《免疫学杂志》变更事项公告

我刊2023年12月发生了一系列变更,现将主要变更内容公布如下:1)《免疫学杂志》主管单位变更为中国融通医疗健康集团有限公司;2)主办单位变更为融通医健期刊出版(北京)有限公司、中国免疫学会.

《免疫学杂志》稿约

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泄浊解毒方改善大鼠溃疡性结肠炎和调控巨噬细胞极化机制研究

目的探讨泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及其对β-catenin/FOSL2/ARID5A分子及巨噬细胞极化的影响。方法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,分为对照组、模型组、阳性组(柳氮磺胺吡啶干预)和低、中、高剂量组(泄浊解毒方干预)。干预14 d后采用疾病活动指数(disease activity index,DAI)和结肠组织评分(colon mucosa damage index,CDMI)评价大鼠的状态;HE染色观察病变组织,ELISA法检测血清细胞因子TNF-α、IL-6水平,流式细胞仪检测外周血M1、M2巨噬细胞含量,RT-PCR检测iNOS、CD206及β-catenin/FOSL2/ARID5A mRNA表达,免疫组化检测结肠组织β-catenin/FOSL2/ARID5A分子的蛋白表达。结果1)低中高剂量组DAI评分、CMDI评分、血清TNF-α、IL-6水平均显著低于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2)HE染色可见低中高剂量组结肠组织损伤与炎症浸润轻于模型组。3)低、中、高剂量组M1型巨噬细胞比例和iNOS mRNA显著低于模型组,M2型巨噬细胞比例和CD206 mRNA显著高于模型组(P<0.05)。4)低、中、高剂量组结肠组织中β-catenin和FOSL2 mRNA及蛋白表达显著高于模型组,ARID5A mRNA及蛋白表达显著低于模型组(P<0.05)。结论泄浊解毒方能有效改善大鼠溃疡性结肠炎的临床症状,下调β-catenin/FOSL2/ARID5A分子的表达,调节巨噬细胞的极化,减轻炎症反应,促进肠道恢复。

异虎耳草素通过调控Nrf2-NF-κB通路轴减轻松果体损伤大鼠氧化应激和炎症反应

目的探讨异虎耳草素对PCPA诱导的大鼠松果体损伤的保护作用及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,褪黑素10 mg/kg组和异虎耳草素1.5 mg/kg组,每组10只。除正常组外,其余3组均通过腹腔注射PCPA(450 mg/kg)构建松果体损伤大鼠模型,造模成功后灌胃给药,连续7 d。在给药第6天,采用戊巴比妥钠协同睡眠实验评估各组大鼠的入睡潜伏期和睡眠持续时间。给药结束后,检测血清褪黑素、松果体组织超氧化物歧酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、白介素(IL)-6、IL-2和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;HE染色观察松果体组织病理学变化;Western blot法检测松果体组织中血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠松果体细胞结构损伤严重、数目减少,大鼠入睡潜伏期延长,睡眠持续时间缩短,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量降低,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量升高(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达上调,Keap1和胞质NF-κB p65表达下调(P<0.05);与模型组比较,异虎耳草素组大鼠松果体组织损伤得到缓解,入睡潜伏期和睡眠持续时间明显改善,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量增加,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量减少(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达下调,Keap1和胞质NF-κB p65表达上调(P<0.05)。结论异虎耳草素能够通过激活Nrf2信号通路和抑制NF-κB信号通路,抑制氧化应激和炎症反应,减轻大鼠松果体组织损伤,促进褪黑素分泌。

DNMT1通过SOCS1影响高糖诱导足细胞凋亡和炎性细胞因子释放

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)对高糖(HG)诱导足细胞凋亡和炎性细胞因子释放的影响,并分析相关分子机制。方法体外培养足细胞MPC-5细胞,设立Control组和HG组,采用小RNA干扰技术和脂质体转染技术沉默或过表达DNMT1、SOCS1。采用qRT-PCR法检测DNMT1、SOCS1基因表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)]水平;Western blot法检测DNMT1、SOCS1蛋白及酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路蛋白表达。结果HG升高了MPC-5细胞凋亡率、炎症因子水平、DNMT1 mRNA表达以及DNMT1、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,降低了SOCS1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。沉默DNMT1表达和过表达SOCS1均降低了MPC-5细胞凋亡率、炎症因子水平及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达(P<0.05)。沉默DNMT1表达升高了SOCS1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。沉默SOCS1表达可逆转沉默DNMT1表达对MPC-5细胞凋亡、炎症以及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达的影响。结论沉默DNMT1表达能够减轻HG诱导的足细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与上调SOCS1表达抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关。

上调IL-37a表达对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺功能及Th1/Th2平衡的影响

目的探究上调白细胞介素-37a(IL-37a)表达对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺功能及Th1/Th2平衡的影响。方法构建过表达IL-37a的间充质干细胞(MSC),并与单个核细胞共培养,流式细胞术检测过表达IL-37a对Th1、Th2表达影响,ELISA检测培养基上清液IFN-γ、IL-4水平。取30只SD大鼠随机分为Control组(假手术)、ARDS组(脂多糖诱导建立ARDS模型)、IL-37a组(建模+尾静脉注射10μg/kg IL-37a重组蛋白)各10只,建模12 h后,血气分析仪检测大鼠动脉氧分压(PaO2)、氧合指数(PaO2/FiO2),并测定肺干/湿(W/D)比,HE染色观察肺组织病理并评估肺部病理损伤评分,ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)及血清中IL-4、IFN-γ表达,流式细胞术检测脾脏Th1/Th2,Westernblot检测肺组织NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果过表达IL-37a组细胞外周Th1、Th1/Th2、IL-4表达低于阴性对照组细胞,Th2、IFN-γ表达高于阴性对照组细胞(P<0.05);与Control组比较,ARDS组和IL-37a组PaO2、PaO2/FiO2、BALF及血清IL-4表达降低,W/D、肺部病理损伤评分、BALF及血清IFN-γ、脾脏Th1/Th2、肺组织NF-κB、NLRP3蛋白表达升高;与ARDS组比较,IL-37a组PaO2、PaO2/FiO2、BALF及血清IL-4表达升高,W/D、肺部病理损伤评分、BALF及血清IFN-γ、脾脏Th1/Th2、肺组织NF-κB、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05)。结论上调IL-37a表达可改善ARDS大鼠肺部损伤,这可能与IL-37a能影响MSC免疫调节功能,促进Th1/Th2恢复平衡有关。

TRIB3靶向AKT磷酸化调控高糖条件下小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的机制研究

目的探讨TRIB3介导高糖条件下巨噬细胞促炎性M1型极化的下游机制。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象:1)细胞分为对照(CON)组和高糖(HG)组,Western blot检测TRIB3、p-AKT和AKT蛋白;在各组内分为DMSO组和SC79组/MK2206组,使用AKT激动剂SC79或抑制剂MK2206处理细胞,Western blot检测p-AKT和AKT蛋白。2)细胞随机分为Control vector-DMSO组、TRIB3 overexpress-DMSO组、Control vector-SC79组、TRIB3 overexpress-SC79组、Control vector-MK2206组和TRIB3 overexpress-MK2206组,CCK8检测细胞活性,相差显微镜观察细胞形态并采集图像,Western blot检测TRIB3、pAKT、AKT、iNOS和Arg-1蛋白,ELISA检测细胞培养液中IL-1β和IL-10分泌。结果1)与CON组相比,HG组TRIB3显著增加、p-AKT/AKT显著下降。HG-SC79组p-AKT/AKT显著高于HG-DMSO组且与CON-SC79组无显著差异;HG-MK2206组pAKT/AKT显著低于HG-DMSO组。2)与对应的Control vector组相比,TRIB3 overexpress组TRIB3均显著增加、p-AKT/AKT均显著下降;与对应的DMSO组相比,SC79组p-AKT/AKT均显著增加、MK2206组p-AKT/AKT均显著下降。与Control vector-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-DMSO组出现较多长梭形和不规则形细胞,iNOS和IL-1β显著增加,IL-10显著减少。与TRIB3overexpress-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-SC79组长梭形和不规则形细胞明显减少,iNSO和IL-1β显著下降,IL-10显著增加;TRIB3 overexpress-MK2206组长梭形和不规则形细胞进一步增加,Arg-1和IL-10显著下降,IL-1β显著增加。结论高糖环境下巨噬细胞中激活的TRIB3蛋白通过靶向负调控AKT磷酸化水平发挥诱导巨噬细胞M1型极化、抑制M2型极化的促炎作用。

基于TNF-α/NF-κB通路探讨四君子汤对快速衰老型小鼠海马神经元炎症因子调节自噬蛋白的作用机制研究

目的 探讨四君子汤(Sijunzi decoction,SJZD)对快速衰老型(senescence-accelerated mouse prone 8,SAMP8)小鼠海马组织炎症因子、自噬蛋白表达的影响及作用机制。方法 将SAMR1小鼠作为对照组、32只SAMP8小鼠分为模型组、多奈哌齐组(Donepezil)、SJZD低、高剂量治疗组。采用Y字迷宫实验检测小鼠记忆功能的变化;免疫组化法检测NF-κB蛋白表达变化;ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blot法检测海马组织Aβ蛋白、caspse-1、beclin-1、LC3-II蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠总进臂次数减少、交替次数减少,TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,Aβ蛋白、caspse-1蛋白表达上调,beclin-1蛋白及LC3-II蛋白表达下调;Donepezil与模型组比较,总进臂次数增加,交替次数增加,IL-6含量减少,Aβ蛋白表达下调。SJZD低剂量组和高剂量组,与模型组比较,总进臂次数增加,交替次数增加;TNF-α、IL-1β、IL-6、Aβ蛋白、caspase-1含量降低;beclin-1、LC3-II蛋白表达上调。结论 四君子汤治疗阿尔茨海默病可能与纠正中枢海马相关炎症因子及自噬功能失调有关。

烟酰胺核糖对EAE小鼠的外周抗炎作用及其机制研究

目的探讨烟酰胺核糖(NR)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的外周抗炎作用及机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35~55肽段(MOG35-55)诱导C57BL/6雌性小鼠制备EAE模型,随机分为EAE模型组和NR治疗组。EAE模型组每只小鼠按200μl/d剂量灌胃给予生理盐水,NR治疗组每只小鼠按500 mg/kg、200μl/d剂量灌胃给予NR,观察并记录各组小鼠临床评分和体质量。免疫后第28天处死小鼠,制备脾脏和脊髓冰冻切片,提取脊髓组织蛋白。HE染色检测外周炎性细胞浸润脊髓,免疫荧光染色检测小鼠脊髓CD4^(+)T细胞、CD68^(+)巨噬细胞数量,Western blot检测小鼠脊髓IFN-γ、IL-1β表达,免疫荧光染色检测小鼠脾脏ROCK-Ⅰ^(+)细胞、TLR4^(+)细胞、p-NF-κB^(+)细胞、TNF-α^(+)细胞、IL-1β^(+)细胞、IFN-γ^(+)细胞、IL-6^(+)细胞、IL-10^(+)细胞、IL-17^(+)细胞、i NOS^(+)细胞、Arg-1^(+)细胞数量。结果与EAE模型组相比,NR显著推迟EAE小鼠发病时间(P<0.05),降低临床评分(P<0.05或P<0.01),减轻体质量丢失,阻止外周炎性细胞浸润脊髓(P<0.01),减少脊髓CD4^(+)T细胞、CD68^(+)巨噬细胞数量(P<0.01),下调脊髓IFN-γ、IL-1β炎性因子表达(P<0.05),抑制小鼠脾脏ROCK-Ⅰ、TLR4、p-NF-κB表达(P<0.01),减少脾脏IFN-γ、i NOS、IL-6等促炎因子分泌(P<0.05或P<0.01),促进脾脏抗炎因子Arg-1、IL-10分泌(P<0.05或P<0.01)。结论NR能够有效缓解EAE小鼠临床症状,显著减轻外周和中枢神经系统炎症反应,其机制可能与抑制EAE小鼠脾脏Rho/ROCK信号通路和TLR4/NF-κB信号通路有关。

ITGB1在胃癌组织中的表达及其对免疫治疗疗效的影响

目的探索ITGB1在胃癌组织中的表达及其对免疫治疗疗效影响,为胃癌的预后判断及免疫治疗疗效预测提供新的标志物。方法通过生物信息学方法对癌症基因图谱(TCGA)数据库中胃癌患者的转录组数据、临床病理特征和生存信息进行分析,评估ITGB1在胃癌中的表达及其与临床病理特征的相关性,并进一步分析ITGB1表达与免疫浸润、免疫检查点相关基因、免疫亚型及免疫治疗响应的关系。结果ITGB1在胃癌组织中高表达,ITGB1高表达组T分期晚、存活率低,总体生存率明显降低。免疫浸润评分分析显示CD4+T细胞、CD8+T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的在ITGB1高表达组评分升高,同时免疫检查点相关基因SIGLEC15、TIGIT、CD274、HAVCR2、CTLA4、PDCD1LG2在ITGB1高表达组表达水平升高,且ITGB1的表达与免疫检查点相关基因SIGLEC15、TIGIT、CD274、HAVCR2、CTLA4、LAG3、PDCD1LG2的表达呈正相关。TISIDB数据库分析显示ITGB1在胃癌不同免疫亚型中的表达存在差异,其中C6亚型(TGF-β主导型)中表达水平升高。TIDE算法提示ITGB1高表达组TIDE评分高于低表达组,对免疫检查点阻断治疗疗效差。结论ITGB1在胃癌组织中高表达,是胃癌患者预后差的危险因素,可作为判断胃癌预后及预测免疫治疗疗效的潜在标志物。

肝细胞癌肿瘤微环境中肿瘤浸润淋巴细胞的研究进展

肝癌是病死率极高的恶性肿瘤。随着靶向药物、免疫治疗等技术手段的不断发展,转化治疗已成为目前中晚期肝癌治疗的共识。肝脏自身存在的免疫耐受,肿瘤组织以及各种免疫成分构成了动态变化的肝癌微环境。肝癌微环境下的免疫逃逸是当前免疫治疗的主要障碍。细胞免疫是机体抗肿瘤免疫的重要组成部分,免疫细胞的状态和功能与癌症预后密切相关。本文归纳了肝细胞癌微环境中肿瘤浸润淋巴细胞的研究进展,以便更好地探索针对性的抗肿瘤临床治疗策略。

RNF20影响RNA病毒感染后的巨噬细胞极化

目的 探究环指蛋白20(RNF20)在抗RNA病毒先天免疫中的作用。方法 在293T人胚肾上皮细胞中过表达RNF20,运用双荧光素酶报告基因实验,检测仙台病毒(SeV)感染诱导的干扰素a4(Ifna4)基因启动子活化。构建Rnf20基因髓系条件性敲除小鼠模型(Rnf20F/F;Lyz2-Cre),运用流式细胞术检测Rnf20F/F;Lyz2-Cre和对照Rnf20F/F小鼠骨髓、脾脏和外周血髓系细胞亚群的比例;利用建立的小鼠模型培养骨髓源巨噬细胞(BMDMs),在SeV和水疱性口炎病毒(VSV)感染后,运用免疫印迹检测转录因子干扰素调节因子3(IRF3)和核因子-κB (NF-κB)p65亚基的磷酸化,通过ELISA检测细胞因子IFN-β、TNF-α、IL-6的表达,通过高通量转录组测序分析转录组的改变,并通过LPS和IL-4分别诱导巨噬细胞M1和M2极化,证实RNF20对于转录组的影响。结果 293T细胞中RNF20过表达不影响SeV感染诱导的Ifna4基因启动子活化。Rnf20F/F;Lyz2-Cre和Rnf20F/F小鼠髓系细胞发育无明显差异,在RNA病毒感染2组小鼠的BMDMs后,IRF3、NF-κB p65的磷酸化和IFN-β、TNF-α、IL-6的表达相似,但是一些与巨噬细胞极化相关的基因表达有显著差异。RNF20的缺失有抑制巨噬细胞M1型极化、促进巨噬细胞M2型极化的趋势。结论RNF20不影响RNA病毒感染诱导的IRF3和NF-κB通路活化,但可通过影响巨噬细胞极化而参与感染后炎症的消退。

沉默MARK4通过NF-κB信号通路抑制溃疡性结肠炎细胞焦亡和炎症因子表达

目的探讨MARK4(microtubule-affinity regulating kinase 4,MARK4)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的FHC细胞溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型中对FHC细胞焦亡、炎症因子释放和肠道屏障相关蛋白表达的影响及其可能分子机制。方法采用Western blot检测UC患者、健康人群结肠组织和LPS诱导的FHC细胞炎症模型中MARK4和细胞焦亡相关的因子Caspase-1、NLRP3和GSDMD的表达水平;通过质粒转染shRNA沉默FHC细胞中MARK4,在正常对照组、LPS组和沉默MARK4+LPS组中采用Western blot分别检测Caspase-1、NLRP3、GSDMD、肠道屏障相关蛋白和NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平;ELISA和RT-qPCR检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果在UC患者结肠组织和LPS诱导FHC细胞体外UC炎症模型中MARK4和焦亡相关蛋白包括NLRP3、Caspase-1和GSDMD的表达水平显著升高。沉默MARK4能够抑制LPS诱导FHC细胞中焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达水平,下调炎症相关细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平,抑制FHC细胞凋亡,上调肠道屏障相关蛋白ZO-1、Occludin表达和上调Claudin2的表达水平。GSEA富集分析显示,MARK4与NF-κB信号通路呈正相关。沉默MARK4能够抑制NF-κB信号通路中p-P65、p-IKKα的表达水平。结论MARK4在UC组织和细胞中显著高表达,沉默MARK4能够通过阻滞NF-κB信号通路激活,进而抑制UC细胞焦亡和炎症因子表达。MARK4可能成为UC患者治疗的一个潜在靶点。

血小板/中性粒细胞比值在ANCA相关性血管炎疾病活动及预后评估中的临床价值

目的评估血小板/中性粒细胞比值(PNR)在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关血管炎疾病活动度及预后的价值。方法回顾性分析2015年3月至2023年7月于我院经肾活检确诊为AAV的128例患者临床资料。采用Spearman法进行相关性分析,通过t检验或秩和检验对比组间差异,Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险回归模型分析患者预后。结果PNR与伯明翰血管炎活动性评分(BVAS)(r=-0.268,P=0.002)负相关,PNR水平对疾病活动的预测效能的ROC曲线下面积(AUC)为0.672。根据PNR的最佳截点值(26.4)将患者分为高水平组(PNR≥26.4)(n=105)和低水平组(PNR<26.4)(n=23)。与低水平PNR组相比,高水平组患者预后情况明显优于低水平组(P<0.001),PNR与肾脏预后不良独立相关(OR=2.54,95%CI:1.1-5.88,P=0.029)。结论PNR降低提示AAV活动性增强及预后不良,有望成为评估活动性及预测预后的生物标志物。

143例儿童哮喘TSLP基因多态性与Eos、IgE及FeNO的关联性研究

目的探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)基因rs1837253、rs3806933位点多态性与儿童哮喘易感性及Eos、IgE、FeNO水平的相关性。方法选取143例哮喘儿童作为研究组,选取同期健康体检儿童112例作为对照组。采用MassARRAY SNP分型技术检测2个位点基因型,散射比浊法测定血清IgE水平,分析基因型及等位基因频率在2组间的分布差异,分析不同基因型对Eos、IgE及FeNO水平的影响。结果rs1837253等位基因及基因型频率、rs3806933等位基因频率在2组间分布无统计学差异(P>0.05);哮喘组rs3806933 CT基因型频率高于对照组,CC基因型频率低于对照组(P<0.05);与野生基因型相比,携带rs1837253 CT+CC和rs3806933 CT、CT+TT基因型的儿童患哮喘风险增高(CT+CC vs TT:OR=2.737,95%CI:1.514~4.945;CT vs CC:OR=2.058,95%CI:1.194~3.543:CT+TT vs CC:OR=1.843,95%CI:1.109~3.062)。哮喘组rs1837253位点3个基因型间Eos计数总体存在统计学差异(P<0.05,多重比较后矫正P>0.05),在对照组无统计学差异(P>0.05);2位点基因型间Eos%、IgE、FeNO及rs3806933基因型间Eos计数水平无统计学差异(P>0.05)。结论TSLP基因启动子区rs1837253、rs3806933位点多态性与儿童哮喘易感性有关,rs3806933CT基因型可能作为哮喘潜在的遗传标志物,rs1837253CT+CC、rs3806933CT+TT基因型是儿童患哮喘的风险因子;rs1837253位点多态性有影响血液Eos计数的趋势;2个SNPs与Eos%、血清IgE、FeNO水平无关。

胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞亚群相关性

目的 探究胃癌患者血浆中hsa_circ_0001588水平,并分析其血浆水平与患者临床特征、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、T淋巴细胞亚群的关系。方法 选取2021年3月至2022年5月于我院治疗的胃癌患者124例为研究组,另选取接受胃镜检查确诊为浅表性胃炎的患者130例作为良性组以及健康体检者130例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、Wmini5146流式细胞仪和双抗体夹心ELISA法检测受试者血浆hsa_circ_0001588水平、TLR4水平和CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平。分析血浆hsa_circ_0001588、TLR4、T淋巴细胞对于胃癌的诊断效能以及血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞水平的关系。结果 研究组血浆hsa_circ_0001588、TLR4和CD8^(+)表达水平高于良性组和对照组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于良性组和对照组(P<0.05),且研究组患者术后hsa_circ_0001588水平下降。临床分期越高、浸润深度越深、分化程度越低,发生远端转移的患者血浆hsa_circ_0001588水平越高(P<0.05)。血浆hsa_circ_0001588、TLR4和T淋巴细胞对于胃癌均有较好的诊断效能,其联合诊断的整体效能最高。血浆hsa_circ_0001588高表达患者CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达较低,TLR4和CD8^(+)表达较高(P<0.05),其血浆hsa_circ_0001588水平与CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达呈负相关性,与TLR4和CD8^(+)呈正相关性。结论 胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平偏高,且与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈负相关性,与TLR4、CD8^(+)呈正相关性。

基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究

目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株。T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果。CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能。结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高。经PCR产物测序和Western blot验证获得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能。结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础。

血必净通过上调ADAM17酶活性抑制EA.hy926细胞TLR4信号通路

目的探索血必净注射液(XBJ)抑制脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞Toll样受体4(TLR4)炎性信号通路的分子机制。方法培养EA.hy926血管内皮细胞,加入不同浓度XBJ处理细胞4 h后,添加100 ng/ml LPS刺激细胞,Western blot法检测p-p38、p-p65、p-ERK、p-JNK及IκBα表达水平。无血清培养EA.hy926细胞过夜,加入20μl/ml XBJ处理细胞不同时间,浓缩培养液,Western blot法检测培养液中TLR4受体含量和脱落酶ADAM17磷酸化水平;利用酶活性试剂盒检测细胞中ADAM17酶活性。结果XBJ显著抑制细胞中TLR4介导的炎性信号。XBJ诱导细胞中p-ADAM17水平和酶活性随时间而升高,同时培养液中TLR4受体含量随时间而增多。TAPI-1(10μmol/L)可显著抑制XBJ诱导的细胞膜TLR4脱落。结论XBJ通过上调ADAM17活性诱导细胞膜TLR4脱落,从而抑制其对细胞内炎性信号的激活。

新辅助治疗后食管癌术后肺部并发症和吻合口瘘的预后意义

目的本研究旨在确定新辅助治疗后食管癌术后肺部并发症(postoperative pulmonary complication,PPC)和吻合口瘘(anastomotic leakage,AL)对长期生存率的影响。方法研究我院2011年至2021年期间接受新辅助治疗后根治性切除的441例食管癌患者的临床病理特征和预后,重点关注PPC和AL。采用log-rank检验和单因素、多因素Cox回归分析对患者生存率进行分析。结果在接受新辅助治疗的食管癌患者中,PPC和AL的发生率分别为23.8%(n=105)和5.2%(n=23)。单因素Cox回归分析显示,PPC与较短的无病生存期相关,而AL与较短的总生存期相关。单因素Cox回归分析显示,新辅助治疗后的PPC是无病生存期的独立不良预后因素。结论PPC和AL分别与无病生存期和总生存期显著负相关。PPC是新辅助治疗后食管癌无病生存期的独立不良预后因素。

慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间HBV特异性CD8^(+) T细胞反应活性的比较分析

目的 比较分析慢性乙型肝炎及HBV相关肝硬化和肝细胞癌患者间的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。方法 选取124例慢乙肝、36例HBV相关肝硬化和114例HBV相关肝细胞癌患者,采用独创的ELISPOT系统定量检测患者外周血中具有反应活性的HBV特异性CD8^(+)T细胞数量;另对19例慢乙肝患者和20例肝细胞癌患者进行纵向追踪(每3~5月检测1次)。结果 慢乙肝组的HBV特异性CD8^(+)T细反应活性与肝硬化组无统计学差异,但明显低于肝细胞癌组,尤其是HBsAg、HBpol和HBe/cAg抗原特异性T细胞。慢乙肝组中,ALT和AST水平正常组、低病毒载量组比ALT和AST水平异常组、高病毒载量组都呈现更高的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性。NUCs治疗的时间长短对慢乙肝患者HBV特异性T细胞的功能恢复有一定影响,但在相同时长内药物种类对其影响较弱。肝硬化组中,HBeAg阳性组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于HBeAg阴性组(P=0.03)。肝细胞癌组中,AFP正常和DCP正常组的HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性明显高于AFP和DCP异常组。纵向研究结果显示,慢乙肝患者使用NUCs治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈逐渐上升趋势;而肝细胞癌患者在靶向药物联合免疫治疗期间,HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性呈现明显上升。结论 HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性在慢乙肝、肝硬化和肝细胞癌的进程中存在差异,且受到病毒学指标、肿瘤标志物以及药物治疗的影响,因此在临床治疗中应密切关注HBV特异性CD8^(+)T细胞反应活性的变化。