二十碳五烯酸通过调节Nrf2通路抑制脂多糖诱导肾小球系膜细胞焦亡

目的:以核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)蛋白为切入点,基于Nrf2/NLRP3/GSDMD信号通路探究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肾小球系膜细胞焦亡的调控作用,结合Nrf2激动剂(4-OI)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-bound oligomerized domain-like receptor protein 3,NLRP3)受体抑制剂(MCC950)探究EPA调控焦亡信号通路的机制。方法:LPS体外诱导肾小球系膜细胞(HBZY-1)焦亡模型,并根据不同药物处理分别设置空白对照组、LPS组、LPS+EPA组、LPS+EPA+4-OI组和LPS+EPA+MCC950组,其中LPS浓度为10μg/mL,EPA、4-OI和MCC950的浓度均为200μmol/L,按分组将药物同时加入培养板中处理48 h,利用CCK-8法、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL染色检测细胞损伤,ELISA检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-18释放量,蛋白免疫印迹法检测Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平。结果:LPS与EPA共处理HBZY-1细胞的细胞活力实验表明,10μg/mL LPS刺激48 h显著降低了细胞活力(P<0.05),但20~200μmol/L EPA对其有明显的保护作用(P<0.05)。采用200μmol/L EPA进行后续实验发现,EPA可明显保护LPS造成的细胞损伤(P<0.01),减少炎性因子(P<0.01)、LDH的释放(P<0.01)和DNA的断裂并抑制焦亡信号通路的激活,促进Nrf2蛋白的表达(P<0.01)。结合4-OI、MCC950共处理发现4-OI可以促进EPA对焦亡的抑制作用(P<0.05),减少相关蛋白的表达以及因子的释放(P<0.05),并增强EPA对细胞的保护(P<0.01),而MCC950对EPA发挥的作用无显著影响。结论:EPA通过Nrf2抑制LPS诱导的HBZY-1细胞焦亡信号通路各分子的表达,发挥细胞保护作用。

二十碳五烯酸对糖尿病肾足细胞损伤保护机制研究

目的探究二十碳五烯酸(EPA)在模拟高糖诱导肾足细胞损伤中的作用及其潜在机制。方法体外培养小鼠MPC5肾足细胞,高糖诱导足细胞出现损伤,用不同浓度的EPA干预处理。采用CCK-8法评估MPC5细胞的活力,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting检测凋亡蛋白及足细胞标志蛋白表达,活性氧(ROS)荧光探针检测法分析高糖刺激后ROS的生成,ELISA进一步检测炎性因子分泌情况。结果CCK-8细胞活力显示,EPA能维持高糖诱导的细胞活力,EPA干预后足细胞标志蛋白podocin和synaptopodin的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);流式细胞术分析显示EPA干预后高糖刺激的足细胞凋亡率明显下降(P<0.01),促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加(P<0.01);相较于高糖组,EPA干预后ROS生成明显降低(P<0.01),ELISA结果显示EPA干预降低高糖诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6炎性因子分泌(P<0.01);EPA干预后炎性信号通路蛋白TLR4和MYD88蛋白降低(P<0.05,P<0.01),EPA干预后脂质代谢蛋白SREBP1的表达下降(P<0.05,P<0.01);过表达SREBP1后,EPA对高糖诱导MPC5细胞上述检测结果被逆转。结论EPA可以抑制高糖刺激后足细胞内ROS的产生及减少足细胞凋亡,同时EPA可能通过调节SREBP1来抑制炎症通路激活,从而对糖尿病肾足细胞起到保护作用。

二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸联合麦芽糊精对Ⅱ型糖尿病大鼠肠道菌群、有机酸及脂类分布的影响

该文探讨二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸联合麦芽糊精(maltodextrin,MED)膳食补充对Ⅱ型糖尿病大鼠肠道菌群、血液有机酸及脏器脂分布的影响。构建大鼠Ⅱ型糖尿病模型,以不同剂量MED灌胃患病大鼠,观察其对患病大鼠血糖水平、脏器指数及脏器脂类蓄积的影响,收集实验大鼠血液和粪便,利用高效液相色谱法检测大鼠血液的有机酸含量,通过16S rDNA扩增子测序获取各实验组肠道菌群的信息数据。MED灌胃尤其中剂量对糖尿病引起的多饮症状有一定的缓解作用,对于糖尿病导致的大鼠各器官脏器系数的增大有较好的改善趋势,但会引起脂类在心肝脾肺肾中的蓄积。对于糖尿病引起的肠道菌群的改变,中剂量MED有恢复某些优势有益菌群的相对丰度的趋势。MED可在一定趋势上缓解糖尿病引起的血液有机酸(如丙酸、丁酸、异戊酸和正戊酸)的变化。MED对Ⅱ型糖尿病引起的多饮、高血糖、脏器系数以及肠道菌群的改变有一定缓解作用,但会引起脂类在各脏器的蓄积,应谨慎使用。

转酯联合动态轴向色谱法制备高纯度二十碳五烯酸乙酯工艺优化

目的 优化转酯联合动态轴向色谱法制备高纯度二十碳五烯酸乙酯(eicosapentaenoic acid ethyl ester,EPA-EE)工艺。方法 首先对鱼油原料中杂质进行分析鉴定,然后以EPA乙酯纯度为评价指标,采用单因素实验结合响应面分析法,探究NaOH浓度、油醇质量比、反应时间3个因素对EPA乙酯化的影响。原料在经最优乙酯化条件前处理后,再通过单因素实验,以EPA-EE回收率、纯度和洗脱时间为评价指标,对动态轴向高压制备液相的工艺条件进行优化。结果 EPA乙酯化的最佳工艺条件为:NaOH浓度1.5%、油醇质量比1:2.8、反应时间4.2 h,经转酯处理,原料EPA-EE纯度由72%增加到82.69%;制备液相(C18填料, 250 mm×50 mm, 10μm)的最佳流动相为95%的甲醇、流速60 mL/min,在此制备条件下, EPA-EE纯度可达98%,回收率为80%。结论 通过一步乙酯化转酯反应,在降低原料中杂质含量的同时可提高EPA-EE含量,再通过动态轴向色谱法精制可获得纯度较高的EPA-EE,本研究建立了转酯联合动态轴向色谱法制备高纯度EPA-EE的方法,获得的工艺条件稳定可行,可为高纯EPA-EE制备降低生产成本。

气相色谱法测定鱼油中的二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸及其品质评价

目的建立气相色谱法测定鱼油中的二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA),并对不同原料来源鱼油的品质进行分析与评价。方法对GB 5009.168—2016《食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》第一法内标法中的水解提取法、色谱条件和结果分析方法等分别进行优化,然后进行方法验证。应用优化后的方法检测实际样品鱼油中EPA与DHA的含量,并进行品质评价。结果EPA和DHA分别在5.57~278.50μg/mL和6.95~347.50μg/mL范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性均符合实验室质量控制规范、化学分析方法验证确认和内部质量控制要求,其加标回收率均在95%~105%之间,相对标准偏差均小于2%。通过对不同来源鱼油中的EPA和DHA含量进行分析,结果显示市场所售的鱼油存在假冒伪劣现象。结论该方法准确、灵敏,适用于鱼油中EPA和DHA含量的测定。市场所售的鱼油产品优劣掺杂,此方法可以作为鱼油品质评价与质量控制的科学依据。

二十碳五烯酸与表阿霉素联合应用对人胃癌细胞株MGC-803的作用

目的评估二十碳五烯酸(EPA)联合表阿霉素(EPI)对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法采用MTT法检测各种药物单用和联合应用对细胞的作用,电镜观察细胞超微结构的变化,等效线图解法判断两药合用效果,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果EPA可抑制MGC-803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P<0.01);倒置相差显微镜下可见经EPA培养的胃癌细胞核周存在大量异常颗粒,电镜下在核周及胞浆内可见异常电子致密物;EPA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P<0.01);EPA与EPI联合应用对MGC-803细胞生长的抑制具有协同作用(P<0.05);EPA有一定的G0/G1期阻滞作用,EPI有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖。结论EPA对胃癌细胞株MGC-803有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用。EPA与EPI对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用EPI相比,联合应用可减少EPI的用药剂量。

超临界流体色谱法分离二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸

以二氧化碳单一作流动相,ODS柱为固定相,用超临界流体色谱法分离了二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),考察了操作温度和压力对容量因子(k′)和分离度(R)的影响，并根据EPA和DHA在超临界二氧化碳中溶解度的变化规律,对实验结果做了定性的解释。

除草剂精喹禾灵用于硅藻过量产生二十碳五烯酸

硅藻Nitzschia laevis是EPA很好的替代来源。除了对硅藻进行高密度培养外,EPA的产量还能利用除草剂来提高。本文研究了除草剂精喹禾灵对硅藻的生长和产EPA的影响。DMSO作为除草剂的溶剂,会对硅藻的生长造成抑制,DMSO在培养基中的添加量最好不要超过0.2%。除草剂能对硅藻的细胞形态造成损害,随着除草剂浓度的增加,硅藻的产量减低了,但脂质和EPA的含量提高了。当除草剂浓度为0.1mmol/L时,EPA的含量从3.00%增加到3.58%,提高了19.3%,EPA占总脂肪酸的含量也由25.15%提高到了32.88%。实验表明,除草剂精喹禾灵能促进硅藻EPA的积累,因而在筛选过量产生EPA微藻方面有重要用途。

从深海鱼油中制备提纯二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)乙酯的研究

用尿素沉淀法和分子蒸馏法研究了二十碳五烯酸（ 简称 Ｅ Ｐ Ａ） 、二十二碳六烯酸（ 简称 Ｄ Ｈ Ａ） 乙酯的分离提纯。实验表明，尿素沉淀法能够将 Ｅ Ｐ Ａ、 Ｄ Ｈ Ａ 乙酯提纯到９０ ％ ，分子蒸馏法能提纯到７０ ％ 以上。两种方法对比，分子蒸馏法提纯工序简单，效率高，尿素沉淀法工序繁杂，效率低。

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的生理功能

综述了二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的来源及生理功能的研究新进展,指出了二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸应用中存在的问题及今后的发展方向,为其进一步的开发利用提供信息。

二十碳五烯酸改变JurkatT细胞膜脂肪微区域脂肪环境的研究

目的:研究二十碳五烯酸(EPA)处理后T细胞膜脂肪微区域中脂肪酸组成改变及其对磷脂分子中脂肪酰基取代基团的作用。方法:用不连续蔗糖密度梯度超速离心法分离T细胞膜脂肪微区域,然后用气相色谱分析细胞膜亚区域中脂肪酸组成,高效液相质谱联用测定膜脂肪微区域磷脂分子脂肪酸酰基取代基团的构成。结果:EPA处理使T细胞脂肪微区域中多不饱和脂肪酸(PUFAs),n-3PUFAs和n-3PUFAs/n-6PUFAs的比值升高;磷脂分子中除了鞘磷脂以外,其他的磷脂分子如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇分子中一些脂肪酰取代基团有显著改变。结论:EPA处理明显改变T细胞膜脂肪微区域和可溶膜组分中脂肪酸的组成,改变磷脂分子脂肪酰基取代基团的构成,从而改变细胞膜脂肪微区域的脂肪环境。

硅藻变温发酵生产二十碳五烯酸的研究

考察不了同温度(10℃～30℃)对硅藻(Nitzschia laevis)合成二十碳五烯酸(EPA)的影响,对不同温度下的发酵过程进行动力学特性分析。在此基础上,提出了EPA合成的变温培养方法:延滞期及对数期初期温度控制在25℃,从对数期中期开始在20℃条件下进行培养。采用此变温培养进行发酵,EPA的含量和产量分别达到了6.00%和291.60mg/L,较采用单一温度(25℃)发酵的最大值分别提高了24.07%和18.81%。

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸研究的综述

二十二碳六烯酸(decosahexaenoic acid,DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA),是人、动物包括鱼体内的微量生物活性物质和必需的高度不饱和脂肪酸(HUFAs),在其繁殖、生长、发育过程中起非常重要的作用,从而吸引越来越多的研究者。本文综述了EPA和DHA研究特别是代谢研究方面的最新成果,以促进应用和更好地把这些科学成果用于对鱼类与其他动物的深入研究。

气相色谱法测定鱼油软胶囊中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的柱前衍生化方法改进

目的建立柱前衍生-气相色谱法测定保健食品中二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）含量的分析方法。方法鱼油软胶囊经皂化后用1%的硫酸-甲醇甲酯化,用气相色谱法测定,FID检测器检测,色谱柱为DB-FFAP（30 m×0.25 mm,0.25μm）,进样口温度250℃,检测器温度260℃,柱温215℃,直接进样,外标法定量。结果 EPA和DHA在0.05~5 mg/mL范围内线性良好（r_（EPA）=0.9999,r_（DHA）=0.9999）,EPA和DHA的回收率分别为93.1%~102.3%和92.2%~103.9%,EPA和DHA的相对标准偏差均小于3%。结论该方法操作简便、快捷,避免了有毒试剂的使用,定量准确,重现性好,适合大批量样品的快速检测。

海参磷脂型二十碳五烯酸对糖尿病大鼠血葡萄糖耐量的影响

目的研究海参磷脂型二十碳五烯酸(eicosapentaeno-ic acid phosphatidylcholine,EPA-PC)对链脲佐菌素(streptozo-cin,STZ)诱导的糖尿病大鼠血葡萄糖耐量的影响。方法两次腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,经不同剂量的海参EPA-PC(25和75 mg.kg-1,以EPA含量计)灌胃60 d。实验结束后,分别检测大鼠空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)、口服葡萄糖耐量(oral glucose tolerance test,OGTT)、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbAlc)、糖化血清蛋白(glycated serum protein,GSP)、空腹血清胰岛素(fasting insu-lin,FIN)含量,并分别采用光镜和电镜观察胰腺组织的显微结构和胰岛β细胞的亚显微结构。结果海参EPA-PC可明显改善糖尿病大鼠OGTT(P<0.05),降低HbAlc和GSP的含量(P<0.01),促进FIN的分泌(P<0.01);明显改善胰腺组织的显微结构,修复受损胰岛β细胞的亚显微结构。结论海参EPA-PC对糖尿病大鼠具有明显改善血葡萄糖耐量的作用,其与恢复糖尿病大鼠受损的胰岛外周组织以及胰岛β细胞有关。

二十碳五烯酸抗拴作用的实验研究

对二十碳五烯酸(EPA)的抗栓作用及其机制进行了研究。结果表明,EPA在体内、体外均有明显抗栓作用,并能增强纤溶活力,缩短优球蛋白溶解时间,抑制花生四烯酸和胶原诱导的大鼠血小板聚集。放射免疫测定证明,EPA能降低小鼠血浆血拴素B_2(TXB_2)含量,提高6-酮前列腺素F_(1α)与TXB_2的比值。

二十碳五烯酸抑制早期糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的:观察二十碳五烯酸(EPA)对早期阶段的糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法:体内实验中,KKAy/Ta小鼠随机分为2组:治疗组予以EPA1g·kg-1.d-1腹腔内注射共8周,对照组同步予以生理盐水注射,应用免疫组化和实时RT-PCR检测肾脏中MCP-1表达及巨噬细胞浸润的变化。应用ELISA方法检测高糖和EPA刺激后的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上清MCP-1的表达。结果:EPA治疗后KKAy/Ta小鼠肾脏MCP-1的蛋白表达及巨噬细胞浸润明显减弱。实时RT-PCR结果显示EPA治疗组小鼠肾皮质MCP-1mRNA的表达明显低于对照组。25mmol/LD-葡萄糖作用72h可引起HUVECs分泌MCP-1明显增加,30μmol/L和50μmol/LEPA均可显著地抑制高糖诱导的MCP-1表达。结论:EPA降低了KKAy/Ta小鼠肾脏及高糖诱导的内皮细胞MCP-1的表达,提示EPA可能抑制早期糖尿病肾病的炎症反应。

二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响。方法:将30只健康SD大鼠随机分为地面对照组(Ⅰ)、悬吊对照组(Ⅱ)和悬吊实验组(Ⅲ)。悬吊实验组鼠料中添加DHA、EPA,其他2组为普通鼠料。悬挂40d后利用激光衍射法测定红细胞变形指数、取向指数,荧光偏振法测定红细胞膜流动性,硫代巴比妥酸荧光法测定红细胞膜脂质过氧化物(LP0),激光共聚焦显微镜观测红细胞纤维型肌动蛋白的改变及含量。结果:失重下大鼠红细胞的变形指数、取向指数以及红细胞膜的流动性明显降低(P<0.05),LPO增加,红细胞形态和骨架发生改变,F-actin含量明显降低(P<0.05)。结论:在模拟失重条件下,红细胞膜流动性降低,DHA、EPA可拮抗损伤作用,对红细胞膜具有较强的保护作用。

鱼油中二十碳五烯酸、二十一碳六烯酸混合乙酯提取方法的研究

本文用尿素沉淀法和分子蒸馏法研究了二十碳五烯酸（ＥＰＡ）、二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）乙酯的分离提纯．实验表明，尿素沉淀法能够将ＥＰＡ、ＤＨＡ乙酯提纯到９０％，分子蒸馏法能提纯到７０％以上。但分子蒸馏法提纯工序简单，效率高，尿素沉淀法工序繁杂，效率低．