四川、西藏部分地区牦牛场球虫感染情况调查

【目的】调查四川省和西藏自治区部分地区牦牛球虫感染情况,为该地区牦牛球虫病的预防、控制提供理论参考。【方法】从四川省和西藏自治区部分地区8个牦牛场采集2~6、7~12和>12月龄牦牛的新鲜粪样共376份,采用饱和盐水漂浮法对粪便样品中球虫卵囊进行定性检查,采用麦克马斯特计数法统计球虫阳性粪样中每克粪便中的球虫卵囊数(OPG),了解不同牦牛场、不同月龄牦牛的球虫感染情况。【结果】8个牦牛场均检测出球虫感染,阳性样品共85份,平均感染率为22.6%(85/376),平均OPG为1643。共检出9种艾美耳属球虫,优势虫种为阿拉巴艾美耳球虫,感染率为37.6%(32/85),多呈混合感染。平均感染率最高的是2~6月龄牦牛,感染率为37.9%(11/29);其次是7~12月龄牦牛,感染率为31%(57/184);>12月龄牦牛的球虫感染率为10.4%(17/163)。【结论】四川和西藏部分地区牦牛场均存在不同程度的球虫感染,均以混合感染为主。牦牛球虫感染率、感染强度以及优势虫种在不同地区、不同年龄牦牛之间存在差异。

宁夏地区奶牛源隐孢子虫分子鉴定与分析

为了明确宁夏地区奶牛隐孢子虫的流行情况及其优势基因型,采集宁夏4个地区10个规模化奶牛养殖场中1174份奶牛粪便样品,基于核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因通过套式PCR进行检测和分析。结果显示,宁夏地区奶牛隐孢子虫阳性率为28.5%(335/1174);共鉴定出4种虫种,即微小隐孢子虫、牛隐孢子虫、瑞氏隐孢子虫和安氏隐孢子虫,阳性率分别为40.6%(136/335)、36.1%(121/335)、19.4%(65/335)和3.9%(13/335);微小隐孢子虫共鉴定出4种基因亚型,分别为ⅡdA15G1(n=70)、ⅡdA18G1(n=26)、ⅡdA19G1(n=23)和ⅡdA20G1(n=17)。统计学分析显示,在宁夏地区,0~2月龄的犊牛隐孢子虫感染率最高,且奶牛隐孢子虫的感染率与月龄差异显著相关(P<0.001)。表明宁夏地区奶牛存在隐孢子虫感染且存在人畜共患虫种,ⅡdA15G1微小隐孢子虫是宁夏地区奶牛感染的优势亚型。

毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析

旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。

中草药防治鸡球虫病的研究概况

鸡球虫病传染性强、发病率高,可显著影响鸡的肠道健康状况,降低鸡的生产性能,甚至引起死亡,给养鸡业造成巨大的经济损失。在我国“减抗、替抗和禁抗”背景下,中草药因具有不易产生耐药性、药物残留低、毒副作用小,兼备药物性与营养性的双重作用等优点,而在抗鸡球虫病中呈现广阔的发展前景。以往研究表明,中草药具有良好的抗球虫功效。因此,论文综述了2013-2023年期间中国知网和PubMed数据库中发表的有关中草药的在体和离体抗鸡球虫研究概况,以期为鸡球虫病的防治和抗球虫的药物研发提供参考。

“复方常青”对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的疗效

为探究基于网状Meta分析配制出的中药组方“复方常青”对鸡柔嫩艾美耳球虫病的治疗效果,将180只黄羽肉鸡随机分为6组,分别为复方常青高、中、低剂量组(A、B、C),地克珠利组(D),不攻虫也不给药的阴性对照组(E)和攻虫不给药的阳性对照组(F)。除E组外,雏鸡在15日龄灌服1×10^(5)个球虫孢子化卵囊以构建感染模型;A、B、C组以中药原药兑水给药,给药浓度分别为5、2.5、1 mL/L,D组以地克珠利溶液1 mL/L兑水给药,并从18日龄起连续治疗5 d。通过增重情况、料肉比、盲肠病变、每克盲肠内容物卵囊数、存活率、抗球虫指数及细胞因子稳态来评价药物治疗效果。结果显示,A组对感染雏鸡增加体重、减轻盲肠病变、减少每克盲肠内容物卵囊数及提高存活率的作用优于其他治疗组,所获得的抗球虫指数最高(>180);B组对细胞因子IL-17、IL-10平衡作用优于其他治疗组。表明复方常青中药组方可有效的治疗鸡柔嫩艾美耳球虫病。

柔嫩艾美耳球虫保守蛋白EtCHP35特性和功能初步研究

鸡球虫病是由几种艾美耳属寄生虫寄生引起的一种家禽肠道疾病。目前,对于该病控制仍然主要依赖于抗球虫药物,但长期广泛地使用药物造成了球虫耐药性的产生。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫保守蛋白35(EtCHP35)在盐霉素耐药株和马杜拉霉素耐药株mRNA转录水平显著上调。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆了柔嫩艾美耳球虫保守蛋白35(EtCHP35)基因,并在原核表达系统中成功表达了重组蛋白(rEtCHP3)。利用实时荧光定量PCR分析了该基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段以及不同虫株(敏感株和耐药株)的mRNA转录水平,结果显示EtCHP35基因在敏感株孢子化卵囊的mRNA转录水平最高;与敏感株相比,EtCHP35的mRNA转录水平在马杜拉霉素耐药株和盐霉素耐药株上调,但在地克珠利耐药株mRNA转录水平无差异,且随着盐霉素耐药株浓度的升高,EtCHP35的mRNA转录水平也升高。间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子和第二代裂殖子的表面和顶部。因此,推测该蛋白可能参与了虫体在宿主体内的生长发育、对宿主细胞的识别附着、逃避宿主免疫应答以及球虫对离子载体类药耐药性产生的过程。

柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对CEK细胞免疫因子表达及抗氧化能力的影响

为了探究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)子孢子感染对鸡胚肾(CEK)细胞免疫反应及抗氧化程度的影响,试验在成功构建E.tenella感染CEK细胞模型的基础上,将CEK细胞分为空白组和感染组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR方法分别检测子孢子感染后第3,9,12,24小时时细胞上清液中与E.tenella感染相关的4种免疫因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度及其在CEK细胞中mRNA相对表达量,同时检测细胞上清液中4种氧化指标过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)浓度。结果表明:子孢子感染后第3,9小时时,感染组IL-6、IL-8及IL-1βmRNA相对表达量及其浓度均极显著高于空白组(P<0.01),且随着感染时间的延长呈下降趋势;感染后第12,24小时时,感染组TNF-αmRNA相对表达量和其浓度均极显著高于空白组(P<0.01),且在感染子孢子后呈上升趋势。此外,感染组CAT和SOD活性在子孢子感染后第3,9,12小时时极显著低于空白组(P<0.01),并呈下降趋势;在感染后第3,9小时时,感染组NO和ROS浓度显著或极显著高于空白组(P<0.05或P<0.01),这些氧化指标的变化主要发生在感染后的9 h或12 h内。说明E.tenella的感染会显著影响CEK细胞的氧化动态平衡与免疫细胞因子的表达水平。

艾美耳球虫的遗传操作:平台建立、应用与展望

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫,引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病,影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展,研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台,实现了艾美耳球虫的基因过表达、基因敲除和基因编辑等操作,极大推进了艾美耳球虫基础生物学和作为新型真核载体疫苗的研究进展,但仍面临一些挑战。本文围绕艾美耳球虫遗传操作平台建立的关键技术、创新性设计、存在的技术瓶颈以及应用前景进行系统梳理和总结,为其他畜禽寄生虫遗传操作平台的构建提供参考,也为球虫病新型防控制剂的研制提供新的思路。

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2_(L2)特性与功能初步分析

利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—Et RON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现Et RON2_(L2)氨基酸序列与常规的Et RON2仅有26.63%的同源性,mRNA水平在第二代裂殖子中最高,而蛋白水平在第二代裂殖子和子孢子阶段最高;Et RON2_(L2)在游离的第二代裂殖子和子孢子阶段主要分布于胞质,而在入侵后子孢子中主要分布于虫体表面;抗rEt RON2_(L2)多克隆血清处理组明显抑制子孢子入侵细胞;Et RON2_(L2)与EtAMA3之间存在互作关系。本研究为探究Et RON2_(L2)在球虫入侵过程中的作用机制奠定基础。

犬新孢子虫miRNAs的鉴定与分析

为鉴定犬新孢子虫(Neospora caninum)特异表达的miRNAs,并研究其在宿主细胞中的表达情况,本研究收集N.caninum速殖子感染的山羊子宫内膜上皮细胞(caprine endometrial epithelial cells,EECs)24和48 h的样本,用Illumina高通量测序平台和生物信息学分析犬新孢子虫特异表达的miRNAs及其体外表达情况,并研究了一个上调的miRNA novel3_mature对犬新孢子虫在山羊EECs增殖的影响。结果发现,共鉴定出3404个犬新孢子虫特异表达的miRNAs(155个新预测miRNAs),其中77个(47个上调和30个下调)miRNAs显著差异表达;随机选取7个显著差异表达的miRNAs进行实时荧光定量PCR分析,结果与高通量测序结果一致;预测分析发现61个miRNAs的3978个靶基因,功能富集分析发现这些靶基因可能主要参与MAPK信号通路、突触导向、黏着斑、cMAP信号通路、钙信号通路等;转染novel3_mature的模拟物显著促进犬新孢子虫在山羊EECs中的增殖。犬新孢子虫存在多个特异表达的miRNAs,其在虫体增殖中发挥重要作用,研究成果为深入理解犬新孢子虫胞内生存提供了新的思路。

肠艾美耳球虫重组微线蛋白2对家兔免疫保护效果评价

本研究旨在评价肠艾美耳球虫重组微线蛋白2(rEiMIC2)对兔的免疫保护效果,为肠艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研究提供参考。在肠艾美耳球虫转录组数据中筛选出EiMIC2基因,进行克隆、原核表达和蛋白纯化,并采用免疫印迹检测重组蛋白的免疫反应性。将35日龄无球虫新西兰幼兔32只随机分为4组(未免疫未攻虫组、未免疫攻虫组、pET-32a(+)载体组和rEiMIC2免疫组),每组8只,未免疫未攻虫组和未免疫攻虫组每只颈部皮下注射1 mL无菌PBS,pET-32a(+)载体组和rEiMIC2免疫组每只分别接种100μg pET-32a(+)载体蛋白、rEiMIC2,首免后2周进行二免。二免14 d后,除去未免疫未攻虫组,其余3组每只新西兰兔口服接种5×10^(4)个肠艾美耳球虫孢子化卵囊;攻虫14 d后安乐死所有新西兰兔。重组蛋白免疫兔后通过观察临床症状、肠道病变、测定兔的相对增重率、卵囊减少率、抗球虫指数(ACI)值和料肉比以及检测血清中特异性IgG、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ综合评价rEiMIC2的免疫保护效果。结果显示,EiMIC2基因开放阅读框长度为1 605 bp,编码的蛋白分子质量约为57.68 ku。免疫印迹显示rEiMIC2能够被阳性血清所识别,表明其具有良好的免疫反应性。免疫保护试验显示:攻虫后各组幼兔陆续出现精神沉郁和腹泻的症状,未免疫攻虫组和rEiMIC2免疫组各有1只兔死亡;rEiMIC2免疫组相对增重率为73.97%,卵囊减少率为69.98%,ACI值为136.97,料肉比为3.98∶1,与未免疫攻虫组差异显著(P<0.05);rEiMIC2免疫组肠道病变与未免疫攻虫组相比较轻,血清中特异性IgG水平显著高于未免疫攻虫组(P<0.05)。综上,rEiMIC2免疫兔后,能有效减少卵囊排出和增重损失,减轻肠道损伤,具有一定的保护效果。

鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

牛球虫体外培养研究进展

牛球虫病(bovine coccidiosis)是由一种或多种艾美耳属球虫引起的具有高度致病性的寄生性原虫病,流行范围广泛,可导致患牛出现营养吸收不良、发育迟缓、水样或血样腹泻等症状,甚至引起死亡,严重危害养牛业的发展。目前主要通过药物预防对牛球虫病进行防控,但随着耐药虫株的出现以及人们对于兽药残留问题的关注,抗球虫新药的研发刻不容缓。体外培养作为实验动物研究的替代方案,可以人工模拟牛球虫自然宿主的体内环境和条件,且成本相对较低,对于研究球虫的入侵机制、球虫与宿主的相互作用以及抗球虫药物的药效评价具有重要意义。在已建立的体外培养体系中,牛球虫可以完成从子孢子到卵囊的部分或全部内生性发育过程,这为研究虫体的生命周期阶段和新的防治策略开辟了新的途径。笔者通过查阅国内外牛球虫体外培养的相关资料,对球虫子孢子的分离和纯化、原代细胞及细胞系培养、体外培养条件和影响因素以及体外培养的应用方面进行了详细阐述,以期为牛球虫的安全有效疫苗和防治药物的研发提供参考。

狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立

为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。

浙江省部分地区鸡球虫感染情况调查分析

为了解浙江省部分地区鸡球虫感染情况,以及对致病性新种:拉坦艾美耳球虫(Eimeria latan)、纳甘比艾美耳球虫(Eimeria nagambie)和扎利亚艾美耳球虫(Eimeria zaria)进行鉴定,从杭州、丽水、嘉兴3个地区7个养殖场采集新鲜鸡粪便349份。使用麦克马斯特计数法检查并计数每克粪便中球虫卵囊数,用显微观察法确定阳性样品中球虫种类,并进行PCR鉴定。随后,按地区来源、养殖方式、用途和日龄不同对鸡球虫的感染情况进行差异分析。结果显示,所调查地区鸡球虫的总感染率为72.78%(254/349),共检出七种传统鸡艾美耳球虫和纳甘比艾美耳球虫。其中优势种为堆型艾美耳球虫,7个养殖场均为混合感染。PCR及序列分析结果表明在7个场中4个存在疑似纳甘比艾美耳球虫的感染,其中A场纳甘比艾美耳球虫与澳大利亚株LR877717.1 COI基因序列亲缘关系最近,相似性为99.99%,聚成一支。调查研究结果表明,浙江地区鸡球虫总体感染率较高,其中堆型艾美耳球虫田间感染尤其严重。所调查的浙江省部分地区部分鸡场已出现疑似纳甘比艾美耳球虫的感染。

陕西奶牛源微小隐孢子虫的基因亚型鉴定及其遗传进化分析

隐孢子虫是一种寄生于人和多种动物消化道的人兽共患寄生性原虫,可通过污染食物、水源等感染宿主,常引起宿主水样腹泻,甚至死亡。微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)是隐孢子虫属中致病力较高的种类之一,有研究表明,C.parvum的致病力与其gp60基因亚型有强相关性。因此,本研究基于gp60基因位点并应用分子生物学方法对分离自陕西奶牛源微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定和遗传进化分析。结果表明,该研究中奶牛源C.parvum分离株(SX-1)属于Ⅱd亚型家族,基因亚型为ⅡdA19G1,与GenBank中MH049734、MN304768、MT156342和AY738194等参考分离株同归于一个大支,均属于Ⅱd亚型家族。该研究所获得的结果表明C.parvum在陕西省奶牛中分布广泛且具有遗传多样性,对做好犊牛腹泻疾病的精准防控具有重要意义,可为陕西奶牛源C.parvum有效防控策略的制定提供理论基础和数据支撑。

永州地区犬球虫的感染情况调查、虫种鉴定及种系发育关系研究

为了了解永州地区犬球虫的感染情况,确定优势虫种,并探究不同球虫虫种之间的种系发育关系,试验利用饱和重铬酸钾溶液漂浮法对采自永州地区的362份犬粪便进行虫卵检测,通过宏基因组测序技术鉴定虫种,PCR扩增球虫的18S r RNA、ITS-1基因,经测序、比对确定永州地区流行的优势虫种,并对其种系发育关系进行分析。结果表明:有124份犬粪便为阳性,总体感染率为34.25%,其中宠物犬的感染率为24.31%,流浪犬的感染率为44.20%;在永州地区有犬等孢球虫与俄亥俄等孢球虫流行,其中犬等孢球虫33株(占比26.61%),俄亥俄等孢球虫91株(占比73.39%);犬等孢球虫18S r RNA、ITS-1基因序列的长度分别为738 bp与1000 bp,俄亥俄等孢球虫18S r RNA、ITS-1基因序列的长度分别为1051 bp和398 bp。两种犬球虫18S r RNA、ITS-1基因序列的相似性分别为98.53%~98.76%和99.58%~99.72%。此外,在基于18S r RNA、ITS-1基因序列所组建的2个种系发育树中,犬等孢球虫与俄亥俄等孢球虫均处于每个种系发育树的同一分支上。说明在永州地区犬球虫的感染率较高,俄亥俄等孢球虫为该地区的优势虫种,且犬等孢球虫与俄亥俄等孢球虫之间存在较近的亲缘关系。

牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白对小鼠免疫应答的研究

为了评估牛环形泰勒虫(Theileria annulata)烯醇化酶(enolase)原核重组蛋白对实验动物体液免疫水平和细胞免疫水平的影响,用His纯化柱和超滤管对pET-32a-enolase进行纯化和浓缩,应用Western blot分析蛋白的反应原性;另外利用牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白(r Ta-enolase)免疫Balb/c鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA检测血清中重组蛋白的特异性抗体水平。免疫后,取小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,用流式细胞术检测脾脏T细胞亚群情况;用MTT试剂盒检测体外刺激后T淋巴细胞增殖情况;用Spss ANOVA单因素检验进行差异显著性分析。Western blot表明,enolase重组蛋白可与阳性血清发生特异性反应。ELISA检测免疫鼠特异性IgG/IgG1和IgG2a抗体均与对照组差异极显著(P<0.01);流式细胞术检测表明,免疫组(2.53±0.11)与对照组(1.85±0.11)CD4^(+)/CD8^(+)T细胞的比值差异极显著(P<0.01);用r Ta-enolase重组蛋白刺激小鼠脾脏淋巴细胞后明显促进其增殖(P<0.05)。研究结果表明r Ta-enolase免疫小鼠能够诱导小鼠产生极高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平,细胞免疫应答偏向于CD4^(+)T细胞,为后续其在疫苗中的免疫功能提供数据资料。

集约化羊场绵羊球虫感染情况调查与分析

应用饱和盐水浮集法和麦克马斯特虫卵计数法对河南省洛宁县某集约化羊场384只绵羊粪便样品进行球虫感染情况调查。结果发现,球虫总感染率为69.5%(267/384),哺乳羔羊、断奶羔羊、哺乳母羊和怀孕母羊感染率分别是52.6%(61/116)、94.5%(104/110)、65.8%(52/79)和63.3%(50/79)。检出的11种艾美耳球虫及其感染率分别是小型艾美耳球虫27.1%、类绵羊艾美耳球虫40.6%、苍白艾美耳球虫25.5%、浮氏艾美耳球虫16.7%、槌型艾美耳球虫33.1%、巴库艾美耳球虫27.9%、阿撤他艾美耳球虫18.5%、温布里吉艾美耳球虫16.4%、错乱艾美耳球虫1.8%、马尔西卡艾美耳球虫3.6%、颗粒艾美耳球虫6.8%。多为2~5种混合感染,混合感染率77.9%(208/267)。类绵羊艾美耳球虫和槌型艾美耳球虫为优势种。哺乳羔羊和断奶羔羊阳性样品每克粪便中的卵囊数极显著高于哺乳母羊和怀孕母羊(P<0.01)。结果表明,球虫感染在集约化绵羊养殖场十分普遍,应高度重视哺乳羔羊和断奶羔羊球虫病的预防控制。

宿主上皮细胞非编码RNA调控隐孢子虫感染的分子机制研究进展

隐孢子虫是全球分布的重要人兽共患病原,其感染可导致人和动物严重腹泻甚至死亡,严重威胁人体健康及畜牧业发展。目前对隐孢子虫入侵机制、致病机理以及宿主防御隐孢子虫感染的调控机制知之甚少,是阻碍开发治疗性药物和疫苗的重要瓶颈之一。据研究报道,宿主上皮细胞非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)参与调控对抗隐孢子虫感染的诸多生物学过程,如调控细胞因子释放、TLR/NF-κB等信号通路、炎性反应等。论文综述了宿主上皮细胞微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)在防御隐孢子虫感染过程中的作用机制。