1株犬源多重耐药粪肠球菌的分离鉴定及其致病性分析

[目的]明确1例犬泌尿生殖道感染的发病原因。[方法]无菌采集病犬尿液,通过细菌分离纯化、革兰染色镜检、生化试验、16S rRNA基因扩增进行鉴定,同时经药敏试验、毒力基因和耐药基因检测及细菌致病性试验测定纯化菌株的生物学特征。[结果]分离得到1株兼性厌氧型革兰阳性球菌;菌落形态如针尖大小、表面光滑、半透明、圆形凸起、边缘整齐;生化鉴定结果显示,致病菌能发酵乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、精氨酸,不能发酵木糖、氧化酶、枸橼酸盐、棉籽糖和鸟氨酸脱羧酶;16S rRNA基因序列与已发表的粪肠球菌序列相似性高于99%,鉴定为粪肠球菌,并将其命名为EFGZ23GY01;药敏试验结果显示,分离株仅对万古霉素及氯霉素敏感,对新霉素中度敏感,对克林霉素等25种药物耐药;8种粪肠球菌毒力基因检测结果显示,分离株携带efaA、ace、asa 1及gelE毒力基因;14种耐药基因检测结果显示,分离株携带tetL、sulⅠ、tetC、bla TEM、bla OXA-23、aadA 1和sulⅢ耐药基因;致病性试验结果显示,5只小鼠注射菌液12 h后出现精神萎靡,被毛杂乱等症状,未出现死亡,48 h后死亡1只,表明分离菌对小鼠具有致病性。[结论]本研究成功从犬尿液种分离得到1株粪肠球菌,其携带多种毒力基因和耐药基因,且对小鼠有致病性,研究为病犬的后续治疗提供了参考。

1株致仔猪脑膜炎的猪链球菌的分离鉴定及致病性分析

【目的】确定广东某猪场送检的疑似猪链球菌引起仔猪脑膜炎的病猪组织中的病原,并测定其药物敏感性和致病性,为猪场用药及探索该病原引起脑膜炎的机制奠定基础。【方法】对疑似猪链球菌引起的仔猪脑膜炎送检病料进行细菌分离培养、形态观察、生化试验及分子学鉴定,并对其开展药物敏感性试验、毒力基因测定、小鼠感染试验及病理组织学诊断。【结果】仔猪脑组织分离株在血平板上出现溶血现象,革兰染色镜检细菌被染成紫色,形态为圆形,部分呈链状排列。生化鉴定结果显示,分离株能发酵棉子糖、乳糖、菊糖、七叶苷,不能发酵山梨醇、甘露醇、阿拉伯糖、松三糖、D-核糖,马尿酸盐还原试验为阴性,与猪链球菌相符。测序分析后确定分离株为猪链球菌。血清型鉴定结果显示,分离株为9型猪链球菌,命名为GDS209。药物敏感性试验结果显示,分离株GDS209对头孢噻吩(先锋Ⅰ)、头孢氨苄(先锋Ⅳ)和氨苄西林/舒巴坦等10种抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感。毒力基因检测结果显示,分离株GDS209携带gdh、gapdh、fbps、orf 2、srtA、ccpA毒力基因,不携带mrp、sly、luxS、epf毒力基因。小鼠感染试验结果显示,分离株GDS209对小鼠的半数致死量(LD 50)为1×10^(9)CFU。组织病理学观察显示,分离株GDS209能引起昆明小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、脑不同程度的淤血和炎症。【结论】本研究分离到1株9型猪链球菌,该分离菌对大部分猪场常用抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感,本研究结果可为9型猪链球菌的临床诊断和药物治疗提供一定的参考依据。

新疆乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌的污染和致病力评价

为了评价新疆乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌污染和致病力,从奶牛养殖场和挤奶厅采集了414份样品,共分离鉴定出51株金黄色葡萄球菌(总分离率为12.3%),其中粪样、吸奶器拭子、体表拭子、乳样、饲料的分离率分别为8.4%、22.8%、14.8%、18.9%、9.8%。采用PCR检测毒力基因的携带情况,SEs的总检出率为60.8%,其中sec、seh和sel的检出率为51.0%、43.1%和23.5%。其他毒力基因hla和hlb、clfa的检出率为52.9%和84.3%、90.2%。菌株耐药率较高的抗生素是阿奇霉素(86.3%)、磺胺二甲嘧啶(84.3%)、万古霉素(49.0%)、环丙沙星(29.4%)、阿莫西林-克拉维酸钾(27.5%)。其中多重耐药有34株,最高可达6重耐药。乌鲁木齐市周边乳源金黄色葡萄球菌的污染较严重,且肠毒素基因携带率较高和耐药严重,需要重视金黄色葡萄球菌的污染和减少抗菌药物的使用。

无乳链球菌nrdD基因缺失株的构建及其对小鼠的致病性检测

为研究nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响,本研究参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)的nrdD全基因序列设计引物,采用融合PCR的方法将nrdD基因上、下游同源臂连接到一起,构建nrdD基因上、下游同源臂融合片段,连接至温敏型自杀质粒pSET4s。PCR克隆含有启动子序列的nrdD基因,连接至链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET2。分别构建nrdD基因的缺失株ΔnrdD及互补株CΔnrdD。经PCR和基因测序,证明nrdD基因的缺失株及互补株构建成功。通过对ΔnrdD和CΔnrdD的形态学变化的观察,生长速率、小鼠血清中增殖能力、小鼠组织载量的测定以及小鼠攻毒试验的分析,评价nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响。结果表明:与野生株GD201008-001相比,ΔnrdD在细菌染色形态上链长明显增加,但不影响荚膜的形成;在相同培养条件下,ΔnrdD在与GD201008-001生长速率无明显差异;在小鼠血清中增殖试验中,ΔnrdD在血清中的增殖能力较野生株明显减缓;在小鼠感染14 h后,ΔnrdD在其血液、脾脏及脑部的载量明显低于野生株,而CΔnrdD在各组织中的载量与野生株相比差异不显著;小鼠的攻毒试验显示,ΔnrdD注射组小鼠存活时间较野生株与互补株延长,差异显著。研究证明,nrdD基因与无乳链球菌毒力密切相关,本试验结果也为深入研究无乳链球菌nrdD基因的功能奠定了基础。

焦棓酸对猪链球菌体外抑菌效果试验

研究焦棓酸对猪链球菌的体外抗菌活性及对生物被膜的抑制作用,并初步探讨其抑菌机制。采用96孔微量稀释法测定常用抗菌药物及焦棓酸对猪链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;平板活菌计数法和分光光度计测定焦棓酸对猪链球菌作用的时间-杀菌曲线;采用结晶紫染色法检测焦棓酸对猪链球菌生物被膜形成的影响;通过荧光定量PCR从转录水平分析焦棓酸对猪链球菌生长与生物被膜形成相关基因表达的情况。结果显示,猪链球菌2型HB菌株对磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑耐药严重,焦棓酸对猪链球菌2型HB菌株的最小抑菌浓度为32μg/mL,最小杀菌浓度为64μg/mL,并且焦棓酸对猪链球菌的抑制作用呈剂量依赖性;焦棓酸在16μg/mL能显著抑制猪链球菌2型HB菌株生物被膜形成的能力;另外,经焦棓酸处理后,发现猪链球菌的生长、生物被膜形成、毒力相关基因ftsZ、stK、mrp、fbps、gapdh、ccpA、luxS下调表达。综上所述,焦棓酸可为耐药猪链球菌在临床上感染的治疗提供新思路。

金黄色葡萄球菌异质性耐药研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是人类和动物感染的常见病原菌。近年来,金黄色葡萄球菌已经对多种抗菌药物出现耐药性,关于金黄色葡萄球菌异质性耐药的研究也被频繁报道。异质性耐药现象是指存在异质性细菌种群,其中一个亚群或几个亚群与主要种群相比表现出更高水平的抗菌药物耐药性。该定义反映出异质性耐药现象具有很多特点,包括克隆性、稳定性、不同亚群的耐药水平以及异质性耐药亚群的频率应在10^(-7)及以上。异质性耐药可看成是敏感表型向耐药表型转化的中间阶段,往往导致临床治疗的失败。本文对异质性耐药的定义、检测方法等进行了介绍,并综述了金黄色葡萄球菌对糖肽类、磺胺类、β-内酰胺类和其他抗菌药物异质性耐药的流行情况及异质性耐药机制的研究,旨在加强对金黄色葡萄球菌异质性耐药的认识,以期为学者了解金黄色葡萄球菌异质性耐药流行情况及机制提供参考。

猪源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性、耐药等相关检测。结果显示,分离菌为猪源葡萄球菌。该菌对30种常用抗菌药物中的苯唑西林、诺氟沙星、头孢类等14种药物高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、四环素、万古霉素、氟苯尼考5种药物中度敏感,对氨苄西林、哌拉西林、卡那霉素等11种药物不敏感,检测cfr、tetM、floR、mcr-1、bla NDM-1、optrA 6种耐药基因均为阴性;该菌对26种中药中的单宁酸高度敏感,对五味子、五信子多酚中度敏感,对叶下珠、厚朴、虎杖低度敏感,对半边莲、铁苋菜、艾叶、重楼等20种中药不敏感;在8种消毒剂中,84消毒液对该分离菌的消杀效果差,新洁尔灭、月苄三甲氯铵、复合酚3种消毒剂对该分离菌消杀效果好;动物攻毒试验表明,该菌对25日龄健康断奶仔猪具有强致病性,能导致猪出现典型的葡萄球菌病临床症状和病理特征,攻菌猪组织病理可见脾脏红髓淤血、肺泡腔内见红细胞渗出及少量粉染的渗出物。研究结果可为在养殖饲料端禁止添加抗生素的背景下,为猪葡萄球菌病的防治提供理论参考和技术支撑。

利用大蜡螟幼虫和小鼠感染模型筛选猪链球菌血清2、3和9型三价灭活疫苗候选菌株

旨在评估临床分离的猪链球菌血清2、3、9型强毒株制备的三价灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。使用大蜡螟幼虫感染模型和小鼠感染模型,从临床分离的猪链球菌中筛选出血清2、3和9型强毒株各1株(SS1803、SS1803024、SS1696),检测其生长曲线和毒力因子。将菌株分别灭活及混合灭活后与佐剂混合,用4×10^(7)CFU、8×10^(7)CFU SS1803、2×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1803024、1×10^(8)CFU、5×10^(8)CFU SS1696及三价灭活苗(2×10^(7)CFU SS1803^(+)1.5×10^(8)CFU SS1803024^(+)3×10^(7)CFU SS1696)分别对BALB/c小鼠进行两轮免疫,采集血清检测特异性抗体水平,分别用3种菌株致死剂量攻毒后观察小鼠免疫保护率,同时用亚致死剂量攻毒三价苗免疫组,测定小鼠血、脑、肺、脾的组织载菌量和细胞因子IL-6、IL-12水平,并观察脑、肺、脾、肾中的组织病理变化。结果显示:3株疫苗候选菌株的毒力基因鉴定分别为SS1803:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(+),SS1803024:gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-),SS1696:gapdh^(+)/sly-/fbps^(+)/orf2^(+)/mrp^(-)/89K^(-)/gdh^(+)/epf^(-)。单价和三价疫苗免疫组均能产生对应免疫血清型的IgG抗体,以产生IgG1型抗体为主。三价疫苗免疫组能对2、3、9型3个菌株攻毒分别提供83.3%、66.7%和66.7%的保护率,能显著降低感染后小鼠组织中的载菌量,降低血清炎性因子水平和组织病变程度。本研究筛选临床流行率高的2、3、9型强毒株,联合制备三价灭活疫苗,能够对小鼠提供良好的免疫保护力,为猪链球菌多价疫苗的研发提供新的材料。

猪链球菌SC124菌株中ICE_Prophage携带耐药基因的水平转移

旨在探究猪链球菌中ICE_Prophage携带耐药基因转移的情况,使用Illumina MiSeq和Pacbio RSII平台对猪链球菌SC124菌株进行了全基因组测序,利用在线网站RAST、ICEberg 3.0、PHASTER和NCBI数据库对SC124菌株的基因组序列进行分析;用肉汤稀释法测定最小抑菌浓度;通过接合试验验证ICE_Prophage携带耐药基因的可转移性;采用反向PCR检测环状中间体的存在;用竞争试验评估接合子是否具有适应性代价。结果显示:猪链球菌SC124菌株中存在携带四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因的ICE_Prophage(ICE Ssu SC124_ΦSsuSC124);携带四环素类耐药基因的ICE Ssu SC124以5.52×10-9频率发生转移,未发现前噬菌体发生转移;ICE Ssu SC124可以形成一个大小约为3.8 kb的环状中间体;与猪链球菌BAA相比,含有ICE Ssu SC124的接合子在无药物压力选择的作用下不具有竞争优势,接合子会产生一定程度的适应性代价。综上,猪链球菌SC124菌株中存在携带四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因的ICE_Prophage,ICE Ssu SC124可发生水平转移,其接合子可产生一定程度的适应性代价。

屎肠球菌FDT2的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】从牦牛粪便中分离和鉴定屎肠球菌并进行体外抑菌特性研究,以期筛选出具有优良抑菌特性的益生菌。【方法】用MRS培养基从青海省健康牦牛粪便中分离肠球菌,结合形态学和分子生物学鉴定后进行抑菌性研究。通过发酵过滤分离菌株上清液,采用打孔法观察其对应的抑菌效果,通过改变pH及加入过氧化氢酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等方法来分析其抑菌物质,并探究温度和pH对菌株发酵上清液的影响。【结果】结合形态学及系统进化树分析表明,分离的2株菌(FDT2和D2)均为屎肠球菌。抑菌试验结果表明,屎肠球菌FDT2对5株致病菌均有抑制作用,其中对产肠毒素性大肠杆菌K88和大肠杆菌ATCC 43888的抑菌性最强,而屎肠球菌D2对5株致病菌均无明显抑菌作用。通过排酸试验证明,屎肠球菌FDT2发酵上清液中起抑菌作用的不是酸性物质;通过加入过氧化氢酶试验证明了抑菌物质中有过氧化氢存在,且发挥部分的抑菌作用;加入胃蛋白酶和胰蛋白酶后其抑菌圈直径极显著低于对照组(P<0.01),表明抑菌物质中包含细菌素,且在抑菌过程中发挥重要作用。随着温度的逐渐升高,屎肠球菌FDT2的抑菌能力有所降低,在100℃下仍有抑菌性,表明其具有较强的热稳定性。随着pH的升高,屎肠球菌FDT2的抑菌活性逐渐下降,说明细菌素在酸性环境下活性较强。【结论】试验共分离到2株菌,其中屎肠球菌FDT2具有良好的抑菌特性,能分泌细菌素等抑菌物质,有必要对其深入研究。

整合性接合元件及其在猪链球菌中的作用

猪链球菌是一种人兽共患病病原体,多重耐药猪链球菌的出现给养猪业及人类健康带来了很大的危害。细菌中抗菌药物抗性基因转移主要依赖可移动遗传元件(MGEs)。其中,整合性接合元件(ICEs)在猪链球菌遗传信息交换中占主要地位,它促进了猪链球菌毒性、耐药性等特性的传播,造成抗菌药物抗性基因可在相同/不同种属细菌间转移,导致细菌的耐药机制变得复杂多样,给临床治疗带来很大的困扰。为进一步了解ICEs在猪链球菌中的作用,论文从其发现、分类、存在形式和相互作用、转移途径和相关结构作用及与细菌耐药性和致病性等方面进行综述。

林麝解没食子酸链球菌的分离鉴定及药敏试验

为分析陕西某林麝养殖场林麝死亡原因,剖检死亡林麝,对有明显病变组织器官进行病理组织学检查,细菌分离培养、形态观察、生化鉴定,动物致病性试验和药敏试验,并用细菌16S rRNA基因通用引物进行基因扩增测序,选取同源性高的8株细菌序列进行同源性分析构建系统进化树。结果表明,该分离菌在绵羊血琼脂培养基上为灰白色、透明、湿润黏稠、露珠状的革兰氏阳性球菌;经生化试验和16S rRNA测序分析确定为解没食子酸链球菌;分离菌对环丙沙星、头孢拉定、氧氟沙星、氯霉素、丁胺卡那、哌拉西林、新霉素、麦迪霉素、四环素、红霉素等药物敏感,对苯唑西林、头孢呋辛、多黏菌素B、复方新诺明等耐药;分离菌对小鼠具有较强致病力,可从死亡小鼠体内分离到该菌株。

优化培养基组分提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数的研究

【目的】以猪链球菌2型NT15B菌株为研究对象,通过优化发酵培养基组分提高菌株活菌数,降低生产成本,为猪链球菌2型NT15B菌株的高密度培养及猪链球菌病疫苗的大规模生产和推广提供参考。【方法】试验以培养的猪链球菌2型NT15B菌株最高活菌数为筛选指标,通过单因素试验筛选菌株发酵培养基中碳源、氮源(有机氮源和无机氮源)、无机盐金属离子、磷酸缓冲液的最佳组分及浓度,并根据单因素筛选结果选择碳源浓度、有机氮源总浓度、有机氮源比例、磷酸盐缓冲液浓度4个因素各3个水平设计正交试验,并进一步进行多因素的筛选与验证。【结果】猪链球菌2型NT15B菌株发酵培养基最优条件为6.0 g/L蔗糖、1.0 g/L尿素、10 g/L酵母提取物YE7与20 g/L酵母蛋白胨Nucel 887混合氮源,1.0 g/L NaCl、9.58 g/L K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O、1.09 g/L KH_(2)PO_(4)、1 mmol/L MgSO_(4)·7H_(2)O、0.3 g/L L-抗坏血酸。采用此最优组合,摇瓶培养猪链球菌2型NT15B活菌数最高达80.83×10^(8)CFU/mL,较优化前提高256.08%。【结论】优化后的培养基能有效提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数,降低了生产成本,为发酵罐水平的优化提供参考。

金黄色葡萄球菌快速检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起肉蛋奶及其制品污染的主要致病菌,同时也会引发畜禽多种疾病,导致畜禽生产性能下降,严重时甚至可能导致死亡。畜产品中存在的金黄色葡萄球菌会对人类健康造成极大威胁。因此,快速检测金黄色葡萄球菌对保证畜禽健康、减少养殖场经济损失、保护人类健康具有重要意义。文章对金黄色葡萄球菌检测方法的发展和应用进行了综述,分析了金黄色葡萄球菌快速检测方法的优缺点,旨在为监测畜禽健康、防止畜产品污染、保证食品安全提供参考。

额敏县1株羊粪源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性与致病性研究

[目的]对羔羊腹泻粪便样本中的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,了解其耐药性和致病性特征。[方法]从新疆维吾尔自治区塔城地区额敏县某养羊场采集腹泻羔羊肛拭子样本4份,使用高盐甘露醇培养基(MSA)选择性分离金黄色葡萄球菌;通过形态学观察和16S rDNA序列分析对分离菌株进行种属鉴定;采用纸片扩散法分析分离菌株对9类11种抗菌药物的敏感性;利用PCR法检测分离菌株毒力基因携带情况;建立昆明系小白鼠腹腔感染模型,开展分离菌株的致病性试验。[结果]从4份羔羊腹泻样本中分离到1株疑似金黄色葡萄球菌,该菌株在MSA培养基上形成有光泽、中度隆起、金黄色或柠檬色的菌落;革兰染色镜检可见分离菌株为革兰阳性,呈葡萄串状排列;16S rDNA序列分析显示,分离菌株的序列与我国湖南省长沙市猪肺源金黄色葡萄球菌分离株序列的相似性为100%;结合形态学观察和16S rDNA序列比对结果,鉴定该菌株为金黄色葡萄球菌。分离菌株对青霉素、克林霉素、头孢噻吩、利福平和红霉素耐药,对庆大霉素、阿奇霉素、氯霉素、诺氟沙星、头孢西丁和复方新诺明敏感。在检测的8类20种毒力基因中,该菌株携带sea、seg、sei、eta、clfA和clfB基因。该菌株对小鼠的半数致死量(LD_(50))为2.24×10^(8)CFU/mL,死亡小鼠脏器病理变化明显。[结论]从额敏县某养羊场羔羊腹泻样本中分离鉴定到1株金黄色葡萄球菌,该菌株具有多重耐药表型,携带多种毒力基因,具有一定致病性。研究结果为该地区羊金黄色葡萄球菌病的合理用药提供了参考。

狐狸流产胎儿体内肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

旨在了解狐狸流产的病因。本研究对河北省某狐狸养殖场流产胎儿进行解剖、病原分离培养、16S rRNA测序、毒力基因检测、血清型检测、药敏试验及致病性试验。结果显示,从狐狸流产胎儿体内分离获得6株肺炎克雷伯菌,检测出12种毒力基因(wabG、fimH、ent、icuA、icuB、mrkA、ycf、ecp、uge、ureA、iroB和ybtA)和3种血清型(K20、K54和K57),其中,K57为本次检测过程的优势血清型;经K-B药敏纸片法分析,发现本次分离获得的肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类、头孢菌素类、喹诺酮、多肽类等抗菌药物存在中度或高度敏感,对大环内酯类、四环素类、青霉素类等抗菌药物存在多重耐药;经致病性试验分析,本次分离获得的肺炎克雷伯菌对小鼠具有一定的致病性,半数致死量(LD_(50))为1.2×10^(7)CFU·mL^(-1)。基于此,本研究分离得到的肺炎克雷伯菌具有一定的致病性和耐药性,且携带多种毒力基因,可能是诱发狐狸胎儿流产、死亡的因素之一,为狐狸胎儿流产的防控及诊断提供思路。

纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响

[目的]本研究旨在明确纤维二糖利用基因簇对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[方法]以肺炎链球菌基因组中纤维二糖利用基因簇为参考,同源性比对分析猪源巴氏链球菌WUSP067中纤维二糖利用基因簇,通过荧光定量PCR(RT-qPCR)、RT-PCR、缺失株构建、不同条件下的生长曲线测定、小鼠毒力试验等评价其对巴氏链球菌生长及毒力的影响。[结果]巴氏链球菌WUSP067基因组中存在2个潜在的纤维二糖利用相关基因簇(cellobiose locus, CL),将其分别命名为CL1和CL2,它们均包括编码磷酸转移酶系统和β-葡萄糖苷酶的基因。RT-qPCR结果显示,与添加10 g·L^(-1)葡萄糖的DMEM培养基相比,在添加10 g·L^(-1)纤维二糖的DMEM培养基中,CL1中的BglP1_(wp)和BglA_(wp)基因表达量无显著差异,而CL2中celA_(wp)和celB_(wp)基因表达极显著上调(P<0.000 1),分别上调49倍和33倍,提示其参与利用纤维二糖。选择CL2深入研究,RT-PCR结果显示,该基因簇由2个操纵子组成。构建编码β-葡萄糖苷酶的celA_(wp)基因缺失株,生长曲线分析表明,野生株和celA_(wp)基因缺失(ΔcelA_(wp))株在THB、DMEM+10 g·L^(-1)葡萄糖条件下生长情况无明显差异,但在DMEM+10 g·L^(-1)纤维二糖条件下,野生株能以纤维二糖为唯一碳源生长,而ΔcelA_(wp)表现出明显的生长缺陷,生长12 h时D_(600)仍低于0.5。以断奶仔鼠为感染模型,比较野生株和ΔcelA_(wp)株的毒力,每鼠攻毒剂量为3×10^(8) CFU,野生株攻毒组小鼠3日内全部死亡,而ΔcelA株攻毒组的小鼠死亡趋势较缓,14 d后存活率为20%(P<0.05)。[结论]猪源巴氏链球菌WUSP067能以纤维二糖为唯一碳源生长,CL2是纤维二糖利用相关基因簇,其中celA_(wp)基因不仅促进该菌利用纤维二糖,而且还影响该菌的毒力,在巴氏链球菌致病过程中发挥作用。

金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Lys239表达纯化及活性分析

为获得具有高效裂解活性的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶,将测序后的噬菌体全基因序列在GenBank数据库中进行比对,找出裂解酶基因序列,对其克隆后在BL21(DE3)中表达蛋白并纯化,选择大蜡螟幼虫作为模型模拟体内细菌感染以探究其抑菌效果。结果显示,裂解酶合成基因构建到载体pET22b中,得到重组质粒pET22b-lys239。并将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后诱导其表达,经纯化验证后,获得浓度为2μg/μL的具有裂解活性的裂解酶Lys239。大蜡螟幼虫体内细菌感染试验结果显示,Lys239处理组存活率明显高于对照组,血淋巴负荷测定显示各处理组与对照组差异极显著(P<0.01)且Lys239浓度越高,对于金黄色葡萄球菌抑制效果越显著。说明重组表达的裂解酶Lys239具有良好的抑菌效果,可作为一种潜在的新型抑菌剂。

新疆奇台地区某猪场猪链球菌耐药性分析

新疆奇台地区某猪场因感染猪链球菌引起病死率升高,为提高抗菌药物对猪链球菌病的疗效,从该猪场健康猪(25头)、患病猪(60头)的鼻拭子样品及病死猪(27头)的脏器和组织液样品中分离猪链球菌,对其进行药敏试验及相关耐药基因检测。对采集的135份样品(85份鼻拭子样、27份组织液样和23份脏器样)进行猪链球菌的分离鉴定,采用琼脂稀释法进行药敏试验,通过PCR方法检测相关耐药基因和毒力基因。结果表明,共分离到猪链球菌19株,分离率为14.1%,从来自健康猪的样品中未分离到猪链球菌。该场猪链球菌对恩诺沙星、红霉素、四环素、阿米卡星和替米考星5种抗菌药物的耐药率高达100%,对氨苄西林和庆大霉素耐药率高达94.7%,对氟苯尼考和青霉素耐药率较低,分别为26.3%和21.1%;均为多药耐药菌株,7耐的菌株数量最多(57.9%,11/19)。tetM、ermB基因检出率均高于90.0%,tetO、lsa(E)和tetL基因检出率分别为21.2%、21.1%和10.5%,检出3株携带噁唑烷酮类多药耐药基因optrA的菌株,未检出ermA、mefA和cfr基因;6种毒力基因均有检出,其中orf2基因检出率最高,为52.6%,fbps基因检出率最低,为5.2%。除了对青霉素和氟苯尼考较为敏感之外,其余均为6耐以上,耐药基因携带率高,建议该猪场结合猪链球菌的分离率和耐药性检测结果,对猪进行合理的用药安排。

致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型鉴定及其生物学特性

旨在了解猪源致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型和致病性及其生物学特性。本研究从患病猪的脑组织中分离到1株猪链球菌PX0923,通过电镜观察、16S rRNA基因测序、多重PCR、PCR-RFLP和多位点序列分析(MLST)等方法对其进行血清型和分子分型鉴定,毒力基因、生物被膜形成能力、耐药基因检测、小鼠感染试验、抗生素和中药药敏试验分析分离株PX0923的致病性和药物敏感性。结果表明,分离菌株PX0923为革兰阳性菌,电镜下可见连续排列成链状的卵圆形菌体;PCR和16S rRNA基因系统发育树分析确定其属于猪链球菌2型;序列分型为ST7,与ST1型猪链球菌聚为一支;携带epf+/mrp+/sly+/gapdh+/fbps+/orf2+/sao+7种毒力基因,呈现α型溶血活性;感染小鼠可导致小鼠肺、脾和肝等多个器官不同程度的病变,出现了小鼠脑膜炎等与病猪类似的临床症状;半数致死量(LD50)为1.08×10^(9)CFU/小鼠,提示PX0923可引起小鼠脑膜炎。分离菌株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素、阿米卡星等12种药物耐药,携带耐药基因:aadA1和bla-TEM,对中药全蝎和三七敏感。本研究分离到猪源猪链球菌PX0923为血清2型,MLST分型为ST7,其携带多种毒力基因和耐药基因,感染小鼠可引起脑膜炎等多组织损伤;对多种抗生素和中药全蝎、三七敏感。研究结果为猪链球菌的流行和溯源分析提供了分子生物学基础,对致脑膜炎猪链球菌感染的防控提供参考依据。