二肽基肽酶4的多功能性及相关药物靶点作用机制的研究进展

二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4,DPP4)是丝氨酸膜固定的外肽酶,在人体的多项生理或病理活动过程中发挥重要调控作用。DPP4不仅作为转录因子调控下游靶基因的转录和表达,还能作为不依赖于转录的调节因子,通过蛋白间的相互作用,发挥其调控作用。在目前研究中,DPP4与多种疾病密切相关,并且已发现多种具有潜在靶向DPP4的物质。该文主要综述了DPP4在调节机体能量代谢、炎症、组织修复和癌变等多个方面的多功能性。同时,以慢性肝病的病理发展过程为基础,还综述了DPP4体外抑制剂的筛选以及其在调控慢性肝病方面的研究进展。

裙带菜多糖抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制

目的探讨裙带菜多糖(sulfated polysaccharide from Undaria pinnatifida,SPUP)对肝癌细胞增殖、迁移的影响及潜在机制。方法MTT和克隆形成实验检测SPUP对肝癌细胞HepG2、SMMC-7721增殖的影响;Hoechst 33258染色和Western blot法检测SPUP干预后对HepG2、SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell和划痕法检测HepG2、SMMC-7721细胞的迁移和侵袭;免疫荧光和Western blot法检测SPUP对肝癌细胞自噬、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-9蛋白的影响。结果SPUP对HepG2、SMMC-7721细胞有短期和长期的抑制增殖作用,对正常肝细胞L-02无明显抑制作用,SPUP可促进两种肝癌细胞凋亡和自噬水平。同时,SPUP可以抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力,降低EMT和MMPs水平。结论SPUP通过促进凋亡和自噬、抑制EMT和MMPs,进而抑制肝癌细胞的增殖和迁移。

人常见肝UGTs活性与抑制体外评价体系的建立与验证

目的 本研究旨在建立一种可靠的体外评价体系,用于评估人肝UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性及药物对人肝UGTs的抑制作用,并验证该体系的准确性和稳定性。方法 选择了人肝微粒体UGTs酶6种主要亚型的6个探针底物,在优化的温孵条件下通过测定其代谢产物生成反映人肝微粒体UGTs酶的活性,代谢产物浓度测定利用经过确证的液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)进行。同时应用已知抑制剂对所建立的温孵体系进行验证。结果 建立的LC-MS/MS分析方法符合生物分析要求;在本实验温孵体系下,已知的UGT抑制剂均表现出明显的抑制作用。结论 该研究成功建立了一种准确可靠的体外评价体系,该方法可应用于评估药物对UGTs酶的体外抑制作用,该研究可为药物研发和临床合理用药提供重要指导。

社区居民长期服用质子泵抑制剂和处方精简的现状及影响因素研究

背景质子泵抑制剂(PPI)长期服用的潜在风险和潜在不合理用药问题逐渐得到重视。PPI处方精简已得到广泛认同,我国社区居民中长期服用PPI的情况及进行PPI处方精简的意愿尚不明确。目的了解社区居民长期服用PPI及PPI处方精简的现状,探讨其影响因素并提出改进措施。方法于2018年4月—2020年1月对在北京市西城区什刹海社区卫生服务中心就诊长期服用PPI的389例居民进行调查,通过社区电子健康信息系统和电话问卷调查收集居民一般情况、PPI使用情况、是否同时使用非甾体类抗炎药(NSAIDs)和/或抗血小板药物、合并慢性疾病情况、用药数量、是否可开展PPI精简处方、多重用药情况等。通过电话问卷调查2020年6—12月仍长期服用PPI的92例居民对PPI长期服用的认知和处方精简态度。对可开展处方精简居民连续服用PPI时间>6个月的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果本次调查排除拒绝回答或无法联系、未连续服用PPI的患者后,最终318例长期服用PPI的居民纳入研究,平均年龄(63.9±12.5)岁,女性占61.0%,合并慢性疾病的数量平均为(3.3±1.4)种,用药数量平均为(6.1±3.3)种。可开展PPI处方精简的居民231例(72.6%)。PPI的处方指征中预防NSAIDs和抗血小板药物消化道损伤最多[202例(63.5%)]。多因素Logistic回归分析显示:居民的年龄(OR=1.044,95%CI=1.016~1.073)、用药数量(OR=1.175,95%CI=1.009~1.376)是连续服用PPI>6个月的影响因素(P<0.05)。2020年6—12月仍长期服用PPI且可开展处方精简的居民中82.6%(76/92)知晓药物使用适应证,70.7%(65/92)不了解长期服用PPI的潜在不良反应,71.7%(66/92)的愿意在全科医生的帮助下精简PPI处方,对于处方精简的主要担心是症状反复。结论社区卫生服务机构长期服用PPI居民的年龄较大、女性居多,多重用药比例高;应关注年龄大、用药数量较多居民使用PPI药物的情况,需加强对PPI长期服用潜在风险的宣教;长期服用PPI的居民对PPI处方精简的态度积极,但需加强对PPI长期用药管理。

Janus激酶抑制剂在皮肤病中的应用进展

Janus激酶-信号转导子和转录激活子(JAK-STAT)信号通路在炎症免疫性疾病及肿瘤的发病机制中发挥重要作用。JAK抑制剂作为一种小分子靶向药物,很可能是治疗此类疾病的新方法。文章主要阐述其在皮肤科领域中的应用进展。

尿激酶或蚓激酶与氟罗沙星联合应用对细菌生物被膜的影响

目的：研究尿激酶（ Ｕ Ｋ） 或蚓激酶（ Ｅ Ｋ） 与氟罗沙星（ Ｆ Ｌ Ｒ Ｘ） 联合应用对细菌生物被膜的影响。方法：最低抑菌浓度测定采用标准微量稀释法；以银染法快速鉴定细菌生物被膜（ Ｂ Ｂ Ｆ） ；扫描电镜（ Ｓ Ｅ Ｍ） 观察 Ｂ Ｂ Ｆ 形态；用甲基四氮唑蓝（ Ｍ Ｔ Ｔ） 比色法测定 Ｂ Ｂ Ｆ 中活菌数。结果：经 Ｆ Ｌ Ｒ Ｘ 处理 Ｂ Ｂ Ｆ 的 Ｓ Ｅ Ｍ 图像示细菌形态仍保持短杆状，但细菌数量及菌体间纤维样黏液物质显著减少；经 Ｕ Ｋ 或 Ｅ Ｋ 与 Ｆ Ｌ Ｒ Ｘ 合用处理后的 Ｂ Ｂ Ｆ 图像显示细菌破碎、形态不一，菌数和菌体间粘液丝均比单用 Ｆ Ｌ Ｒ Ｘ 时明显减少。对活菌数影响与电镜图像结果一致。结论： Ｕ Ｋ 或 Ｅ Ｋ 与 Ｆ Ｌ Ｒ Ｘ 合用对铜绿假单胞菌 Ｂ Ｂ Ｆ 的抑制具有明显的协同效应。

乌司他丁对心肺脑复苏后血细胞因子与脑超微结构的影响

目的 :探讨酶抑制剂乌司他丁 (ulinastatinforinjection ,UTI)对心肺脑复苏后肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 6 (IL 6 )、白细胞介素 10 (IL 10 )和脑超微结构的影响。方法 :将 2 4只成年健康普通级SD大鼠 ,随机分成对照组、复苏组和乌司他丁组 ,每组 8只。对照组仅行气管切开术 ,不夹闭气管 ,不造成心跳呼吸骤停 ;复苏组与乌司他丁组建立心肺脑复苏模型 ,乌司他丁组在心肺脑复苏时加用单次UTI 10 6U·Kg-1。对照组在气管切开即刻、0 .5、2、4、6h采集血标本 ,复苏组与乌司他丁组分别在气管切开即刻、复苏成功后 0 .5、2、4、6h采集血标本 ,以放免法测定血清中TNF α、IL 6、IL 10的水平。实验结束时每组随机取 2只动物快速断头取皮层脑组织观察脑超微结构的变化。结果 :对照组中TNF α、IL 6、IL 10基本平稳 ,各时间点间无显著变化 (P >0 .0 5 )。复苏组复苏后TNF α、IL 6明显上升 ,IL 10明显下降 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。乌司他丁组TNF α、IL 6、IL 10复苏后各时间点与气管切开即刻比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,TNF α在复苏后0 .5、2、4h与复苏组同时间点比明显下降 (P <0 .0 5 ) ,IL 10在复苏后 0 .5、6h与复苏组同时间点比明显升高 (P <0 .0 5 )。脑组织超微结构改变 :乌司他丁?

表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂的研究进展

表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶介导的信号转导与肿瘤发生发展密切相关,抑制该受体活性可以有效地抑制肿瘤。近年来,许多以此为靶点的新抗肿瘤药物陆续被开发,在多种肿瘤治疗中取得了令人鼓舞的疗效。综述了EGFR的结构和作用以及近年来EGFR酪氨酸激酶抑制剂的研究进展。

肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠模型的制备及鉴定

目的利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础。方法将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2^(fl/fl))和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2^(ΔHSC))小鼠模型。观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态。结果成功鉴定Grk2^(ΔHSC)小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2^(ΔHSC)小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2^(ΔHSC)小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2^(ΔHSC)小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2^(fl/fl)相比差异无显著性,可用于后续研究。结论本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具。

肝细胞微粒体的制备和细胞色素P450氧化酶活性测定

目的：为测定人肝细胞微粒体细胞色素Ｐ４５０氧化酶的活性。方法：用差速离心法制备３例人肝细胞微粒体。结果：细胞色素Ｐ４５０的含量为０．５２３±０．００５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；细胞色素ｂ５为０．２８５±０．０２５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；氨基比林Ｎ－脱甲基酶的活力为０．５±０．６ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；乙基吗啡Ｎ－脱甲基酶活力为０．９８±０．０８ｎｍｏｌ·ｍｇ－１。结论：Ｐ４５０酶活性影响因素较多，个体差异大。临床用药时应考虑患者的个体情况。

醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤家兔花生四烯酸代谢的影响

目的：观察醒脑静注射液(XNJI)对脑缺血再灌注家兔花生四烯酸代谢的影响，并探讨其脑保护机制。方法：将健康家兔20只以“四管闭塞法”及再开放颈动脉建立家兔急性全脑缺血及缺血再灌注动物模型，造模后分为生理盐水组(n=10)和醒脑静组(n=10)，于缺血前和再灌注前，生理盐水组家兔静脉注射生理盐水1ml·kg^(-1)，醒脑静组静脉注射醒脑静注射液1ml·kg^(-1)。观察血浆、脑组织中血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1α)(6-Keto-PGF_(1α))含量与比值的变化，并观察脑超微结构变化。结果：醒脑静组与生理盐水组同时相相比血浆和脑组织TXB_2含量、TXB_2／6-Keto-PCF_(1α)比值明显降低(P＜0．05)，醒脑静组脑组织超微结构病理改变不明显。结论：XNJI通过抑制TXB_2合成、促进6-Keto-PGF_(1α)生成而下调两者比值，这可能是其减轻脑缺血再灌注损伤的又一作用机制。

豆豉纤溶酶Subtilisin FS33的提取纯化与鉴定

探讨了凝胶层析法提取纯化新型纤溶酶Subtilisin FS33的方法。芽胞杆菌(Bacillus subtilis)DC33发酵液或固态豆豉抽提液在30%～65%硫酸铵饱和度下分段盐析沉淀,再经DEAE-Sepharose FF、Phenyl Sepharose 6FF、Sephadex G-50连续凝胶层析纯化,得到电泳纯纤溶酶Subtilisin FS33,其最终纯化倍数和回收率分别达到34.6倍和13.0%,酶蛋白比活力达到15495U/mg。该酶在还原和非还原条件下SDS-PAGE电泳分析均呈现单一条带,分子量为30kDa;活性电泳FS33凝胶条带在纤维蛋白平板上也表现出强烈纤溶活性。

用髓过氧化酶法定量测定心肌组织中的中性白细胞

中性白细胞中存在有髓过氧化酶(Myeloperoxidase enzyme,MPO),每个细胞所含酶的量是一定的,约占细胞干重的5%。该酶具有使过氧化氢还原的能力,利用这一特点可以分析酶的活力从而定量测定中性白细胞的数目。

DPP-4抑制剂西格列汀对2型糖尿病合并肥胖患者血清vaspin水平影响研究

目的探讨DPP-4抑制剂西格列汀对2型糖尿病(T2DM)合并肥胖患者血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)、胰岛素抵抗(IR)和胰岛β细胞功能的影响。方法连续性收录肥胖T2DM患者60例,随机分为西格列汀组(n=30)和二甲双胍组(n=30)。分别于入组时和治疗后3月检测血清vaspin水平、IR和胰岛β细胞功能指标。结果经过3个月治疗后,西格列汀组患者稳态模型IR指数(HOMA-IR)、血糖曲线下面积(PGAUC)和vaspin水平显著下降,胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)和△I30/△G30水平显著上升。组间比较可见,西格列汀组患者HOMA-IR和vaspin水平显著低于二甲双胍组,而HOMA-β水平显著高于二甲双胍组。西格列汀干预与△HOMA-IR和△vaspin呈负相关,与△HOMA-β呈正相关。结论西格列汀干预治疗可能通过降低血清vaspin水平进而改善肥胖T2DM患者IR和胰岛β细胞功能。

血管紧张素转移酶2(ACE2)在糖尿病致大鼠肝脏氧化应激损伤中的作用及机制分析

目的:探讨血管紧张素转移酶2(ACE2)在糖尿病致大鼠肝脏氧化应激损伤中的作用和可能机制。方法:24只健康雄性SD大鼠,随机选取8只作为正常对照组,剩余16只按60mg/kg(以体质量计)一次性腹腔注射STZ溶液制备糖尿病肝脏氧化应激损伤模型,成模后大鼠随机分为2组:糖尿病组和胰岛素治疗组(优泌林3.7×10-8mol/d),30d后宰杀,取血液和肝脏组织等进行各指标测定:1)测定血清中AGEs含量;2)测定肝脏组织中过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)的含量及过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;3)肝脏组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)的含量,ACE和ACE2酶活力的测定。结果:1)正常对照组大鼠空腹血糖均值为(5.39±0.30)mmol/L,糖尿病组大鼠空腹血糖均值持续维持在(28.24±2.51)mmol/L(远高于高水平高血糖状态指标值16.6mmol/L),胰岛素治疗后大鼠空腹血糖水平明显下降至(11.18±1.26)mmol/L,显著高于正常对照组(P<0.05),但同时显著低于糖尿病组(P<0.05),且治疗后期已经低于10.0mmol/L并逐渐接近正常对照组。糖尿病组大鼠血清中的AGEs的含量显著高于正常对照组和胰岛素治疗组(P<0.05)。2)与正常对照组和胰岛素治疗组相比,糖尿病组大鼠肝脏组织中的MDA和H2O2极显著增多(P<0.01),SOD和GSH-Px的活力极显著降低(P<0.01);AngⅡ的含量显著增多(P<0.01),Ang1-7含量显著降低(P<0.01),ACE的酶活力显著升高(P<0.01),而ACE2的酶活力显著降低(P<0.01)。结论:糖尿病时大鼠肝脏组织局部AngⅡ显著升高,ACE2活力下降,肝脏组织处于氧化应激状态。胰岛素治疗后,ACE2活力增高,致AngⅡ降解,AngⅡ含量显著降低,肝脏的氧化应激减缓,提示ACE2对糖尿病大鼠肝脏氧化应激损伤有一定的保护作用,其机理可能与对AngⅡ降解作用增强有关。

Kunitz型胰蛋白酶抑制剂的研究进展

Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于典型丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能至少包括了保护储存蛋白、调节内源蛋白酶的活性、保护个体免受昆虫和病原体的侵害、抑制癌细胞侵袭扩散、抗炎、抗真菌等作用。并已经应用到了抗虫性转基因植物和临床疾病治疗中。

纳豆激酶的研究进展

纳豆激酶是一种新的溶栓剂，具有溶栓效率高，药效时间长等优点。综述了纳豆激酶的由来、理化特征、药理效果及开发进展。

左西孟旦对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察含左西孟旦(Levo)的停搏液对大鼠离体缺血再灌注心肌的保护作用。方法:32只雄性Wistar大鼠随机分为L0、L0.03、L0.3、LG共4组,每组8只,在去极化停搏液STH-2中分别加入Levo0、0.03、0.3μmol/L以及Levo0.3μmol/L+格列苯脲10μmol/L。平衡灌注30min后分别用25℃的4种不同停搏液停搏,2h后重新灌注30min,观察对比各组停搏前后不同时间点心功能指标、再灌注末冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量的不同。结果:各组心功能基础值差异无统计学意义(P>0.05),再灌注期各组心功能都有不同程度的降低,L0.3组左心室舒张末压(LVDP)、心室内压力上升/下降速率(±dp/dtmax)的恢复率均高于其他3组(P<0.01或P<0.05),HR的恢复率明显高于L0组(P<0.01),L0.03组、LG组与L0组比较心率(HR)、+dp/dtmax的恢复率差异无统计学意义(P>0.05),-dp/dtmax恢复率在T2时点高于L0组(P<0.05或P<0.01)。再灌注末CK和LDH漏出量L0.3组明显低于其他各组(P<0.05或P<0.01)。结论:Levo加入STH-2停搏液能够明显减轻缺血再灌注心肌的损伤。

碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺的临床应用进展

碳酸酐酶(CA)能可逆性地催化CO2水合反应,产生参与人体多种生理功能的H+和HCO3-。现在研究较多是α-CA同工酶CAI,CAII,CAIV,CAIX和CAXII。乙酰唑胺是一种临床应用较早的碳酸酐酶抑制剂,原用于心源性水肿和青光眼的治疗,由于不良反应较多现对上述疾病已失去实用价值。近来研究发现乙酰唑胺对众多组织细胞的CA有广谱抑制作用,使细胞内CO2水合反应正向途径受阻,从而纠正诸多病理状态的生化代谢紊乱,由此扩宽了其一系列临床新用途。文中就乙酰唑胺在急性高原病、慢性高原病、脑血管病、肿瘤、顽固性呃逆、癫痫、代谢性骨病、氧惊厥等方面临床应用的最新进展进行综述。