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滑液囊支原体与鸡传染性支气管炎病毒共感染对SPF鸡的致病性研究 被引量:6
1
作者 王晨燕 邵国青 侯博 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期113-120,共8页
为比较滑液囊支原体(MS)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)共感染对SPF鸡的致病性,本研究将144只28日龄SPF鸡随机均分为阴性对照组、MS感染组、IBV-M41感染组、IBV-M41+MS共感染组、IBV-QX感染组、IBV-QX+MS共感染组共6组,采用50μL/只剂量... 为比较滑液囊支原体(MS)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)共感染对SPF鸡的致病性,本研究将144只28日龄SPF鸡随机均分为阴性对照组、MS感染组、IBV-M41感染组、IBV-M41+MS共感染组、IBV-QX感染组、IBV-QX+MS共感染组共6组,采用50μL/只剂量按相应分组点眼感染MS (106CCU50)、IBV(105EID50),阴性对照组以50μL/只点眼KM2培养基(左眼)和PBS (右眼)。感染后每天观察临床症状,在感染后7 d、14 d、21 d和28 d每组随机剖检6只鸡,观察气囊炎和气囊损伤评分,并采集气管进行病原再分离,其中MS经支原体液体培养基培养后进行PCR鉴定,IBV接种SPF鸡胚后进行RT-PCR鉴定。此外,各组鸡气管均经10%甲醛固定后进行粘膜厚度检测以及病理损伤评分。结果显示:除阴性对照组和MS感染组,其他组鸡在感染后4 d均出现一过性呼吸道症状。剖检结果显示MS感染组鸡在感染后21 d出现气囊炎,28 d仍可见气囊炎;而IBV-M41感染组和IBV-QX感染组鸡在感染后7 d或14 d出现气囊炎,且气囊炎的发生率均未超过50%。感染后14 d IBV-QX+MS共感染组鸡气囊炎发生率达100%(6/6),直至21 d并且大部分鸡气囊炎可持续至感染后28 d (5/6),而IBV-M41+MS共感染组鸡气囊炎仅可持续至感染后21 d,且气囊炎的发生率最高在感染后14 d (5/6)。IBV-QX+MS共感染组鸡平均气囊损伤评分在感染后14 d、21d和28 d均极显著高于单一感染组(P<0.001),而IBV-M41+MS共感染组鸡仅在感染后14 d极显著高于单一感染组(P<0.001)。病原再分离结果显示,各感染组鸡均在气管中再分离到MS(感染后28 d内)或IBV(感染后7 d内)。病理损伤检测结果显示,共感染组鸡较各单一感染组鸡气管粘膜增厚持续时间更长以及病理损伤更为严重。IBV-M41+MS共感染组鸡在感染后14 d平均气管粘膜厚度显著低于IBV-QX+MS共感染组(P<0.05),而在感染后21 d极显著低于IBV-QX+MS共感染组(P<0.001),其余各组鸡在感染后14 d和21 d均极显著低于IBV-QX+MS共感染组鸡(P<0.001)。IBV M41+MS共感染组鸡最早14 d出现气管病变,而IBV QX+MS共感染组鸡在共感染后7 d就可见气管病理损伤,且共感染组鸡的平均气管损伤评分均极显著高于单一MS或IBV感染组(P<0.01或P<0.001)。上述结果证实MS和IBV共感染较单一感染对28日龄SPF鸡的致病性更强,IBV M41或QX株与MS共感染对SPF鸡的致病性存在差异,本研究为临床IB和MS的防控提供科学参考依据。 展开更多
关键词 滑液囊支原体 鸡传染性支气管炎病毒 共感染 致病性
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黄芩苷对多杀性巴氏杆菌感染猪巨噬细胞后炎症因子表达及信号通路影响的研究 被引量:4
2
作者 刘静 周红蕾 +4 位作者 戈文 徐一天 张一多 王丽华 安东 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期78-83,共6页
为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MA... 为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路3个关键蛋白(p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK)的表达水平;采用ELISA和荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)分析检测低浓度剂量黄芩苷(L组,20μmol/L)、中浓度剂量黄芩苷(M组,40μmol/L)和高浓度剂量黄芩苷(H组,60μmol/L)对Pm感染的猪巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β分泌水平及其m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)和模型组(HN-13);利用抑制剂SCH772984阻断ERK通路,采用ELISA和RT-qPCR检测黄岑苷对Pm感染的HD11细胞内炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达及m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)、模型组(HN-13)、抑制组(HN-13+抑制剂)。结果显示:与HN-13株处理0 min组相比,随着感染时间的延长,HN-13株感染HD11细胞中p-ERK/ERK的蛋白表达量逐渐升高(P<0.01),而p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表达量均未发生显著变化(P>0.05),表明,HN-13株可使HD11细胞炎症相关ERK通路蛋白表达增强,且与作用时间呈正相关。与模型组(HN-13)相比,3个浓度剂量的黄芩苷均显著抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平及m RNA转录水平(P<0.05),且抑制作用随着黄芩苷浓度升高而增强。与抑制组相比,黄芩苷与抑制剂共处理组可以显著抑制HN-13感染的HD11细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及m RNA转录水平(P<0.05)。综上所述,黄芩苷可以抑制Pm感染的HD11细胞中ERK通路相关蛋白的表达和分泌,进而发挥抗炎作用。本研究为研制防治Pm引起的猪肺疫的新药提供了思路。 展开更多
关键词 黄芩苷 多杀性巴氏杆菌 猪巨噬细胞 炎症表达 MAPK信号通路
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羊肠道病毒研究进展 被引量:6
3
作者 王瑶 阿比克哈莫 杨发龙 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期432-436,446,共6页
肠道病毒(Enterovirus,EV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员。肠道病毒属包括EV-A~EV-L 12个肠道病毒种和RV-A~RV-C 3个鼻病毒种(Rhinovirus)。其中EV-A~EV-D主要感染人类,EV-E和EV-F主要感染牛,EV-G主要感... 肠道病毒(Enterovirus,EV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员。肠道病毒属包括EV-A~EV-L 12个肠道病毒种和RV-A~RV-C 3个鼻病毒种(Rhinovirus)。其中EV-A~EV-D主要感染人类,EV-E和EV-F主要感染牛,EV-G主要感染猪和羊[1-5],也有报道从羊体内检测出了EV-E和EV-F[6-7]。山羊及绵羊肠道病毒(Caprine/Ovine enterovirus,CEV/OEV)是一种新发病原,主要引起羊以高热、严重腹泻、流涎等为主要特征的疾病,有时也会表现为脑炎和脊髓炎[6-8]。 展开更多
关键词 肠道病毒 鼻病毒 脊髓炎 小RNA病毒科 猪和羊
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2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析 被引量:1
4
作者 董志民 李秀丽 +10 位作者 杨春蕾 杨丽景 田向学 王利丽 池晶晶 张莉 孟乐 张万江 祝瑶 张东超 鄢明华 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期468-475,共8页
为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定... 为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 分离鉴定 致病力 遗传特征
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快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用 被引量:1
5
作者 袁雪梅 陈静 +5 位作者 黄雷 蔺凌云 潘晓艺 彭先启 焦锦彪 姚嘉赟 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期505-510,共6页
为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察... 为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增 侧向流试纸条技术 十足目虹彩病毒I
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《中国预防普医学报》编辑部
6
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期F0002-F0002,共1页
《中国预防普医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防兽医学报》为我国预防兽医科技领域学术交流的平台。
关键词 学术类期刊 中国农业科学院 学术交流 医学报 预防兽医 《中国预防兽医学报》 科技领域 哈尔滨兽医研究所
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《中国预防兽医学报》征订征稿启事
7
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期F0003-F0003,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的预防兽医科技专业期刊,面向国内外公开发行。
关键词 中国农业科学院 专业期刊 预防兽医 征订 征稿启事 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行
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《中国预防兽医学报》编辑部
8
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期F0002-F0002,共1页
《中国预防曾医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨曾医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防曾医学报》为我国预防曾医科技领域学术交流的平台。本刊自1979年创刊以来影响力不断扩大。
关键词 学术类期刊 中国农业科学院 学术交流 医学报 《中国预防兽医学报》 科技领域 公开发行 编辑部
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《中国预防兽医学报》征订征稿启事
9
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期F0003-F0003,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的预防兽医科技专业期刊,面向国内外公开发行。
关键词 中国农业科学院 专业期刊 预防兽医 征订 征稿启事 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行
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《中国预防兽医学报》编辑部
10
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期F0002-F0002,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防兽医学报》为我国预防兽医科技领域学术交流的平台。
关键词 中国农业科学院 学术类期刊 预防兽医 学术交流 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行 科技领域
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《中国预防兽医学报》编辑部
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中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期F0002-F0002,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防兽医学报》为我国预防兽医科技领域学术交流的平台。
关键词 中国农业科学院 学术类期刊 预防兽医 学术交流 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行 科技领域
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《中国预防兽医学报》编辑部
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中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期F0002-F0002,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防兽医学报》为我国预防兽医科技领域学术交流的平台。本刊自1979年创刊以来影响力不断扩大。
关键词 中国农业科学院 学术类期刊 预防兽医 学术交流 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行 科技领域
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《中国预防兽医学报》编辑部
13
中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期F0002-F0002,共1页
《中国预防兽医学报》是由中华人民共和国农业农村部主管,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所主办的国家级学术类期刊,面向国内外公开发行。《中国预防兽医学报》为我国预防兽医科技领域学术交流的平台。
关键词 中国农业科学院 学术类期刊 预防兽医 学术交流 《中国预防兽医学报》 哈尔滨兽医研究所 公开发行 科技领域
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2017年~2023年河南省猪圆环病毒2型的流行调查及遗传变异分析
14
作者 冷超粮 马秀秀 +14 位作者 宋佳静 王佳宝 贾楠 田想 刘华 李峻婕 段竹君 刘思 翟洪月 张腾 史鸿飞 李娜 姚伦广 阚云超 田志军 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期960-966,共7页
为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行及变异情况,本研究采集该地区规模化猪场2017年1月~2023年6月939份表现为繁殖障碍和呼吸道症状的病猪血液或组织样品,采用PCR方法进行PCV2检测。结果显示,PCV2总阳性率为31.42%(295/939);2017年~2... 为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行及变异情况,本研究采集该地区规模化猪场2017年1月~2023年6月939份表现为繁殖障碍和呼吸道症状的病猪血液或组织样品,采用PCR方法进行PCV2检测。结果显示,PCV2总阳性率为31.42%(295/939);2017年~2022年PCV2阳性率逐年降低,分别为58.65%(61/104)、49.48%(48/97)、28.57%(36/126)、16.15%(31/192)、11.52%(19/165)和7.87%(7/89),而2023年迅速上升,达到56.02%(93/166)。利用PCR扩增29份PCV2阳性样品的全基因组序列并测序,采用Meg Align分析PCV2流行株全基因组序列与Gen Bank中4株PCV2参考株全基因组序列的同源性;采用MEGA 11软件利用NJ法构建PCV2流行株ORF2基因与Gen Bank中24株PCV2参考株ORF2基因的系统发育树;采用Meg Align分析PCV2流行株Cap蛋白氨基酸序列的变异特征;采用RDP4和Sim Plot分析PCV2流行株全基因组的重组特征。全基因组同源性分析结果显示,本研究鉴定的PCV2全基因组序列之间的同源性为95.1%~100%,与PCV2参考株的同源性为93.7%~98.6%,其中与疫苗株PCV2a LG(HM038034)、PCV2b DBN-SX07-2(HM641752)和PCV2d SH(AY686763)的同源性分别为94.8%~96.2%、95.3%~98.6%和96.6%~97.8%,与来自丹麦的代表株PCV2c DK1980PMWSfree株(EU148503)的同源性为93.7%~95.1%。此外,两株2023年的PCV2流行株HN230522和HN231217与参考株的同源性仅为94.5%~97.9%。进化树结果显示,有19株PCV2流行株与PCV2d基因型参考株聚为一个分支,10株与PCV2b基因型参考株聚为一个分支。其中今年出现的PCV2流行株HN230522和HN231217株虽然属于PCV2d基因型,但处于一个相对独立的分支。Cap蛋白氨基酸序列分析结果显示,与疫苗株PCV2a LG(HM038034)、PCV2b DBN-SX07-2(HM641752)和PCV2d SH株(AY686763)相比,部分PCV2流行株在构象表位区(aa47~aa85和aa165~aa200)存在R^(48)H、A^(59)K/R、G^(85)D、P^(151)T、N^(178)S、R^(180)K和G^(197)S的突变,在基因型特异性结构域(aa190~aa191/aa206/aa210)存在K^(206)I的突变,且HN230522株在核定位信号区(NLS)(aa1~aa41)存在特有的V^(30)L突变,HN231217株在基因型特异性结构域(aa89~aa91)存在特有的^(89)RTV^(91)残基。重组分析结果显示,有高达65.52%(19/29)的PCV2流行株存在疑似的重组片段,且重组片段全部位于ORF1中。上述结果表明,今年以来河南省猪场PCV2阳性率快速上升,且流行株出现了较大变异,应加强对PCV2流行动态和遗传变异的监测。本研究为河南省PCV2分子流行病学、疫苗研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 流行病学调查 序列分析 CAP蛋白 遗传变异
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安徽地区新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因序列分析
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作者 胡晓苗 李薇 +7 位作者 李婷 许夏澎 薄宗义 郭梦娇 张小荣 吴艳涛 戴银 张成成 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期805-811,共7页
为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR... 为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR检测及病毒纯净性鉴定;同时对NDRV分离株的全长σC基因进行克隆并测序,将测序所得的分离株σC基因序列与GenBank中登录的21株禽源呼肠孤病毒参考株的相应基因序列及推导氨基酸序列进行相似性比对分析,利用Mega 7.0软件构建分离株基于σC基因的系统进化树,并进行σC基因编码氨基酸序列的突变分析。将分离株接种Vero细胞观察其体外培养特性,感染雏鸭进行致病性试验。结果显示,25份病料样品中检出3份NDRV阳性样品,将阳性病料样品接种鸡胚3 d内,鸡胚全部死亡,并伴有水肿、严重充血等现象;病毒纯净性试验结果显示,病料样品仅NDRV呈阳性,其他病原如鸭甲型肝炎病毒(DHV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)及禽腺病毒(FAdV)均为阴性。将3株分离株经测序分析,结果显示,其目的基因序列完全一致,为同一株病毒,并将其命名为NDRV AH株。对NDRV AH株σC基因进行序列相似性分析发现,NDRV AH株与其他NDRV参考株σC核苷酸序列的相似性为89.5%~99.0%,氨基酸序列的相似性为85.3%~98.9%。σC基因的遗传演化结果显示,NDRV AH株属于基因2型。σC氨基酸比对分析结果显示,与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)相比,NDRV AH株aa67、aa93、aa100、aa132、aa151、aa158、aa212、aa253和aa298均发生了突变。将该分离株接种Vero细胞,可观察到细胞出现形态圆缩、细胞核聚集等细胞病变。致病性试验结果显示,感染雏鸭死亡率为40%,剖检发现雏鸭肾脏、肝脏出血,脾脏肿大,有轻微坏死灶或大面积坏死灶,有些脾脏质地较硬。可见大面积坏死灶。本研究揭示了NDRV在我国安徽地区的分子流行病学特征,为变异株疫苗研发奠定了基础,对NDRV感染的防治具有重要意义。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 σC基因 进化分析 致病性试验
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免疫磁珠富集水中鲤春病毒血症病毒的初步研究
16
作者 景宏丽 孔玉方 +7 位作者 斯烈钢 王建平 葛明峰 徐胜威 黄呈炜 高隆英 张旻 吴绍强 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期641-644,共4页
为建立一种富集水中鲤春病毒血症病毒(SVCV)的技术,本研究利用SVCV多克隆抗体制备免疫磁珠,通过对磁珠耦联抗体量的优化,确定该免疫磁珠有效富集SVCV的最低浓度,建立一种富集SVCV的免疫磁珠分离技术,并联合荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)技术... 为建立一种富集水中鲤春病毒血症病毒(SVCV)的技术,本研究利用SVCV多克隆抗体制备免疫磁珠,通过对磁珠耦联抗体量的优化,确定该免疫磁珠有效富集SVCV的最低浓度,建立一种富集SVCV的免疫磁珠分离技术,并联合荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)技术对水中SVCV进行检测。结果显示,1 mg磁珠与75μg SVCV多克隆抗体耦联时,耦联的抗体量最大,耦联率为98.48%;耦联后的免疫磁珠对SVCV(200μL,浓度为1.54×10^(6)拷贝/μL)的富集效率最高为91.56%。以该多克隆抗体量制备的免疫磁珠富集10倍倍比稀释的SVCV(3.54×10^(6)拷贝/μL~3.54×10^(3)拷贝/μL),以确定其有效富集SVCV的最低浓度。结果显示,1 mg免疫磁珠能够使200μL病毒液(3.54×10^(3)拷贝/μL)富集率达到61.58%。表明该免疫磁珠能够有效富集SVCV。在免疫磁珠分离技术联合RT-qPCR技术检测水样品中SVCV(浓度约为1.16×10^(4)拷贝/μL)的结果显示,免疫磁珠组富集SVCV核酸量是裸磁珠组富集SVCV核酸量的1.77×10^(3)倍,是未处理组富集SVCV核酸量的1.68×10^(3)倍,免疫磁珠组富集SVCV均极显著高于裸磁珠组和未处理组(P<0.01),裸磁珠组富集的SVCV与未处理组则无显著差异(P>0.05)。本研究首次建立了一种能够有效富集水中SVCV的方法,为SVCV的监测提供了技术手段。 展开更多
关键词 免疫磁珠 鲤春病毒血症病毒 水样品
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陕西省奶山羊重点养殖县区布鲁氏菌感染情况及其影响因素的横断面研究 被引量:26
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作者 杨文欢 赵光明 +7 位作者 赵仙苗 焦韵洁 王桂花 游建华 史冰君 王青杰 杨增岐 赵合平 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期245-253,共9页
为掌握陕西省奶山羊布鲁氏菌的感染情况及其影响因素,本研究在陕西省6个奶山羊重点养殖县区813个奶山羊养殖单元采集22.87万份血清样品,采用虎红平板凝集试验(初筛试验)和试管凝集试验(确诊试验)检测,对其中286个奶山羊养殖场(户)开展... 为掌握陕西省奶山羊布鲁氏菌的感染情况及其影响因素,本研究在陕西省6个奶山羊重点养殖县区813个奶山羊养殖单元采集22.87万份血清样品,采用虎红平板凝集试验(初筛试验)和试管凝集试验(确诊试验)检测,对其中286个奶山羊养殖场(户)开展现场问卷调查,并采用单因素分析和多因素logistic回归分析,确定布鲁氏菌的感染情况及其关联因素。结果显示,6个县区奶山羊布鲁氏菌个体感染率和群体感染率分别为0.02%和2.2%;4个检出布鲁氏菌抗体阳性的县区个体感染率介于0.02%~0.8%,群体感染率介于3.1%~6.5%,陈仓区、凤翔区分别与阎良区、富平县个体感染率存在统计学差异(P<0.05),4个县区群体感染率间无统计学差异(P>0.05);规模场与散养村个体感染率和群体感染率均存在统计学差异(P<0.05)。饮用河水、母羊有流产史、断奶羔羊存活率低于85%和本场人员兼职从事羊的屠宰贩卖等相关工作,这4个因素为奶山羊感染布鲁氏菌的潜在风险因素(P<0.05);引入羊的检疫、入场车辆消毒为保护性因素(P<0.05)。多因素logistic回归方程为Logit[P(Y=1)]=-4.484+0.874X_(1)+1.829X_(2)-2.453X_(3)+4.488X_(4)-0.09X_(5)+2.1X_(6)-2.611X_(7)+2.978X_(8),可用于奶山羊感染布鲁氏菌的风险预测。本研究结果提示,陇县、千阳县应重点加强调引入羊的检疫和落地监管,定期对高风险因素和动物进行监测,其余4个县区可以采取相同的布鲁氏菌病监测与净化策略,对布鲁氏菌阳性奶山羊群开展全群检测,重点开展奶山羊散养村的布鲁氏菌病监测净化工作;奶山羊养殖场(户)应重点关注人员车辆入场、饮水等高风险因素,做好引进羊的检疫,提高饲养管理能力和生物安全管理水平,才能有效降低布鲁氏菌的感染风险。本研究采用横断面研究方法调查了陕西省奶山羊重点养殖县区布鲁氏菌的感染率及其感染因素,为陕西省布鲁氏菌病的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 奶山羊 横断面研究 风险因素分析
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冀北地区致犊牛腹泻奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性研究 被引量:7
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作者 张召兴 韩平 +6 位作者 王亚男 王珍珊 张妍 郭磊 衡江鸿 闫港 张艳英 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期24-31,共8页
为鉴定冀北地区养殖场中引起犊牛腹泻的病原菌,本实验于2021年~2023年采集冀北地区养殖场中患腹泻病奶肉犊牛的肛拭子、粪便及肝脏等病料样品247份,采用细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定和ureR基因的PCR扩增等方法进行细菌的分离鉴定... 为鉴定冀北地区养殖场中引起犊牛腹泻的病原菌,本实验于2021年~2023年采集冀北地区养殖场中患腹泻病奶肉犊牛的肛拭子、粪便及肝脏等病料样品247份,采用细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定和ureR基因的PCR扩增等方法进行细菌的分离鉴定,结果显示,从采集的247份患腹泻病的奶肉犊牛病料样品中分离并鉴定到102株奇异变形杆菌(PM)。将分离菌人工感染小鼠(0.20 m L/只,含菌量为108cfu/mL),检测PM对小鼠的致病性。结果显示其中72株PM引起小鼠发病与死亡,为致病性PM,小鼠的死亡率在40%~100%。采用PCR方法及K-B药敏纸片法分别检测分离菌的毒力基因、相关耐药基因及耐药性,采用SPSS19软件中的Fisher确切概率法分析PM耐药表型与相关耐药基因之间的相关性。结果显示,毒力基因fliL、zapA、pmf A、atfA、rsb A、ureC、atfC在72株致病性PM中的检出率在63.4%~100%,其他毒力基因的检出率在2.7%~8.1%;72株致病性PM对阿莫西林、氨苄西林、安普霉素等12种药物耐药的菌株占51.4%以上,对其他药物耐药的菌株占6.9%~33.3%,均呈多重耐药性(MDR),且至少耐3类药物;72株致病性PM的β-内酰胺类耐药基因blaOXA、blaCTX-M、blaTEM,磺胺类耐药基因Sul1、Sul2、Sul3,氨基糖苷类耐药基因adA、aac(6’)-Ib,四环素类耐药基因TetA、TetM的检出率在43.2%~98.6%,其他耐药基因检出率在4.2%~33.3%,其耐药表型与耐药基因型之间基本呈正相关(除多粘菌素类和大环内酯类药物外)。本研究为致奶肉犊牛腹泻的奇异变形杆菌病的防控提供了参考。 展开更多
关键词 犊牛 奇异变形杆菌 致病性 毒力基因 耐药性 耐药基因
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用 被引量:4
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作者 刘大凯 韩郁茹 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 曾苗苗 时洪艳 秦毅斌 石达 冯力 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期499-504,共6页
为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白 原核表达 多克隆抗体 初步应用
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几种中药体外抗猪流行性腹泻病毒活性的研究 被引量:15
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作者 甘晓凤 孟心茹 +5 位作者 郭丽君 张嫱 郑哲 王燕春 赵权 蔡亚南 中国预防兽医学报 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期229-235,共7页
为探究蒲公英、板蓝根、泽泻、葛根、黄芩5种中药水提物体外抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的效果,本研究先将不同浓度中药液分别2倍倍比稀释后加入非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中,观察各药物对细胞生长状态的影响来确定各药物的最大安全... 为探究蒲公英、板蓝根、泽泻、葛根、黄芩5种中药水提物体外抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的效果,本研究先将不同浓度中药液分别2倍倍比稀释后加入非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中,观察各药物对细胞生长状态的影响来确定各药物的最大安全浓度。结果显示,蒲公英、板蓝根、泽泻、葛根、黄芩的最大安全浓度分别为3.91 mg/m L、1.95 mg/m L、1.95 mg/m L、0.98 mg/m L、0.98 mg/m L。以药物最大安全浓度为初始浓度,2倍倍比稀释各药物,共6个浓度,采用先加药物后加病毒(阻断作用),先加病毒后加药物(抑制作用)、药物和病毒同时加入(杀灭作用)3种不同加药的方式,加入已铺满单层Vero细胞的96孔细胞培养板中,72 h后加入CCK-8溶液1 h后测定各孔的OD_(450nm)值,评估阻断作用、抑制作用、杀灭作用下各药物对PEDV抑制率最高的浓度。结果显示,5种药物在阻断作用、抑制作用、杀灭作用下对PEDV抑制率最高的浓度分别为3.91 mg/m L、1.95 mg/m L、1.95 mg/m L、0.98 mg/m L以及0.98 mg/m L。以上述对PEDV抑制率最高的药物浓度为试验浓度,重复上述3种加药方式,72 h后加入CCK-8溶液1 h后测定各孔的OD_(450nm)值,计算3种作用方式下各药物对PEDV的抑制率,筛选出对PEDV抑制率最高的药物。结果显示,各中药均可在体外抑制PEDV的感染,阻断作用下黄芩对PEDV的抑制率最高达138.10%,抑制作用下蒲公英对PEDV的抑制率最高达149.90%,杀灭作用下葛根对PEDV的抑制率最高达102.90%,且蒲公英和黄芩在3种作用方式下对PEDV的抑制率均高于80%。以上结果表明蒲公英和黄芩体外抗PEDV感染的效果最好,本研究首次证实5种中药对体外抗PEDV感染的效果,为中药治疗PED提供了参考依据。 展开更多
关键词 中药 猪流行性腹泻病毒 非洲绿猴肾细胞 体外抗病毒活性
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