荷斯坦奶牛乳腺组织冻存及乳腺上皮细胞原代培养技术改进

为了改进奶牛乳腺上皮细胞原代培养技术和探究乳腺组织冻存方法,选用24月龄无泌乳史荷斯坦奶牛,采用组织块种植法,通过侧置和倒置两种方式,分别从新鲜和冻存（8个月）的乳腺组织中分离培养奶牛乳腺上皮细胞。结果表明,侧置处理能使乳腺细胞爬出时间缩短1-2d,并改善组织块贴壁速度和效果;回收于前次培养后的乳腺组织块再分离培养,贴壁第2天即有乳腺上皮细胞爬出;一步冷冻（-80℃）液氮保存较大奶牛乳腺组织块,冻存液A（FBS∶DMSO∶DMEM/F12=7∶2∶1）冻存的组织块存活率为50%,冻存液B（FBS∶DMEM/F12∶DMSO∶HEPES/丙酮酸钠贮存液=10∶7∶2∶1）冻存的组织块存活率为56%。可见,作者建立的侧置处理法和组织块回收法可以用于奶牛乳腺上皮细胞的分离培养,可以缩短组织块种植法实验周期,冻存液中加入缓冲液HEPES/丙酮酸钠后有利于组织块生物活性保持。

中药复方对奶牛隐性乳房炎病原菌的体外抑菌试验

取10头隐性乳房炎患牛乳汁,采用北京亚临床乳房炎快速诊断液(BMT试剂),对泌乳黑白花奶牛的乳汁进行了病原菌分离鉴定,结果共分离出金黄色葡萄球菌、乳房链球菌和大肠杆菌3种病原菌。将蒲公英、王不留行等中药水煎、去渣、浓缩制成相当于2g/mL的生药液,然后稀释为1.5,1.0,0.5g/mL3种质量浓度,用优质定性滤纸制成相应浓度的药敏片进行中药体外抑菌试验,结果表明,该中药对以上3种病原菌均有明显的抑制作用。

低酸度酒精阳性乳患牛颈、乳静脉中矿物质含量变化的研究

通过对酒精阳性乳患牛及正常牛颈、乳静脉中8种离子含量的测定与对比分析,发现酒精阳性乳患牛的乳腺分泌上皮细胞选择性吸收钠、钾、钙、镁的功能异常,进而引起乳中的相应含量发生变化;以及患牛乳腺组织利用锌、铜、锰、铁的量发生了变化。这对深入探讨酒精阳性乳症的发生机理以及对患牛乳腺代谢的影响都提供了有力的证据。

奶牛胎衣不下的病因探析

胎衣不下是奶牛常见的产科疾病之一,该病的发生严重影响我国奶牛养殖业的健康发展和经济效益。结合近年来国内外关于奶牛胎衣不下病因方面的文献报道及目前我国奶牛养殖场的生产实际情况,对引起奶牛胎衣不下的主要病因进行了综述,旨在为该病的综合有效防治提供理论依据。

干乳期奶牛隐性乳腺炎主要致病菌的分离、鉴定及2种抗菌药物的体外抗菌效果评价

[目的]对新疆维吾尔自治区奶牛隐性乳腺炎常见致病菌进行分离、鉴定,评价头孢洛宁和利福昔明对临床分离菌株的体外抗菌效果。[方法]采用兰州隐性乳腺炎诊断液对新疆维吾尔自治区昌吉回族自治州某奶牛养殖场的干乳期奶牛进行诊断;利用平板划线法及细菌16S rDNA序列分析法对采集的74份乳样进行细菌分离及种属鉴定;应用微量肉汤稀释法测定头孢洛宁和利福昔明对致病菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)以及最低杀菌浓度(MBC)。[结果]从74份乳样中共分离、鉴定致病菌9种、103株,其中,金黄色葡萄球菌35株,占总菌株数量的33.98%;大肠杆菌24株,占总菌株数量的23.30%;产色葡萄球菌15株,占总菌株数量的14.56%;模仿葡萄球菌(10株)、表皮葡萄球菌(6株)、屎肠球菌(5株)、溶血性葡萄球菌(4株)、地衣芽孢杆菌(3株)和腐生葡萄球菌(1株)的数量分别占总菌株数量的9.70%、5.83%、4.85%、3.88%、2.91%、0.97%。体外抗菌试验结果显示,头孢洛宁对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、屎肠球菌、模仿葡萄球菌和地衣芽孢杆菌的MIC分别为0.12、3.91、0.98、0.06、0.98、0.98、3.91、0.06、0.49μg/mL,MBC分别为0.24、7.81、1.95、0.12、1.95、1.95、7.81、0.24、1.95μg/mL;利福昔明对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、屎肠球菌、模仿葡萄球菌和地衣芽孢杆菌的MIC分别为0.20、6.25、1.56、0.78、1.56、1.56、12.50、0.20、0.20μg/mL,MBC分别为0.78、12.50、3.13、1.56、3.13、3.13、12.50、0.78、1.56μg/mL。[结论]引起该养殖场干乳期奶牛隐性乳腺炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产色葡萄球菌;头孢洛宁和利福昔明对临床分离的致病菌株均有良好的抑菌效果。

中草药防治奶牛产科疾病研究进展

本文从中草药防治奶牛产科疾病的作用机理、中草药在防治奶牛产科疾病上的应用和中草药治疗奶牛产科疾病研究展望三个方面阐述了中草药防治奶牛产科疾病研究进展,并指出了存在的问题和今后的研究方向。

盱眙县绿头野鸭寄生虫感染情况调查

对盱眙县专业户养殖的 1 40只绿头野鸭寄生虫感染状况进行了调查 ,采取粪检查虫卵和剖检鸭体找虫。结果检出蠕虫 7种 ,球虫 3种 ,昆虫

母牛胚胎死亡及其预防

母牛胚胎死亡及其预防田允波（云南农业大学昆明６５０２０１）除了改善饲养管理条件外，最大限度地利用家畜潜在的自然繁殖性能，是保证进一步增加家畜头数和提高其生产性能的条件之一。但在实际生产中，常见母牛胚胎死亡现象，它导致产犊间隔延长、增加配种费用，造成严...

奶牛腐蹄病的防治

蹄病是奶牛的常见病，对牛的利用有很大影响，而在蹄病中腐蹄病又占有相当高的比例。据调查，在山东省规模在１００头以上的奶牛场，腐蹄病的发病率在２５％左右，农户奶牛蹄病的发病率近４０％，而腐蹄病牛占蹄病牛的比例高达４５％。牛蹄病的发生对奶牛饲养场、户造成的...

奶牛子宫内膜炎与胃肠微生物相关性及益生菌作用的研究进展

奶牛子宫内膜炎是奶牛分娩时或产后由于病原微生物感染子宫所引起奶牛的一种繁殖障碍性疾病,严重影响奶牛繁殖能力并制约奶牛业的发展,明确奶牛子宫内膜炎的发病机制有助于对其高效治疗。然而,引起奶牛子宫内膜炎的原因较为复杂,比如细菌、病毒、真菌、支原体等。随着研究的深入,有人提出奶牛肠道菌群紊乱也可能影响奶牛子宫内膜炎的发生、发展;也有研究表明,益生菌可通过调节宿主肠道微生物菌群改善奶牛子宫内膜炎。本文就胃肠道菌群与奶牛子宫内膜炎之间的关系及益生菌在奶牛子宫内膜炎中的应用进行综述,以期为规模化奶牛场的奶牛子宫内膜炎的管理提供新的思路。

抑制性消减杂交构建奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库

以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料,分离Poly(A)+ RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400～600 bp的片段,将患乳房炎奶牛cDNA分成2组,分别与2种不同的接头连接,再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增,将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增,构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库.文库扩增后得到610个白色阳性克隆,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在250～750 bp 之间.文库的成功构建为进一步筛选、克隆与奶牛乳房炎抗性相关的基因奠定了基础,对研究奶牛乳房炎抗性的分子机制以及乳房炎的综合防制具有重要意义.

牛乳体细胞数对牛奶品质的影响

随着奶牛业和乳品业的迅速发展,牛奶体细胞数在牛奶生产中的重要作用越来越得到人们的重视。本文综述了影响牛奶体细胞数的因素、体细胞数在奶牛生产中的应用及其对乳及乳制品品质的影响。

复方中草药对隐性乳房炎乳牛细胞免疫功能的影响

选用当归、川芎、芍药、黄芪、蒲公英、丹参、益母草等中草药 ,配制成饲料添加剂饲喂患隐性乳房炎乳牛 ,检测乳牛淋巴细胞刺激指数 (SI)和中性粒细胞吞噬力的变化 ,并用北京亚临床乳房炎快速诊断液 (BMT)对供试牛进行疗效跟踪检验。结果表明 ,该中草药添加剂可显著提高SI (P <0 .0 5 )和中性粒细胞吞噬力 (P <0 .0 5 ) ,并能明显降低乳牛隐性乳房炎的发病率。

奶牛乳房炎葡萄球菌的分离鉴定及耐药性检测

【目的】了解引起奶牛乳房炎的最主要病原菌葡萄球菌的耐药性，为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。【方法】于2006-2007年在泰安地区5个规模化奶牛场，采集128份临床乳房炎奶牛乳样，用传统的细菌分离、培养和生化鉴定方法，对其中的葡萄球菌进行了分离，用K-B纸片扩散法对葡萄球菌的耐药性进行了检测调查。【结果】本次调查中共分离到29株葡萄球菌，其中金黄色葡萄球菌14株（14/29，47.4%），产色葡萄球菌3株（3/29，10.3%），木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌各2株（2/29，6.9%），头葡萄球菌和模仿葡萄球菌各1株（1/29，3.3%）；葡萄球菌对头孢拉定和阿米卡星高度敏感，对临床上常用的林可霉素、红霉素、四环素、复合磺胺均存在不同程度的耐药性。金黄色葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为19.1 mm，凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为20.3 mm。【结论】金黄色葡萄球菌在分离葡萄球菌中仍占主导地位，万古霉素对葡萄球菌具有较强的体外抗菌活性，未发现耐药株。

乳牛骨软症的调查研究

本文对哈尔滨奶牛场发生的以异嗜、跛行等为特征的乳牛疾病进行了调查研究,分析研究了日粮成分,临床表现,血清钙、无机磷、镁和羟脯氨酸的含量及变化,以及尾椎密度的测定值。结果表明,日粮中钙过多,磷、镁供给不足,钙、磷比例过大是致病的主要原因。并分析研究了乳牛血液生化指标的变化和尾椎骨密度的测定法对诊断和监测骨软症和钙、磷、镁代谢动态的意义。

奶牛子宫内膜炎致病菌的16S rRNA序列鉴定

【目的】对奶牛产后子宫内膜炎致病菌进行16S rRNA序列鉴定。【方法】从产后子宫内膜炎患牛子宫分泌物中分离致病菌,通过细菌培养、纯化、分离、革兰氏染色和生化试验进行初步鉴定。选取代表性菌株11株,利用细菌通用引物,通过PCR方法,对其16S rRNA基因的核苷酸序列进行扩增,将扩增产物与pMD19-T载体连接构建克隆载体,经PCR和双酶切鉴定正确后测序,测序结果与GenBank中已注册菌株的16S rRNA基因序列进行比对。【结果】共分离到致病菌株60株,有代表性的11株细菌归类为:SD01为琼氏不动杆菌,SD02为粪肠球菌,SD03为金黄色葡萄球菌,SD04为中间葡萄球菌,SD05为溶血葡萄球菌,SD06为鲁菲不动杆菌,SD07为无乳链球菌,SD08为芽孢杆菌,SD09为枯草芽孢杆菌,SD10为大肠杆菌,SD11为假单胞杆菌。【结论】通过国际公认的16S rRNA序列鉴定技术,准确鉴定出引起奶牛子宫内膜炎的致病菌种类,为临床治疗该病提供了理论依据。