β-谷甾醇通过诱导ROS累积造成氧化应激抑制K562/ADR细胞增殖并促进凋亡和分化

目的:探讨β-谷甾醇抑制耐阿霉素人类髓性白血病细胞K562/ADR增殖、促进细胞凋亡与分化的效果及其可能机制。方法:使用细胞毒性试验计算β-谷甾醇对K562/ADR细胞的半数抑制率(IC50),采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率与线粒体膜电位下降率,使用分光光度法检测细胞上清中SOD活力与MDA含量,使用荧光试剂盒检测细胞ROS强度,使用联苯胺染色检测红细胞分化程度,使用蛋白质印迹(Western blot)检测珠蛋白转录因子1(GATA-1)、β-珠蛋白(β-globin)和核因子e2相关因子2(NF-E2)蛋白表达水平。结果:β-谷甾醇对K562/ADR细胞的半数抑制浓度的IC50为163.64μmol/L。与空白组相比,3个浓度的β-谷甾醇均能抑制细胞增殖、促进细胞凋亡与红细胞分化,降低SOD活力、线粒体膜电位,增加MDA与ROS含量,升高GATA-1、β-globin和NF-E2蛋白表达水平(P<0.01)。结论:β-谷甾醇能抑制K562/ADR细胞增殖,促进细胞凋亡,并且诱导红细胞分化,其机制可能是通过促进ROS积累引起氧化应激失衡。

β-谷甾醇改善绝经后骨质疏松的实验研究

[目的]探究杜仲有效单体成分β-谷甾醇对小鼠绝经后骨质疏松的疗效及其潜在作用机制。[方法]将24只12周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组及β-谷甾醇干预组,每组8只,采用双侧卵巢切除术建立绝经后骨质疏松模型,术后假手术组及模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,β-谷甾醇干预组给予β-谷甾醇灌胃,术后8周将各组小鼠处死取材,借助显微计算机断层扫描(micro-computed tomography,Micro-CT)观察β-谷甾醇干预对绝经后骨量丢失及骨小梁破坏的保护作用,并采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色对小鼠股骨远端区域进行组织形态学分析,同时通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色评估小鼠骨吸收与骨形成情况,并通过免疫组化检测各组样本的β-catenin表达水平。[结果]Micro-CT扫描结果显示,β-谷甾醇干预可减少绝经后骨量丢失及骨微结构破坏,HE染色证实β-谷甾醇可有效维持骨小梁数目及组织形态,并在一定程度上抑制雌激素缺乏引起的异常脂肪堆积现象。TRAP染色结果表明,β-谷甾醇并不影响破骨细胞形成,而免疫组化结果表明β-谷甾醇可显著促进成骨标志物ALP的表达。与此同时,β-谷甾醇可增加β-catenin在股骨远端区域的表达,提示β-谷甾醇促进骨形成,可能与其上调β-catenin信号通路有关。[结论]β-谷甾醇体内干预可上调β-catenin信号通路,增强成骨分化,促进机体骨形成,从而改善绝经后骨质疏松。

β-谷甾醇对增生性瘢痕成纤维细胞作用机制的网络药理学分析

背景:目前针对增生性瘢痕有效的预防和治疗措施仍然有限。而大多数植物中草药不良反应小且来源丰富,为预防和治疗增生性瘢痕提供了新的思路和方法。目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨植物来源β-谷甾醇作用于增生性瘢痕成纤维细胞的潜在分子机制,并通过细胞学实验进行初步验证。方法:通过网络药理学方法,利用相关数据库及软件筛选β-谷甾醇的药物靶点,获取增生性瘢痕相关疾病靶点,取交集得到β-谷甾醇作用于增生性瘢痕的潜在作用(交集)靶点,使用Cytoscape软件和STRING数据库构建“药物-靶点-疾病”网络和蛋白质互作网络(PPI),同时筛选出PPI中核心作用靶点。通过DAVID数据库对交集靶点进行GO生物学功能和KEGG通路富集分析,结合文献分析进一步确立与交集靶点关系密切的信号通路及核心靶点基因,应用AutoDock软件对β-谷甾醇和核心靶点蛋白进行分子对接。采用体外细胞实验验证β-谷甾醇对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、细胞周期分布和核心靶点基因mRNA表达的影响。结果与结论:①β-谷甾醇和增生性瘢痕的交集靶点共56个,PPI网络中筛选出10个核心靶点:酪氨酸激酶(SRC)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、载脂蛋白E(APOE)、雌激素受体1(ESR1)、固醇调节元件结合转录因子1(SREBF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、C-反应蛋白(CRP)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和过氧化氢酶(CAT)。②结合文献报道和KEGG通路、GO功能分析结果,进一步认定MAPK信号通路与交集靶点关系密切,确定MAPK3(即为ERK1-MAPK)、CASP3、P53和肿瘤坏死因子为其核心靶点。③分子对接结果提示β-谷甾醇与核心靶点蛋白结合良好。④细胞实验结果表明,100μmol/L的β-谷甾醇能抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡(P<0.01),使G1期细胞占比增加,S期细胞占比减少(P<0.05),同时上调CASP3、P53和肿瘤坏死因子mRNA表达(P<0.05),并下调MAPK3 mRNA表达(P<0.001)。⑤上述数据证实,β-谷甾醇可能通过激活肿瘤坏死因子通路,上调CASP3和P53的表达,诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,同时抑制ERK-MAPK通路使细胞周期阻滞从而降低增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性。

β-谷甾醇对肿瘤的防治作用及其机制研究进展

β-谷甾醇是一种天然的甾体类化合物,因其特有的生物学活性和理化特性广泛应用于医药和食品行业。β-谷甾醇作为真核生物细胞膜的重要组成成分,不仅具有良好的自由基清除作用,还具有化学预防高血脂、动脉硬化和炎症等疾病的作用。近年来,β-谷甾醇对肝癌、胃癌、结直肠癌、肺癌和乳腺癌等癌症均表现出极佳的抑制作用,在癌症的预防与治疗方面具有很好的应用前景。该文对β-谷甾醇的抗癌作用及分子机制进行总结,以期为深入了解β-谷甾醇的抗癌作用以及未来在临床癌症的应用提供参考。

基于代谢组学解析抗感水稻差异代谢物β-谷甾醇对褐飞虱的杀虫活性

本研究利用代谢组学筛选抗性水稻中有活性的代谢物质,为开发控制褐飞虱Nilaparvata lugens的绿色植物源农药开拓思路。基于水稻品种对褐飞虱有抗性的差异,采用生长发育和存活率比较方法,验证了水稻品种Mudgo和TN1对褐飞虱的抗性差异;通过代谢组学分析抗褐飞虱水稻Mudgo和感褐飞虱水稻TN1代谢物的不同,筛选了品种间有显著差异的物质β-谷甾醇和无显著差异的物质豆甾醇作为褐飞虱生测物质,进行存活率和适合度功能验证,明确其对褐飞虱的功能效应。褐飞虱在Mugdo和TN1两种水稻品种上的生命参数间存在显著差异,在Mudgo水稻上发育历期延长,体重、体长和存活率降低。代谢组学分析共检测到69种差异代谢物,主要为脂质(36%)、碳水化合物(23%)、氨基酸(19%)、次生代谢物质(14%)、核酸(6%)及其他物质(1%)等6大类物质。褐飞虱人工饲料添加剂生测数据显示,褐飞虱取食20.0μg/mL和500.0μg/mL浓度β-谷甾醇,雌虫体重显著降低;取食500.0μg/mL浓度β-谷甾醇,雄虫体重显著降低。此外,取食不同浓度豆甾醇对褐飞虱体重均无显著性影响。β-谷甾醇对褐飞虱的存活率有显著降低作用,而豆甾醇只有在4.0μg/mL、100.0μg/mL和500.0μg/mL浓度下有降低作用。确认了水稻品种Mudgo对褐飞虱有显著的抗性,可显著降低存活率,抑制生长。代谢组学筛选到的69种差异代谢物可作为抗褐飞虱绿色植物源农药的备选库;其中,差异显著的代谢物质β-谷甾醇对褐飞虱体重和存活率有显著降低作用,可作为防治褐飞虱的植物源农药。

β-谷甾醇对猪卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响

旨在探索一种自然植物提取的抗氧化分子——β-谷甾醇(β-sitosterol,SITO)对猪卵母细胞体外成熟效率和早期胚胎体外发育质量的影响。本研究以在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度SITO为试验组,不添加SITO(含0.16%DMSO)的培养基为对照组,对屠宰场所得猪卵巢中收集到的卵母细胞进行体外培养,试验组浓度分别为10、20、40μmol·L~(-1),不同浓度各重复3次,每组培养卵母细胞150~200枚。培养46 h后,对卵母细胞成熟率进行统计,并收集成熟卵母细胞进行活性氧、细胞凋亡、线粒体膜电位染色以及相关基因的实时荧光定量PCR;对成熟卵母细胞进行孤雌激活,2 d后统计卵裂率,7 d后统计囊胚率,并统计囊胚细胞总数。结果发现,20μmol·L~(-1)SITO处理显著提高了猪卵母细胞的体外成熟率,且促进了孤雌激活后囊胚的形成并增加了囊胚细胞数,降低了卵母细胞中ROS含量,提高了抗氧化应激基因SOD和CAT的表达;同时,SITO降低卵母细胞的凋亡水平,增加抗凋亡基因BCL-2的表达,降低促凋亡基因Caspase 3和BAX的表达。此外,SITO可增强线粒体膜电位(ΔΨm),增加TFAM基因的表达。综上所述,本研究结果表明,在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加20μmol·L^(-1)SITO能够显著促进猪卵母细胞的体外成熟率、提高胚胎的体外发育能力和胚胎质量。

β-谷甾醇调控信号通路治疗乳腺癌的作用机制研究进展

乳腺癌是女性中最常见的癌症,并在女性癌症相关死亡的原因中排名第二。β-谷甾醇是当归等药用植物的主要活性成分,具有抗氧化、调节细胞周期、促进细胞凋亡和抗炎等作用,可通过调节雌激素、Wnt/β-catenin、PI3K/Akt、MAPK/ERK和NF-κB等信号通路发挥对乳腺癌的治疗作用。本研究旨在阐明β-谷甾醇在治疗乳腺癌中的作用机制,为其临床应用和新药研发提供理论基础。

β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响

目的探究β-谷甾醇对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)信号通路的调控作用。方法体外培养结肠癌细胞HCT116并分为β-谷甾醇高(240μmol/L)、中(120μmol/L)、低剂量(60μmol/L)组,设置空白对照组(0μmol/L)。应用不同浓度的β-谷甾醇处理HCT116细胞。24h后应用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测β-谷甾醇对HCT116细胞增殖的影响,并在显微镜下观察细胞的形态变化;应用Hoechst 33342细胞核染色法检测β-谷甾醇对HCT116细胞凋亡的影响;应用细胞克隆集落形成实验检测HCT116细胞的集落形成能力;应用蛋白质印迹技术检测HCT116细胞中PI3K、磷酸化Akt、Akt、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax等相关蛋白的表达情况;利用AutoDock软件实现β-谷甾醇与PI3K和Akt蛋白的分子对接。结果与对照组比较,β-谷甾醇可浓度依赖性地抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,抑制细胞的集落形成能力,促进细胞的凋亡;抑制HCT116细胞中磷酸化Akt、PI3K、Bcl-2蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达;β-谷甾醇与PI3K、Akt蛋白的结合均较为稳定。结论β-谷甾醇可通过抑制PI3K/Akt信号通路调节HCT116细胞的增殖与凋亡。

β-谷甾醇对帕金森病模型大鼠脑氧化应激损伤及Nrf2/HO-1蛋白通路的影响

目的 探讨β-谷甾醇对帕金森病模型按照随机数字表法大鼠脑氧化应激损伤的保护作用及对Nrf2通路蛋白表达的影响。方法 将40只2月龄SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为正常组、造模组、治疗组和美多芭组,每组10只。模型组、美多芭组及治疗组采用鱼藤酮葵花油乳液颈背部注射建立帕金森病大鼠模型。造模成功后,治疗组以60 mg/(kg·d)β-谷甾醇、美多芭组以5 mg/(kg·d)美多芭混悬液、正常组和模型组采用生理盐水分别灌胃,均为每天1次,连续14 d。采用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测试剂盒检测4组大鼠血清SOD、MDA含量,免疫组化检测4组大鼠脑黑质中黑质酪氨酸羟化酶(TH)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)阳性细胞数;Western blot检测4组大鼠脑组织中Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、蛋白醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组SOD含量降低、MDA含量升高,脑黑质TH、Nrf2阳性细胞数减少,脑组织中Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组和美多芭组SOD含量升高、MDA含量降低,脑黑质中TH、Nrf2阳性细胞数增加,脑组织中Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 β-谷甾醇可对帕金森病大鼠模型氧化应激损伤产生保护作用,其机制可能是通过调高Nrf2表达并激活下游信号通路蛋白。

西康扁桃仁中β-谷甾醇检测方法的建立

西康扁桃仁中植物甾醇含量丰富,且以β-谷甾醇为主。通过高效液相色谱法检测波长、流动相配比、流速、柱温等条件,确定西康扁桃仁中β-谷甾醇含量测定的最佳条件为检测波长201 nm,流动相为100%甲醇,流速1.0 mL/min,色谱柱温度40℃。方法学考察结果表明,该方法线性关系良好,精密度、重复性及稳定性的RSD值均小于2.0%,平均加标回收率106.14%,该方法稳定可靠,可用于西康扁桃仁中β-谷甾醇的含量测定。

超声波萃取苦荬菜叶中β-谷甾醇的工艺优化及其动态积累

为优化超声波辅助提取蒙早苦荬菜(Lactuca indica L.cv. Mengzao)叶中β-谷甾醇的工艺条件,并探究不同生长期叶中β-谷甾醇的含量,本研究采用超声波辅助乙醇提取法,以料液比、超声频率、提取温度和提取时间为影响因素,以β-谷甾醇提取率为考核指标,采用单因素试验法和Box-Behnken方法优化了β-谷甾醇提取工艺,并测定了不同生育阶段蒙早苦荬菜叶的β-谷甾醇含量。结果表明:蒙早苦荬菜叶中β-谷甾醇的最佳提取工艺为提取时间20 min、温度60℃、频率80 KHz、料液比为1∶30 g·mL^(-1)。在此条件下,提取量达到最高,为12.08 mg·g^(-1)。各因素对苦荬菜中β-谷甾醇提取量的影响大小顺序为:料液比>时间>频率>温度。对不同生育期(幼嫩期、营养生长期、开花初期、开花中期、开花末期、结实期)蒙早苦荬菜叶片的β-谷甾醇提取量进行分析发现,开花初期为最佳收获期,β-谷甾醇提取量最高,达13.22 mg·g^(-1)。目前,β-谷甾醇多应用于医疗领域,但都处于探索阶段,仍需进行更为深入系统的研究。

中药药用成分β-谷甾醇的预测及其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分,并分析其对辐照宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法通过Coremine Medical、TCMSP、Uniprot以及Cytoscape数据库查找宫颈癌差异基因靶向中药及其药用成分和对应靶点,并筛选出核心靶点和关键药用成分。通过STRING数据库分析关键药用成分对应靶点基因与宫颈癌差异基因的蛋白互作。采用MTT、细胞划痕实验和Western blotting实验检测关键药用成分对辐照前后宫颈癌HeLa、Siha细胞增殖、迁移和DNA断裂水平的影响。结果共预测出宫颈癌差异基因的有效靶向中药9种。共得到96种药用成分和252个靶点基因,其中关键药用成分为β-谷甾醇,并筛选出其对应的核心靶点基因10个。β-谷甾醇的相关核心靶点基因与宫颈癌差异基因表达蛋白存在互作。β-谷甾醇抑制辐照前后宫颈癌细胞的增殖与迁移,促进宫颈癌HeLa细胞以及Siha细胞的DNA断裂水平。结论预测宫颈癌差异基因的靶向中药关键药用成分为β-谷甾醇,其可抑制辐照宫颈癌细胞的增殖与迁移。

高效液相色谱法同时测定泻白散颗粒剂中绿原酸、山柰素及β-谷甾醇的含量

目的 建立泻白散颗粒剂中绿原酸、山柰素及β-谷甾醇含量的高效液相色谱测定法。方法 采用高效液相色谱法,使用ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0~10 min,5%~20%A;10~25 min,20%~50%A;25~35 min,50%~100%A;35~45 min,100%A);流速:1 ml/min;检测波长:360 nm,205 nm;柱温:30℃;进样量10μl。测定泻白散颗粒剂中绿原酸、山柰素及β-谷甾醇的含量。结果 绿原酸在29.6~592μg/ml范围内线性关系良好;山柰素在2.08~41.6μg/ml范围内线性关系良好;β-谷甾醇在6.2~310μg/ml范围内线性关系良好。精密度、稳定性和重复性试验的RSD均不大于2.0%。结论 建立的泻白散颗粒剂中绿原酸、山柰素及β-谷甾醇的含量测定方法,重复性及稳定性良好,可作为泻白散颗粒剂的质量控制方法。

高效液相色谱法测定花生中β-谷甾醇的含量

目的:建立超声波辅助萃取-高效液相色谱法快速检测花生中β-谷甾醇的分析方法,并应用该方法对辽宁、山东和河南3个花生种植大省不同品种花生中β-谷甾醇的含量进行分析测定。方法:样品经85%乙醇溶液(乙醇∶水=85∶15,V∶V)超声提取,离心,中性氧化铝去色素和杂质后,经Agilient ZORBAX SB-C_(18)色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果:β-谷甾醇在1.0~100.0 mg·L^(-1)范围内与峰面积线性关系良好,回归方程为y=10.070x+2.348(r=0.9999);平均加标回收率为88.5%~106.9%,相对标准偏差为2.31%~4.73%(n=6),检出限为0.5 mg/100 g。运用该方法对30个花生样品进行检测,不同品种花生β-谷甾醇含量在31.6~77.0 mg/100 g。结论:该方法简单快捷、重复性好、准确度和灵敏度较高,适用于花生中β-谷甾醇的快速检测。

HPLC法同时测定牛大力中豆甾醇和β-谷甾醇含量

【目的】建立一种同时测定牛大力中豆甾醇和β-谷甾醇含量的高效液相色谱法。【方法】采取超声提取法,提取溶剂为100%甲醇,提取料液比为1∶20 g/mL,提取时间为60 min;检测色谱柱为CAPCELL PAK C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(97∶3),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为210 nm,进样量为20μL。【结果】豆甾醇、β-谷甾醇分别在0.0202~1.0120 mg/mL(r=0.9997)、0.0202~1.0075 mg/mL(r=0.9998)范围内与峰面积呈现良好的线性关系,平均回收率分别为98.3%、96.8%,RSD分别为1.20%、1.64%,方法精密度、重复性、稳定性均良好。【结论】该方法简便快速、准确稳定、灵敏度高、专属性强,适用于牛大力中豆甾醇和β-谷甾醇含量的测定;该方法可为牛大力进行质量控制提供参考方法,可为牛大力进行深入开发提供科学借鉴。

β-谷甾醇对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞功能的影响及机制

目的 研究β-谷甾醇对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞MH7A功能的影响及其机制。方法 使用网络药理学筛选β-谷甾醇的作用靶点及治疗RA的靶点,两者取交集后进行拓扑分析寻找治疗RA的最关键靶点。用不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)的β-谷甾醇处理MH7A细胞并用CCK-8法检测细胞活性,筛选β-谷甾醇的最适给药浓度。采用10 ng/mL肿瘤坏死因子(TNF-α)体外诱导MH7A细胞后,加入β-谷甾醇(最适给药浓度)处理。CCK-8法和EdU法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell侵袭法分别检测细胞迁移及侵袭能力;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的水平;qRT-PCR法和Western blot法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA和蛋白表达水平。MH7A细胞转染PPARα小干扰RNA,并通过上述实验方法检测PPARα敲低后β-谷甾醇对MH7A细胞增殖、迁移、侵袭、炎症因子分泌及PPARα蛋白表达的影响。结果 PPARα是β-谷甾醇治疗RA的最关键靶点,β-谷甾醇的最适给药浓度为20μmol/L。与模型组相比,β-谷甾醇组MH7A细胞活力显著降低、细胞增殖数显著减少(P<0.05),细胞迁移率显著降低、细胞侵袭数显著减少(P<0.05),IL-1β水平、IL-6水平均显著降低(P<0.05),PPARα mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.05)。与阴性对照小干扰RNA组相比,敲低PPARα后细胞活力上升35.6%(P<0.05),细胞增殖数、细胞迁移率和细胞侵袭数均显著增加(P<0.05),IL-1β水平及IL-6水平均显著升高(P<0.05)。结论 β-谷甾醇可以抑制TNF-α诱导的MH7A细胞的增殖、迁移、侵袭和炎症因子分泌,其作用机制与激活PPARα通路有关。

β-谷甾醇对脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应及乳蛋白合成的影响

本试验旨在探讨β-谷甾醇(BSS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)炎症反应及乳蛋白合成的影响。以体外培养的HC11细胞为模型,分为5组,对照组(生长培养基处理)、乳腺炎症模型组(LPS组,1μg/mL LPS处理)以及炎症模型药物组(BSS+LPS组,分别用5、10、20μmol/L的β-谷甾醇预处理1 h后加入1μg/mL LPS),每组设置5个重复。检测炎性细胞因子和乳蛋白mRNA表达以及乳蛋白合成信号通路相关基因mRNA和蛋白表达。结果表明:1)与对照组相比,LPS组的HC11细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2和iNOS的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,LPS组的HC11细胞β酪蛋白(CSN2)、κ酪蛋白(CSN3)和乳清蛋白(LALBA)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞CSN2、CSN3和LALBA的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,LPS组的HC11细胞信号转导和转录激活因子5(STAT5)、酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)和核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),同时磷酸化信号转导和转录激活因子5(p-STAT5)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞STAT5、JAK2、mTOR、4EBP1和S6K1的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),同时p-STAT5、p-JAK2和p-mTOR的蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,β-谷甾醇能够抑制LPS诱导的HC11细胞炎症反应和促进乳蛋白的合成。

β-谷甾醇在辣椒疫霉菌生长发育中的作用研究

辣椒疫霉菌是一种缺乏甾醇合成必要基因的疫霉属重要植物病原卵菌,其可利用植物中富含的β-谷甾醇等甾醇类物质完成生活史。为了明确β-谷甾醇在辣椒疫霉菌不同生长发育阶段中的作用,本研究设置系列浓度梯度(0.2、1.0、5.0、25.0、125.0µg·mL^(-1)),测定了其对辣椒疫霉菌孢子囊和卵孢子形成的影响,观测了β-谷甾醇处理后菌丝的生长及形态结构,探究了其对辣椒疫霉菌细胞膜透性的影响。结果表明,β-谷甾醇对辣椒疫霉菌生长发育具有重要作用,表现为低浓度促进生长发育,高浓度抑制生长发育。具体表现为:当β-谷甾醇浓度为0.2µg·mL^(-1)时,其对辣椒疫霉菌菌丝生长、孢子囊和卵孢子形成具有促进作用;当β-谷甾醇浓度高于5.0µg·mL^(-1)时,其对菌丝生长及孢子囊和卵孢子形成表现出抑制作用;且随着β-谷甾醇浓度的升高,其抑制作用随之增强。在β-谷甾醇对辣椒疫霉菌菌丝生长抑制有效中浓度(EC50=10.0µg·mL^(-1))下,其对菌丝有明显的致畸作用,细胞膜通透性增大,对菌丝生长、孢子囊和卵孢子形成的抑制率分别达6.2%、70.0%和55.3%。表明β-谷甾醇对辣椒疫霉菌生长发育的作用与其浓度密切相关。本研究结果可为由辣椒疫霉菌引起的植物疫病防控途径开发提供理论依据。

β-谷甾醇对脂多糖诱导的乳腺上皮细胞氧化应激及乳脂合成的影响

本试验旨在探讨β-谷甾醇(BSS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)氧化应激及乳脂合成的影响。试验以体外培养的HC11细胞为模型,分为5组:对照组(CON组,生长培养基处理)、乳腺炎症模型组(LPS组,1μg/mL LPS处理)以及炎症模型药物组(BSS+LPS组,分别用5、10、20μmol/L的BSS预处理1 h后加入1μg/mL LPS),每组设置5个重复。检测HC11细胞氧化应激指标及抗氧化相关基因、乳脂合成相关基因mRNA和蛋白表达的变化。结果表明:1)与CON组相比,LPS组的HC11细胞丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性显著升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞MDA、NO含量及iNOS活性显著降低(P<0.05),SOD、GPx、CAT活性和T-AOC显著升高(P<0.05)。2)与CON组相比,LPS组的HC11细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。3)与CON组相比,LPS组的HC11细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)和硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,5、10、20μmol/L BSS+LPS组的HC11细胞PPARγ和SREBP1 mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),ACC、FAS和SCD mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,BSS能够抑制LPS诱导的HC11细胞氧化损伤,并能促进氧化应激状态下HC11细胞乳脂的合成。

β-谷甾醇对小鼠乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪合成的影响

为探讨β-谷甾醇对泌乳动物乳腺乳蛋白和乳脂肪合成的影响,研究首先利用MTT法筛选出对小鼠乳腺上皮细胞生长增殖不受抑制的β-谷甾醇剂量;采用qRT-PCR技术检测β-谷甾醇处理乳腺上皮细胞后乳蛋白合成相关基因和乳脂肪合成相关基因的mRNA表达水平。结果表明:较高剂量(40~120μmol/L)的β-谷甾醇明显抑制小鼠乳腺上皮细胞的活力(P<0.05),故后续试验添加5、10、20μmol/L的β-谷甾醇处理乳腺上皮细胞。β-谷甾醇明显提高酪蛋白基因CSN1S1、CSN2、CSN3及乳蛋白合成通路相关基因JAK2、STAT5、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P<0.05),但5、10μmol/L的β-谷甾醇对4EBP1基因的mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。β-谷甾醇显著上调乳脂肪合成关键调控因子SREBF1、PPARG、PPARGC1A和脂肪酸合成相关基因ACC、FAS、SCD的mRNA表达(P<0.05)。由此可见,β-谷甾醇能通过调节小鼠乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞乳蛋白和乳脂肪的合成。