我国鸭疫里默氏杆菌血清型调查及新血清型的发现和病原特性

从全国 2 9个省 (市、自治区 )不同代次 (原种、祖代、父母代和商品代 )的 5～ 90日龄患有典型鸭传染性浆膜炎的病死鸭分离到 184 2株鸭疫里默氏杆菌 ,血清型分布为 1(6 38株 )、2 (36 7株 )、3(10 2株 )、4 (14 6株 )、5 (89株 )、6 (4 9株 )、7(87株 )、8(6 8株 )、10 (4 3株 )、11(35株 )、13(5 6株 )、14 (6 1株 ) ,另有 10 1株不属于 1～ 2 1血清型 ,而分属于 4个相同的抗原型 ,被命名为 2 2 (2 1株 )、2 3(18株 )、2 4 (34株 )和 2 5 (2 8株 )血清型。

致麻鸭产蛋下降的副粘病毒的分离和鉴定

从浙江省某麻鸭养殖基地产蛋锐减的病鸭生殖器官分离到1株致产蛋下降、不致鸭死亡的病毒株(YH99V)。该病毒易感蛋鸭,经SPF鸡胚传至第9代时致病性突然增强,第11代出现对鸡红细胞的血凝特性,通常在42～80h致死SPF鸡胚,EF15EID50为10-4.8。经磷钨酸负染电镜观察,YH99V粒子呈现圆形、杆状形、葫芦状形等多形态,直径70～400nm不等,病毒外表有囊膜,囊膜外层有排列整齐的纤突。病毒粒子和包涵体位于细胞浆内。病毒抵抗力由弱到强依次为0.2%甲醛、24h→56℃、45min→紫外线、1h→乙醚≈氯仿≈37℃、16h→pH9→pH5→1%Try。对人眼结膜易感,鸭眼结膜不易感。接种传代细胞BHK-21、IBRS-2均能引起细胞病变。YH99V株与同样引起鸭产蛋下降的AIV、鸭源EDSV无抗原相关性,而能被禽副粘病毒型阳性血清中和。根据试验结果,初步将YH99V判定为鸭副粘病毒。

猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化及其品种和性别特点

4种肌球蛋白重链的异构体 (My HC 、My HC2 a、My HC2 x、My HC2 b)分别特征性地对应 4种不同类型的肌纤维( 、2 a、2 x和 2 b)。选用生长速度快 ,但肉质较差的瘦肉型猪大白猪和生长速度慢 ,但肉质较好的肥胖型猪二花脸作为实验动物 ,采用相对定量 RT- PCR方法 ,测定了背最长肌中 、2 a、2 x和 2 b4种 My HC m RNA基因的表达 ,以探讨二花脸猪和大白猪背最长肌中 、2 a、2 x和 2 b 4种肌纤维类型比例的发育性变化 ,并分析了其品种和性别特点。结果表明 :(1) 3日龄 My HC 型和 2 a型肌纤维的比例较高 ,2 b型几乎没有分化 ;(2 )从 3日龄到 2 0日龄 ,肌纤维组成发生了急剧的变化 ,My HC 型和 2 a型表达下调 ,比例下降 ,2 b型肌纤维显著上升 (P<0 .0 5 ) ,且品种间无显著差异 ;(3) 90日龄以后 ,二花脸公猪背最长肌中 My HC 型和 2 a型的比例均显著高于大白猪 ,同时 ,大白猪背最长肌中酵解型肌纤维 2 b的比例增加迅速 ,显著地高于二花脸 (P<0 .0 5 ) ;(4)性别间比较 ,My HC 型纤维的比例无显著差异 ,90日龄和180日龄 ,二花脸母猪的 My HC2 b的比例显著高于二花脸公猪 (P<0 .0 5 )。以上结果提示 ,大白猪和二花脸猪背最长肌肌纤维类型的差异主要表现在 90日龄后 ,大白猪 型纤维比例的显著下降和 2

阉牛不同日粮的纤维消化、瘤胃内VFA对甲烷产生量的影响

装有瘤胃和真胃瘘管的成年阉牛４头，体重（５００±５０）ｋｇ，采用４×４完全拉丁方试验设计，在呼吸代谢室内就不同日粮的纤维消化、瘤胃内ＶＦＡ对甲烷产生量的影响进行了研究。结果表明：（１）可消化中性洗涤纤维（ＤＮＤＦ）和可消化酸性洗涤纤维（ＤＡＤＦ）的甲烷产生量，在不同加工细度羊草之间（７．５ｍｍ，１５ｍｍ，３５ｍｍ和长草）无显著差异（Ｐ＞０．０５）。（２）不同精粗比日粮（０∶１００，２５∶７５，５０∶５０，７５∶２５）的ＮＤＦ或ＡＤＦ降解量（ｋｇ／ｄ）与甲烷产生量呈较高的线性正相关（ｒ＝０．８６８９或ｒ＝０．９７７５），乙酸、丙酸、乙酸＋丙酸产量（ｍｏｌ／ｄ）以及乙酸／丙酸与ＣＨ４产生量（Ｌ／ｄ）之间均存在较高的线性相关（ｒ依次为０．９６９１，－０．９６８３，０．９７８９，０．８８３３）。

抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响

用编码抑制素 α(1～ 32 )的基因与 pc DNA3.1真核表达质粒进行重组 ,构建抑制素基因疫苗 p INH。将 30只 2周龄 ICR小鼠随机分为 3组 (每组 10只 ) ,试验 、 组分别经脂质体介导肌肉注射 p INH 15μg(10 0μL )、2 5μg(10 0μL) ,对照组注射免疫空载体 pc DNA3.115 μg(10 0 μL)。首次免疫后间隔 3周加强免疫 1次。小鼠经 p INH基因免疫后 ,用 EL ISA可从血浆中检测到抑制素抗体 ,表明 p INH可在活体肌细胞内表达 ,表达产物具有抑制素抗原性 ,能激活免疫系统产生抑制素抗体。抑制素抗体 P/ N>2视为阳性 ,阳性率为 30 % (6 / 2 0 )。抑制素抗体阳性小鼠与阴性小鼠的产仔数、初生重和窝重等没有显著差异 (P>0 .0 5 )。抗体阳性组首次免疫后 ,雌鼠血浆 FSH浓度略有升高 ,经过加强免疫后显著升高 (P<0 .0 5 )。由此可以看出 ,抑制素基因免疫可以诱导产生抗抑制素抗体 。

外源性谷氨酰胺和谷氨酸对早期断奶仔猪肠粘膜形态、结构和小肠吸收功能及骨骼肌中DNA、RNA浓度的影响

74头 2 8日龄健康二元杂交断奶仔猪分成 3组 ,用于研究外源性谷氨酰胺 (glutam ine,Gln)和谷氨酸 (glutamate,Glu)对断奶仔猪小肠粘膜形态、结构和功能及骨骼肌中 DNA、RNA合成的影响。结果表明 :与对照组相比 ,添加 1%谷氨酰胺或 1%谷氨酸可防止断奶后 1周内空肠绒毛萎缩 ,减少断奶后 2周内空肠固有膜内未成熟细胞数 ;显著改善断奶后 1周内小肠吸收功能 ,并促进肌肉中 RNA合成。这些结果为利用 Gln、Glu缓解仔猪断奶应激 ,改善生产性能提供了实验基础。

规模化猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流行病学调查

为了调查猪致病性大肠杆菌的耐药性及流行血清型 ,从湖北、河南、江西、安徽、浙江等省的 33个猪场采集 32 1份仔猪黄、白痢病料进行细菌的分离和生化鉴定 ,结果分离到大肠杆菌 30 2株 ,其中致病性大肠杆菌 2 76株。对 112株致病性大肠杆菌进行了 15种抗生素敏感性试验 ,发现分离菌株对 15种药物均有不同程度的耐药性 :青霉素 G对其完全没有抑制作用 ;先锋霉素 抑制作用最强 (97.3% ) ,其次为呋喃妥因 (78.6 % )、痢特灵 (71.4 % )、环丙沙星(6 8.8% )、诺氟沙星 (6 5 .1% )。 112株菌中 ,有 4 7种耐药谱型 ,多数为 6耐以上的菌株 (80株 ) ,占供试菌株的 71.4 %。应用微量平板凝集试验 ,对分离的 2 76株致病菌进行了血清型鉴定 ,鉴定共有 72种血清型 ,其中优势血清型 10种 ,占能定型分离致病菌株的 5 3.7%。

猪圆环病毒2型感染的血清学分析

应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 0 % ,全省猪的 PCV2感染的平均血清阳性率为 5 8.31% ,其中种猪感染的血清阳性率为 5 9.38% ,断奶后猪感染的血清阳性率为 5 6 .6 5 %。长白种猪感染的血清阳性率为 4 4 .83%、长白仔猪感染的血清阳性率为 6 4 .2 8% ,明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。 PCV2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群 ,其 PRRSV和 Pr V的抗体阳性率低。这些结果说明 ,PCV2在猪群中的感染非常普遍 ,不同品种猪对 PCV2的易感性不同 。

鸭瘟病毒弱毒株在免疫雏鸭体内的分布和排毒规律

鸭瘟病毒(DPV)弱毒Cha株经皮下、口服和滴鼻3种途径免疫1日龄雏鸭,应用聚合酶链反应(PCR)检测了病毒在体内分布和排毒规律。Cha株免疫雏鸭后,对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果如下(1)皮下接种雏鸭后4h,即可在心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑共10种组织中检出DPV的DNA;8h后,所有采取的组织器官均可检测到DPV的DNA。(2)口服接种雏鸭后4h,可在舌和食道中检测到DPV的DNA;8h后,可在心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共12种组织器官中检出DPV的DNA。(3)滴鼻接种雏鸭后4h,未能在各种组织中检出DPV的DNA;8h后,可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共11种组织中检测到DPV的DNA。(4)在3种免疫途径中,检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏、脑(大脑、小脑和延脑);3种途径免疫的鸭,从免疫后12h至21d均能从所有采集的组织中检测出DPVDNA。

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 CSFV反转录后的 c DNA模板进行多重 PCR扩增和多重 PCR反应条件的优化 ,结果同时得到 3条与试验设计相符的 2 88bp( CSFV)、5 75 bp( PPV)和 70 0 bp( PRV)特异性条带 ;敏感性检测结果表明 ,该多重 PCR可以检测到 14 .5 ng/ L 的 CSFV、2 7.1pg/ L 的 PPV、31.4 ng/ L 的

致仔猪水肿病大肠杆菌的分离、鉴定及生物学特性

从不同省份发生水肿病的仔猪的脏器中分离到 7株细菌 ,通过菌体形态、菌落形态、革兰氏染色特性、生化特性、血清型等一系列的鉴定 ,确认为大肠埃希氏菌。动物致病性试验表明 ,该菌对小鼠有较强的致病性 ,可引起小鼠死亡。肉汤培养物无菌滤液能致死小鼠且剖检见相关脏器水肿 ,引起 Vero细胞死亡。对主要毒力基因 SL T- Ile及 F18进行扩增 ,SL T- Ile全部阳性 ,5株 F18为阳性 ,对 L T1及 ST1扩增则全为阴性。药敏试验证明 ,各菌株的耐药谱不同。各菌株攻毒于断奶仔猪 。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对 2 0日龄 SPF猪和 2 0日龄猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS)血清阳性猪 ,人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒 ( PRRSV)北京分离株 ( BJ-4 )后 4 8h接种猪瘟疫苗 ,利用 ELISA方法检测仔猪针对 PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫 ,利用 MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原 Con A的刺激反应。结果表明 ,不论是SPF仔猪还是带有 PRRSV抗体的仔猪 ,在鼻内接种 PRRSV后 4 8h接种猪瘟疫苗 ,其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组 ,对有丝分裂原 Con A的刺激反应也下降。由此说明 。

传染性法氏囊病病料中MDV、CAV、REV的共感染检测

从江苏、山东、浙江、河南、上海、广西、云南等地收集根据临床表现及病理变化诊断为传染性法氏囊病( IBD)的病鸡法氏囊样品 66份 ,用相应的核酸探针及斑点杂交法分别检测样品中鸡传染性贫血病病毒( CAV)、马立克氏病病毒 ( MDV)、网状内皮细胞增生病病毒 ( REV)的感染 ;用抗 IBD血清做琼扩检测 IB-DV。结果显示 ,部分地区病料中这些病毒有不同程度的二重感染、三重感染甚至四重感染。提示在研究特定毒株 IBDV的毒力时 ,应考虑多重感染对致病性的影响。

猪链球菌2型的PCR快速检测

根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。

猪MyoG基因的PCR-RFLP分型及其与生长性能和肌纤维数目的相关性分析

对33头申农号猪MyoG基因进行PCR-RFLP分型,结果发现3种基因型(MM,MN和NN)。M基因频率为51.5%,N基因频率为48.5%。对不同基因型猪初生重和断奶重分析发现,NN型猪初生重显著高于其他基因型猪(P<0.05),但断奶重差异不显著。根据不同基因型共屠宰12头申农号猪,取半腱肌、半膜肌和股二头肌做冰冻切片,HE染色,并计算肌纤维数目,结果表明,不同基因型猪间半腱肌和半膜肌肌纤维密度差异显著(P<0.05),其中NN型肌纤维密度高于其他基因型。

猪精液冷冻技术的研究

以解冻后的精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和人工授精结果为判定指标 ,比较了几种冷冻稀释液、解冻液及冷冻 -解冻程序对猪精液冷冻的效果 ,并对所筛选出的最佳稀释液和冷冻程序做了改进。结果如下 :(1) 号稀释液冷冻解冻后的精子活力 (32 .4± 7.3) %、活率 (4 2 .2± 3.2 ) %、顶体完整率 (6 2 .3± 0 .8) %和弯尾率 (4 2 .6± 7.5 ) %均显著高于 、 、 号稀释液 (P<0 .0 5 )。 (2 )在 号稀释液中添加 0 .5 %、1%和 2 %的 O.E.P(氨基 -钠 -十二烷硫酸酯 )使精子活率提高 5 %、弯尾率提高 6 %、顶体完整率提高近 10 % ,与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 )。 (3)应用改进的稀释液 ( 液加 1% O.E.P) ,细管法比颗粒法冷冻精子活率提高近 7个百分点 ,活力提高 6个百分点 (P<0 .0 5 )。(4 )室温预平衡 4h的精子活力和活率都比对照组 (0 h)有显著提高 (P<0 .0 5 ) ,而预平衡 2、6 h的精子活力和活率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 )。 (5 ) 号解冻液解冻后精子活力 (4 2 .9± 2 .6 ) %显著高于 、 、 号解冻液 (P<0 .0 5 )。 (6 )用 5 0℃水浴解冻精子的活力 (4 6 .3± 2 .6 ) %显著高于 39℃ (4 2 .9± 2 .6 ) %和 70℃水浴 (4 1.1± 5 .7) %解冻的精子活力 (P<0 .0 5 )。 (7)精清和 号解冻液?

3种非猪瘟病毒单独或混合感染对猪瘟弱毒疫苗免疫效力的影响

将 2 0头 9月龄左右猪瘟、伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征抗原、抗体阴性猪分成 6组 ,分别利用猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒 (PRV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 (PRRSV)单独或混合感染。 7d后连同对照猪 4头 ,免疫接种猪瘟兔化弱毒疫苗 (HCL V) ,13d后连同 4头阴性对照猪一起攻击猪瘟石门强毒。整个试验期间分别每天测温 ,观察临床症状 ,每周采集扁桃体和血样做各种病毒抗原及抗体检测。结果表明 ,非猪瘟病毒感染 7d后 ,所有各组猪均从体内检测到了相应感染的病原 ,表明 3种非猪瘟病毒感染成功。在攻击猪瘟石门强毒后 2周 ,感染了非猪瘟病毒后接种 HCL V疫苗的 4个免疫组 12头猪除 1头外 ,11头全为猪瘟病毒 (HCV)抗原检测阳性 ,且多呈强阳性 ;而单一 HCL V疫苗免疫组在猪瘟强毒攻击后检测不到 HCV;所有 HCL V疫苗免疫猪均存活 ,而非免疫对照组 4头猪全部在攻毒 16 d内死亡。

益生素和低聚木糖对断奶仔猪生产性能、消化酶活性、血液指标和肠道微生物的影响

选用(21±2)日龄体质量为(6.83±0.9)kg的PIC断奶仔猪240头,随机分为4个处理,正对照组(positivediet,PD)含有较多的鱼粉和乳清粉;负对照组(negative diet,ND)含有较少的鱼粉和乳清粉,较多的豆粕;负对照+0.035%益生素(negative diet+probiotics,ND+P);负对照+0.002%低聚木糖(negative diet+xylo-oligosaccha-ride,ND+X)。饲喂至65日龄屠宰。结果显示,在断奶仔猪日粮中乳清粉和鱼粉从5.50%降低到2.50%,豆粕从22.50%增加到26.50%可导致仔猪消化道酶活性、血糖和血清总蛋白水平、盲肠乳酸杆菌数量降低(P<0.05),血清尿素氮、盲肠大肠杆菌数量、仔猪腹泻指数和料重比增加(P<0.05)。添加益生素和低聚木糖可以提高仔猪消化道蛋白质、脂肪和淀粉消化酶活性(P<0.05),降低料重比(P<0.05);提高血糖,降低血清尿素氮水平(P<0.05),改善蛋白质平衡和能量代谢;提高盲肠乳酸杆菌数量,减少大肠杆菌数量(P<0.05),降低仔猪的腹泻指数(P<0.05)。添加益生素和低聚木糖与否,均不影响日增重和采食量(P>0.05)。益生素和低聚木糖可以改善断奶仔猪的消化功能、后消化道有益菌群、饲料转化效率,防治仔猪腹泻。

应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠孤病毒

参考 Gen Bank中番鸭呼肠孤病毒 (m uscovy duck reovirus,MDRV ) S1基因序列 ,用计算机设计并合成了 1对引物 HP11、HP12 ,以此引物用 RT- PCR对番鸭呼肠孤病毒 S1基因进行了特异性扩增。结果表明 :引物 HP11、HP12能从所有供试的 4株分离毒 MDRV- MW9710、MW980 6、MW980 9、MW9810扩增出 30 0 bp S1基因 c DNA片段 ,而不能从禽呼肠孤病毒 (ARV) S1133株和番鸭胚成纤维 (MDEF)细胞培养物中扩增出任何片段 ;该 RT- PCR的检测灵敏度为 1pg的病毒核酸 ,特异性强 ,重复性好 ,对含毒细胞培养液和尿囊液只需用氯仿进行简单处理 ,即能检测出 MDRV核酸。因此认为 ,该 RT-