精氨酸加压素、神经降压素和强啡肽对神经母细胞瘤细胞cAMP和cGMP的影响

本文报道小鼠神经母细胞瘤细胞在无血清培养条件下,用cAMP和cGMP放射免疫测定方法,观察AVP、NT和DYN对小鼠神经母细胞瘤细胞内cAMP和cGMP水平及cAMP/cGMP比值的影响。结果发现:AVP使cAMP水平和cAMP/cGMP比值显著升高(P<0.01);DYN使cGMP水平升高(P<0.01),但cAMP/cGMP比值下降;NT使cAMP水平和cAMP/cGMP比值下降,同时又使cGMP水平升高。结果提示:这三种神经肽可以分别对神经母细胞瘤细胞内cAMP、cGMP水平和cAMP/cGMP比值产生影响。

氯化镨在小鼠肝脏细胞中形成含镨致密体

本实验给小鼠4次注射氯化镨(总剂量为200mg/kg)后,光镜发现肝细胞呈嗜酸变性或空泡变性,肝细胞与枯否细胞中酸性磷性酶阳性的溶酶体增多。电镜观察到肝细胞出现程度不同的核变形、内质网扩张、糖原缺乏、溶酶体含较多高电子密度微粒。肝细胞与枯否细胞中均出现由高电子密度微粒聚集形成的致密体,应用X射线微区分析术可测到镨特征性能谱峰。

人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的研究进展

人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8是近年来阐明的一种新的细胞因子,本文按照该因子的研究历史综述了有关它的氨基酸 序列测定、cDNA克隆、基因合成与表达及生物学功能等方面的研究概况,并介绍了其基因组序列、细胞受体及构象方面的最新进展。

染色体端粒研究的进展

粒为真核生物染色体的天然末端。它对稳定以及染色体的完全复制有着十分重要的作用。许多种生物的端粒DNA分子结构及其复制机制已被阐明,不少资料显示端粒在细胞中有着特殊的行为,并推测端粒可能参与了染色体的空间组织等核功能。

涎腺腺样囊性癌多种癌基因mRNA的表达

Barbacid等从人膀胱癌细胞株成功地克隆分离出C-ha-ras癌基因的开创性工作使分子生物学和遗传工程学技术开始应用于人类肿瘤研究。细胞癌基因激活和异常表达的研究加深了对细胞癌变的根本原因的认识。有关人癌基因异常表达的报道日渐增多,人们企望从中发现人癌基因异常表达的规律,以指导肿瘤的预防、诊断和治疗。涎腺腺样囊性癌(Salivaryadenoid cyslic carcinoma,SACC)是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤,虽生长缓慢,但有较强的浸润性和转移力。

人破骨细胞的原代培养和生物学特性

维持骨体积是骨吸收与骨形成相对平衡的结果,如失去这种稳定,则发生病理性变化,骨吸收破坏是主要现象之一,但关于骨吸收机理还不清楚。近些年来随着骨细胞培养技术的发展,使人们对骨吸收有了进一步认识,目前公认破骨细胞是骨吸收作用的主要承担者。为此,大多数学者从破骨细胞入手,对破骨细胞的结构和功能等进行研究。目前已从多种动物骨组织中分离出破骨细胞。本实验是通过建立人的破骨细胞分离、培养方法,为进一步开展骨吸收机理的研究奠定基础。

果蝇胚胎背腹图式的早期形成

果蝇卵的背腹极性和胚胎的背腹组织图式依赖于不同的背腹图式基因。在卵细胞发生中,背腹雌性致死基因最早表达,并可能通过生殖细胞和体细胞间的信息交流,使营养细胞和卵泡细胞分别在适当位置围绕卵细胞。雌性致死基因突变体的卵室中,3种细胞的异常分布使卵细胞外壳失去正常背腹极性。并且通过卵细胞内母体效应基因产物在背腹轴上异常分布,使胚胎发育成背方化或腹方化。母体效应基因cac的产物可能与d1蛋白结合,而使d1蛋白在留细胞质内。d1组其它基因产物通过蛋白酶解过程,将d1蛋白从cac复合体中解离,并转移到卵裂核内,形成从腹方到背方的形态发生原浓度梯度。不同浓度的核内d1蛋白能够抑制或激活不同的合子背腹基因的表达。在背腹轴水平上不同区域表达的合子基因产物最后通过调节组织分化基因,而决定局部的囊胚细胞向着不同类型的组织分化,形成正常的背腹组织图式。

Ly-1 B淋巴细胞

Ly-1 B细胞是近年来发现的一种淋巴细胞,它们既带有典型的B淋巴细胞表面抗原,又表达T淋巴细胞抗原——Ly-1分子与普。通B细胞相比,Ly-1 B细胞具有其独特的性质,参与自身抗体的分泌,并与慢性B淋巴细胞白血病的发生有关。本文报道了近年来对Ly-1B细胞的研究进展。

以地戈辛标记反义RNA为探针的组织原位杂交

原位分子杂交是在液相和固相分子杂交基础上发展起来的,从染色体、细胞或整体水平在原位研究特异核酸的分布、数量、表达形态及其同细胞的分化、生理或病理状态、形态特征演化之间关系的分子生物学技术。随着技术的发展,原位杂交不仅被用来研究特定DNA、RNA的细胞内的分布,而且被用来探索被检mRNA相关基因的表达。可以说,原位杂交技术在分子生物学与形态学研究之间架起了一座桥梁。

免疫电镜定位酶的探针——蛋白A胶体金复合物(PA-Au Complexes)的制备和检验

我们以HAuCl_4为原料,用柠檬酸三钠还原方法能制备所需直径大小的金胶体溶液,并成功地制备蛋白A-胶体金复合物(PA-Au Com-plexes),经检验PA-Au复合物具合格性和使用价值,可作为免疫电镜在分子水平上定位酶的探针。用作者自制的纯的CF_1的抗体(AbCF_1)以及我们引进和建立整套制备PA-Au复合物和以PA-Au作为探针的免疫电镜技术,现已开始应用于研究偶联因子(CF_1)在叶绿体类囊体膜上分布,获初步结果;为研究叶绿体类囊体膜上关键酶系的精确分布创造了必要的条件。

荧光原位杂交及其应用

荧光原位杂交(FISH)法是直接从组织或细胞中检测特定DNA或RNA的最有效方法。整个操作过程为:1)制备探针;2)细胞或组织显微镜标本的制作;3)原位分子杂交;4)荧光免疫检测;5)显微镜下观察。其中以1),2)步最为关键。FISH法的最大特点是灵敏度高,并可以进行定量分析。FISH法可应用于染色体上的基因定位,基因表达的检测,病毒感染的检查,特定核酸序列在细胞内的空间分布分析以及核酸复制过程中的定量分析等许多领域的实验中。

中胚层诱导中反应系统的分子生物学研究

中胚层诱导机制的研究大体上应该包括两方面的内容:“诱导”本身的机制,即植物半球细胞是通过怎样的方式诱导动物半球细胞的;目前在这个领域中,主要是对诱导因子的研究。另外是对反应系统的研究,即动物半球细胞受到诱导后,所发生的一系列的变化,还包括对反应能力(competence)的研究等等。第一个方面的内容已在另文中作了较为详细的论述,本文只着重讨论近几年来对反应系统的研究成果。

智能型基因扩增PCR装置在京研制成功

以聚合酶链式反应(PCR)为基础的离体基因扩增技术对基因工程的研究和应用产生了革命性影响。提供自动化的PCR专用仪器则是推广PCR技术的关键。 为解决国产PCR装置的更新换代并替代大量进口,中科院发育生物学所最近完成了以智能化仪表控制系统为核心的干式基因扩增PCR装置,经多种对照引物和模板DNA的PCR实验,获完全成功,即将通过技术鉴定并批量生产。该仪器的研制成功为分子生物学、生物工程、医学和法医学鉴定及考古。

中国细胞生物学学会第五届学术大会纪要

中国细胞生物学学会第五届学术大会由杭州大学及浙江省细胞生物学学会协办,于1992年11月21日至25日在交通部杭州疗养院召开,来自21个省市及香港的222位代表出席了本届大会。 大会开幕式于11月22日上午举行,由中国细胞生物学学会理事长王亚辉教授主持,浙江省政府、人大、政协、科协、科委的有关领导同志和省细胞生物学学会理事会成员应邀出席。李德葆副省长在开幕式上致词,对本届大会在杭州召开表示热烈欢迎。学会秘书长左嘉客教授作了学会会务工作报告。

编者按

生殖健康关系人口安全与民族素质,是实现“健康中国战略”的重要组成部分。目前我国出生人口数量断崖式下跌,主要原因之一是生育力的下降,这与中国日趋严重的不孕不育症有关,其发病率已高达18%,主要由配子发生障碍导致。配子发生是高度复杂的生物学事件,二倍体的原始生殖细胞经由有丝分裂增殖分化、减数分裂和分化形成单倍体的卵或精子;该过程受到精细繁复的分子调控。从基础研究出发,深入解析配子发生的分子机制,揭示人类自然生育的调控机理,并拓展生育力促进前沿技术,对于诊治不孕不育症,实现国家生殖健康和人口发展领域战略目标具有重大意义。

circTHBS1调节miR-135a-5p/RAB1A轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

该文旨在探究环状RNA血栓反应蛋白-1(circTHBS1)调节微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/Rab家族蛋白1A(RAB1A)轴对乳腺癌(BC)细胞恶性生物学行为的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BC细胞系中circTHBS1、miR-135a-5p和RAB1A mRNA的表达情况,筛选最佳细胞系进行后续实验;通过RNase R处理验证circTHBS1的环状结构。将MCF-7细胞分为Control组、sh-NC组、sh-THBS1组、sh-THBS1+inhibitor-NC组和sh-THBS1+miR-135a-5p inhibitor组。采用qRT-PCR检测转染效率;采用双荧光素酶报告基因法确认circTHBS1和miR-135a-5p、miR-135a-5p和RAB1A的相互作用;Western blot法检测RAB1A在MCF-7细胞中的表达情况;采用平板克隆法检测MCF-7细胞增殖情况;使用流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况;划痕实验检测MCF-7细胞迁移情况;Transwell法检测MCF-7细胞侵袭情况;通过裸鼠移植瘤实验检测circTHBS1对瘤组织内BC细胞生长的影响。双荧光素酶报告基因实验结果显示,circTHBS1与miR-135a-5p、RAB1A与miR-135a-5p均具有靶向关系。与正常人乳腺上皮细胞MCF-10A相比,circTHBS1和RAB1A在BC细胞系中表达水平显著增加,miR-135a-5p表达水平显著下降(P<0.05);敲低circTHBS1表达可以抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导MCF-7细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-135a-5p表达可逆转敲低circTHBS1表达对MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用,并抑制MCF-7细胞凋亡(P<0.05);通过裸鼠移植瘤实验发现,敲低circTHBS1表达后,裸鼠BC瘤组织质量和体积下降,同时RAB1A表达量下降,miR-135a-5p表达量升高(P<0.05)。circTHBS1在BC细胞中高表达,敲低circTHBS1可以通过调控miR-135a-5p/RAB1A轴抑制BC细胞的恶性生物学行为。

欧前胡素调节HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路对高糖诱导的视网膜内皮细胞损伤的影响

该研究探讨欧前胡素(IMP)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)-核转录因子κB(NF-κB)信号通路对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤的影响。使用10~320μmol/L的IMP处理高糖诱导的视网膜血管内皮细胞hRECs,筛选最佳药物浓度;将视网膜血管内皮细胞hRECs细胞分为正常糖组(NG组,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol/L葡萄糖)、低浓度欧前胡素组(IMP-L组,25 mmol/L葡萄糖+20μmol/L IMP)、中浓度欧前胡素组(IMP-M组,25 mmol/L葡萄糖+40μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素组(IMP-H组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素+重组HMGB1蛋白组(IMP-H+rHMGB1组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP+200μg/L rHMGB1)。CCK-8试剂盒检测hRECs细胞活性;流式细胞仪检测hRECs细胞凋亡的情况;管腔形成实验检测细胞血管生成;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MDA水平和SOD水平;Western blot检测HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果显示,IMP可以促进高糖诱导的hRECs增殖,且呈浓度依赖性,选择浓度为20、40、80μmol/L的IMP进行后续实验;与NG组比较,HG组细胞存活率、SOD活性降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组比较,IMP-L组、IMP-M组、IMP-H组细胞存活率、SOD活性升高,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);与IMP-H组比较,IMP-H+rHMGB1组细胞存活率、SOD活性显著降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结果表明,IMP可能通过抑制HMGB1-RAGENF-κB信号通路,降低炎症反应和细胞凋亡水平,进而减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤。

天地位焉 万物育焉——怀念我们的老师翟中和院士

风雨故园1930年8月18日,翟中和出生在江苏省溧阳县,与宜兴交界的一个小村庄—八字桥。上世纪30年代,连绵不息的社会动荡下,溧阳也难以逃脱当时中国农村普遍的凋敝情形。8岁的时候母亲因病去世,翟老师从小就体会了生活的艰辛。翟老师7岁开始在村里唯一的学堂接受启蒙教育,学堂是一至三年级的几十个孩子的共用教室。教师也只有一位,负责轮流讲授三个年级所有的课程。特殊的环境,使他从小就养成了自学和独立思考的习惯,这对翟老师今后的发展产生了深远的影响。

外泌体不同制备方法的综合实验教学实践

流式细胞术随着单克隆抗体技术和光电技术的快速发展而日趋多元化和多样化。然而,该技术仍受流式细胞仪检测极限的限制而制约外泌体等细胞外囊泡的分离纯化。该文通过对外泌体样本制备方法的建立和探索,使流式细胞技术理论与实验教学内容更加直观、更易理解和掌握。该方法包括对流式细胞仪配置及实验参数的优化、外泌体的不同制备方法(超速离心、流式细胞分选)、纳米流式分析鉴定、电镜成像鉴定等步骤。通过对该方法的实践操作,使学生充分掌握相关的检测技术和数据分析手段,为流式细胞术在外泌体分选及后续功能研究中提供支撑作用。教学、科研、实践相融合,极大地激发了学生学习实验技能的兴趣和积极性,大大提升了学生实验技能水平以及科研创新能力等科研素养,为新时期全能型科研创新人才的培养提供助力。

苍术素通过调节RhoA/ROCK1信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

该文探讨苍术素(ATR)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响。利用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80、160mg/L)的ATR对T24细胞增殖率的影响,筛选ATR干预浓度。在此基础上将T24细胞分为NC组(正常培养)、L-ATR组(20 mg/L ATR)、M-ATR组(40 mg/L ATR)、H-ATR组(80 mg/L ATR)、H-ATR+血管紧张素II(Ang II)组(80 mg/L ATR+100 nmol/L的RhoA/ROCK1通路激活剂Ang II)。MTT检测、Edu实验检测T24细胞增殖情况;流式细胞术、TUNEL法测定T24细胞凋亡情况;Matrigel基质胶法测定T24细胞血管生成情况;鬼笔环肽染色观察T24细胞骨架;Western blot测定RhoA/ROCK1通路蛋白表达情况。随着ATR浓度的增加,T24细胞增殖率呈ATR剂量依赖性降低(P<0.05),选择ATR浓度为20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L进行后续研究。与NC组对比,L-ATR组、M-ATR组、H-ATR组T24细胞D450值、Edu阳性细胞率及管腔数量均显著降低,凋亡率及F-肌动蛋白荧光强度显著升高,且呈ATR剂量依赖性变化(P<0.05);与H-ATR组对比,HATR+Ang II组T24细胞D450值、Edu阳性细胞率及管腔数量均显著升高,凋亡率及F-肌动蛋白荧光强度显著降低(P<0.05)。与NC组对比,L-ATR组、M-ATR组、H-ATR组T24细胞RhoA、ROCK1蛋白表达水平均显著降低,且呈ATR剂量依赖性变化(P<0.05);与H-ATR组对比,H-ATR+Ang II组T24细胞RhoA、ROCK1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。ATR可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路激活进而抑制T24细胞增殖,影响VM的形成,诱导细胞凋亡。