心肌细胞的培养鉴定及β3-AR蛋白提取方法的比较

目的优化培养乳鼠心肌细胞的技术,筛选出简便、准确、特异的提取心肌细胞β3-肾上腺素能受体(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法收集心肌细胞,分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白;BCA法进行蛋白定量;Western blot法检测蛋白样品中β3-AR和GAPDH相对含量及提取蛋白的特异性。结果优化心肌细胞的培养方法可以使所得细胞产量大、浓度高,满足后续实验。试剂盒法提取蛋白的浓度(8.26±0.29)g/L>总蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L>超速离心法的(3.20±0.37)g/L,差异均有统计学意义。Western blot检测结果示,试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)>超速离心法(0.09±0.03)>总蛋白提取法(0.01±0.01),差异均有统计学意义。结论优化培养心肌细胞的方法可获得高产量、高纯度的细胞。试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性。