乙基香兰素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为研究检测乙基香兰素(EV)的免疫学方法,采用活性酯(AE)和混合酸酐(MA)2种方法,将乙基香草酸(EVA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备乙基香兰素人工免疫抗原BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA),并采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。将BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)分别免疫BALB/c小鼠,3免后10 d断尾采血并分离血清制备鼠源多克隆抗体。采用间接ELISA法测定血清抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清抗体敏感性和特异性。结果显示,乙基香兰素人工抗原制备成功,BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)的偶联比分别为1∶2.92和1∶37.95。BSA-EV(AE)免疫组3号血清效价最高为1∶51 200,对EV的半数抑制浓度(IC_(50))为173.78μg/L,线性范围为14.79~2 041.74μg/L。BSA-EV(MA)免疫组1号血清效价最高为1∶102 400,对EV的IC_(50)为617.00μg/L,线性范围为42.66~8 709.64μg/L。2个免疫组的血清抗体与香兰素、甲基香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚、BSA、鸡卵清蛋白(OVA)的交叉反应率均小于1%。综上,人工抗原BSA-EV合成成功,并成功制备了对EV灵敏特异的鼠源多克隆抗体。

桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究

为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product,IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性,选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭,并饲喂含0.8%IOFP的饲粮,同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血,分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒,持续检测泄殖腔排毒量,以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示,IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平,特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外,添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量,缩短排毒时间。由此可见,IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂,对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。

囊泡诱导序列诱导的囊泡蛋白质谱及生物信息学分析

囊泡诱导序列(vesicle inducing sequence,VIS)诱导哺乳动物细胞产生的囊泡,能够装载或展示靶蛋白质,具有产量高、易于改造等特征,有望在草食动物疫苗及水产疫苗等领域得到应用。然而,VIS囊泡的结构组成及形成机制目前还不清楚。基于此,将免疫亲和纯化的VIS囊泡进行蛋白质质谱(LC-MS/MS)鉴定,对鉴定结果进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、KEGG代谢通路分析,同时利用Western blot技术验证排名靠前的部分蛋白质。蛋白质质谱技术共鉴定出709种蛋白质。其中,多数蛋白质为细胞囊泡组分,且部分蛋白质参与高尔基体膜泡运输。KEGG通路富集结果显示,VIS囊泡结构蛋白共参与了3条囊泡形成及运输过程相关的代谢通路,分别为吞噬体通路、内吞作用、突触囊泡途径。该研究从蛋白质水平上揭示了VIS囊泡构成及形成机制,对今后VIS囊泡在动物生物制品及疫苗等领域的应用奠定了基础。

人和动物重要传染病mRNA疫苗研究进展

根据已有研究数据显示,mRNA疫苗具有免疫效果好、安全性高、研究周期短等特点,发展前景广阔。近年来,无论是面对新冠疫情,还是其他重大动物疫病,mRNA疫苗逐渐发挥重要作用。论文就mRNA疫苗的发展、分类及结构、作用机制、给药方式及在人和重大动物疫病预防中的应用等方面对mRNA疫苗进行综述,并分析了现阶段mRNA疫苗的优势与不足,以期为新型mRNA疫苗的研制提供参考。从已报道的数据来看,mRNA疫苗在流感、狂犬病、弓形虫病等人兽共患病上已经进入临床试验阶段且表现出较好的预防效果,但在畜禽传染病方面的mRNA疫苗研究较为缺乏,可见mRNA疫苗在畜禽传染病的防控中也极具发展潜力。

母源抗体对禽流感-新城疫疫苗免疫后抗体效价的影响规律研究

为研究母源抗体对鸡免疫禽流感-新城疫灭活疫苗后抗体效价的影响及其变化规律,试验将1日龄鸡苗随机分成A、B两组,分别于1、7日龄接种禽流感(H9)-新城疫二联灭活疫苗,并在1、7、21、35、42日龄分别采血,HI试验测定禽流感和新城疫抗体效价,试验期42 d。结果显示:A、B两组鸡免疫21d后禽流感抗体效价持续下降并达到最低值,A组禽流感抗体下降速度和幅度较B组高,禽流感抗体阳性率21日龄最低,A组抗体阳性率较B组低约30%,A组抗体效价明显低于B组(P<0.05);A、B两组新城疫抗体效价持续下降,21日龄达到最低值,28日龄开始上升,35日龄达到峰值,两组间各日龄抗体效价、峰值均无显著差异(P>0.05),A组新城疫抗体效价下降和上升的速度较B组慢。结果表明高母源抗体对禽流感灭活疫苗免疫后抗体效价影响较大,在高母源抗体基础上免疫禽流感疫苗,影响免疫后抗体效价的上升速度和幅度;高母源抗体对新城疫灭活疫苗免疫后效价影响较小,早免疫能有效保护鸡群。

三种疫苗对牦牛免疫血清抗体效价监测分析

为监测牛病毒性/黏膜病灭活疫苗、牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗对牦牛的免疫效果,本试验选取健康牦牛40头,以多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗每头4 mL的剂量、牛病毒性/黏膜病灭活疫苗及牛副伤寒灭活疫苗每头2 mL的剂量进行接种,并于免疫后30、60、90、120、150和180 d后采集血液,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对牦牛血清抗体进行检测。结果表明,病毒性/黏膜病灭活疫苗免疫保护效果较好,免疫6个月后能维持较高的血清抗体效价;牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫抗体效价较低。本试验对免疫后抗体的监测评估为今后牦牛三种疫病的疫苗免疫防控提供了数据支撑。

血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。

尘螨诱导特应性皮炎小鼠模型和哮喘小鼠模型的构建

旨在构建尘螨诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis, AD)小鼠模型和哮喘小鼠模型。本研究利用3种主要尘螨螨种(屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨)的主要变应原Der p 1、Der f 1、Blo t 5等比混合,分别诱导AD小鼠模型和哮喘小鼠模型,并通过皮肤及肺组织的相关炎症细胞因子水平(IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A)、血清总IgE水平等指标对AD小鼠的过敏程度进行评估;通过IgE水平、耳朵点刺试验、肺部组织苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)等指标评估哮喘小鼠模型。结果表明,AD模型中致敏区域皮肤出现破损后结痂现象,皮肤及肺组织中细胞因子水平的变化表明小鼠体内反应偏向Th2反应,IgE水平较正常组显著升高;哮喘模型组小鼠血清总IgE水平显著升高,变应原激发后模型小鼠体温下降明显,且90 min后仍未恢复初始温度,耳朵点刺试验中,抗原的攻击使模型组小鼠耳朵染料渗漏增加,肺组织HE染色显示模型组小鼠炎症细胞浸润增加。本研究成功诱导尘螨AD小鼠模型和尘螨哮喘小鼠模型。

线粒体质量控制对畜禽氧化应激影响的研究进展

在畜牧生产中,氧化应激是一种常见的生理现象,可影响畜禽生长、健康和生产性能。线粒体作为细胞内主要的能量产生中心和氧化应激的主要靶标,其质量控制对于维持细胞内氧化还原平衡至关重要。本文综述了线粒体质量控制对畜禽氧化应激影响的研究进展,包括作用机制、相关调节途径以及在畜禽生产中的应用前景,旨在为畜禽养殖业中应对氧化应激问题提供参考。

流式细胞分选技术及其在单克隆抗体制备中的应用

单克隆抗体是一类在疾病防治、药物开发、生命科学研究领域具有重要作用的生物活性蛋白质,目前已有多种制备途径。随着PCR技术的发展,单个细胞生产抗体技术迅速兴起;与其他制备技术相比,流式细胞分选技术依靠强大的光学分析与分选系统能够精准高效地将免疫细胞分群,后续通过基因工程的方法获得单克隆抗体。利用该技术生产的单克隆抗体具有可变区天然构象与抗原结合特异性强等显著优势,在病毒感染机制研究、抗肿瘤治疗、抗自身免疫病等方面具有重要价值。论文对单克隆抗体开发过程中各技术优劣对比与流式细胞分选在单克隆抗体开发中的过程、应用与发展趋势进行综述,以期为单克隆抗体制备技术的研究进展提供参考。

不同白油佐剂制备的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的比较试验

为研究不同白油佐剂制备的灭活疫苗免疫效果,试验采用2个厂家的3个国外进口白油样品、1个国产白油样品,制备4批鸡新城疫、禽流感(H9亚型)(La Sota株+WD株)二联灭活疫苗(以下简称:鸡新-流二联灭活疫苗),分别标A、B、C、D,按照现行版《中华人民共和国兽药典》方法,进行性状、安全检验、抗体检测以及吸收情况对比。结果表明,4批样品析出量均小于0.1 mL,稳定性合格。黏度对比结果,进口白油B最低27.6 cP、进口A 48.2 cP、进口C 56.5cP、国产D 52.0 cP,吸收情况D组最好,其次是C、A,B组最差。免疫持续期对比结果B组抗体最好,免疫后28 d抗体最高,ND抗体滴度为9.83log2,H9抗体滴度为11.33log2,直到免疫后154 d,ND抗体滴度为5.1log2,H9抗体滴度为8.6log2,仍可以达到保护效果;其次是D组,ND部分免疫后21 d抗体滴度最高为8.17log2,H9免疫后42 d抗体滴度最高为9.58log2,ND免疫后154 d抗体滴度为4.2log2,H9抗体滴度为7.8log2;最后为C、A两组。综合评定B组抗体滴度最高但吸收度最差,蛋鸡免疫时可以考虑使用;D组抗体和吸收整体比较好,结合性价比确定为最佳白油佐剂。

基于生物信息学方法设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗

为了设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,试验在NCBI网站的Protein数据库中获取OmpC和FliC蛋白的氨基酸序列,采用Expasy服务器分析其理化性质,通过在线工具AllerTopV.2.0和Vexijen分析其抗原性和致敏性,应用NPS~@服务器分析二级结构,应用IEDB在线工具分析OmpC和FliC的B、T细胞表位。选取优势表位设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,对其理化性质、抗原性、致敏性及三级结构进行预测。结果表明:OmpC和FliC均是亲水性蛋白,无致敏性,抗原性较高;OmpC和FliC蛋白均筛选出3个B细胞优势表位,2个细胞毒性T细胞(CTL细胞)优势表位,1个辅助T细胞(Th细胞)优势表位。设计的多表位疫苗为亲水性的稳定蛋白,抗原性预测的分数为1.1422分,且为非致敏原,预测三级结构模型的可信度大。说明鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗对动物无致敏性,且具有良好的抗原性。

不同IBD商品疫苗对国内新型变异株的免疫攻毒保护实验

传染性法氏囊病(IBD)是严重危害家禽业的疾病之一,该病目前呈全世界分布。近期我们进行的IBD流行病学调查结果显示,不同类型鸡群都存在一定比例的IBD野毒感染情况,包括经典毒株、超强毒株及新型变异株都有检出,其中又以新型变异株为主。我们筛选了两个具有代表性的毒株并命名为S1、S2,其与美国变异株在进化树上同属一个分支,氨基酸序列一致性为96.81%~98.24%。为了对IBD的防控提供最新的参考依据,我们在实验室条件下使用不同的商品IBD疫苗免疫SPF鸡后进行攻毒试验,由此来评估其对新型变异株的免疫保护效果。试验结果表明:针对目前国内普遍流行的IBDV变异株攻击导致的法氏囊组织萎缩,HVT-IBD载体疫苗较抗原抗体复合物疫苗、中等偏强毒力活疫苗以及VP2亚单位疫苗在保护力上都具有一定优势,且HVT-IBD载体疫苗单独免疫的保护效果也不比HVT-IBD载体疫苗与IBD活疫苗及HVT-IBD载体疫苗与VP2亚单位疫苗组合免疫的效果差。我们推荐在保证雏鸡具有较高水平的母源抗体的基础上1日龄免疫HVT+IBD载体疫苗,同时辅以良好的生物安全措施会取得比较理想的效果。

实验动物血清胶冻样成因分析及消除方法探索

动物血清是常用的实验材料,血清质量往往决定实验数据的准确性和科学性。动物血清制备常出现一些异常情况,如血清析出,但呈胶冻样血清。胶冻样血清对血清学检测过程和数据造成很大影响,严重干扰实验结果。减少血清胶冻样的形成,对涉及血清学检测的实验都具有重要意义。本文基于血液凝固机制,重点分析实验动物血清胶冻样的成因,并探索消除血清胶冻样的系列方法,减少血清胶冻样的形成,对于血清学检测具有重要的意义。

尼西鸡血液生理生化指标分析

为了从生理生化特性方面研究尼西鸡的种质特征,试验采用自动血液分析流水线测定了24周龄尼西鸡(雄性10只,雌性8只)的24项血液生理指标,用全自动生化分析仪测定了同周龄尼西鸡(雄性10只,雌性9只)的17项血液生化指标,并与多个不同地方鸡种的数据进行比较分析。结果表明:雄性尼西鸡的嗜酸性粒细胞百分数(EO%)、嗜酸性粒细胞绝对值(EO#)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度SD(RDW-SD)等7项指标极显著高于雌性尼西鸡(P<0.01),白细胞计数(WBC)和平均血红蛋白含量(MCH)显著高于雌性尼西鸡(P<0.05);而中性粒细胞百分数(NEU%)、淋巴细胞百分数(LYM%)、单核细胞百分数(MONO%)、嗜碱性粒细胞百分数(BASO%)、中性粒细胞绝对值(NEU#)、淋巴细胞绝对值(LYM#)、单核细胞绝对值(MONO#)、嗜碱性粒细胞绝对值(BASO#)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度CV(RDW-CV)、血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)和大血小板比率(P-LCR)等15项指标在雌雄尼西鸡间差异不显著(P>0.05)。雄性尼西鸡的丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性极显著高于雌性尼西鸡(P<0.01),钙(Ca)和白蛋白(ALB)含量极显著低于雌性尼西鸡(P<0.01),总胆红素(TBIL)显著低于雌性尼西鸡(P<0.05);而葡萄糖(Glu)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)、BUN/CREA、总蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、淀粉酶(AMY)和磷(P)等12项指标在雌雄尼西鸡间差异不显著(P>0.05)。与其他地方鸡种比较,雄性尼西鸡的红细胞和白细胞最高,白蛋白最低,耗氧量大,免疫力和抗病力更强;雌性尼西鸡的平均红细胞体积和总胆红素最低,蛋白质合成代谢能力旺盛。说明尼西鸡能很好地适应高海拔低温缺氧环境。

层状双氢氧化物-rFel d 1-Can f 1融合变应原对小鼠模型过敏反应的预防效果分析

旨在预防猫、犬诱导的过敏反应,本研究将猫主要变应原Fel d 1与犬主要变应原Can f 1融合原核表达,纯化制备了rFel d 1-Can f 1融合变应原。将层状双氢氧化物(layered double hydroxides,LDH)与rFel d 1-Can f 1混合,制备LDH-rFel d 1-Can f 1,皮下注射法免疫BALB/c小鼠,随后利用rFel d 1-Can f 1融合变应原诱导过敏小鼠模型,通过检测小鼠应激性过敏反应的体温变化、耳朵点刺试验、肺部组织切片HE染色、血清IgE水平等指标评价LDH-rFel d 1-Can f 1对猫犬诱发过敏反应的预防效果。研究表明,LDH与rFel d 1-Can f 1质量比为7∶1时,LDH可以完全吸附rFel d 1-Can f 1融合蛋白。LDH-rFel d 1-Can f 1可以有效缓解应激性过敏反应引起的小鼠体温下降,显著减少过敏导致的染料渗透面积。肺部组织切片HE染色结果显示,LDH-rFel d 1-Can f 1可以缓解过敏引起的炎症细胞浸润。此外,LDH-rFel d 1-Can f 1免疫后可以诱导小鼠产生较高水平IgG,这为开发抑制宠物猫犬诱发过敏反应的疫苗奠定基础。

小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及其质量控制

本文详细探讨了小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及质量控制。包括病毒的选择、培养、减毒,以及疫苗提取、纯化和配方调整。特别强调了疫苗稳定性测试和保存条件的重要性。在质量控制方面,论述了生产环境、原材料质量监控,生产工艺的监控,及成品疫苗的安全性、有效性和纯度评估。通过这些严格的步骤和措施共同确保了疫苗的高效性和安全性,对于防控小反刍动物疫病具有重要意义。

汨罗市部分地区羊衣原体血清学调查与分析

本研究从汨罗市4个乡(镇)26个羊养殖场(17个规模化羊养殖场和9个散养户)采集血清样品1 045份,采用间接血凝试验检测羊衣原体流行情况。结果发现,衣原体血清阳性样本共192份,阳性率为18.37%,其中,规模化羊养殖场和散养户来源样本阳性率分别为15.60%(127/814)和36.80%(85/231);哺乳羔羊、幼年羊、青年羊、成年母羊和成年公羊阳性率分别为10.52%(8/76)、13.38%(19/142)、17.63%(67/380)、21.50%(86/400)和25.53%(12/47);不同季节衣原体感染情况差异较大。其中,秋季和冬季稍高,分别为23.76%(67/282)和25.0%(55/220);而春季和夏季偏低,分别为13.99%(41/295)和11.69%(29/248)。结果表明,汨罗市部分地区羊养殖场衣原体感染情况较为严重,对人畜健康造成巨大的威胁。

浅述兽用核酸疫苗及展望

核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗,是近年备受关注的新型疫苗,其可诱导机体产生全面的免疫应答,具有安全、可靠、生产方便、便于储存和运输等优点。本文对动物核酸疫苗的作用机制、影响免疫效果因素、研究进展、存在问题、应用前景等方面的简单综述,以期为核酸疫苗的发展提供思路。

猪用疫苗免疫接种后应激反应及应对措施

疫苗免疫接种是防范传染性疾病发生流行最节约最有效的手段之一,通过接种经过特殊处理的抗原能够更好地诱导机体产生相应的抗体,当机体再次受到相同的抗原入侵之后,就能够迅速识别抗原产生抗体,短时间的杀灭抗原,有效增强猪群的身体抵抗能力,抵御病原的传播流行,降低传染性疾病的发生率。本文主要结合实际工作经验,探讨了生猪免疫接种疫苗之后应激反应产生的原因,并提出相应的应对措施,希望通过研究对广大同行有所帮助。