卵泡抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒的构建及表达

目的 :构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法 :通过PCR扩增pCMV S基因中的S基因片段 ,然后将抑制素α(1 32 )片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒pcDNA13.1( ) :酶切、测序鉴定后 ,采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞 ,用SDS PAGE和ELISA对其表达产物进行检测。用抑制素融合表达质粒免疫大白鼠 ,ELISA检测血中抗抑制素抗体水平。结果 :酶切鉴定和序列分析表明 ,融合基因的表达质粒pClS构建成功。表达质粒在HeLa细胞中获得了表达 ,融合蛋白的分子量约为 2 9kD ,融合蛋白具有抑制素免疫原性。重组质粒免疫使大白鼠产生了抗抑制素抗体。结论 :高免疫原性的抑制素表达质粒的构建为利用抑制素基因免疫技术诱导单胎动物生多胎奠定了基础。

中药联合干扰素对慢性乙肝患者血清乙肝表面抗原及乙肝病毒e抗原影响的系统评价

目的系统评价中药联合干扰素对慢性乙型肝炎(乙肝)患者血清乙肝表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)的影响。方法根据系统评价的原则制定检索策略,收集符合纳入标准的文献,提取数据并应用RevMan 4.2软件进行分析。结果最终筛选出9篇文献,质量均不高。Meta分析结果显示:中药联合干扰素组的血清HBsAg阴转指标的相对危险度(RR)值为1.63[95%CI(1.04,2.55)],血清HBeAg阴转指标的RR值为1.37[95%CI(1.14,1.64)],与干扰素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论就阴转血清HBsAg和HBeAg这两个指标来看,中药联合干扰素治疗的效果优于单用干扰素。

乙肝表面抗原在慢性乙型肝炎病毒感染临床不同阶段的变化

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者不同临床阶段乙肝表面抗原（HBsAg）定量值的变化。方法：收集2012年1月至2013年5月安徽医科大学第二附属医院246例未经抗病毒治疗的HBV感染患者血清，其中慢性HBV携带患者（HBV携带组）4l例，慢性乙型肝炎患者（乙型肝炎组）99例，乙肝肝硬化（肝硬化组）患者70例，原发性肝癌（肝癌组）患者36例。结果：在HBV携带组、乙型肝炎组、肝硬化组及肝癌组中HBsAg定量值的中位数（4分位数间距）分别是135 280．oo（1 788．80。51 820．00）IU／mL，8 218．00（1 644．60～266 700．80）IU／mL。1 280．38（265．70～2 375．00）IU／mL．925．10（135．05-2 381．8）IU／mL。HBsAg与HBVDNA定量水平呈正相关性（L=0．332，P=0．000），HBsAg定量与年龄呈负相关性（L=-0．496，P=0．000）。结论：HBV携带组、乙型肝炎组、肝硬化组及肝癌组中HBsAg定量值HBV DNA逐渐下降．且HBsAg定量值与血清HBV DNA水平呈正相关性。HBsAg定量与年龄呈负相关性。

热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原的新方法

以Ｎ－异丙基丙烯酰胺为单体，将水溶性热敏高分子聚异丙基丙烯酰胺（ＰＮＩＰ）和抗体偶联，用异硫氰酸荧光素标记羊抗人乙肝表面抗原抗体，建立了夹心型热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的新方法．评价了抗体在ＰＮＩＰ上的固定效率和非特异性吸附情况．ＨＢｓＡｇ在０．５～１００μｇ／ｍＬ范围内与体系荧光强度呈良好的线性关系，检出限为１０ｎｇ／ｍＬＨＢｓＡｇ．该方法既具有均相免疫分析的快速性，又有固相免疫分析的高灵敏度．用于乙肝病人血清中ＨＢｓＡｇ水平的测定。

乙型肝炎患者不同突变谱的乙肝表面抗原水平变化

目的本研究旨在探讨乙肝表面抗原(HBsAg)滴度、HBV DNA水平与乙肝基因突变位点的相关性,确定耐药突变是否会影响HBsAg水平。方法本研究共纳入2843例患者。所有患者首先分为突变组和非突变组,然后根据突变位点将突变组分为M204I/V、L180M+M204V、L180M+M204I、A181T、N236T、A181T+N236T等组别。同时收集患者HBsAg、HBV DNA、肝功能和HBV基因分型等资料,采用t检验对正态分布数据进行组间比较,χ2检验用于分类数据的比较,pearson相关分析描述两个变量之间的相关性。结果耐药突变组与非突变组间HBV DNA水平差异有统计学意义(t=7.675,P<0.001)。非突变组和各突变组血清HBsAg滴度与HBV DNA水平呈正相关(非突变组:r=0.413,P<0.001;rtM204I/V:r=0.380,P<0.001;L180M+M204V:r=0.300,P<0.001;rtA181V:r=0.258,P=0.008;rtN236T:r=0.369,P=0.004),但rtL180M+rtM204I突变组和rtA181V+rtN236T突变组血清HBsAg滴度与HBV DNA水平无相关性。L180M+M204I突变组HBV DNA水平显著高于M204I/V和L180M+M204V突变组(t=-4.362,P<0.001;t=-3.763,P<0.001)。rtA181T+rtN236T突变组血清HBsAg滴度明显低于N236T单位点突变组(t=2.005,P=0.038)。结论HBV RT区不同变异影响HBsAg水平及其和HBV DNA的相关性。

生长抑素与乙肝表面抗原真核表达载体构建及其对Vc獭兔生长的影响

人工合成生长抑素(Somatostatin,SS)基因,与乙肝表面抗原基因融合,插入pMD-18T克隆载体,经序列分析证明,所得目的基因743bp,与设计一致。提取质粒后用Sma和Nhe双酶切,克隆入pIRES1neo-CMV表达载体,构建pIRES-HBsAg/SS质粒。用乳酸-乙醇酸共聚物包裹后,在Vc獭兔后肢进行肌肉注射,比较与注射生理盐水的对照组的增重差异,结果发现60d后,试验组家兔累积增重比盐水组高61.02%(P<0.01)。

乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S)基因在转基因苹果中表达

构建了乙肝表面抗原大蛋白基因PRS-S1S2S的表达载体pYF9616,通过根癌农杆菌介导法首次将该基因导入苹果品种红爱佳中,得到了抗卡那霉素的GUS阳性转化植株。随机取3株GUS染色阳性的转基因苹果植株经PCR扩增及RT-PCR检测证实该基因已整合入转基因苹果的基因组,并在转录水平得到了表达,ELISA检测证明在苹果植株中正确表达了乙肝表面抗原大蛋白基因。

纳米磁性微球免疫伏安法测定乙肝表面抗原

采用化学键合法将乙肝抗体固化在自行制备的纳米磁性高分子功能微球表面 ,利用免疫夹心反应原理 ,捕获溶液中的乙肝表面抗原和标记有辣根过氧化物酶的乙肝第二抗体 .在外加磁场的作用下 ,抗体抗原结合物从样品溶液中分离 ,在含有邻氨基苯酚和过氧化氢的底液中 ,生成具有电活性的化合物 3 氨基吩呃嗪 ,用示差脉冲伏安法进行测定 .响应电流与乙肝表面抗原浓度分别在 0 2～ 1 0和 1 0～ 5 0 0ng·mL-1成线性关系 ,检出限达 0 0 60ng·mL-1.采用本方法检测血清中乙肝表面抗原 ,灵敏度大大高于目前临床采用的酶联免疫吸附法 .

溶胶-凝胶非标记免疫传感器检测乙肝表面抗原

采用溶胶 凝胶 (sol gel)技术包埋乙肝表面抗体 (HBsAb) ,涂布于金盘电极表面 ,构成sol gel HBsAb/Au非标记免疫传感器 ,用于检测人血清中乙肝表面抗原 (HBsAg)。该传感器对HBsAg的电位响应遵循Nernst方程 ,在 1～ 330 μg/L浓度范围内 ,传感器的电位响应值ΔE与HBsAg浓度C的对数呈线性关系 ,线性回归方程为ΔE =1 8.1 7+79.84lgC。响应时间为 3min。癌胚抗原、甲胎蛋白等对测定无明显影响。对于HBsAg阴性血清 ,电位响应值ΔE <30mV ,而对于阳性血清则ΔE >30mV ,据此 ,作为临床判别的依据。对1 0 0例临床血清分别用传感器和酶联免疫法 (ELISA)进行双盲检验 ,两法的符合率为 86 %。

乙肝表面抗原结合蛋白的红色荧光示踪分子的表达纯化和功能鉴定

乙肝表面抗原结合蛋白（HBsAg binding protein，SBP）是本实验室发现的一种可以与乙肝表面抗原HBsAg特异性结合的人源蛋白，已被证实具有增强乙肝疫苗免疫效果的作用。DsRed—Monomer是来源于DsRed的人工突变体，作为蛋白表达的报告基因在真核细胞中使用。为探究SBP的作用机理，通过基因工程方法将该基因与DsRed—Monomer基因连接，克隆到原核表达载体，表达带有红色荧光的融合蛋白，该蛋白通过荧光激发检测显示荧光强度与蛋白量成正比例关系。同时该融合蛋白经过ELlSA方法检测可以与HBsAg特异性结合，使用常规方法和荧光量检测两种方法测定得到的该蛋白与HBsAg的亲和常数相似。首次证实了DsRed—Monomer在原核表达中可作为报告基因进行研究和使用，建立了利用荧光量检测蛋白的方法，与常规ELISA方法比较证明，大大缩短了试验时间和步骤，可以更方便的应用于分子示踪及其功能研究。

乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄的遗传转化体系的建立

以丽春番茄无菌苗的子叶为外植体,以农杆菌菌株EHA105(包含质粒pBin438S)为载体,将乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄组织中.基本培养基采用MS+6-BA1 0mg/L+IAA0 2mg/L,在共培养时加入乙酰香酮100μmol/L作为诱导剂,经过组织培养得到转基因植株.对转化植株基因组进行的分子学PCR检测表明,外源基因有可能已整合到番茄基因组中.该转基因遗传体系的建立为利用转基因植物生产乙肝口服疫苗奠定了基础.

罗氏Cobas e601与雅培Architect i2000检测乙肝表面抗原的比较

目的比较罗氏电化学发光检测仪Cobas e601与雅培化学发光微粒子免疫分析仪Architect i2000检测乙肝表面抗原的结果。方法选取在雅培i2000检测仪上检测乙肝表面抗原结果为有反应性,且定量结果小于250IU/mL的标本,同时在罗氏e601进行检测,分析比较检测结果间的差别,并进行直线相关和回归分析。结果共检测46份临床标本,剔除1份两台仪器上检测结果反应性不符的标本外,其余结果具有很好的相关性。其中雅培检测值为0.05~1.00IU/mL的15份,两者的直线回归方程为Y=17.49 X＋0.843,相关系数r=0.979;1.1~10.00IU/mL的15份,两者的直线回归方程为Y=15.72 X＋21.06,相关系数r=0.952;11~250IU/mL的15份,两者的直线回归方程为Y=29.17 X-129,相关系数r=1.000。结论两种方法的检测结果具有很好的相关性,并可以通过公式进行相互换算。

毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化(英文)

乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁，而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段，乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后，对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法，探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明，FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基，溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响，甲醇诱导最佳终浓度为1％（V／V），发酵的最适pH值为5．4～6．0。发酵罐放大培养后，ELISA和SDS—PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达，最终菌体生物量达到310 OD600，表达量达到27mg／L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22nm类病毒颗粒，为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。

ELISA检测592例乙肝表面抗原复检结果的分析

目的总结分析592例ELISA手工检测乙肝表面抗原的复检结果特点,进一步提高ELISA手工检测的质量。方法以0.7≤S/CO<10作为复检范围,从67 070例ELISA手工检测HBsAg的结果中筛选出592例进行复检,两次结果一致则报告结果;如不一致则再次ELISA复检或采用MEIA进行复检,以两次一致的ELISA或MEIA结果报告。分析初检时造成假阳性或假阴性结果的原因。结果按照2007年上海市临床检验中心复检要求,以0.7≤S/CO<2为复检范围,复检率为0.48%(325/67 070);本实验室扩大复检范围,以0.7≤S/CO<10为复检范围,复检率为0.88%(592/67 070),初复检结果符合率为65.88%(390/592),初检假阴性率为1.35%(8/592),初检假阳性率为32.77%(194/592)。结论严格遵守操作规程,根据实验室实际情况扩大复检范围,确保实验结果准确性。

用于乙肝表面抗原检测的压电免疫传感器的研制

研制了一种用于乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）检测的新型传感器———石英压电免疫传感器。采用聚乙烯亚胺粘附和戊二醛交联法在金电极上固定抗体蛋白，对固定化过程进行了监测。ＨＢｓＡｇ含量的检测范围为１～４０ｍｇ／Ｌ。使用过的电极用０２ｍｏｌ／Ｌ乙醇胺（ｐＨ＝８）解吸，可重复使用。将此传感器用于实际血清样品的检测，与酶联免疫吸附法所得结果吻合。

二氧化氯对乙肝表面抗原的灭活效果

应用酶联免疫吸附(ELISA)试验研究了二氧化氯(ClO2)在各种条件下对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的灭活效果,并与液氯进行了对比。结果表明,在投量为25mg L、作用时间为20min、pH值为3.0～7.0时ClO2对HBsAg有很好的灭活效果。与Cl2(液态)相比,ClO2对HB sAg的灭活效果好、速率快,且pH值适应范围广。

化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝表面抗原的比较

目的比较化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)与酶联免疫法(ELISA)两种方法检测乙肝表面抗原灵的敏度。方法采用酶联免疫法测定经化学发光微粒子免疫分析法筛选的低浓度HBsAg阳性患者血清标本107例。同时采用上述两种方法对福建省临检中心提供的不同浓度HBsAg质控品进行测定,比较分析两种方法的灵敏度。结果CMIA法测定灵敏度为0.05 IU/ml,ELISA法测定灵敏度为0.25 IU/ml。107例CMIA法检测阳性标本中ELISA法检出阳性88例。结论CMIA法的检测性能大大优于ELISA法,尤其是对低浓度的HBsAg检测,能最大程度地减少假阴性结果。

乙肝表面抗原双试剂阳性HBV-DNA核酸检测阴性结果分析

目的通过分析献血者乙肝表面抗原检测双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,探讨1遍血清学联合1遍核酸检测的新检测策略对血液安全的意义。方法对2017—2019年献血者标本中乙肝表面抗原血清学双试剂阳性的标本,无论核酸检测系统采取的是混样模式还是单检模式都同时进行核酸检测。阴性的标本使用原检测系统再进行重复检测。结果 2017—2019年献血者检测标本共计25.8万人份,乙肝表面抗原双试剂阳性标本共计195份,核酸HBV DNA阳性标本172份,阴性标本23份,其中核酸单检系统阴性标本8份,核酸混检系统阴性标本15份。单检系统的8份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有5份,混检系统的15份标本再次进行检测,至少有1次为阳性的标本有9份。结论无论单检核酸检测系统还是混检核酸检测系统都会出现乙肝表面抗原双试剂阳性而核酸检测阴性的结果,其中混检系统较单检系统的标本数量要多近1倍。重复检测结果为阳性标本的比例约为60%,为低浓度标本的机会性检出。因此采取1遍血清学联合1遍核酸进行乙肝检测的新检测策略,无论是核酸检测系统还是血清学检测系统都应进行系统的评估,比较与实验室原有检测策略的差异,避免漏检的发生,减低输血传播疾病的风险。