常用酰基辅酶A的合成

酰基辅酶A作为重要的酰基活化形式在代谢中起着重要作用,而获得酰基辅酶A是进行相关代谢过程研究的基础。目前酰基辅酶A的合成方法主要为化学合成和酶法合成两类,不同结构的酰基辅酶A适用的合成方法有所不同。本文采用化学合成(酸酐合成、咪唑基活化和PyBOP一步合成)和酶法合成(辅酶A连接酶和酰基转移酶完成体外催化),合成了苯乳酰辅酶A、异戊酰辅酶A、苯甲酰辅酶A、对香豆酰辅酶A和肉桂酰辅酶A,并对合成结果进行了评价。结果表明,酶法具有转化率高,专一性强的优势,化学合成具有高效快速合成的特点。本文为将来合理选择酰基辅酶的合成方法提供了参考。

八月瓜种子的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性

该研究探讨了药食两用八月瓜种子[Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.Seeds]的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。将八月瓜种子经水和95%乙醇提取,不同极性溶剂萃取后,分别测试各部位的α-葡萄糖苷酶抑制活性,发现95%乙醇提取物的正丁醇部位为α-葡萄糖苷酶抑制活性部位(IC_(50)为18.16μg/mL),采用硅胶柱色谱、HP20SS柱色谱和半制备HPLC等手段对正丁醇部位进行分离纯化。从八月瓜种子正丁醇部位中分离得到14个化合物,通过与文献波谱数据对比,分别鉴定为:Hederacholichiside F(1)、Saponin E(2)、Mutong Sponin B(3)、Saponin PJ1(4)、Saponin PH(5)、YuzhiziosideⅣ(6)、Akebia Saponin D(7)、Saponin B(8)、HN-Saponin F(9)、YuzhiziosideⅣa(10)、Icariside D(11)、Phenethyl rutinoside(12)、Calceolariolside B(13)和Isoquercitrin(14)。化合物9、10、11、12、14为首次从八月瓜中分离得到。化合物2、7、10、14对α-葡萄糖苷酶具有一定程度的抑制活性,其IC_(50)分别为17.48、35.62、35.79、44.78μg/mL。化合物6、13的抑制活性最为显著,其IC_(50)分别为4.27、2.95μg/mL,活性优于阳性药阿卡波糖(IC_(50)为6.02μg/mL)。

熊果甙作为化妆品添加剂对酪氨酸酶抑制作用

熊果甙(Arbutin)作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.本文研究了熊果甙对酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力的抑制效应.结果表明,熊果甙对酪氨酸酶活性的抑制作用表现为可逆抑制效应.熊果甙对酪氨酸酶的单酚酶的效应主要表现于迟滞时间有明显的延长,但对稳态酶活力的影响不显著.160mmol/L熊果甙使得单酚酶的迟滞时间从82s延长到430s,增大4.24倍,稳态酶活力仅下降16%.熊果甙对二酚酶的抑制作用显示浓度关系,测定导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为5.30mmol/L,其抑制作用为竞争性类型,抑制常数KI为2.98mmol/L.本文通过研究熊果甙对酪氨酸酶的抑制作用机理,阐明了熊果甙作为化妆品添加剂的增白作用机理.

从小麦胚芽蛋白中分离和鉴定血管紧张素转化酶抑制肽的研究

用碱性蛋白酶水解小麦胚芽蛋白得到的水解物对血管紧张素转化酶有强的抑制活性(IC50=0.014mg/ml),小麦胚芽蛋白水解物经SephadexG-15纯化、制备RP-HPLC分离,得一对ACE有强烈抑制作用的组分X(IC50=5.46μmol/L),X氨基酸分析、电喷雾质谱确定了X的序列为Ala-Met-Tyr。

基于转录组深度测序研究银杏中萜类合成酶的功能

目的:利用深度转录组测序,获得了8个银杏萜类合成酶基因。方法:通过生物信息学方法分析,推测了8个银杏萜类合成酶基因的功能。结果:系统发育树表明GbTPS6基因属于TPS-f家族,其功能更倾向于被子植物的功能。GbTPS1,GbTPS2和GbTPS5属于TPS-d3亚家族,该家族是裸子植物倍半萜合成酶的亚家族。GbTPS4属于TPS-d2亚家族,属于二萜合成酶的亚家族。结论:基于银杏深度转录组测序,通过生物化学、生物信息学以及合成生物学等方法,对银杏中的萜类合成酶进行基因功能分析,为未来更深入研究银杏中的萜类合成酶提供研究思路和方法。

锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

于1995年2月在厦门海域采集锯缘青蟹，取其内脏经正丁醇抽提、硫酸铵分级分离、DEAE-52离子交换柱层析及SephadexG－200凝胶过滤柱层析纯化，获得碱性磷酸酶制剂，以快速蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验其纯度，获得单一蛋白纯的酶制剂。研究酶的物理性质得出该酶的紫外特征吸收峰在278nm处，荧光激发光谱特征峰在282nm处，荧光发射光谱特征峰在343nm处，全酶分子量为78kD。研究酶催化对－硝基苯磷酸二钠水解的动力学性质，金属离子及有机溶剂对其活力的影响，得知该酶水解对－硝基苯磷酸二的最适温度为52℃，最适pH为9．2，米氏常数为6．67×10-4mol／L，酶活性中心的转换常数为460min-1；Mg2＋对酶有显著的激活作用；Cn2＋，Hg2＋和甲醇、乙醇、乙二醇对酶有不同程度的抑制，说明在一定条件下，效应物引起酶分子构象发生了不同程度的变化。

产胶原酶地衣芽孢杆菌菌种的分离、筛选及发酵条件研究

从成都皮革厂等处采集的样品中 ,分离筛选到一株胶原酶的产生菌J 4 8,菌种鉴定为地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis) .该菌产酶的最适碳源为蔗糖 ,氮源为明胶 ,起始 pH为7.5,容瓶装量为 10mL ,种龄是 2 4h ,接种量为 6 % .在此条件下 ,摇瓶振荡发酵后 ,酶活达 2 5U/mL发酵液 ,较原发酵培养基发酵后的酶活提高 35% .

大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达

用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。

链霉菌产生的新型纤溶酶的纯化和性质的研究

从一株土壤链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｙ４０５的发酵液中通过硫酸铵分级盐析、２９０树脂脱色、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５阴离子交换层析和ＬｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，获得一种新型的具有纤溶活性的蛋白酶ＳＷ１。每升发酵液中可获得４２ｍｇＳＷ１样品，回收率为１２０％，每毫克蛋白活力达２９５２３尿激酶单位，以发酵液作为起始，所获得样品纯度提高２３０６倍，ＨＰＬＣ检测纯度约为８３５％。ＳＷ１在ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳中是单肽链蛋白，分子量为３０ｋＤ，等电点为８５，测定其Ｎ端１７个氨基酸序列为Ａｒｇ／Ａｓｎ／ＰｈｅＰｒｏ／ＡｓｐＧｌｙＭｅｔＴｈｒＭｅｔＴｈｒＡｌａＩｌｅＡｌａＡｓｎＧｌｎＡｓｎＴｈｒＧｌｎＩｌｅＡｓｎ，Ｎ端第一和第二残基具有不均一性，根据氨基酸组成分析推算ＳＷ１由２６２个氨基酸组成。ＳＷ１的纤溶活性可被１０ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ、１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ和１ｍｏｌ／Ｌ赖氨酸完全抑制，表明ＳＷ１其赖氨酸结合位点与活性有关。ＳＷ１的纤溶活性在４～３７℃和ｐＨ４．０～９０具有较好?

修饰SOD-CTS复合酶的制备及其性质研究

报道了SOD-CTS复合酶的化学修饰。药用淀粉用高碘酸钠氧化后,与复合酶共价结合制得了修饰酶。与天然酶相比,修饰酶对温度、酸、碱有较强的抗性,且具有较强的抗蛋白酶水解能力,

温度对猪血提取超氧化物歧化酶的影响

用不同的温度与不同的时间对猪血超氧化物歧化酶液进行处理 ,结果表明 :随着温度的升高和处理时间的延长 ,酶活性和杂蛋白均呈下降趋势 .但从比活性上看 ,猪血SOD的处理以变性温度 5 5～ 6 5℃ ,变性时间为 15 2 6min最适宜 ,酶纯度最高 .

白菜型油菜种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究

采用热变性、硫酸铵分步盐析及离子交换层析和分子筛层析等方法,从白菜型油菜种子中得到胰蛋白酶抑制剂(BNTI)。SDSPAGE检测为单一条带,表明纯化的胰蛋白酶抑制剂电泳均一。SDSPAGE测定其分子量约为14.4kD,等电聚焦测定其等电点约为4.7。BNTI具有较高的热稳定性。本文还考察了温度对溶液中BCTI蛋白构象的影响,荧光光谱和测定抑制活力结果表明BNTI中的色氨酸和酪氨酸残基位于疏水部位。

石杉碱甲的合成及结构改造研究进展

石杉碱甲是一高效、高选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂，由于其独特的药理特征和低毒性，引起了人们的广泛注意。本文系统地综述了石杉碱甲的全合成方法、结构改造工作及构效关系的研究。

高纯度茄尼醇的现状与市场前景

高纯度的茄尼醇是生产辅酶Q10的关键原料。2004年国外辅酶Q10总产量约为900t,直接需要消耗高纯度茄尼醇近2000t,日本、美国、德国、韩国是高纯度茄尼醇需求量最大的4个国家。我国用于辅酶Q10和其他用途的高纯度茄尼醇年需求量近4000t,由于国际上高纯茄尼醇的生产技术被日本等国垄断,我国高纯茄尼醇几乎全部依赖进口。我国具有生产高纯度茄尼醇的资源优势,如能解决技术难题,生产高纯度茄尼醇则是一项具有一定市场潜力的项目。

重组葡激酶(r-Sak)的分离、纯化和结晶

通过葡激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 ,表达产物 r- Sak以可溶性、活性状态存在于胞浆内。本文报道用离子交换和凝胶过滤纯化 r- Sak的简易路线 ,从每升发酵液可得纯度 98%以上 ,比活性 10万 HU/ mg的 r- Sak30 0 mg以上 ,比国外报导道 6倍。r- Sak的理化特性和 N末端 15个氨基酸顺序与天然 Sak十分相似。利用纯化的 r- Sak已成功地制备了晶体。

膨胀床离子交换吸附分离纳豆激酶

对膨胀床分离纳豆激酶过程的各个阶段进行了考察。在填充床上的探索性实验表明,吸附时最佳的pH为6.0,电导率应低于6.2mS/cm。在膨胀床上样吸附阶段,考察了保持流速不变和保持床层膨胀率不变2种操作方式,结果表明采用控制膨胀率不变的方法更适合纳豆激酶这种料液的粘度和平衡缓冲液的粘度相差不大的情况;在冲洗阶段,通过考察颗粒冲洗的效率确定采用平衡缓冲液冲洗;洗脱阶段采用填充床模式洗脱。与传统方法相比,用膨胀床对纳豆激酶进行分离和纯化,操作步骤从6步减少为2步,操作时间缩短了8—10h,回收率提高了约50%。

产辅酶Q_(10)酵母的发酵条件研究

研究了豆油、豆粉、胡萝卜汁、西红柿汁、烟叶、β -胡萝卜素、桔子皮汁等自然物的添加对酵母发酵生产CoQ1 0 的影响 ,结果表明它们均能大幅度提高酵母菌中CoQ1 0 的含量。其中豆油、豆粉、西红柿汁、桔子皮汁是富含CoQ1 0 和胡萝卜素合成途经中的前体物质因而提高了CoQ1 0 的产量 ;烟叶和 β -胡萝卜素阻断了合成 β -胡萝卜素的途经从而起到提高CoQ1 0 合成的作用 ;胡萝卜汁的作用可能两者兼而有之。因此可以得出以下结论 ,微生物中CoQ1 0 的合成与 β

三角酵母D-氨基酸氧化酶的固定化研究

通过共价结合的方法把三角酵母 D-氨基酸氧化酶 (DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上 ,结果表明多糖类载体壳聚糖和 Sepharose4B比高聚物更能有效地固定化 DAO。经过固定化后 ,壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和 p H的稳定性提高 ,表观米氏常数增大。在分批式头孢菌素 C氧化脱氨的反应中 ,固定化酶表现出良好的操作稳定性 ,戊二酸单酰基 - 7-氨基头孢霉烷酸的得率为 93%。

三甲氧基甲苯合成辅酶Q_0工艺优化研究

对三甲氧基甲苯氧化制备辅酶Q0的合成反应进行了研究,对反应温度、浓硫酸的用量、乙酸的用量等主要影响因素运用正交试验方法进行了优化,得到的较佳反应条件与运用偏最小二乘法拟合方程所得的较优点一致。