猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪淋巴细胞亚群的动态

目的 :研究SPF仔猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制的机理。方法 :利用流式细胞术检测了SPF仔猪感染PRRS病毒BJ 4后外周血淋巴细胞亚群的动态。结果 :外周血CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 和SLA DR+ 表达细胞在感染早期比例下降 ;感染猪扁桃体的CD3+ 和CD4+ CD8+ 细胞亚群比例下降 ;肠系膜淋巴结的CD3+ 细胞亚群在感染后下降 ,但是SLA DR+ 细胞亚群有逐渐升高的趋势。结论 :仔猪感染PRRS病毒后淋巴细胞各亚群的比例下降可能会抑制机体对其它病原体的免疫反应 ,扁桃体的细胞比例变化有利于其它呼吸道病原体的混合感染或继发感染。

抗猪支原体共同抗原单克隆抗体的制备与鉴定

以猪肺炎支原体 (Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp) 16 8菌株F332作为抗原 ,免疫 8周龄BALB/c小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得两株能稳定分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株单抗与Mhp和猪鼻支原体 (M .hyorhinis ,Mh)等反应 ,而不与鸡支原体、对照血清等反应。结果表明两株单抗可能是针对猪支原体共同抗原的单抗。用SDS_PAGE电泳和Western_blot分析猪支原体的膜蛋白成分 ,结果显示 ,猪支原体的共同抗原是 80kd和 30kd蛋白 ,两株单抗均与Mhp和Mh的 30kd蛋白条带反应 ,表明这两株单抗特异地针对猪支原体的共同抗原成分 30kd蛋白。可以看出 ,这两株单抗在Mhp的抗原分析。

黄芪多糖对仔猪免疫功能的影响

选用24头20日龄三元杂交仔猪,分为对照组和3个试验组(试验组仔猪在20日龄、35日龄时分别肌肉注射黄芪多糖2,4,6 mL),并分别于20日龄、35日龄、50日龄采血检测仔猪外周血嗜中性白细胞百分数、猪瘟抗体水平、淋巴细胞转化率等免疫指标。结果表明:应用一定剂量的黄芪多糖能极显著提高仔猪猪瘟疫苗的抗体水平(P<0.01),显著提高仔猪外周血嗜中性白细胞百分数和淋巴细胞转化率(P<0.05)。表明黄芪多糖对仔猪的免疫功能具有一定的促进作用。

猪脾转移因子的部分生化和免疫性及其应用

对６只新生仔猪和８只成年猪脾脏提取的转移因子(ＴＦ）分析表明，新生仔猪脾已有较高含量的ＴＦ（４．０１ｍｇ／ｇ），１７种氨基酸百分比与成年猪类似。通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的研究表明：新生仔猪脾ＴＦ已具有明显的免疫活性，但不及成年猪。给初生仔猪注射成年猪转移因子的试验表明，注射ＴＦ对白细胞数（ＷＢＣ），３日龄淋巴细胞增殖均无明显影响，但对４５日龄淋巴细胞有促进作用，对３０日龄至６０日龄增重亦有极显著的影响（Ｐ＜０．０１）。

猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制

利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)国内分离株 J1 ,采用反复差速离心法制备免疫抗原 ,长程免疫法免疫 BALB/ c小鼠 ,用间接 ELISA方法检测抗体 ,通过细胞融合技术 ,并经 3次亚克隆获得了 1 0株能稳定分泌抗 PRRSV单抗的杂交瘤细胞克隆株 ( A1 D7H1 0 ,A1 D7H1 1 ,A1 E7H9,A1 E7D9,A2 D8E7,A2 D8B1 1 ,B3D1 1 D6 ,B3D1 1 E6 ,B2 G9A9,B2 G9F2 )。这些细胞经体外连续传代 1个月和冻存 2个月复苏后 ,均能稳定分泌高效价的抗 PRRSV抗体 ,并能在小鼠体内形成肿瘤 ,有效诱导产生高效价 PRRSV抗体腹水 ( ELISA效价为1 0 - 3～ 1 0 - 4 )。其中有 7株能与美洲弱毒株

猪细小病毒弱毒株（PPV_（s－1）A）及其疫苗的免疫效力

以ＰＰＶｓ－１Ａ株弱毒肌肉接种后备母猪２头，每头注射１ｍＬ。接种后第８天的ＨＩ价为１２８～２５６。以后抗体上升，攻毒前ＨＩ价平均为１２８０。对照母猪２头ＨＩ抗体均为阴性。４头母猪配种后，怀孕至３８～４０ｄ时攻毒，结果从接种母猪的血浆中没有分离到病毒，而对照母猪的血浆中则分离到病毒。攻毒４０ｄ后宰杀，接种母猪共怀２５头胎猪，从它们的脏器中均没有分离到病毒，而对照母猪共怀２３头胎猪，其中有１０头的脏器分离到病毒。４批弱毒苗免疫１１头５．５月龄阴性猪，１周内全部产生抗体反应，１个月时平均ＨＩ价为５９９，免疫后１～７个月攻毒，结果免疫猪的血浆和内脏均未分离到病毒，相反，８头对照猪在攻毒前ＨＩ价保持阴性，攻毒后１周ＨＩ１０２４～４０９６，从血浆和内脏都分离到病毒。试验证明，弱毒苗免疫持续期至少为７个月；保存期１１个月。

志贺样毒素II型变异体A亚单位单抗的制备

将表达志贺样毒素II型变异体A亚单位重组蛋白的菌株ppSLT -IIeA在含氨苄青霉素的 2×YTA培养基中培养 ,至对数生长期时加入IPTG诱导 ,诱导的重组菌超声波裂解后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达重组蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白 ,测定纯化蛋白的浓度 ,免疫BALB/c小鼠 ,细胞融合后经ELISA检测 ,得到一株阳性杂交瘤细胞 ,命名为A2 _D3 ,制备的单抗腹水ELISA效价为 2 4log2 ,免疫印迹结果表明此单抗仅与重组蛋白反应 ,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测 13株水肿病菌株 。

猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻穴位针刺免疫的研究

以猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）弱毒疫苗经与胃肠道疾病相关的足阳明胃经６个穴位和督脉经后海穴位共７个穴位的穴位免疫筛选试验，证明后海穴接种为３／３保护，是首选的接种穴位。以后海穴取代ＴＧＥ苗原鼻内途径的第二次接种，免疫４头妊娠母猪，对所产仔猪的保护数为３７／４１。以小剂量０．１ｍｌ及０．２ｍｌ后海穴接种３日龄仔猪，保护率分别为６０．５３％及１００％，而口服０．１ｍｌ只保护６．６７％。针刺１．５ｃｍ及３．０ｃｍ深度注苗的穴位刺激参数试验均获全保护。针刺点旁离穴位０．５ｃｍ及１．０ｃｍ分别获１００％及７５％保护，而同时设的肌肉途径接种组只获２５％保护，首次证明后海穴具有相对免疫特异性。ＴＧＥ灭活苗后海穴一次接种被动免疫保护率为７７．４５％，主动免疫为９５％。猪流行性腹泻（ＰＥＤ）灭活苗被动免疫保护率为９７．０３％，主动免疫试验０．１ｍｌ及０．５ｍｌ的保护率分别为７７．７８％ｍ和８５％。ＴＧＥ、ＰＥＤ二联灭活苗的被动免疫试验的总保护率ＴＧＥ为８７．９％ＰＥＤ为８２．４％。注苗后攻毒前ＴＧＥ与ＰＥＤ的中和抗体价均为１∶１２８，攻毒后７～１０天中和抗体价均为１∶２５６，主动免疫试验的总保护率：ＴＧＥ为１００％，ＰＥＤ为９７?

用2种偶联比率偶联蛋白质制备猪抗克伦特罗血清的比较

将同窝断奶 1周左右的仔猪分为 2组 ,用偶联比率为 1∶14和 1∶18的 2种BSA CL偶联蛋白BSA14 和BSA18分别免疫 3次后 ,采用间接ELISA、间接抑制ELISA测定抗血清效价和血清阻断率。结果表明 ,虽然BSA18组血清的稀释度(1∶2 0 0 0 0 )低于BSA14 组血清的稀释度 (1∶40 0 0 0 ) ,但血清阻断率明显高于BSA14 组。提示以BSA为载体蛋白制备抗CL血清时 ,偶联比率在 1∶2

旋毛虫新生幼虫对猪的免疫保护作用

给大白鼠经口感染７０００～１００００条肌幼虫后７天剖杀，收集成虫。将７日龄成虫于１９９培养液中３７℃培养４８小时后过滤、离心收集新生幼虫。将冻融灭活的新生幼虫按不同数是与等体积弗氏完全佐剂乳化后按不同免疫程序经腹腔免疫猪。最后１次免疫后第７天攻击感染不同数量的肌幼虫。攻击感染后３５天剖杀全部试验猪，取隔肌脚消化检查，计算每克肌肉的荷虫量（ＬＰＧ）及免疫效力，同时观察免疫后及感染后的血清抗体消长变化。结果表明，新生幼虫对猪具有很好的免疫保护作用，１０万条灭活新生幼虫所诱导的最高减虫率达９５．３％，免疫保护期至少９０天。免疫后特异抗体增加，免疫猪体内肌幼虫感染性明显减弱。

广西某猪场7种主要病毒性疫病的抗体检测与分析

为了解广西某猪场猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)、猪细小病毒病(PPI)及猪乙型脑炎(JE)7种主要病毒性疫病的抗体水平及感染情况,本研究采集155份商品猪和种猪的血清,利用阻断ELISA和间接ELISA方法进行抗体水平检测。结果显示:猪群猪瘟病毒(CSFV)、O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪伪狂犬病病毒gB蛋白(PRV-gB)、猪伪狂犬病病毒gE蛋白(PRV-gE)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)的平均抗体阳性率分别为90.3%、81.3%、96.8%、0%、52.3%、76.1%、84.5%、69.7%,表明该猪场CSFV、FMDV-O、PRV、PCV2、PPV免疫效果较好,达到了农业农村部规定的标准(70%);PRV-gE抗体阳性个体总数为0,表明无伪狂犬野毒感染。从各阶段猪群的抗体阳性率分析,商品猪存在PRRSV、PPV、JEV野毒感染,其中PPV野毒感染较为严重,提示该猪场应加强商品猪PRRSV、PPV和JEV的疫苗免疫。

猪链球菌不同佐剂苗的制备及对家兔的免疫原性

选择油乳佐剂、蜂胶佐剂和铝胶佐剂分别制成３ 种猪链球菌苗。对兔体进行了免疫试验，结果证实：油乳佐剂苗免疫原性最好，其次为蜂胶佐剂苗，铝胶佐剂苗效果较差。３ 种佐剂苗中，无论哪种佐剂疫苗，经两次免疫注射的效果均优于一次注射的；且两次注射后，抗体滴度高，维持时间长，进一步验证了免疫抗体的消长规律。

猪链球菌2型分型血清的制备

利用猪链球菌2型(SS2)参考菌株ATCC 43765所制备的全菌菌体抗原,经免疫家兔制备了全菌抗血清。经平板和试管凝集试验测定,该血清的效价为128。该血清仅与SS2发生凝集反应,不与化脓链球菌(A群)、无乳链球菌(B群)、马链球菌兽疫亚种(C群)、马链球菌(C群)、停乳链球菌(C群)、粪链球菌(D群)、粪便链球菌(D群)、F群链球菌、兰氏L群链球菌、兰氏O群链球菌发生凝集反应,表明该血清具有较高的特异性,可作为SS2的分型血清。

猪瘟病毒单克隆抗体的研制和应用——Ⅱ.应用抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体 ELISA 竞争法检测猪瘟病毒抗体

利用过氧化酶标记的抗 SFV-CMcAb 建立的 ELISA竞争法对5份未吃初乳仔猪血清和79份注射疫苗前后不同时期的猪血清进行检测.结果表明,该法具有特异、敏感、快速、简便等特点.哺乳仔猪注射疫苗前血清中母源抗体在 McAb ELISA 竞争法测定中的抑制率为55.8%.而注射疫苗15天后血清抑制率均为65.0%以上,这与HRP-SPA-ELISA 检测结果呈显著正相关(r=0.9890P<0.01).以此方法检测猪瘟病毒抗体可正确反映疫苗注射后产生的抗体应答和猪群的免疫水平.

大河猪红细胞免疫功能研究及其意义

应用红细胞C3b受体花环（C3bRR）和免疫复合物花环（ICR）试验，证实大河猪红细胞表面存在补体C3b受体（C3breceptor，C3bR），表明红细胞免疫系统（Redcellimmunesystem，RCIS）的概念亦适用于这种动物。大河猪的RCIS有其独特之处，文中对大河猪红细胞C3bRR和ICR分别代表红细胞表面C3b“空位”和“占位”状态的含义做出了新的解释。

重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究

利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。

猪细小病毒弱每株(PPVs-1A)对猪的安全性试验

为了证买PPV_(S-1)株的黄全性,以1—4毫升肌注接种5月龄左右阴性猪6只,观察8天,接种猪无明显临床症状,没有发生病毒血症和排毒.以4毫升(TCIDS_(50)10^(7.5)HA:4096)肌注接种孕猪(孕龄38～46天)4只,一头未接种怀孕母猪与接种孕猪同居饲养42天.结果5只孕猪都没有发生病毒血症,接种后42天宰杀,共收集到胎猪68只,从68只胎猪中没有分离到PPV.