发生慢性移植物抗宿主病。1年和3年总体生存(overall survival,OS)率为83.5%和68.0%,1年和3年无进展生存(progression⁃free survival,PFS)率为75.0%和64.4%。单因素分析中,高剂量MNC(≥9.79×10^(8)个/kg)、高剂量CD3^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值<3.57患者有更好的OS,高剂量MNC患者有更好的PFS(P=0.061)。多因素分析显示,CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值<3.57患者有更好的OS(HR=0.288,95%CI:0.084~0.988,P=0.048)。1年和3年累积复发率分别为18.2%和26.8%,高剂量MNC和CD8^(+)T细胞患者有更低的累积复发率。结论:移植物细胞组分对异基因造血干细胞移植预后有重要影响,高剂量CD34^(+)细胞可促进血小板更快植入,回输移植物中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值<3.57的患者有更好的OS和更低的累积复发率。

人表皮生长因子受体2阳性胃癌靶向治疗的研究进展

以靶向治疗为代表的新兴治疗方法是传统一线放化疗耐药的有效补充,人表皮生长因子受体2(HER2)是胃癌靶向治疗中十分重要的靶点之一,曲妥珠单抗联合化疗已被用于晚期胃癌的一线治疗方案,帕妥珠单抗和马格妥昔单抗治疗胃癌的安全性和有效性已得到了验证。然而,单克隆抗体因其分子量较大、不能穿透血脑屏障,且耐药而导致治疗效果下降,因此需探索其他靶向HER2的疗法在胃癌中的疗效。小分子药物酪氨酸激酶抑制剂(TKI)如拉帕替尼、吡咯替尼等具有分子量小、可穿透血脑屏障和口服生物利用度高等优点,未来经过大型临床试验验证后有望成为胃癌围手术期治疗、新辅助治疗的选择药物。抗体-药物偶联物(ADC)如T-DM1、T-DXd等尽管其发挥肿瘤杀伤作用的机制不同,但能够克服单克隆抗体的耐药,是曲妥珠单抗等单抗治疗失败患者治疗药物的补充。因此,对胃癌患者进行更加细致的分层后,靶向HER2的各类胃癌治疗药物有望发挥更加显著的作用。

融合PE38的抗CD70纳米抗体免疫毒素的制备及其对肾透明细胞癌786-O细胞的杀伤作用

目的:构建靶向CD70分子的重组免疫毒素,通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白,体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性。方法:通过基因工程手段,将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个连接子与pET21a-PE38基因片段相连,获得重组表达载体pET21a-Nb 2B3-PE38并转入BL21(DE3)感受态细胞中进行表达、纯化与鉴定。用间接ELISA及FACS法检测Nb 2B3-PE38与CD70分子的结合活性,MTT法检测Nb 2B3-PE38对高表达CD70分子的肾透明细胞癌786-O细胞的体外杀伤活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Nb 2B3-PE38对786-O细胞凋亡的影响。结果:成功构建抗CD70纳米抗体重组免疫毒素Nb 2B3-PE38,纯化获得纯度>90%的重组蛋白,SDS-PAGE及WB检测结果表明目的蛋白正确表达,分子量为56000。纯化后的Nb 2B3-PE38能与重组CD70抗原及786-O细胞表面的CD70分子特异性结合;25μg/mL Nb 2B3-PE38即对786-O细胞产生极显著的杀伤作用(P<0.001),并且促进786-O细胞的细胞凋亡(P<0.01),其杀伤效应强于阳性对照顺铂(P<0.01)。结论:成功制备了特异性靶向CD70分子的免疫毒素Nb 2B3-PE38,其能够有效杀伤786-O细胞并诱导细胞凋亡且效果强于顺铂。

鼠尾草酸调节CXCR7/CXCL12轴对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨鼠尾草酸(CA)通过调节CXC基序趋化因子受体7(CXCR7)/CXC基序趋化因子配体(CXCL12)轴对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20、40、80μg/mL))的CA处理胃癌AGS细胞,采用CCK-8法筛选合适的CA浓度;将AGS细胞分为对照组(未经处理的AGS细胞)、CA组(20μg/mL CA处理)、CA+siCXCR7组(转染siCXCR7+20μg/mL CA处理)、CA+siNC组(转染siNC+20μg/mL CA处理)、CA+vectorNC组(转染vectorNC+20μg/mL CA处理)、CA+vectorCXCR7组(转染vectorCXCR7+20μg/mL CA处理),采用CCK-8法检测AGS细胞增殖的变化,qPCR法检测细胞中CXCR7、CXCL12 mRNA表达水平的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,WB法检测周期蛋白D1、Bcl-2、CXCR7、CXCL12、MMP-2蛋白表达的变化。结果:不同浓度CA均可抑制AGS细胞存活率,且浓度为20μg/mL时,细胞存活率接近50%,故选择20μg/mL CA用于后续研究。与对照组相比,CA组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与CA+siNC组相比,CA+siCXCR7组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与CA+vectorNC组相比,CA+vectorCXCR7组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著增加(均P<0.05)。结论:CA可抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制CXCR7/CXCL12轴有关。