基于NF-κB/MAPK通路探讨五味子甲素对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:探讨五味子甲素(DSD)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对核因子κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用机制。方法:将无特定病原体(SPF)组雄性SD大鼠分为假手术组(仅穿线不结扎,生理盐水灌胃)和造模大鼠(MIRI模型)。将造模成功大鼠随机分为模型组(生理盐水灌胃)、阳性药物组(复方丹参滴丸8.5 mg/kg灌胃)、DSD低剂量组(DSD 20 mg/kg灌胃)、DSD中剂量组(DSD 40 mg/kg灌胃)、DSD高剂量组(DSD 80 mg/kg灌胃),每组20只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(cTnI);氯化三苯基四氮唑(TTC)测量心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化;检测心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6);蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NF-κB/MAPK通路相关蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组MIRI大鼠心肌组织肌纤维弯曲,肌细胞减少,肿胀明显,细胞核严重固缩,血清CK-MB、Mb、cTnI水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、p-p38蛋白水平均升高,SOD活性降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药物组和DSD各剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,肌纤维形态完整,肌细胞增加,无明显肿胀,细胞核固缩减轻,血清CK-MB、Mb、cTnI水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、p-IκBα、p-ERK1/2、p-p38蛋白水平均降低,SOD活性升高(P<0.05)。结论:DSD通过抑制NF-κB/MAPK通路,对MIRI大鼠发挥保护作用。

五味子甲素调节miR-429/Notch1信号轴对冠心病大鼠心肌组织损伤的影响

目的:探究五味子甲素(Sch A)调节miR-429/Notch1信号轴对冠心病大鼠心肌组织损伤的影响。方法:利用盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导建立冠心病大鼠模型,随机分为对照(Control)组、模型(ISO)组、低剂量Sch A组(L-Sch A组)、中剂量Sch A组(M-Sch A组)、高剂量Sch A组(H-Sch A组)、普萘洛尔(Pro)组、miR-429 mimics阴性对照+H-Sch A组、miR-429 mimics+H-Sch A组。于ISO诱导30 min后,观察心功能指标[心率、平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)];酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌损伤血清标志物[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、B型钠尿肽(BNP)];苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理损伤;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测心肌组织miR-429 mRNA;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织Notch1信号相关因子[Notch受体胞内结构域(NICD)、Hes1]蛋白。结果:与Control组比较,ISO组心率、MAP、LVSP降低(P<0.05),LVEDP、CK-MB、cTnI、BNP升高(P<0.05),同时可见明显病理学损伤,心肌细胞结构异常、肌原纤维排列紊乱、炎性细胞浸润;而经L-Sch A组、M-Sch A组、H-Sch A组及Pro组心率、MAP、LVSP升高(P<0.05),LVEDP、CK-MB、cTnI、BNP降低(P<0.05),同时病理学损伤明显减轻,且H-Sch A效果更佳,与Pro效果相当。与Control组比较,ISO组miR-429 mRNA升高(P<0.05),NICD/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、Hes1/GAPDH蛋白比值降低(P<0.05);而经H-Sch A预处理,miR-429 mRNA降低,NICD/GAPDH、Hes1/GAPDH蛋白比值升高(P<0.05);而使miR-429过表达后,NICD/GAPDH、Hes1/GAPDH蛋白比值降低(P<0.05);同时LVEDP、CK-MB、cTnI、BNP升高,心率、MAP、LVSP降低(P<0.05),以及心肌组织病理损伤程度有所加重。结论:Sch A可减轻冠心病大鼠心肌组织损伤,可能通过下调miR-429表达,进而激活Notch1信号通路而实现。

五味子甲素对炎性肠病小鼠结肠NF-κB/COX-2信号通路的影响

目的:考察五味子甲素对三硝基苯磺酸所致炎性肠病小鼠核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/环氧合酶2(cyclooxygenase,COX-2)通路的抑制作用。方法:采用三硝基苯磺酸灌肠诱导小鼠炎性肠病,采用ELISA、免疫组化、WB法测定小鼠体内NF-κB及COX-2表达,采用RT-PCR法测定小鼠结肠组织NF-κB及COX-2 mRNA表达,观察小鼠体质量、腹泻症状和疾病活动指数。结果:炎性肠病小鼠体内NF-κB、COX-2含量、蛋白及其mRNA表达增多,五味子甲素可抑制NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达,抑制炎性肠病小鼠体质量减轻和疾病活动指数,改善小鼠腹泻情况。结论:五味子甲素可通过抑制NF-κB/COX-2通路的激活而抑制炎症反应,对三硝基苯磺酸诱导的炎性肠病小鼠具有治疗作用。

五味子甲素对去卵巢骨质疏松大鼠SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的探究五味子甲素对去卵巢骨质疏松症大鼠的治疗作用以及对基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响。方法采用去卵巢法构建骨质疏松症大鼠模型,将建模成功的60只大鼠随机分为模型组、五味子甲素低(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组、阿仑膦酸钠(1 mg/kg)组、五味子甲素高剂量+SDF-1/CXCR4通路抑制剂(AMD3100)(40 mg/kg+5 mg/kg)组,每组12只。另取12只大鼠作为假手术组(手术过程中仅暴露卵巢不切除)。建模结束后,各组给予对应药物干预,每天1次,连续12周。采用双能X射线骨密度仪检测大鼠左、右股骨骨密度(BMD);酶联免疫吸附法检测大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(OC)水平;HE染色观察大鼠股骨组织病理学变化;荧光定量PCR法检测大鼠股骨组织中SDF-1、CXCR4信使RNA(mRNA)水平;蛋白印迹法检测大鼠股骨组织中SDF-1、CXCR4蛋白水平。结果假手术组大鼠股骨组织骨小梁结构正常,排列规则;与假手术组相比,模型组大鼠股骨组织骨小梁稀疏断裂,数量减少,排列紊乱,左、右股骨BMD、血清中OC、CTX-Ⅰ水平、股骨组织中SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,五味子甲素低、高剂量组大鼠股骨组织病变程度依次减轻,左、右股骨BMD、血清中OC、CTX-Ⅰ水平、股骨组织中SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白水平依次升高(P<0.05);阿仑膦酸钠组和五味子甲素高剂量组大鼠股骨组织病理学变化及各项指标差异比较均无统计学意义(P>0.05);AMD3100可逆转高剂量五味子甲素对骨质疏松症大鼠上述指标的改善效果(P<0.05)。结论五味子甲素可抑制骨质疏松症大鼠BMD的下降,减轻大鼠股骨组织病变,改善大鼠骨质疏松,其机制可能与激活SDF-1/CXCR4信号通路有关。

一测多评高效液相色谱法同时测定五味子中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素

建立一测多评高效液相色谱法同时测定五味子中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的方法,并验证该法的可行性和准确度。通过Plackett-Burman设计考察流动相中甲醇比例、流动相流量、柱温、进样体积对五味子醇甲色谱峰分离度的影响,确定流动相中甲醇比例、柱温为关键分析参数(P<0.05)。通过中心组合设计优化关键分析参数,建立色谱分析条件:以甲醇-水(体积比为70∶30)溶液作为流动相进行洗脱,流量为1.0mL/min,柱温为35℃,检测波长为254nm,进样体积为10μL。以五味子醇甲为内参物,分别建立五味子甲素、五味子乙素与五味子醇甲的相对校正因子,计算各成分含量,实现一测多评。采用外标法测定五味子甲素、五味子乙素含量,比较外标法的实测值与一测多评法预测值之间的差异,以验证一测多评法的准确度及可行性。五味子中五味子醇甲与五味子甲素、五味子乙素的相对校正因子分别为1.039、1.246。五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素色谱峰面积与质量浓度在5~500μg/mL范围内呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。样品加标回收率分别为100.1%、100.6%、100.3%,测定结果的相对标准偏差分别为1.6%、1.8%、1.1%(n=6)。分别采用一测多评法和外标法测定10批样品,测定结果基本一致。一测多评法可用于测定五味子中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量,方法准确。

五味子甲素治疗肝脏疾病及其代谢研究进展

五味子甲素是从五味子中分离出来的一种联苯环辛二烯木脂素单体,是五味子中主要的活性单体之一。研究表明,五味子甲素具有抗纤维化、抗氧化、镇静、降血脂、抗炎,以及抑制破骨细胞形成、改善学习记忆等多种功能,且可抑制肝脏肿瘤细胞增长,促进肿瘤细胞凋亡。本文就五味子甲素在肝脏疾病中的研究状况、药理效应及其机制进行综述,以期为五味子甲素的开发与应用提供参考依据。

五味子甲素通过SIRT1/NF-κB通路减轻脑出血后星形胶质细胞焦亡的机制

目的探讨五味子甲素(SchA)能否通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的去乙酰化酶(SIRT1)调控NF-κB在脑出血(ICH)后减轻星形胶质细胞焦亡。方法体内实验:通过胶原酶Ⅶ纹状体注射构建小鼠脑出血模型。将小鼠随机分为5组:①Sham+DMSO组;②ICH+DMSO组;③ICH+SchA(10 mg/kg)组;④ICH+SchA(20 mg/kg)组;⑤ICH+SchA(40 mg/kg)组。蛋白免疫印迹(WB)及免疫荧光染色验证脑出血后是否发生焦亡。利用小鼠转棒疲劳实验评估各组小鼠神经运动功能。SchA治疗脑出血后蛋白免疫印迹(WB)评估SIRT1、乙酰化NF-κB蛋白P65亚基(Ac P65)、NF-κB蛋白P65亚基(P65)、焦亡相关蛋白的表达情况。体外实验:提取小鼠原代的星形胶质细胞,采用OGD/H建立离体脑出血模型;将实验分为:①二甲基亚砜(DMSO)组;②糖氧剥脱/氯高铁血红素(OGD/H)+DMSO组;③OGD/H+SchA组;④OGD/H+SchA+塞利西斯塔特(EX527)组。SchA治疗及SIRT1特异性抑制剂EX527处理OGD/H模型评估SIRT1、切割GSDMD后的N残端(GSDMD-N)蛋白情况。结果动物实验中证实ICH后星形胶质细胞发生焦亡。WB检测发现脑出血后1、3 d SIRT1明显减低(P<0.05),Ac P65与P65相对表达量及比值增加(P<0.05),焦亡蛋白相对表达量增加(P<0.05)。小鼠转棒疲劳实验表明五味子甲素明显改善ICH后小鼠神经运动功能(P<0.05)。五味子甲素治疗可增加SIRT1蛋白相对表达量,减少Ac P65、P65、GSDMD-N、C-Cas-1、GSDMD-C蛋白相对表达量(P<0.05)。离体实验中,免疫荧光及WB证实OGD/H中SIRT1蛋白表达水平降低,五味子甲素上调SIRT1蛋白相对表达量(P<0.05),上调的SIRT1蛋白表达被EX527部分逆转(P<0.05)。WB证实OGD/H后GSDMD-N蛋白表达增加(P<0.05),五味子甲素下调GSDMD-N蛋白相对表达量,EX527部分逆转GSDMD-N蛋白的表达水平(P<0.05)。结论脑出血后五味子甲素促进SIRT1表达进而抑制NF-κB表达从而抑制星形胶质细胞焦亡。

HPLC法测定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量

目的 测定更年安中五味子甲素和五味子乙素的含量。方法 样品用环己烷超声提取 ,过滤 ,蒸干。残渣用乙腈 -甲醇 (1∶ 1)溶解后 ,经 HPL C仪测定。色谱柱 :Phenomenex C1 8柱 (5μm,2 5 0 mm× 4.6 m m) ,柱温 2 2℃ ,流动相 :乙腈 -甲醇 -水 (15∶ 15∶ 10 ) ,检测波长 :2 5 4nm。结果 更年安中五味子甲素和五味子乙素与其它成分分离良好 ,保留时间分别约为 14.6和 19.1min。五味子甲素对照品线性浓度范围 1.0～ 80μg/ m L ,r=0 .9996 ,平均回收率为 96 .5 % ,RSD为 3.2 8% (n=5 )。五味子乙素对照品线性浓度范围 1.0～ 80 μg/ m L,r=0 .9998,平均回收率为 94.7% ,RSD为 3.49% (n=5 )。结论 本法灵敏度高、操作简便、结果准确 。

HPLC测定柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

目的:建立用 RP-HPLC 法测定柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素的含量。方法:样品用甲醇超声提取,过滤,取续滤液,采用 RP-HPLC 法直接测定,用十八烷基键合相,甲醇-水-冰醋酸(71:29:0.1)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长220 nm。结果:五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素分别在0.0046～0.460 μg(r=1.000);0.0054～0.540 μg(r=1.000);0.0055～0.553 μg(r=0.9998)范围内,质量与峰面积具有良好的线性关系。平均加样回收率(n=6)分别为94.2%～102.4%,99.1%～106.8%,98.3%～105.6%;RSD 分别为2.2%～3.8%,2.7%～4.1%,1.9%～4.0%。方法用于柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量的测定,RSD(n=6)分别为2.3%～4.0%,1.8%～3.5%,1.5%～4.2%。结论:方法具有灵敏度高、准确、快速和简便的特点,能用于柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量的测定。

红花五味子甲素的分离纯化及其抗HIV-1活性的研究

目的:从红花五味子果实中寻找活性代谢产物,研究其抗HIV1活性和作用机制。方法:通过合胞体抑制、HIV1感染细胞保护、HIV1p24抗原测定、融合阻断、逆转录酶和蛋白酶活性分析等实验,检测分离化合物的抗HIV1活性并探讨其作用机制。结果:红花五味子甲素能够抑制病毒诱导的合胞体形成,保护病毒感染细胞,抑制病毒在细胞内的复制。对HIV1感染细胞与正常CD+4细胞间的融合,逆转录酶活性有一定的抑制作用。但是红花五味子甲素不抑制病毒在慢性感染细胞中的复制,也不抑制蛋白酶的活性。结论:首次从天然产物中分离得到红花五味子甲素,它对HIV1病毒复制早期具有抑制作用。

五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其机制

目的:探讨五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用,阐明其作用机制。方法:培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组及50、100和200mg·L-1五味子甲素组,采用MTT法检测C6细胞增殖率,流式细胞术分析细胞周期百分率,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中CyclinD1、Bax、Bcl-2和Casepase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,24和48h时50、100和200mg·L-1五味子甲素组细胞增殖率均明显降低(P<0.01),72h时100和200 mg·L-1五味子甲素组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,200mg·L-1五味子甲素组SubG1期细胞百分率升高(P<0.05),S期细胞百分率降低(P<0.05)。与对照组比较,100和200mg·L-1五味子甲素组细胞CyclinD1蛋白表达水平降低(P<0.01),不同浓度五味子甲素组Bax蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),200mg·L-1五味子甲素组Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01),不同浓度五味子甲素组Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.01),200mg·L-1五味子甲素组Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:五味子甲素通过下调CyclinD1蛋白表达水平、上调促凋亡因子Bax和Bcl-2表达水平而抑制C6细胞的生长。

HPLC同时测定复方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸铵、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素

目的建立HPLC同时测定复方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸铵、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素6种成分含量的方法。方法KromasiL C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈－0．05％磷酸水溶液，梯度洗脱；流速1．0mL／min；柱温30℃，检测波长250nm。结果葛根素、甘草苷、甘草酸铵、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分别在0．0310～0．1549、0．0137～0．0685、0．0424～0．2118、0．0174～0．0871、0．0018～0．0091、0．0136～0．0681mg／mL线性范围良好；相关系数均大于0．9995；平均加样回收率分别为98．6％、100．4％、98．3％、98．3％、96．8％、99．4％；RSD分别为2．6％、2．8％、1．2％、2．3％、0．9％、2．5％。结论该方法简便、重复性好，可用于复方五味含片的质量控制。

五味子甲素对单核巨噬细胞炎症相关介质表达的影响

目的验证五味子甲素的抗炎作用并探索其机制。方法无菌状态下,取注射过3%巯基乙醇酸钠3天的小鼠腹腔内的单核巨噬细胞,计数接种于96孔板,培养24h后给药,将其分为4组,分别为:空白对照组(DMSO)、模型对照组(LPS)、阳性对照组(地塞米松)、五味子甲素组(另分4组,终浓度分别是:A组4×10-5mmol/l、B组4×10-6mmol/l、C组4×10-7mmol/l、D组4×10-8mmol/l,4组各0.4μl),给药后静置5 min加入LPS,12 h后取上清,ELISA法检测上清中IL-6、TNF-α、NO的含量。0.25%胰酶消化给药后的细胞,行总RNA提取,RT-PCR法检测单核巨噬细胞炎症模型中IL-1β的表达。结果与空白对照组相比较,五味子甲素组和阳性对照组可明显降低单核巨噬细胞炎症模型中IL-1β的表达,具有显著性差异(P≤0.01),且五味子甲素组与阳性对照组相比也可明显降低单核巨噬细胞炎症模型中IL-1β的表达,具有显著性差异(P≤0.05);与空白对照组相比较,阳性对照组可明显减少单核巨噬细胞炎症模型上清液中TNF-α、IL-6及NO含量,具有显著性差异(P≤0.01),五味子甲素组可明显减少单核巨噬细胞炎症模型上清液中TNF-α、IL-6及NO含量且呈剂量依赖性,有显著性差异(A组P≤0.01,B组P≤0.01,C组P≤0.05,D组P≤0.05),五味子甲素组与阳性对照组无显著性差异(P>0.05)。结论五味子甲素具有明确的抗炎作用和免疫调节作用,其主要作用可能是通过对TNF-α、IL-1β、IL-6、NO表达的抑制来实现的。本研究为进一步推广应用五味子甲素抗炎的临床应用奠定坚实的理论基础。

UFLC法同时测定护肝胶囊中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素

目的建立UFLC同时测定护肝胶囊(柴胡、五味子等)中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的方法。方法色谱柱Agilent SB C18(100 mm×4.6 mm,1.8μm);流动相为乙腈-水梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温40℃;检测波长250 nm。结果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素进样量分别在0.029～0.584μg(r=0.999 9)、0.016～0.328μg(r=0.999 6)、0.02～0.40μg(r=0.999 1)范围内具有良好的线性关系。平均回收率分别为99.7%、98.5%、99.2%;RSD分别为1.1%、2.3%、1.6%(n=5)。结论本方法简便、准确、重复性好,可用于护肝胶囊的质量控制。

五味子甲素和五味子醇甲对四氯化碳所致肝脏损伤的保护作用

目的 研究五味子甲素 (Deoxyschizandrin)和五味子醇甲 (Schizandrin)对血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)、血清白蛋白 (ALB)和总蛋白 (TP)的影响。方法 复制小鼠CCl4 肝损伤模型 ,用五味子甲素和五味子醇甲防治 ,用生化方法测定血清ALT、AST、ALB和TP。结果 与CCl4 组相比 ,五味子醇甲组和五味子甲素组ALT、AST均显著降低(P <0 0 1) ,ALB和TP无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;五味子醇甲组和五味子甲素组之间各项指标均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 五味子甲素和五味子醇甲均对CCl4 所致肝损伤具有一定的保护作用 。

五味子甲素对结肠炎大鼠氧化应激水平的调控作用

目的探讨五味子甲素对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠组织氧化应激水平的调控作用。方法用三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)/乙醇混合液灌肠复制结肠炎SD大鼠模型,大鼠随机均分为正常对照组、模型组、阳性对照组及五味子甲素低剂量(20 mg·kg^-1)、中剂量(40 mg·kg^-1)、高剂量组(80 mg·kg^-1),每组10只。灌胃给药,正常组与模型组同期分别给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予150 mg·kg^-1美沙拉嗪(5-ASA),连续治疗7 d后取大鼠结肠并评测其结肠重量、结肠长度、肠重指数、病理切片以及选择最佳剂量组的结肠组织检测SOD,GSH-PX,NO等氧化应激指标。结果经治疗后,与模型组比较,五味子甲素中剂量组治疗效果最佳,肠重减轻、长度增加、肠重指数明显下降,炎症因子明显减少,GSH-PX,SOD,eNOS,iNOS和T-AOC的水平明显升高(P<0.01 or P<0.05),而NO及MPO水平显著降低(P<0.01 or P<0.05)。结论五味子甲素可能通过降低结肠组织中性粒细胞数量和NO含量以及升高SOD和GSH-PX的表达量缓解机体的氧化应激水平治疗实验性大鼠结肠炎。

HPLC法测定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量

目的建立HPLC法同时测定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量。方法十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,甲醇-水(77∶23)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长230nm。结果五味子甲素和五味子酯甲的线性范围分别为0.125～1.25μg和0.08～0.8μg,r分别为0.9990和0.9986,平均加样回收率分别为100.1%、100.0%(RSD为0.15%、0.28%。南五味子)和99.7%、101.2%(RSD为0.32%、0.67%。北五味子)(n=5)。结论该方法简便、专属、重现性好,可用于测定五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量。

RP-HPLC法同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含量

目的 建立同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含量的方法。方法 RP-HPLC法。色谱柱为Thermo Hypersil BDS C18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-水（体积比为45：30：25），流速1．0mL·min^-1，检测波长254nm。结果 以峰面积为纵坐标，以对照品溶液质量浓度（mg·L^-1）为横坐标，进行线性回归：五味子甲素的回归方程为A=2．701×10^7 ρ-1．396×10^4，r=0．9999，表明五味子甲素在10．1-202mg·L^-1线性关系良好；五味子乙素的回归方程为A=2．797×10^7 ρ＋1．570×10^4，r=0．9998，表明五味子乙素在12．2-244mg·L^-1线性关系良好。平均回收率分别为102．0％、100．5％，RSD均小于3．1％。结论 该方法可用于北五味子药材质量控制。

五味子甲素在人肝星状细胞中的抗纤维化作用

目的:研究五味子甲素对人肝星状细胞系LX-2细胞的增殖、纤维化指标及凋亡相关蛋白的影响。方法:采用不同浓度的五味子甲素与肝星状细胞LX-2共孵育,MTT法检测五味子甲素对细胞的抑制作用,RT-PCR法和Western blot法测定纤维化指标I型胶原α亚基1(collagen type I alpha 1,collagen I-1)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达量,并检测五味子甲素对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达量的影响。结果:五味子甲素在不同浓度时可抑制人肝星状细胞系LX-2细胞的增殖,可降低collagenⅠ和α-SMA的mRNA水平和蛋白表达量(P<0.05),并能降低Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达量以及Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。结论:五味子甲素可能通过抑制细胞增殖、降低纤维化指标的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。