本刊的办刊宗旨和征稿范围

1办刊宗旨《中华实验和临床病毒学杂志》为医学病毒学专业学术期刊,涉及人类病毒学基础理论性和应用性研究,人类病毒性疾病的预防、诊断、流行病和临床治疗等方面的新进展、新成果、新技术和新方法,以及国外在该领域的最新研究进展。

本刊的办刊宗旨和征稿范围

1办刊宗旨《中华实验和临床病毒学杂志》为医学病毒学专业学术期刊,涉及人类病毒学基础理论性和应用性研究,人类病毒性疾病的预防、诊断、流行病和临床治疗等方面的新进展、新成果、新技术和新方法,以及国外在该领域的最新研究进展。

2019—2022年铜陵市B型Victoria系流感病毒HA和NA基因进化特征分析

目的分析2019—2022监测年度铜陵市B型Victoria系流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的遗传进化特征。方法选取2019—2022年度本实验室分离的22株B型Victoria系流感病毒进行全基因组测序,利用生物信息分析软件进行序列对比和系统进化分析。结果2019—2022年铜陵市季节性流感主要以B型Victoria系流感为主,归属于V1A.3分支,其中2021—2022年分离的14株归属V1A.3a.2分支。与疫苗株相比,22株B型Victoria系流感的HA与NA蛋白均出现多个氨基酸变异位点,HA蛋白的四个主要抗原表位(120环、150环、160和190螺旋)均有变异,NA蛋白耐药位点未检测出变异,HA蛋白197 NETQ糖基化位点也发生改变。结论2019—2022年铜陵市B型Victoria系流感病毒的HA蛋白的氨基酸位点部分发生了变异现象,这可能导致抗原表位的漂移变化,因此需要进一步加强流感病毒变异监测。

2023-2024年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒血凝素基因特性和抗原性分析

目的了解2023-2024年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒(BV)的血凝素(hemagglutinin,HA)基因特性、抗原性及与流感疫苗组分株的匹配性。方法采集2023—2024年流感监测季流感样病例(influenza like-illness,ILI)咽拭子样本,经MDCK细胞或鸡胚培养分离流感病毒,提取病毒核酸后测序。应用Mega5.0进行病毒HA基因的核苷酸和氨基酸变异分析,采用maximum likelihood方法构建HA基因的遗传进化树,在线预测N-糖基化位点。SWISS-MODEL同源建模,建立BV毒株HA的蛋白质三维空间模拟图。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验,进行毒株的抗原性分析。结果随机抽取本年度BV分离毒株54株,提取核酸后测序获得HA基因全长序列。与本年度的疫苗组分BV株(B/Austria/1359417/2021)HA基因相比较,这54株均有3个氨基酸序列替换,涉及2个不同的抗原决定簇。遗传进化树分析显示:所有毒株均位于Clade 1A.3a.2分支,与2023—2024年度疫苗组分BV株在同一分支。抗原性分析结果显示:54株均为疫苗组分BV株的类似株。结论2023—2024年流感监测季北京市人群中BV流行毒株以Clade 1A.3a.2进化分支为主要流行株。本监测季BV流行株与疫苗BV组分的抗原匹配性较高。

数字PCR检测HIV-1完整前病毒DNA方法的建立

目的通过数字PCR建立检测HIV-1完整前病毒DNA方法。方法通过培养8E5细胞(含有单拷贝整合HIV-1前病毒的T淋巴细胞系),提取DNA。通过连续稀释DNA,利用数字PCR扩增1倍、5倍、25倍、625倍、3125倍和15625倍稀释的HIV-1Ψ区、env区和真核细胞10号染色体RPP30区,计算线性关系及最低检测浓度。在数字PCR体系中分别加入5μl、3.1μl、2.5μl的DNA,各进行2批次检测,每批次重复检测4次,判断其批内变异系数,同核酸量和不同核酸量的批间变异系数判断稳定性。利用8E5 DNA检测细胞中完整前病毒含量。结果DNA在6个稀释度下,Ψ区、env区和RPP30区线性拟合优度分别是R^(2)≥0.999、R^(2)≥0.993、R^(2)≥0.996。当稀释到3125倍时,Ψ区、env区和RPP30区最低阳性液滴检出3个、2个和2个,检出浓度是2.37拷贝/μl、1.21拷贝/μl和1.58拷贝/μl。DNA的数字PCR重复性实验检测,Ψ区批内变异系数从0.66%到3.43%,同核酸量的批间变异系数分别是3.19%、4.3%和3.45%,不同核酸量的批间变异系数仅4.35%。env区批内变异系数从0.7%到3.2%,同核酸量的批间变异系数分别是3.18%、4.52%和3.4%,不同核酸量的批间变异系数仅4.02%。RPP30区批内变异系数从0.91%到2.91%,同核酸量的批间变异系数分别是3%、4.55%和3.37%,不同核酸量的批间变异系数仅在3.98%。8E5细胞中含缺陷前病毒的比例和含完整前病毒的比例分别是90%和45%。结论利用数字PCR能够检测HIV-1完整前病毒DNA,表现出较强的稳定性,为HIV-1感染者储存库检测提供技术手段。

山东省狂犬病暴露人群监测研究

目的分析2019-2023年山东省狂犬病暴露预防处置门诊暴露人群监测数据,探讨暴露风险因素,为进一步规范暴露后预防处置提供依据。方法基于山东省2019-2023年狂犬病暴露预防处置门诊预防接种信息系统监测信息、人口、空间行政区划等数据,采用SPSS 18.0进行描述性流行病学分析。结果2019-2023年山东省暴露预防处置门诊每年接受暴露后处置人数均在100万以上,并呈逐年上升的趋势。每年5~8月份就诊人数最多。女性就诊者有逐年上升的趋势。15岁以下年龄组就诊者占31.69%~36.86%,且占比逐年增高。Ⅲ级暴露者占53.40%,暴露部位在四肢的占89.81%,1.94%为多部位暴露。致伤动物以犬为主,其次为猫,猫占比逐年上升。就诊者自行处理伤口的比例由32.32%上升至45.46%,门诊处理伤口的占比由76.07%下降至66.24%。首次暴露后全程接种率63.79%,15~29岁年龄组全程接种率低于其他年龄组;Ⅲ级暴露者被动免疫制剂使用率在35.66%。2019-2023年报告8例狂犬病病例死亡,均未进行暴露后处置。结论山东省动物致伤后疑似狂犬病暴露人群的流行特点和暴露风险发生了变化,需关注女性群体、15岁至29岁全程接种率偏低群体、猫致伤群体等,持续开展暴露人群监测,适时调整防控策略。

2010—2023年吉林省水痘-带状疱疹病毒流行株基因特征分析

目的分析2010—2023年吉林省水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)流行株基因型特征。方法收集吉林省2010—2023年VZV散发病例样本78份,选取经荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR,Real-Time PCR)检测后CT<25阳性标本26份,采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增开放阅读框(Open reading framme,ORF)ORF22、ORF38及ORF62,扩增产物测序后根据ORF22的5个单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNPs)位点(37902,38019,38055,38081和38177)和ORF38的1个SNP位点(69424),进行基因分型,根据ORF38的1个位点(69349)及ORF62的3个位点(106262、107252、108111)确定是疫苗株或野毒株。通过序列比对构建系统进化树。结果26份样本序列与Dumas株相比,SNPs(37902,38055,38081和38177)四个分型位点发生突变,与pOka株相同,均属于clade2分支,与Dumas和Baike株相比,26份样本均为野毒株。JL2016-4株在38059位点苏氨酸变为天冬胺酰,JL2021-4株在37933位点精氨酸变为脯氨酸,37935位点天冬氨酸变为酪氨酸,38031位点碱基天冬氨酸变为酪氨酸。JL2023-1株在37933位点精氨酸变为亮氨酸。结论吉林省2010—2023年连续14年均存在VZV流行,主要流行株属于clade2分支,应加强VZV暴发监测,提高VZV疫苗接种的覆盖率。

广东省H1N1pdm亚型流感病毒聚合酶碱性蛋白2变异株基因分析

目的了解广东省甲型H1N1pdm流感病毒聚合酶碱性蛋白2(polymerase basic protein 2,PB2)基因变异株的分子特征,探讨其特异性分子位点,为流感病毒防控提供科学依据。方法采集感染PB2基因变异株的2例病例咽拭子标本进行病毒分离,并挑选23株广东省流感病毒株进行测序分析,利用GISAID提供的参考序列和疫苗株序列对血凝素(hemagglutinin,HA)和PB2基因进行进化分析;开展毒株抗原分析和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)抑制试验;构建PB2蛋白模型,分析聚合酶活性。结果PB2-D701N和PB2-A271S变异株HA基因出现H399N氨基酸位点突变,均属于6B.1A.5a.2a分支;与疫苗株A/Victoria/4897/2022同属大分支不同小分支,均为疫苗类似株。在三维结构中,PB2-D701N和PB2-A271S突变发生电荷改变和亲疏水变化。结论PB2-D701和A271高度保守,PB2突变株尚未成为优势株,但其抗原性与疫苗匹配性高,对NA抑制剂敏感。三维模型推测,PB2-D701N突变可增强病毒的致病力而影响传播能力,PB2-A271S则可能影响流感病毒的聚合酶活性和聚合酶复合物的合成。

非复制型痘苗病毒NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的构建及免疫效果评价

目的对我国非复制型痘苗病毒NTV进行基因改造,以提高其免疫原性。方法通过基于CRISPR-Cas9技术的痘苗病毒同源重组方法,在痘苗病毒F1L基因缺失的同时回插C7L基因,构建NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L。然后将该重组病毒以10^(7) PFU免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISpot方法分别检测修饰株NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的体液免疫和细胞免疫水平,并采用噬斑减少中和实验测定中和抗体水平。结果经PCR和western blot鉴定证明构建的NTV修饰株NTV-ΔF1L-C7L的F1L基因缺失,同时C7L基因回插在该区域,且C7L基因能正常表达,说明重组病毒构建正确。NTV-ΔF1L-C7L免疫小鼠后,ELISA结果表明重组病毒NTV-ΔF1L-C7L诱导产生的IgG抗体水平高于NTV;ELISpot结果亦能够表明该重组病毒能够诱导产生水平更高的IFN-γ;噬斑减少中和实验结果表明,该重组病毒比NTV能够诱导产生水平更高的中和抗体。结论正确构建了NTV基因修饰株NTV-ΔF1L-C7L,相比于NTV,其能诱导更强的体液免疫和细胞免疫,为我国天花或猴痘疫苗的换代产品研发提供参考数据。

HBsAb阳性隐匿性乙型肝炎病毒T细胞及B细胞表位变异分析

目的分析隐匿性乙型肝炎病毒(occult hepatitis B virus,OHBV)PreS-S基因T、B细胞表位变异情况,探讨隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)及HBsAb+OBI发生机制。方法利用巢式聚合酶链反应(nested PCR)扩增OBI样品PreS-S区并测序,确定基因型。生物信息学分析HBsAb+/HBsAb-以及不同基因型OBI毒株PreS-S基因T、B细胞表位变异情况,分析高频T细胞突变表位突变前后与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)亲和力变化以及高频B细胞突变表位突变后抗原特性的改变。结果85份OBI样品成功扩增出PreS-S基因21份,其中HBsAb+OBI_(B) 4份,HBsAb-OBI_(B) 6份,HBsAb+OBI_(C) 6份,HBsAb-OBI_(C) 5份。OBI毒株PreS-S区突变率高于野毒株,差异有显著的统计学意义(OBI_(B) vs.WT B:2.64%:0.66%,P<0.001;OBI_(C) vs.WT_(C):3.67%:1.19%,P<0.001)。OBI毒株蛋白免疫区突变率大于非蛋白免疫区,差异有显著的统计学意义(OBI_(B):3.57%:1.86%,P=0.005;OBI_(C):4.78%:2.65%,P=0.001)。OBI_(C)毒株蛋白免疫区及非蛋白免疫区突变率均大于OBI_(B)毒株,差异无统计学意义(蛋白免疫区:4.78%:3.57%,P=0.107;非蛋白免疫区:2.65%:1.86%,P=0.142)。HBsAb-OBI毒株T、B细胞表位突变率高于HBsAb+OBI毒株,差异无统计学意义(HBsAb-OBI_(B) vs.HBsAb+OBI_(B):4.17∶3.01,P=0.303;HBsAb-OBI_(C) vs.HBsAb+OBI_(C):5.65∶4.26,P=0.207)。4个T细胞表位高频突变(T47A/K、S174N、L175S、V177A)以及3个B细胞表位高频突变(G73S、K122R、I126M/T)的亲和力分析和抗原性分析显示多数T细胞表位突变前后与HLA分子亲和力变化不大,B细胞表位免疫原性变化不明显,某些位点突变后亲水性、表面可及性甚至优于野生毒株。结论OBI毒株PreS-S区突变率显著高于野毒株;OBI毒株蛋白免疫区突变率显著高于非蛋白免疫区;OBI_(C)变异活跃程度大于OBI_(B);各点突变可能在病毒复制过程中随机发生,未发现HBsAb压力或依赖性;PreS-S区关键位点突变或多表位共同突变可能在OBI形成中发挥重要作用。

人偏肺病毒研究论文的文献计量分析

目的探讨基于检索Web of Science数据库对人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)的相关研究论文进行论文数据分析的可行性。方法本文采用论文计量学分析方法,以"metapneumovirus"为检索词检索论文,检索Web of Science数据库中2001—2023年发表的HMPV论文。统计学分析HMPV发表论文的年份、国家、期刊、研究机构、作者等的分布情况,了解HMPV在国际上的研究现状及其发展趋势。结果共检索到3282篇论文,97%的论文是英文论文。HMPV于2001年首次报道,之后,研究论文逐年增多。发表论文量最多的是美国,中国、英国、法国、荷兰分别排第2、3、4、5位。病毒学(virology-general)领域的论文最多。在研究机构分布上,美国范德比尔特大学发表了135篇,位列第1。发表论文最多的期刊的是JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY,共143篇。美国范德比尔特大学的作者Williams JV发表了92篇论文,提示了其在HMPV研究领域较高的国际地位。结论HMPV相关论文中,欧美国家的研究机构、大学发表的文章为主。

学龄前儿童呼吸道合胞病毒感染的流行病学特征及引起重症肺炎的危险因素

目的描述学龄前儿童呼吸道合胞病毒(RSV)感染的流行病学特征,并探讨引起重症肺炎的危险因素。方法调查279例RSV感染学龄前患儿的流行病学资料,对重症肺炎予以筛查并分成普通型和重型。比较两组一般资料、实验室检测资料,并通过二分类Logistic回归模型分析确定重症肺炎的危险因素。结果学龄前RSV感染患儿以男性(63.08%)、<6月龄(65.95%)、居住环境差(53.05%)居多,主要症状为咳嗽(占91.04%)、喘息(占69.18%),肺部听诊以哮鸣音(86.74%)为主,影像学表现以斑片状阴影(76.34%)为主,发病季节集中于秋季(31.18%)、冬季(43.37%)。279例患儿重症肺炎检出率为20.27%(56/279)。重型发病季节为秋冬季、低出生体重儿、3个月内有呼吸道感染史、延迟治疗、NEUT<10×10^(9)/L、CRP≥10 mg/L、PCT≥1.5ng/mL、白蛋白<30 g/L、CD4^(+)/CD8^(+)<1.2的患儿比例高于普通型(P<0.05)。Logistic回归分析显示,发病季节为秋冬季(OR=2.316,95%CI:1.235~4.345)、低出生体重儿(OR=2.679,95%CI:1.442~4.977)、3个月内有呼吸道感染史(OR=2.815,95%CI:1.539~5.148)、延迟治疗(OR=2.869,95%CI:1.581~5.206)、白蛋白<30 g/L(OR=2.756,95%CI:1.495~5.080)和CD4^(+)/CD8^(+)<1.2(OR=3.016,95%CI:1.695~5.366)为学龄前儿童发生重症RSV肺炎的危险因素(P<0.05)。结论秋冬季、低出生体重儿、3个月内有呼吸道感染史、延迟治疗、低白蛋白和低CD4^(+)/CD8^(+)和学龄前儿童发生重症RSV肺炎有关,故需对具有上述危险因素的学龄前RSV感染患儿加强病情关注,针对可控性因素予以积极干预,以降低重症肺炎发生风险。

2022-2024年盐城市甲型H3N2流感病毒HA1和NA基因分子特征

目的研究2022-2024年盐城市分离的甲型H3N2流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)分子进化特征。方法收集盐城市2022年4月至2024年3月间的流感哨点监测医院以及各县市区流感暴发点采集的流感样病例标本,Rt-qPCR进行核酸检测,阳性样本进行病毒分离。分离的甲型H3N2毒株,采用一步RT-PCR方法扩增HA1和NA基因并测序,采用相关生物信息学软件分析基因核苷酸、氨基酸位点变异及进化特征。结果2022年4月至2024年3月间共采集5020份样本,流感病毒核酸阳性检出率为18.59%(933/5020)。2022年4月至2024年3月两个监测季冬春季流感峰明显,其中,仅2022年4月-2023年3月监测季夏季流感峰明显,甲型H3N2亚型流感病毒是两个监测季的优势流行株。遗传进化树显示:2022-2024年盐城市32株甲型H3N2毒株HA1和NA基因在各分支的聚类关系基本一致,2023-2024年24株分离株的HA1基因和NA基因与2022-2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.2a.3a.1进化谱系;2022年8株分离株与2021-2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)聚类位于3C.2a1b.2a.1a进化谱系。6株分离株(A/JSTH/11735/2023、A/JSTH/11788/2023、A/JSTH/11974/2023、A/JSYD/353/2023、A/JSYD/354/2023、A/JSTH/138/2023)均发生F79L、N122D、P239S、K276E氨基酸位点的变异,既存在于散发株又存在于暴发株。盐城市甲型H3N2毒株HA1基因编码区抗原表位、受体结合位点、糖基化位点发生了一定程度变异,基因层面上分析,2023-2024年24株分离株与2022-2024年北半球疫苗株A/Darwin/9/2021免疫原性匹配性较好,2022年8株分离株与2021-2022年北半球疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020免疫原性匹配性较好。盐城市分离株未发生NA蛋白酶活性位点以及耐药位点的变化。结论2022-2024年盐城市流行的甲型H3N2毒株HA1和NA基因正逐渐发生抗原性漂移,增加推荐疫苗株的不匹配度,造成流感的暴发流行。2022年盐城市分离株相对于疫苗株A/Darwin/9/2021(H3N2)已发生实质性抗原漂移。需要对甲型H3N2流感病毒进行动态监测及时发现变异株。

济宁地区3~5岁就诊腹泻患儿轮状病毒感染流行特征及危险因素

目的分析济宁地区3~5岁就诊腹泻患儿轮状病毒感染流行特征及危险因素。方法收集2022年9月至2023年9月济宁地区医院698例3~5岁就诊腹泻患儿流行病学资料,同时采集粪便标本进行实验室检查,分析轮状病毒感染的流行特征,并采用Logistic回归分析腹泻患儿轮状病毒感染的危险因素,基于决策树建立腹泻患儿轮状病毒感染的预测模型,采用受试者工作特征(ROC)曲线验证模型的预测性能。结果济宁地区3~5岁就诊腹泻患儿轮状病毒抗原检测阳性302份,阳性率43.27%(302/698)。不同性别的轮状病毒感染阳性率比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.862,P=0.172);轮状病毒感染阳性率随年龄增长呈降低趋势(χ^(2)=28.893,P<0.001);不同月份的轮状病毒感染阳性率比较差异有统计学意义(χ^(2)=241.607,P<0.001),呈明显季节性特点,高发月份为当年10月至次年3月,最高为12月份,最低为7月份。轮状病毒基因分型:G基因型分型结果显示以G9最常见,P基因型分型结果显示以P[8]最常见,G/P组合基因型分型结果显示以G9P[8]最常见。多因素Logistic回归分析结果显示:有吮指习惯(OR=4.193,P=0.018)、无接种轮状病毒疫苗(OR=1.947,P=0.002)、喂食前否清洁双手(OR=4.719,P=0.007)、轮状病毒感染患儿接触史(OR=4.976,P=0.001)是济宁地区3~5岁就诊腹泻患儿感染轮状病毒的独立危险因素。决策树模型灵敏度58.94%、特异度87.12%,AUC为0.814,说明筛选出的4个危险因素可较好的预测轮状病毒感染。结论济宁地区3~5岁就诊腹泻患儿轮状病毒感染阳性率较高,呈明显年龄、时间流行特征,基因型分布以G9、P[8]、G9P[8]为主,轮状病毒感染与有吮指习惯、无接种轮状病毒疫苗、喂食前否清洁双手、轮状病毒感染患儿接触史有关。

重组病毒蛋白纳米颗粒治疗肺腺癌作用

目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙肝核心蛋白(hepatitis B core protein,HBc)的主要免疫显性区域(Major Immunodominant region,MIR),利用大肠杆菌进行表达纯化后,得到重组蛋白纳米颗粒HBc-HER2。将此重组蛋白纳米颗粒免疫小鼠肺腺癌皮下瘤模型,通过检测其血清中HER-2抗体水平及抗体型别,评价此纳米颗粒免疫原性。通过小鼠皮下瘤大小变化评价肿瘤治疗效果。结果得到了纯度较高的HBc-HER2重组蛋白,且电镜观察显示其形成了HBc-HER2纳米颗粒,动物实验表明免疫原性强,能够诱导机体产生高滴度的针对HER-2的抗体,并有良好的肿瘤治疗作用。结论基因重组的HBc-HER2在小鼠肺腺癌皮下瘤模型中有明显的抑制肿瘤作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供了依据。

中国消除人间狂犬病的前景

2007年以来,中国每年狂犬病发病人数持续下降,中国已经进入消除人间狂犬病的攻坚阶段。中国将控制犬间狂犬病作为人间狂犬病防控的首要工作,实施监测围堵策略,同时着力提高狂犬病暴露后预防处置(post-exposure prophylaxis,PEP)的规范化水平。中国狂犬病免疫制剂的产能充足,为狂犬病防控提供了良好的生物制品保障条件。然而,中国犬只管理问题突出,不仅影响犬只免疫工作,也使得犬伤数量居高不下,导致人狂犬病PEP花费巨大。中国在开发更加廉价而高效的狂犬病疫苗方面相对滞后,而这类疫苗有助于更多狂犬病暴露者获得PEP。在中国的狂犬病防控工作中不存在无法克服的技术障碍,中国实现2030年消除人间狂犬病的前景是可期的。

淮安市H3N2亚型流感病毒全基因组序列的遗传特征分析

目的了解江苏省淮安市H3N2亚型流感病毒的生物学特性和变异情况,为流感疫情防控与疫苗研发提供参考依据。方法选取4株2022年淮安市流感监测网络实验室分离的流感毒株,通过全基因组核酸提取、文库构建,应用Nanopore三代测序平台对H3N2亚型毒株进行全基因组序列测定,利用生物信息学软件比对基因组序列相似性、构建系统发育树,解析氨基酸变异特征。结果8个基因节段之间的核苷酸相似性为97.1%~100.0%,相似性差异最大的是HA基因(97.1%~99.9%),差异最小的是MP基因(98.6%~99.9%)。核苷酸位点变异频率最高和最低的节段分别是HA基因(3.06%)和MP基因(1.43%),不同基因节段核苷酸变异率有统计学意义(χ^(2)=14.293,P=0.046)。HA和NA基因发育树拓扑结构基本一致,3株隶属3C.2a1b.2a.1a进化簇,1株独立属于3C.2a1b.1b进化分支且糖基化位点相较于另外3株在HA1蛋白142NWT、149NGT和NA蛋白436NLS位点发生丢失。4株淮安株均对NA抑制剂和金刚烷胺类药物敏感。结论1株淮安株抗原性发生了改变,与当年疫苗株匹配性较低,建议持续加强H3N2流感病毒的基因监测,为流感防控及流感疫苗筛选提供科学依据。

桂林市2019-2023年HIV/AIDS患者抗病毒治疗失败后耐药情况分析

目的探究桂林市HIV/AIDS患者在抗病毒治疗(antiretroviral treatment,ART)失败后HIV-1耐药情况。方法采集桂林市2019年1月至2023年12月接受ART时间≥1年且HIV病毒载量≥1000拷贝/ml的患者血浆样本,同时收集其人口学信息,进行HIV-1基因型亚型分析和耐药检测,以确定耐药突变位点及毒株对药物的敏感性。结果共收集ART失败并成功扩增的患者样本766例,其中男性536例(69.97%,536/766),平均年龄为54岁;共检出8种HIV-1亚型,其中以CRF01_AE(80.55%,617/766)、CRF07_BC(11.10%,85/766)和CRF08_BC(6.92%,53/766)为主。耐药分析结果显示,HIV-1耐药率为34.86%(267/766),对核苷类反转录酶抑制剂(nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NRTIs)、非核苷类反转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)和蛋白酶抑制剂(protease inhibitors,PIs)的耐药均有发生,其中以NRTIs/NNRTIs双重耐药(48.31%,129/267)和NNRTIs耐药(43.07%,115/267)为主。共检测到37个耐药突变位点,14个NRTIs相关的突变位点主要包括M184V/I(47.57%,127/267)、K65R(18.73%,50/267)、K70E/N/T/G/R(13.11%,35/267)等;18个NNRTIs相关的突变位点主要包括K103N/R(56.93%,152/267)、V179D/E/T(21.72%,58/267)、G190C/S/Q(17.23%,46/267)和V106I/M(16.85%,45/267)等;5个PIs相关的突变位点以L10V/I突变率最高(3.00%,8/267)。4种NRTIs相关、3种NNRTIs相关和1种PIs相关的耐药突变位点在不同亚型的流行率存在显著差异(P<0.05)。结论桂林市HIV/AIDS患者抗病毒治疗效果良好,耐药发生率总体较低,但未来仍需加强监测,减少耐药株的传播。

乙肝病毒感染者HBV基因突变与疾病进展的关系研究

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者在不同疾病进展阶段的HBV全基因序列以及关键位点突变情况, 了解HBV基因特征与疾病进展的关系。方法收集无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者以及原发性肝细胞癌患者四种乙肝感染者的血清样本和基本信息, 采用巢式PCR法扩增样本获得HBV全基因序列, 构建系统发育树确定样本基因型别, 结合各型别参考序列分析样本的基因突变情况。结果成功扩增256份样本, 包括无症状HBV携带组68例、CHB组118例、LC组15例和HCC组55例, 检出B、C、D、I和C/D重组型5种基因型。结果发现有56个核苷酸位点突变率在四组之间有统计学差异(P<0.05);除发现C105T、A1762T/G1764A、G1899A等一些既往报导的关键位点突变以外, 还发现HCC组的T791A、C1485T、C1023T等位点突变率显著高于其他组;无症状HBV携带组的T2150G、T2151C显著高于其他组;发生缺失突变的序列共计24条, 分布在前S区和前C区, HCC组的缺失突变率显著高于其他组。结论本研究发现T791A、C1485T、C1023T等核苷酸位点置换突变可能与HBV疾病进展密切相关, HCC患者较非HCC患者更容易发生HBV基因缺失, 研究结果为了解病毒变异与HBV感染相关疾病进展的关系提供参考。

重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。