流行性乙型脑炎高免阳性血清的制备与应用

为满足乙型脑炎活疫苗的鉴别检验及外源病毒检验需求,以乙型脑炎活疫苗和灭活疫苗为免疫原,通过对SPF鸡进行反复免疫制备乙型脑炎特异性血清。当血清效价满足要求时,以心脏采血法采集血清,经分装、冻干后,开展纯净性检验、噬斑减少中和效价测定、特异性检验、剩余水分测定和均匀性检验,并对乙型脑炎活疫苗进行鉴别检验和外源病毒检验。结果显示:制备的乙型脑炎阳性血清无菌、支原体及外源病毒检验结果均为阴性,与口蹄疫病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和牛病毒性腹泻病毒等均无交叉反应,噬斑减少中和效价大于1:1 000,剩余水分<3%,且10个样品的效价测定结果组内、组间均无明显差异(P<0.05)。结果表明,制备的乙型脑炎阳性血清效价高,剩余水分少,纯净性、特异性、均匀性均良好,可满足乙型脑炎活疫苗的检验需求。

猪流行性乙型脑炎的诊断与预防

【目的】探讨猪流行性乙脑(又名“日本乙型脑炎”)的防治策略,为猪场疫病防控提供借鉴和参考,以保障猪场稳定生产。【方法】基于对猪流行性乙型脑炎的全面分析,总结其流行病学特征:妊娠母猪感染乙脑会表现流产或早产,新生仔猪可能表现出全身性痉挛,公猪在高热后会出现睾丸肿胀。提出其主要的诊断方法是通过细菌学和病毒学检测进行确定。【结果】猪流行性乙脑的治疗措施主要为康复猪血清或抗血清的应用、加强饲养管理、降低颅内压、利尿解毒和使用免疫增强剂等。【结论】作为一种严重的人畜共患传染病,猪流行性乙脑在亚洲各国包括中国的部分地区广泛存在。为有效控制猪流行性乙脑的传播,猪场需加强对其病原学特点和传播方式的认识,采取免疫接种、灭蚊和做好人员防护等措施进行综合防控。

乙型脑炎病毒部分NS1基因假病毒的构建

目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基因片段次序连接克隆到该质粒上,构建重组载体pET-MS2-JEV;转化大肠杆菌后表达纯化假病毒,并对其进行耐受性和稳定性评估。结果构建了重组载体pET-MS2-JEV,表达获得的假病毒具有耐核酸酶、耐物理化学因子的特性,可在4℃和-20℃条件下稳定保存。结论本研究获得了稳定性好的含JEV部分NS1基因的假病毒,可作为JEV实验室核酸检测的质控品。

抗日本乙型脑炎病毒的线粒体靶向小分子化合物的筛选及鉴定

[目的]线粒体作为重要的能量代谢细胞器,不仅可以调控宿主先天免疫通路影响病毒复制,而且其生物学功能的改变与病毒生命周期密不可分。本文旨在确定抑制日本乙型脑炎病毒(JEV)的线粒体靶向化合物。[方法]通过体外CCK-8、间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、RT-qPCR以及细胞因子检测等试验,对382种线粒体靶向化合物抗JEV的效果进行评价,筛选到的敏感药物在小鼠体内进行抗病毒效果验证。[结果]通过药物初筛,从382种药物中筛选出9种疑似抗JEV药物,进一步的体外分子试验筛选确定了其中3种药物对JEV复制有明显的抑制作用,分别为丙酮酸钠(sodium 2-oxopropanoate)、布喹那(brequinar)及松果菊苷(echinacoside)。动物试验结果表明,3种药物有效抑制了JEV在小鼠体内的增殖,给药组小鼠体重增加明显高于对照组,血液中的病毒含量更低,死亡率更低,细胞因子水平出现显著变化,其中以布喹那给药组最为明显。[结论]成功筛选出3种抗JEV的线粒体靶向化合物,为探究线粒体在病毒复制中发挥的作用提供了借鉴,也为抗JEV的临床药物研发提供了新思路。

乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

1例猪乙型脑炎的诊治

猪乙型脑炎（又名猪日本乙型脑炎，流行性乙型脑炎，简称乙脑），是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种急性人畜共患传染病。据统计．近几年东海县部分乡镇生猪发生的“猪高热病”中．猪乙型脑炎或猪乙型脑炎伴发猪呼吸与繁殖障碍综合症等其它传染病的病例占整个猪高热病的14．5％，给生猪生产造成了一定损失。现摘1例报告如下：

乙型脑炎病毒激活天然免疫应答的特点

流行性乙型脑炎(JE)是由乙型脑炎病毒(JEV)感染引起的人兽共患病,威胁人类健康和畜牧业健康发展。天然免疫作为机体防御的第一道防线,在抵抗病原感染过程中发挥重要作用。病原微生物感染机体后,宿主模式识别受体(PRRs)通过识别病原相关分子模式(PAMPs)诱导天然免疫发挥抗病毒功能,其中干扰素和炎性因子至关重要。为了逃逸宿主的免疫清除,JEV进化出多种策略抑制天然免疫,促进自身复制。本文通过论述JEV基因组结构和致病机理,总结机体天然免疫分子识别JEV PAMPs激活天然免疫应答的方式,并进一步阐释JEV调控天然免疫应答的策略,有利于深入理解该病毒的致病机理,为JE的防控提供思路。

乙型脑炎病毒非结构蛋白的表达及与hnRNP K的相互作用

【目的】为探明JEV病毒复制与宿主蛋白的关系。【方法】首先构建非结构蛋白质粒,然后将构建成功的非结构蛋白的质粒转染至Vero细胞中,24 h在荧光显微镜下观察蛋白表达情况,再分别与pCMV-MYC-hnRNP K质粒同时转染至Vero细胞中,培养24 h,收取细胞蛋白样,进行Co-IP试验相关步骤,用Western-blot实验进行结果呈现,得出试验结果。【结果】构建的非结构蛋白质粒在Vero细胞中可以表达,通过与表达hnRNP K蛋白的质粒共转染,通过Co-IP试验经Western-blot结果分析能够得出JEV的NS1与hnRNP K之间存在相互作用,JEV的NS2a、NS3、NS5与宿主hnRNP K之间不存在相互作用。【结论】JEV的NS1蛋白与宿主蛋白hnRNP K存在相互作用,为JEV非结构蛋白的研究进一步拓宽了思路,同时为JEV病毒在宿主细胞中的生命活动周期的研究提供了基础,为深入研究JEV病毒复制提供了新方向。

一例猪伪狂犬与猪乙型脑炎脑病毒混合感染的诊断

猪伪狂犬病(PRV)是由伪狂犬病病毒引起的一种以发热和脑脊髓炎为特征的急性传染病[1]。此病危害新生仔猪的消化系统、呼吸系统以及神经系统,可致母猪繁殖障碍。我国猪群普遍存在PRV野毒感染,并呈散发性流行。近年来猪场伪狂犬病的感染率逐年上升,严重影响养猪业的发展[2,3]。猪乙型脑炎又称日本乙型脑炎,是由乙型脑炎病毒引起一种人和动物均可感染的由蚊虫介导感染的病毒性疾病。其中人,猪,马,猴,驴感染后脑炎症状明显,病死率高。

家畜乙型脑炎及其防控措施

乙型脑炎病毒又称为日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus),是亚洲人类神经系统疾病的一个重要病因,每年造成约70000例人类病例,约10000人死亡。该病毒通过蚊子传播,尤其是库蚊属的蚊子,能够在蝙蝠、鸟类和一些牲畜物种中传播。该病毒感染家畜会导致一系列疾病,对猪的影响尤其明显,成年猪感染一般不会引起明显症状,但会导致严重的生殖问题。

小鼠流行性乙型脑炎疾病进展中反应性星形胶质细胞活化模式的变化及干预

目的 明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法 首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技术(RNA-seq)、实时定量PCR明确流行性乙型脑炎发病不同阶段星形胶质细胞活化模式的变化;最后,通过侧脑室注射鸢尾素(irisin)调控补体C3阳性A1型星形胶质细胞、 S100钙结合蛋白A10(S100A10)阳性的A2型星形胶质细胞活化比例,探索其是否可改善乙型脑炎模型小鼠的体质量、行为学评分及脑组织损伤情况。结果 流行性乙型脑炎模型组小鼠的M1、 M2等运动皮层脑区和海马组织中NS3蛋白显著增加。上述区域胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞的数目和体积较对照组也显著增加,其中JEV感染后与A1/A2型星形胶质细胞活化相关的基因均显著升高。侧脑室或者腹腔注射irisin虽不能改善流行性乙型脑炎预后,但可在一定程度上抑制A1型星形胶质细胞活化,减轻神经炎症。结论 JEV主要感染小鼠的运动皮质和海马神经元,且星形胶质细胞异常激活导致神经炎症损伤。Irisin可能抑制A1型星形胶质细胞激活,减轻JEV感染后的神经炎症。

两种流行性乙型脑炎疫苗的安全性和免疫效果观察

目的观察乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗和Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗(Vero细胞乙脑疫苗)的安全性和免疫效果。方法在湖南省沅江市和衡东县筛选8～20月龄无乙脑疫苗免疫史(基础免疫组)和1.5～3岁完成了基础免疫(加强免疫组)的二组健康儿童作为观察对象。沅江市的观察对象接种乙型脑炎减毒活疫苗,衡东县的观察对象接种Vero细胞乙脑疫苗。然后从每个市县的二组观察对象中抽取部分对象检测免疫前和免疫后1个月血清乙脑中和抗体滴度,并观察其接种不良反应。结果乙型脑炎减毒活疫苗接种不良反应总发生率为5.2%;Vero细胞乙脑疫苗接种不良反应总发生率为8.8%。两种疫苗的接种不良反应以全身发热为主,分别占不良反应的95.4%和92.3%,发热72h后恢复正常。乙型脑炎减毒活疫苗基础免疫后抗体阳性率为82.5%,抗体几何平均滴度(GMT)为1:23.1;加强免疫后抗体阳性率为93.2%,GMT为1:28.6。Vero细胞乙脑疫苗基础免疫后抗体阳性率为83.2%,GMT为1:25.1;加强免疫后抗体阳性率为93.7%,GMT为1:32.4。结论乙型脑炎减毒活疫苗和Vero细胞乙脑疫苗安全、有效,可在预防控制乙脑工作中推广使用。

郴州市使用乙脑疫苗后33年来流行性乙型脑炎的流行特征

目的 了解湖南省郴州市使用乙脑疫苗后33年来乙脑的动态变化趋势及其流行病学特征。方法 对郴州市使用乙脑疫苗后33年来（1972-2004年）的乙脑疫情监测资料进行整理建立数据库，用SPSS10.0统计软件包进行X^2等统计学检验。结果 郴州市使用乙脑疫苗后的33年间乙脑发病率差异有显著性（X^2=2464．92，P〈0．01），年平均发病率为4．27／10万；流行强度明显减弱，疫区范围逐渐缩小。80.88％的病例为学龄前儿童；发病具有明显季节性，7、8月是发病的高峰月，占全年病例数的78．41％。结论 乙脑疫苗的免疫接种对预防和控制乙脑的发生起着重要作用，且已取得显著成效，但仍需加强对学龄前儿童的乙脑疫苗免疫接种。

云南省宾川县流行性乙型脑炎爆发流行调查及实验研究

１９９１年宾川县乙脑爆发流行，病例以儿童居多，调查揭示流行区有蚊种６种，ＨＩ检测阳性率：人为４６．６７％，猪为７８．６８％，羊为４７．６７％，鸡为１３．９５％。从患者血液分离到病毒８株，蝙蝠４株，鹭鹰一株，家燕１株，部份毒株经鉴定为乙脑病毒。

1990年河南省流行性乙型脑炎流行特点分析

１９９０年河南省流行性乙型脑炎流行特点分析河南省卫生防疫站（郑州４５０００３）吴振溢，张彦平，郭万申，胡卫峡，余福勋，李瑞兰，何家龙（指导）１９９０年，河南省流行性乙型脑炎（以下简称乙脑）出现了较大的流行，全省共报告病例９５１１例，发病率为１１．１２...