不同处理方法对海南黑山羊同期发情效果和繁殖性能的影响

为探讨不同处理方法对海南黑山羊同期发情效果和繁殖性能的影响。随机选取海南省某规模化养羊场的120头(35~50)kg海南黑山羊,分为2次注射氯前列烯醇(PG)法、孕酮阴道栓(CIDR)+孕马血清促性腺激素(PMSG)二联法、CIDR+PMSG+PG三联法3种不同的处理方法,诱导发情试验结束后,分别观察3组羊的发情情况和繁殖性能。结果显示,3组试验羊的同期发情率差异显著,且试验组C海南黑山羊同期发情率显著高于试验组A和试验组B(P<0.05);试验组A母羊发情时间主要集中在48~72 h,试验组B和试验组C母羊发情时间主要集中在24~48 h;试验组C母羊的受胎率和产羔率均显著高于试验组A和试验组B(P<0.05);待分娩后,3组试验母羊初生的羔羊平均初生重差异不显著(P>0.05)。结果表明,应用CIDR+PMSG+PG三联法处理方法能够显著提高海南黑山羊同期发情效果和繁殖性能,为今后提高海南黑山羊同期发情效果和繁殖性能提供了参考依据。

基于RNA-Seq技术的山羊嘴唇黏膜色素沉积相关差异表达基因筛选及初步分析

【目的】通过RNA-Seq技术筛选不同颜色山羊嘴唇色素代谢相关的候选基因,初步揭示山羊嘴唇黏膜颜色差异形成的分子机理,为动物黏膜色素代谢研究提供理论依据。【方法】以嘴唇等面部可视黏膜颜色存在差异的酉州乌羊(乌黑色)和板角山羊(粉色)为研究对象,采用Illumina Hiseq 2000测序平台对嘴唇黏膜组织进行转录组测序,所得序列经质控、组装后,以|log_(2)(Fold Change)|>1且q value<0.05为标准筛选差异表达基因,并对差异表达基因进行功能注释和富集分析。【结果】利用RNA-Seq技术共筛选出249个基因差异表达,其中与粉色嘴唇黏膜组织相比,乌黑色嘴唇黏膜组织中上调基因有218个,下调基因有31个。23个差异表达基因被划分在9种TFs家族中,其中14个基因属于含有锌指结构域的转录因子家族。GO功能富集分析结果显示,差异表达基因主要参与离子转运相关生物学过程和分子功能。KEGG代谢通路富集结果显示,差异表达基因显著富集于催产素、钙、cGMP-PKG信号通路,以及肥厚性心肌病、心脏肌肉收缩等7个与肌肉组织功能相关的信号通路,其中钙和cGMP-PKG信号通路与色素代谢密切相关;此外,ASIP等12个基因富集到MAPK信号通路、cAMP信号通路、黑色素合成信号通路(Melanogenesis)等色素代谢核心通路中;CALML6、OXTR、ATP1A2、ATP1B44个差异表达基因同时富集到多条与色素代谢相关的通路。qRT-PCR结果与测序结果一致,表明测序结果可靠。【结论】初步确定ASIP基因为山羊嘴唇色素代谢的候选基因,CALML6、OXTR、ATP1A2、ATP1B44个基因参与了山羊嘴唇黏膜色素沉积过程,为研究山羊黏膜色素代谢的分子机制提供理论基础,也为探究人类黏膜异常着色的分子机制提供参考。

山羊circFDXR的鉴定及其在卵巢颗粒细胞中高效表达的研究

【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质分离、荧光原位杂交(FISH)检测circFDXR亚细胞定位。利用同源重组将circFDXR的线性序列无缝克隆至慢病毒载体pLC5-ciR,转染至293T细胞包装病毒后进行病毒滴度测定,并确定最佳感染复数(MOI),并以最佳MOI感染山羊原代卵巢颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测过表达效率,并测序验证circFDXR是否正确环化。【结果】山羊circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,耐受RNase R酶的消化。成功构建circFDXR慢病毒过表达载体,浓缩病毒滴度为5.49×10~9 TU/mL,感染山羊卵巢颗粒细胞的最佳MOI为100。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,过表达组circFDXR表达量极显著升高(P<0.01),测序结果显示过表达的circFDXR可以正确环化。【结论】circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,相比线性RNA具有更高的稳定性。利用慢病毒包装的circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中可以正确环化,本试验结果为进一步研究circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中的功能奠定了理论基础。

青贮黑麦草对奶山羊生产性能、乳成分和血清相关指标的影响

试验旨在探究青贮黑麦草代替饲粮中10%青贮紫花苜蓿对奶山羊生产性能、乳成分和血清相关指标的影响。挑选体重、产奶量、胎次一致的健康奶山羊40只,随机分为2组,每组4个重复,每个重复5只羊。对照组奶山羊饲喂基础饲粮,试验组采用10%青贮黑麦草代替基础饲粮中等量的青贮紫花苜蓿。预试期1周,正式试验期8周(妊娠期和泌乳期均为4周)。结果显示,与对照组相比,试验组初生羔羊体重和断奶羔羊存活率均显著升高(P<0.05),乳脂率显著升高(P<0.05),乳体细胞数显著下降(P<0.05);试验组奶山羊血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和球蛋白(GLB)含量均显著升高(P<0.05),甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量显著下降(P<0.05)。研究表明,以青贮黑麦草代替10%青贮紫花苜蓿可以提高羔羊存活率和幼羊生长性能,增加奶山羊采食量和产奶量,改善奶山羊的免疫功能,但对奶山羊血清抗氧化和肝功能等相关指标无显著影响。

miR⁃7靶向调控CTSK对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和迁移的影响

【目的】探明miR⁃7与CTSK基因相互作用关系及其对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,为贵州黑山羊优良品种保藏、选育与开发利用提供依据。【方法】采用在线数据库筛选miR⁃7与CTSK基因3′UTR的结合靶点,通过将CTSK基因3′UTR插入双荧光素酶报告系统中进行互作位点检测;采用CCK⁃8和划痕试验检测miR⁃7是否靶向调控CTSK基因影响贵州黑山羊卵巢颗粒细胞的增殖和迁移;过表达miR⁃7后采用RT⁃qPCR检测其对促增殖蛋白PCNA、抗凋亡蛋白BCL2和促凋亡相关蛋白BAX、caspase⁃3、caspase⁃9表达水平的影响。【结果】成功构建CTSK基因3′⁃UTR 2个预测靶点的野生型和突变型双荧光素酶报告载体;双荧光素酶试验结果表明CTSK基因3′UTR区的2个预测靶位点均受miR⁃7调控;CCK⁃8和细胞划痕结果表明,转染miR⁃7试验组的卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力均显著高于对照(NC)组;RT⁃qPCR结果表明,上调miR⁃7能极显著上调PCNA和BCL2的表达,抑制BAX、caspase⁃3和caspase⁃9的表达。【结论】miR⁃7可以靶向结合CTSK的3′UTR区2个靶位点并极显著抑制CTSK基因的表达;过表达miR⁃7可以显著促进贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力,并促进增殖标志基因、抗凋亡基因的表达和抑制促凋亡相关基因的表达。研究结果可为进一步研究miR⁃7靶向调控CTSK表达影响贵州黑山羊繁殖性能的分子机制提供理论依据。

奶山羊低密度液相SNP芯片开发及有效性验证

为更好地了解奶山羊在世代更替中的遗传谱系,避免因错误谱系记录造成群体近交程度过高,本研究利用液相SNP芯片标记技术确立羊群遗传谱系及其亲缘关系。通过简化基因组测序,对25个不同种群的崂山奶山羊基因组DNA样本进行分析,挑选出1 792个SNP多态性位点,再通过靶向测序基因型分型,合成低通量的探针,最后对探针进行相应的捕获测试,开发出检测崂山奶山羊遗传基因的低密度液相SNP芯片。将该液相芯片应用于300只崂山奶山羊群体的血缘关系鉴定,与已知300只奶山羊系谱记录的亲缘关系进行对比,发现结果高度吻合,证明此芯片具有很高的准确性。本实验开发出均一性高、位点多态性好的低密度液相芯片技术,可专门用于崂山奶山羊亲缘关系鉴定,从而更好地指导奶山羊的选种选配。

菌糠替代紫花苜蓿对贵州黑山羊母羊生产性能、抗氧化能力和瘤胃微生物区系的影响

试验旨在研究饲粮中菌糠替代紫花苜蓿对贵州黑山羊母羊生产性能、抗氧化能力和瘤胃微生物区系的影响。选取18只体况相近的贵州黑山羊母羊,随机分为3组,每组6个重复,每个重复1只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别以金针菇和海鲜菇菌糠等量替代基础饲粮中的紫花苜蓿,依次记为对照组(CK组)、金针菇组(JZG组)、海鲜菇组(HXG组)。预试期14 d,正式试验期60 d。结果显示,JZG组和HXG组血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著高于CK组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著低于CK组(P<0.05)。JZG组和HXG组瘤胃液中乙酸(AA)含量显著低于CK组(P<0.05)。通过高通量测序分析发现,JZG组瘤胃微生物的物种多样性和丰度显著高于HXG组和CK组(P<0.05)。聚类分析发现:在门水平上,厚壁菌门和变形菌门相对丰度在CK组中较高,而拟杆菌门、疣微菌门、浮霉菌门和螺旋菌门相对丰度在JZG组和HXG组较高;在种和属水平上,奎因氏菌属、普雷沃氏菌属、溶糊精琥珀酸弧菌等相对丰度在CK组中较高,而毛螺科菌、理研菌科、支原体_girerdii等相对丰度在JZG组和HXG组较高。研究表明,以金针菇和海鲜菇菌糠替代紫花苜蓿调制全混合日粮对贵州黑山羊母羊的育肥效果无不良影响,其中金针菇菌糠效果优于海鲜菇菌糠。

鲁北白山羊种质资源保护与利用现状

鲁北白山羊是山东省著名的肉皮兼用品种之一,具有多胎高繁、肉质好、板皮质量高及杂交优势明显等优良特性。该文对鲁北白山羊的外貌特征、产肉和繁殖等品种特性进行了描述,指出了盲目杂交、种群近交及研究投入少等问题,提出了有效扩大核心群、利用分子育种技术提升选育效率、加强产品开发等发展建议,对未来的育种方向进行了展望,旨在为鲁北白山羊这一优良地方品种乃至我国其他地方山羊品种的开发利用提供参考。

国审新品种皖临白山羊培育与种质特性

为更好地保护和开发利用安徽省优良地方羊种,增加我国优质肉羊产能。该研究以地方品种安徽白山羊为基础,引入萨能奶山羊和波尔山羊血缘,开展了皖临白山羊新品种培育。选育结果:经过三元杂交以及横交固定选育四个世代后,新品种皖临白山羊2月龄公羔体重为(12.38±1.63) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(46.12±1.51)、(44.15±1.55)和(50.10±1.99) cm;6月龄公羔体重为(31.12±3.14) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(63.38±1.98)、(58.95±2.15)和(72.20±2.55) cm;12月龄公羊体重为(52.53±4.01) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(71.38±4.11)、(68.55±2.99)和(85.85±3.55) cm;18月龄公羊体重为(66.16±4.78) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(81.25±4.10)、(73.44±4.21)和(92.21±4.31) cm;产羔率达255.3%;6月龄公羊屠宰率、净肉率和眼肌面积分别达(54.15±1.42)%、(47.08±0.85)%和(13.01±0.44) cm2;6月龄母羊屠宰率、净肉率和眼肌面积分别达(53.21±0.76)%、(46.56±1.52)%和(12.92±0.78) cm2。可见,皖临白山羊新品种体型较大,背毛白色,全身结构匀称紧凑,背腰宽平,四肢粗壮,蹄质坚实,充分发挥了亲本成活率高、抗逆性强、耐粗饲等优良特点。

长江三角洲白山羊不同杂交组合早期生长发育性状研究

为了研究长江三角洲白山羊不同杂交组合生长发育的差异,以长江三角洲白山羊为母本、以萨能奶山羊和波尔山羊为父本进行杂交选育,分析萨白F_(1)、波萨白F_(2)和长江三角洲白山羊F_(0)60日龄体重与体尺指标的变化。结果显示:波萨白F_(2)各日龄体重、平均日增重均显著高于长江三角洲白山羊F_(0)(P<0.05);波萨白F_(2)各日龄体重和平均日增重均高于萨白F_(1),萨白F_(1)各日龄体重和平均日增重均高于长江三角洲白山羊F_(0),但差异均不显著(P>0.05)。整个试验期间,波萨白F_(2)、萨白F_(1)各日龄体尺指标均高于长江三角洲白山羊F_(0),但差异均不显著(P>0.05);各组羊的体尺数据随着日龄的增加呈递增的趋势。该试验通过分析不同杂交组合羔羊体重、体尺等早期生长发育性状,为培育具有较高经济价值的长江三角洲白山羊肉用品种(系)提供了一定参考。

不同配料制作的山羊发酵床应用效果

为探索微生物发酵床的制作工艺和饲养效果,选取120只本地山羊(母羊),分为4组,每组30只,3个试验组饲养于水泥地板地面发酵床羊舍,对照组饲养于普通漏缝地板羊床羊舍,测定舍内外温度(10—12月)、山羊增重、饲养费用。结果显示,各试验组羊舍的平均温度显著高于对照组羊舍(P<0.05)。10月试验组羊舍平均温度在25℃左右,而在该地气温相对较低的12月试验组羊舍的温度还能维持在22℃左右,比对照组羊舍温度高7℃以上(P<0.05),比舍外温度高12℃以上(P<0.05)。试验组山羊初始平均体重差异不显著(P>0.05),试验结束时试验组山羊平均日增重显著高于对照组(P<0.05)。试验期间(3个月),试验组羊舍的人工费用较对照组羊舍降低25%、兽药费用较对照组羊舍至少降低27.77%以上,综合效益增加89元/只以上。表明发酵床饲养技术可为山羊越冬提供适宜的温度,提高增重率,无污水排放,可提高经济效益。

马头山羊耳组织成纤维细胞系的建立

马头山羊是武陵山脉的地方良种,以个体较大,肉和板皮质量优良而著称,是湖北省重点保护的品种。本研究选取性别不同的1岁马头山羊作为试验对象,利用纤维蛋白酶消化法建立马头山羊耳部组织成纤维细胞系,并分析、比较成纤维细胞不同天数生长形态、生长曲线和冻存前后存活率等生物学特征。结果表明,培养48 h后,可观察到组织块周围有许多典型成纤维细胞形态的细胞环绕生长,细胞倍增时间约为24 h,细胞冻存后的复苏率分别为96.0%和96.5%,细胞生长呈现出典型的“S”形。此细胞系的建立为马头山羊遗传资源保护及其他研究提供理想的试验材料。

不同能量饲料对贵州黑山羊生长性能、屠宰性能、肉质性状、氨基酸及脂肪酸含量的影响

试验旨在探究不同能量饲料对贵州黑山羊生长性能、屠宰性能、肉质性状及肌肉中氨基酸、脂肪酸含量的影响。选取生长状况基本一致体重为(21.12±1.25) kg的6月龄贵州黑山羊公羊45只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复5只。玉米组、大麦组、小麦组分别饲喂以玉米、大麦和小麦为主要能量饲料配方的混合饲粮。预试期7 d,正式试验期90 d。结果表明:大麦组平均日增重达到180.56 g,显著高于其他两组(P<0.05),玉米组和大麦组屠宰率均显著高于小麦组(P<0.05),玉米组滴水损失、熟肉率以及干物质含量均最高,小麦组粗脂肪含量最高。各试验组羊肉中均检出16种氨基酸,包含7种必需氨基酸和9种非必需氨基酸,大麦组和小麦组非必需氨基酸含量显著高于玉米组(P<0.05)。各试验组羊肉中共检测出37种脂肪酸,其中检测出17种饱和脂肪酸,9种单不饱和脂肪酸,11种多不饱和脂肪酸。小麦组饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的含量最高,大麦组多不饱和脂肪酸的含量显著高于玉米组和小麦组(P<0.05)。研究表明,大麦能够提升贵州黑山羊生长性能和屠宰性能,且肉品质相对较好,可作为主要能量饲料使用。

基于简化基因组测序(Super-GBS)的子午岭黑山羊保种群遗传结构评估

旨在分析子午岭黑山羊的群体遗传多样性和亲缘关系以及家系结构,为子午岭黑山羊的保护和利用提供依据。本研究通过简化基因组测序(super-genotyping by sequencing,Super-GBS)技术对99只(10公/89母)成年子午岭黑山羊进行全基因组SNP检测。利用Plink软件计算观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)、核苷酸多样性(Pi)、有效等位基因数(Ne)及次要等位基因频率(MAF)等6项遗传多样性指标;GCTA软件进行主成分分析及基因组亲缘关系G矩阵构建;Plink软件构建IBS遗传距离矩阵,R语言绘制热图;PHYLP构建系统发育树;detect RUNS工具检测ROH。结果表明,99只子午岭黑山羊个体共检测到996042个SNPs。子午岭黑山羊群体的PIC、Pi、Ne及MAF值分别是0.161、0.193、1.295、0.130,且Ho(0.167)低于He(0.192),说明子午岭黑山羊群体遗传多样性较低。G矩阵和IBS遗传距离结果均表明子午岭黑山羊群体间大部分个体间亲缘关系较远。主成分分析结果揭示子午岭黑山羊群体内部不存在明显分化,系统发育树结果说明子午岭黑山羊群体公羊可大致分为6个家系,所有家系公羊数量较少。子午岭黑山羊群体的近交系数FROH为0.0496,说明子午岭黑山羊群体内部近交程度相对较低。综上所述,子午岭黑山羊群体遗传多样性较低,大部分个体间亲缘关系较远,群体内近交程度较低,后期应注意后代的选育,避免血统流失。

饲粮不同能量水平对陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和微生物组成的影响

旨在探究饲粮不同能量水平对陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和菌群结构的影响。选择40只体重[(13.80±1.60)kg]接近的陕北白绒山羊断奶公羔随机分为4组,饲喂消化能水平分别为9.16(Ⅰ组)、9.66(Ⅱ组)、10.16(Ⅲ组)和10.66 MJ·kg^(-1)(Ⅳ组)4种饲粮,所有饲粮的粗蛋白质水平均为11.8%。饲养试验持续60 d,包括7 d预试期和53 d正试期。试验结束后采集所有动物瘤胃液,测定瘤胃发酵参数,提取瘤胃液总DNA,PCR扩增16S rRNA的V3~V4区进行高通量测序及分析。结果显示:1)随着饲粮能量水平的提高,瘤胃液pH、氨态氮(NH3-N)含量和乙酸/丙酸的比值逐渐降低,总挥发性脂肪酸、乙酸和丙酸含量呈现出先增加后降低的变化趋势,微生物菌体蛋白(MCP)、丁酸和戊酸含量逐渐升高;Ⅳ组pH显著低于其他3组(P<0.05),Ⅰ组丙酸含量显著低于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组乙酸/丙酸的比值极显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01)。2)瘤胃微生物物种多样性结果表明,随着饲粮能量水平的提高,Shannon和Simpson指数逐渐降低,而Chao1、faith_pd和observed_OTUs指数均呈现出先增加后降低的变化趋势,Ⅰ组和Ⅱ组Chao1和observed_OTUs指数均显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05)。3)对瘤胃微生物的物种组成分析发现,拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)是所有试验羊瘤胃优势菌门,且随着饲粮能量水平的提高,拟杆菌门的相对丰度逐渐降低,厚壁菌门和变形菌门的相对丰度逐渐升高。普雷沃氏菌属(Prevotella)和瘤胃球菌属(Ruminococcus)是所有试验羊瘤胃优势菌属,且随着饲粮能量水平的提高,普雷沃氏菌属相对丰度逐渐降低,而瘤胃球菌属相对丰度极显著升高。4)瘤胃微生物的物种差异性方面:门水平上,Ⅳ组变形菌门(Proteobacteria)相对丰度最高,且显著高于其他3组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组TM7相对丰度极显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组互氧菌门(Synergistetes)相对丰度显著高于其他3组(P<0.05);属水平上,Ⅰ组瘤胃球菌属(Ruminococcus)相对丰度极显著低于其他3组(P<0.01),Ⅰ组和Ⅱ组颤螺旋菌属(Oscillospira)相对丰度极显著低于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.01),Ⅰ组和Ⅲ组未分类拟杆菌(Unspecified_Bacteroidales)相对丰度显著高于Ⅱ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)、未分类韦荣氏球菌科(Unspecified_Veillonellaceae)、未分类毛螺菌科(Unspecified_Lachnospiraceae)和未分类梭菌(Unspecified_Clostridiales)相对丰度显著高于Ⅲ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅳ组Unspecified_RF32相对丰度显著高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组Unspecified_F16相对丰度显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P<0.05)。综上所述,饲粮不同能量水平影响陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性,随着饲粮能量水平的提高,瘤胃微生物的丰富度有逐渐降低的变化趋势,显著改变了变形菌门(Proteobacteria)、互氧菌门(Synergistetes)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)和解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)等细菌的相对丰度(P<0.05),且消化能水平为9.66 MJ·kg^(-1)的饲粮能够有效改善陕北白绒山羊断奶公羔瘤胃发酵特性和细菌组成。

藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关基因和可变剪接事件的综合分析

背景:藏西北绒山羊子宫内膜容受性是胚胎植入的关键因素,目前对于藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关基因表达及可变剪接的认识还未明确。目的:分析并挖掘藏西北绒山羊子宫内膜容受性相关的基因和可变剪接事件。方法:在妊娠第5天和第15天(分别代表容受前子宫内膜组和容受性子宫内膜组),分别随机选取3只藏西北绒山羊,采集子宫内膜组织,苏木精-伊红染色观察组织形态,免疫组织化学检测子宫内膜容受性标志蛋白白血病抑制因子、血管内皮生长因子的表达水平;提取子宫内膜组织总RNA,质量检测合格后进行转录组测序,寻找差异表达的mRNA、长链非编码RNA、环状RNA和miRNA,进行功能预测,并分析与子宫内膜容受性相关的可变剪接mRNA和长链非编码RNA。结果与结论:(1)与容受前子宫内膜组比较,容受性子宫内膜组子宫内膜组织中白血病抑制因子和血管内皮生长因子蛋白的表达水平明显升高;(2)测序结果显示,差异表达基因多为mRNA和长链非编码RNA,包括250个上调的mRNA、193个上调的长链非编码RNA、135个下调的mRNA和123个下调的长链非编码RNA,显著富集于Wnt、Hedgehog和Hippo信号通路;(3)可变剪接事件分析显示有8个差异表达的可变剪接转录本,均为mRNA分子,其中2个下调、6个上调,与血管内皮生长因子受体信号、细胞运动和胚胎发育有关。

黑色素在酉州乌羊皮肤中的分布特征研究

为寻找酉州乌羊皮肤乌色特异性形成的组织形态学依据,本研究以酉州乌羊(乌色皮肤)为实验对象,以板角山羊(白色皮肤)为对照,分别采用HE染色法、Masson-Fontana银染法对2种不同肤色山羊皮肤组织中的黑色素颗粒数量、分布特征进行比较,再利用免疫荧光法对黑色素细胞进行组织定位和计数分析。HE染色结果显示:酉州乌羊皮肤中黑色素颗粒较多,基底层和毛囊等部位有大量黑色素存在;Masson-Fontana银染结果显示:酉州乌羊皮肤黑色素从皮肤基底层蔓延到皮肤浅表层,形成明显的帽状结构;免疫荧光结果显示:酉州乌羊皮肤组织黑色素细胞定位于表皮基底层和毛囊中,与对照白皮羊部位相同,且黑色素细胞数量差异不显著。本实验结果说明酉州乌羊肤色特异是由于黑色素分泌数量多且分布延伸到皮肤表皮层所形成的,可能与其黑色素细胞活性有关,而与黑色素细胞数量无关。

不同发育阶段关中奶山羊睾丸间质细胞的生物学特性

【目的】研究幼龄期、初情期和成年期关中奶山羊睾丸间质细胞(Leydig cells,LCs)的形态、分布特点、超微结构特征及睾酮合成水平,解析不同发育阶段LCs的形态特征与睾酮合成水平之间的相关性。【方法】使用光镜和改良后的透射电镜技术观察不同月龄奶山羊LCs的形态、分布规律及超微结构特征;采用免疫组织化学染色方法检测睾酮合成关键酶3β-羟基类固醇脱氢酶的表达和分布;采用酶联免疫吸附试验检测血清中促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和睾酮含量的变化;采用荧光定量PCR和免疫印迹技术分析LCs成熟和睾酮合成关键基因/蛋白表达的规律。【结果】与幼龄期相比,初情期和成年期的LCs逐渐变大、呈不规则多边形,且逐渐向间质中央移动。初情期和成年期的LCs胞质内含有大量脂滴,且脂滴与线粒体、光面内质网等细胞器密切接触。随着性成熟,血清中的LH和睾酮含量显著或极显著增加,睾丸组织中与睾酮合成相关的基因表达水平显著或极显著上调。【结论】关中奶山羊LCs的睾酮合成能力与其发育成熟过程密切相关,初情期和成年期的LCs胞质内存在大量脂滴且与线粒体直接接触,这为形态学方法研究脂滴参与睾酮的合成提供了科学依据。

山羊AGRP基因克隆及在黑色素细胞中的表达研究

为了研究刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AGRP)基因在动物皮肤黑色素沉积中的作用,试验以酉州乌羊为研究对象,利用TRIzol法提取皮肤组织RNA,通过RT-PCR扩增AGRP基因编码区(coding region,CDS)序列,采用生物信息学软件预测AGRP蛋白质结构和功能,构建系统进化树分析山羊与其他哺乳动物AGRP基因的保守性;体外培养黑色素细胞,利用实时荧光定量PCR检测AGRP基因在细胞增殖和分化阶段不同时间点的相对表达量。结果表明:酉州乌羊AGRP基因CDS序列长度为405 bp,编码135个氨基酸,编码蛋白质分子量为14871.36 u,理论等电点为5.70;AGRP蛋白二级结构由3个α-螺旋和1个β-折叠以αααβ的顺序组成;AGRP蛋白的氨基酸序列在不同物种间高度相似;在构建的系统进化树中,酉州乌羊与绵羊和山羊的亲缘关系最近,与小鼠和人的亲缘关系最远。AGRP基因在黑色素细胞增殖和分化阶段的不同时间点均有表达,随着细胞培养时间的延长,AGRP基因的相对表达量在增殖阶段先逐渐降低再升高,在分化阶段逐渐升高,与0小时比较均差异极显著(P<0.01)。说明AGRP基因在黑色素细胞中具有时空特异性,在黑色素沉积过程中发挥重要作用。

基于多性状模型内蒙古绒山羊早期生长性状基因组预测准确性研究

内蒙古绒山羊是经过长期自然选择和人工选育后形成的优良家畜品种,是目前世界一流的绒肉兼用山羊。多性状动物模型被认为可以显著提高畜禽遗传评估的准确性,实现性状间的间接选择。本文基于内蒙古绒山羊个体的系谱、基因型、环境以及早期生长性状的表型记录,建立多性状动物模型,利用ABLUP、GBLUP、ssGBLUP三种方法进行早期生长性状(初生重、断乳重、断乳前平均日增重、周岁重)遗传参数及基因组育种值的估计,进一步利用五倍交叉验证方法评价基因组育种值估计准确性和可靠性。结果显示,3种方法估计的初生重遗传力为0.13~0.15,断乳重遗传力为0.13~0.20,日增重遗传力为0.11~0.14,周岁重遗传力为0.09~0.14,均属于中等偏低遗传力;断乳重和日增重、日增重和周岁重之间存在强的正遗传相关,相关系数分别为0.77~0.79和0.56~0.67,表型相关发现同样的规律;ABLUP、GBLUP和ssGBLUP法估计的初生重育种值准确性分别为0.5047、0.6694、0.7156,断乳重分别为0.6207、0.6456、0.7254;日增重分别为0.6110、0.6855、0.7357,周岁重分别为0.6209、0.7155、0.7756。综上所述,内蒙古绒山羊早期生长性状属于中等偏低遗传力,对其进行遗传选育改良速度相对较慢;通过对断乳重的选择可以实现其他生长性状的遗传改良;ssGBLUP方法估计内蒙古绒山羊早期生长性状基因组育种值的准确性和可靠性均最高,且显著高于ABLUP法,说明该方法是内蒙古绒山羊早期性状基因组选育的最佳方法。