不同鸡马立克病疫苗的免疫保护效果比较

【目的】对国内外共7个批次/品种(A~D,F~H)的CVI988或CVI988+HVT商品疫苗进行免疫保护分析,以期了解不同马立克病(MD)疫苗的保护效果,为该病的防控提供参考。【方法】将140只1日龄SPF鸡随机分为9组,G01~G09组,其中G01~G07组(15只/组)分别按推荐剂量免疫A~D及F~H马立克病疫苗,G08(攻毒对照组,15只)和G09(空白对照组,20只)组不免疫,7日龄时G01~G08组分别经腹腔注射马立克病病毒(MDV)超强毒Md5株(1000 PFU/只),所有鸡隔离饲养120 d。通过检测疫苗毒蚀斑数、疫苗毒复制情况、攻毒后体重差异、临床表现和病理变化综合评估各疫苗的保护力。【结果】7个批次疫苗的病毒蚀斑数均符合国家标准(2000 PFU/羽份),疫苗F的病毒蚀斑数最高(6467 PFU/羽份)。以1羽份剂量免疫1日龄SPF鸡后,疫苗F的复制速率相对较快。用Md5株攻毒后,攻毒对照组鸡体重减轻,且有93.3%(14/15)的鸡死亡,100%(15/15)剖检出现MD典型病变;G01~G07各免疫组鸡体重与空白对照组鸡相比,均无显著差异(P>0.05),死亡比例分别为0/14、3/15、5/15、0/14、0/13、0/15和1/15,剖检出现MD典型病理变化的比例为5/14、8/15、7/15、5/14、3/13、3/15和5/15,攻毒保护试验结果显示,7个批次的马立克病疫苗对鸡均具有一定保护力,保护指数为45.7%~73.3%。【结论】不同厂家生产的鸡马立克病疫苗对MDV超强毒Md5株的攻击具有相似的保护效果,二价苗的保护力(73.3%)高于单价疫苗。

我国禽用生物制品现状及禽用病毒类生物制品质量情况分析

对我国禽用生物制品基本现状及2013-2022年禽用病毒类生物制品的质量情况进行总结,分析存在的问题,提出强化SPF鸡(鸡胚)质量控制、持续开展风险监测方法研究、完善禽用标准物质、推动禽用新型生物制品研制的建议。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗免疫效果评估

为了解重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗免疫效果,2022年对河南省1 303个禽群免疫的不同厂家生产的重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗进行临床安全性调查,并对从其中615个禽群中采集的17 207份禽血清进行疫苗免疫有效性评估。7家重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的临床安全性调查结果显示:禽群应激减蛋率为2.80%~4.17%,应激反应率为0.02%~0.34%,应激发病率为0.004%~0.200%,应激死亡率为0.001 1%~0.002 7%。7家重组禽流感病毒(H 5+H 7)三价灭活疫苗的免疫有效性评估结果显示:禽群H 5-Re 13抗体合格率为89.54%~94.45%,H5-Re14抗体合格率为88.82%~93.74%,H7-Re4抗体合格率为87.64%~94.59%。结果提示:7家重组禽流感病毒(H 5+H 7)三价灭活疫苗临床安全性和免疫有效性整体良好,但不同厂家生产的疫苗在临床安全性指标和免疫抗体合格率上存在一定差异,建议根据家禽品种及其生长阶段选用合适的疫苗。

整合REV-LTR基因的MDV活疫苗与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力比较

利用同源重组技术将禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)整合进CVI988/Rispens疫苗株基因组中所构建成的重组马立克氏病病毒株(r MDV-LTR株),具有较高的增殖效率。为比较r MDV-LTR株与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力差异,开展了对这两种疫苗的比较试验。试验将这两种疫苗分别按照三个不同剂量经颈背部皮下接种1日龄SPF鸡。接种后第7 d,攻毒马立克氏病强毒株rMd5,连续观察60 d后进行剖检。临床病理观察结果发现,以不低于250 PFU/羽剂量的rMDV-LTR株或CVI988/Rispens株免疫SPF雏鸡都可以提供大于80%的免疫保护效率;以125 PFU/羽剂量的两种疫苗虽均不能提供大于80%的免疫保护效力,但rMDV-LTR株免疫组试验鸡未出现死亡,仅有2只鸡出现消瘦,剖解脏器无肿瘤,而CVI988/Rispens株免疫组鸡出现2只死亡,其中1只剖解后检出肿瘤。rMDV-LTR株和CVI988/Rispens株免疫组的免疫保护指数分别为77.78%和66.67%。由实验结果可见,在较小免疫剂量下,rMDV-LTR株免疫保护率高于亲本CVI988/Rispens疫苗株。说明重组毒rMDV-LTR疫苗株可以作为一种安全的、有效的新型MDV疫苗。

伪狂犬病病毒经典疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性研究

已有研究表明伪狂犬经典疫苗株Bartha-K61对小鼠具有较强的致死性,为了研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对兔的致病性,本研究以10^(3)TCID_(50)的剂量接种5只成年家兔,家兔于接种后第3 d出现死亡,并陆续在5 d内全部死亡。对病死兔进行解剖后发现大脑血管扩张及出血,心脏出现坏死以及肺部气肿、出血、坏死等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片也显示心脏血管扩张,血管周围轻度水肿,脑部胶质细胞增生,细胞数量增多,其他各脏器也都有不同程度的病理变化。通过荧光定量PCR的方法对病死兔各组织的病毒载量进行了测定。结果表明,病死兔的各组织脏器均检测出高水平的病毒DNA,均显著高于对照组。为了进一步研究伪狂犬疫苗株Bartha-K61对家兔的致病性,本研究测定了Bartha-K61对家兔的半死致死量,结果表明:Bartha-K61对家兔的半数致死量为10^(0.3)TCID_(50),以1×TCID_(50)的剂量接种成年家兔后,仍可引起20%的家兔致死,由此可见Bartha-K61对家兔的致死性要显著强于小鼠。因此在使用Bartha-K61过程中应针对不同物种注意生物安全控制。

PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

雾化疫苗研究进展

近年来,随着黏膜疫苗及免疫技术的不断发展,针对呼吸道疾病免疫预防的雾化疫苗及相应雾化吸入免疫技术的报道与应用逐渐增多。雾化疫苗是通过雾化装置将液态和固态免疫原制成雾滴或气溶胶颗粒,以喷雾免疫或气溶胶免疫的形式进入人与动物呼吸道及肺部,并诱导机体产生保护性应答的疫苗。雾化免疫能更好地诱导黏膜免疫应答,同时避免了注射带来的疾病传播风险和疼痛。20世纪50年代鸡新城疫疫苗的喷雾免疫研究拉开了动物呼吸道免疫的序幕,随后开展了鸡传染性支气管炎疫苗的喷雾接种,目前很多禽用疫苗的喷雾免疫已被广泛使用。猪用疫苗的气溶胶免疫研究起步较晚,难度也更大。20世纪70年代末以来,逐步在猪瘟疫苗、猪胸膜肺炎放线杆菌疫苗及猪支原体肺炎疫苗上开展相应的气溶胶免疫研究。相比动物疫苗,人用疫苗的气溶胶免疫研究报道更多,主要集中在麻疹疫苗、结核疫苗和流感疫苗。2019年以来,新型冠状病毒肺炎疫苗的气溶胶免疫快速发展,目前在中国已被批准紧急使用。笔者就动物用及人用雾化疫苗研究现状进行系统陈述,总结分析了各类雾化疫苗的理化参数、安全性、体内趋向性、肺脏局部免疫应答、免疫接种效果,并提出未来在疫苗剂型与组份、雾化发生装置、雾化过程质控、免疫程序与效果评价等方面的研究需求。本综述可为后续相应的呼吸道黏膜疫苗研发提供参考。

非洲猪瘟病毒MGF360-13L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF360-13L基因原核表达系统表达13L蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体。利用生物信息学方法,对ASFV MGF360-13L基因进行序列比对,分析其同源性、构建遗传进化树;将非洲猪瘟病毒MGF360-13L基因密码子优化后进行合成,连接至PET32a载体构建重组质粒pET32a-13L,转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达获得目的蛋白,采用镍柱纯化法进行蛋白纯化。将纯化后的蛋白乳化后免疫8周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测抗体特异性。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白分子量大小为58.2 kDa,主要以包涵体形式存在;Western blot结果显示免疫猪阳性血清可特异性识别该蛋白,具有良好的反应性,表明该重组蛋白获得正确表达。利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体进行Western blot,结果显示其能与MGF360-13L重组蛋白发生特异性反应。间接ELISA测定抗体效价高达1∶256000。本研究成功制备非洲猪瘟病毒MGF360-13L重组蛋白,以其为免疫原制备的多克隆抗体具备较高的特异性和反应性,为进一步阐述MGF360-13L蛋白的生物学功能和研制非洲猪瘟新型疫苗奠定了基础。

L929细胞无血清悬浮驯化及其在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株。将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法制备流产衣原体灭活疫苗。以25μL、50μL、100μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示,当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×10^(5)/mL时,培养72 h后细胞浓度可达到约7×10^(6)/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×10^(6)/mL,接菌量为5.5×10^(4) IFU/mL,加入脂质体2000的量为1.7μL/mL、放线菌酮浓度为0.4μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮培养细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50μL、100μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明,本试验成功驯化出1株L929悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50μL、100μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了技术支持。

家畜布鲁氏菌病疫苗研究现状

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病,该病可造成家畜流产,猪、牛、羊发病率较高,严重危害畜牧业的健康可持续发展。近年来,由于家畜调运频繁、检验防疫等措施不到位等因素,使得该病发病率逐年上升,对布鲁氏菌病防控措施和疫苗的研究现状进行概述,以期为布鲁氏菌病的防治奠定基础。

基于噬菌体展示系统的多类型疫苗研究进展

噬菌体表面展示技术是将外源基因与特定噬菌体衣壳蛋白融合,进而展示到噬菌体表面并保持良好生物学活性的一种技术,该技术具有安全可靠、免疫效果好等特点,在新型疫苗研发中具有很高的应用价值。本文主要介绍了4种常见的噬菌体展示系统和3种噬菌体疫苗,同时对噬菌体可作为一种理想的疫苗载体进行了展望。

六种布鲁菌病疫苗对绵羊与山羊免疫效果的比较

为了比较不同布鲁菌病疫苗对乌拉特草原以放牧为主的山羊与绵羊的免疫效果,我们在乌拉特草原6个苏木/镇,随机选取80~100日龄并经过布鲁菌病检测阴性的乌拉特土种绵羊羔385只、二狼山绒山羊羔275只,用6种布鲁菌病疫苗进行免疫效果比对试验。采用琥红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)分别对试验组羊接种疫苗后7、14、21、35、60、120、150、180、210、240、270 d进行转阳率和抗体效价检测;免疫后270 d进行攻毒试验。RBPT和SAT结果显示,M5-90Δ26和S2接种绵羊与山羊后抗体产生快,持续时间长;免疫后攻毒试验结果显示,A19点眼绵羊和A19-ΔVirB12株皮下注射绵羊保护比例均为4/6;M5-90Δ26绵羊皮下注射和ReV.1山羊点眼的保护比例均为4/5;本试验为乌拉特草原建立牛羊免疫无布鲁菌病区筛选理想疫苗,以及为创建全国首个牛羊免疫无布鲁菌病区制定合理的免疫程序提供了科学依据,同时对布鲁菌病疫苗的研制及国内其他地区布鲁菌病防治具有参考价值和指导作用。

C株猪伪狂犬病疫苗免疫效果评价

越来越多的文献证实,国内流行的猪伪狂犬病毒株已经发生变异,其毒力、致病特点已经有了明显不同,因此很多人开始质疑经典毒株对新流行毒株的保护力。目前,国内很多疫苗厂家已经将猪伪狂犬病疫苗毒株更换为新的变异毒株,将其缺失致弱后用作疫苗株,比较知名的如HB-2000株、C株等。猪伪狂犬病病毒C株的不同之处在于其是自然致弱的毒株,病毒培养效果更好,容易收获更高的毒价,但其确切的效果还需要逐步验证。

口蹄疫血清抗体阴性实验牛筛选方法的探讨

牛口蹄疫疫苗属于国家强制免疫疫苗,牛口蹄疫产品的动物检验是反映该批次产品是否安全有效的重要评判依据。口蹄疫阴性实验牛筛选的速度决定着该批次产品是否能快速投入市场。本实验使用口蹄疫抗体胶体金检测技术对实验牛进行阴阳性初筛,然后用口蹄疫抗体液相阻断ELSIA技术对阴性动物进行复核确认,可以实现快速筛选抗体阴性实验牛,完成口蹄疫疫苗动物实验评估。

基因工程疫苗在动物疾病防治中的前景

随着生物科技的不断革新,动物疫病的防治手段也越来越多,但在兽医临床当中,疫苗仍然是重要的防护手段。传统疫苗的研制受到微生物体外培养以及安全性等多方面的限制,在使用中存在着较大的风险,而随着现代生物技术和手段的发展,利用基因工程技术研发的疫苗,具有更高的安全性和稳定性,同时还具备大批量生产的可能性,进一步降低了生产的成本,是未来动物疾病防治的主流发展趋势。本文对基因工程疫苗进行了简单的阐述,同时分析了基因工程疫苗所具有的优势和劣势,以及当前的应用现状,并就此分析了其在动物疾病防治当中的发展前景,以供相关人士参考。

五种常用猪2型圆环病毒疫苗的效果比较与分析

为了比较不同厂家疫苗对圆环病毒2d亚型(PCV2d)的防控效果,试验将相同批次的28 d龄断奶仔猪525头,分成5组,每组105头,分别接种A、B、C、D和E五个厂家的PCV2疫苗。免疫前从每个组中挑选15头断奶仔猪,采血监测PCV2抗体,根据抗体结果再将小猪均衡调配至各疫苗组并标记为后续跟踪监测对象,于60、88、97、107、117、127、137、149、158和181 d龄进行采血监测PCV2感染情况。试验前称取并记录各组猪只的重量,试验期间记录猪只的死淘情况和饲料消耗量,试验后再次称重并计算日增重和料重比。结果显示:感染后各时间点血液PCV2抗原的阳性率整体上,疫苗D组>疫苗A组>疫苗E组>疫苗B组>疫苗C组;死淘率和料重比,疫苗C组<各疫苗组;日增重,疫苗C组>各疫苗组;疫苗C组猪只的血液PCV2抗原阳性率低、病毒血症维持时间短、死淘率低(8.57%)、日增重高(0.738 kg/d)、料重比低(2.644)。说明疫苗C相较其他厂家的疫苗效果更好,更能有效防控PCV2d型毒株的感染。

重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片对母猪产后子宫保健的效果试验

为探究重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片对母猪产后子宫保健的应用效果,按照不同的产后护理方式将87头生产母猪分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组,每组29头。对照组产后不进行任何护理,试验Ⅰ组采用传统方式肌注抗生素进行护理,试验Ⅱ组采用重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片进行护理,比较各组母猪断奶发情间隔时间、断奶5 d及7 d发情配种率、返情率,并评估经济效益。结果:试验Ⅱ组断奶5、7 d的发情配种率显著高于试验Ⅰ组和对照组(P<0.05),返情率显著降低(P<0.05);试验Ⅰ组断奶5 d发情配种率显著高于对照组(P<0.05),断奶7 d发情配种率、返情率无显著差异(P>0.05);3组断奶至配种间隔时间无显著差异(P>0.05);试验Ⅱ组的综合效益提高8.3万元,平均每头母猪每年增加效益208元。结论:使用重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片对母猪产后护理的效果优于传统肌注抗生素方式,且能提高猪场经济效益。

羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立

为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法。针对布氏杆菌菌株的16S rRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序。以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90△26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性。克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度。使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性。结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90△26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线。该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL。该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90△26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90△26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法。

促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗在哺乳动物免疫去势中的研究进展

GnRH免疫阉割是控制动物性欲和生殖能力的一种手段,它可在不做手术的前提下达到“阉割”动物的目的,比手术阉割更安全便捷,是一种对动物福利友好的替代方案。近年来GnRH免疫去势疫苗研究发展迅速,本文阐述了GnRH免疫去势的机制,综述了GnRH疫苗在哺乳动物免疫去势中的研究进展,并进一步探讨了目前GnRH去势疫苗研发困境与发展前景,为GnRH疫苗的广泛开发、完善和推广应用提供参考。

猪圆环病毒2型重组亚单位疫苗抗原纯化工艺优化和佐剂筛选

为优化重组毕赤酵母表达PCV2 Cap的纯化工艺和筛选佐剂。对破碎压力、循环次数、PEG相对分子质量、PEG终质量分数、pH和NaCl浓度进行筛选,用BCA(bicinchoninic acid)法测定PCV 2Cap质量浓度,并用电镜负染法观察纯化后PCV2 Cap颗粒。分别用国产白油、MONTANIDE^(TM) IMS 2215 VG ST和ISA 206 VG配制PCV 2Cap佐剂疫苗,测定免疫小鼠血清中的抗体水平。结果显示:高压均质仪设定130MPa、破碎循环2次,酵母细胞破碎率达89.74%;PEG纯化PCV2 Cap的优化条件为5%(终质量分数)PEG6000、pH 7.5、0.20 mol/L NaCl,PCV2Cap回收率可达91%,电镜下观察PCV 2 Cap颗粒完整;MONTANIDE^(TM) IMS 2215 VG ST PCV 2 Cap佐剂疫苗接种小鼠后,抗体水平最高,可达1∶5 120。