亚砷酸钠对人正常肝细胞脂质代谢及因子调控的作用

背景:肝脏作为砷毒作用的主要靶器官,成为砷毒性作用机制相关研究的焦点。目的:探讨亚砷酸钠对人正常肝细胞脂质代谢、细胞增殖、细胞凋亡及相关调控因子表达的影响。方法:MIHA正常人肝细胞株暴露于0,10,20,30μmol/L亚砷酸钠48 h,光学显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活性,单试剂COD-PAP法、单试剂GPO-PAP法及酶微板法检测细胞上清总胆固醇、三酰甘油及总胆汁酸水平,油红O染色法检测细胞内脂质含量,Edu-488渗入法检测细胞增殖,PI染色法及Annexin V-FITC/PI双标记法结合流式细胞术分别检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot检测肝细胞核因子4α、胆固醇7α-羟化酶及法尼醇X受体的m RNA及蛋白表达水平。结果与结论:(1)与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:MIHA细胞活性逐渐降低;细胞上清中总胆固醇、三酰甘油水平逐渐增高,总胆汁酸水平逐渐降低;细胞内脂质含量逐渐增多;细胞停滞于S期及G_2/M期细胞比例逐渐增多;细胞凋亡率逐渐升高;肝细胞核因子4α mRNA表达水平未见明显变化,胆固醇7α-羟化酶与法尼醇X受体mRNA表达水平下降;肝细胞核因子4α、胆固醇7α-羟化酶、法尼醇X受体蛋白表达水平逐渐下降;(2)亚砷酸钠具有细胞毒性,显著降低MIHA细胞活性,诱导细胞脂肪变性,阻滞细胞增殖,诱发细胞凋亡等损伤;亚砷酸钠可下调肝细胞核因子4α蛋白表达以及胆固醇7α-羟化酶、法尼醇X受体的转录和蛋白表达,进一步引起肝细胞的脂质代谢紊乱。

亚砷酸钠治疗加速期慢性粒细胞性白血病的疗效观察

目的:观察亚砷酸钠治疗加速期性粒细胞性白血病(CML)的临床疗效.方法:依据外周血白细胞数,每日静脉滴注亚砷酸钠10～15mg.结果:经过平均40. 5天治疗,7例诊断为加速期慢性粒细胞白血病患者中,3例CR,4例PR,患者对亚砷酸钠均耐受良好,并见到临床与血液学及CFU-GM的明显改善,但无Ph染色体及融合基因改变.结论:亚砷酸钠可通过诱导细胞凋亡而用于CML加速期患者的临床治疗.

亚砷酸钠对酵母细胞抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响

以模式生物酿酒酵母为材料,研究亚砷酸钠对细胞生长、抗氧化酶活性、丙二醛(MDA)含量及胞内活性氧(ROS)水平的影响。结果显示,加入亚砷酸钠(终浓度0.1~0.6 mmol·L^(-1))后,培养液在600 nm处的光密度值(OD600值)低于对照组,并呈浓度依赖性降低。经亚砷酸钠处理12 h后,酵母细胞中过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)活性均增高,但胞内ROS水平和MDA含量与对照组无显著差异。砷处理24 h后,POD在0.2 mmol·L^(-1)砷处理组中活性最高,而CAT、SOD和T-AOC活性呈浓度依赖性增高;胞内ROS水平和MDA含量在高浓度砷组(0.4和0.6 mmol·L^(-1))显著增高。结果表明,亚砷酸钠可抑制酵母细胞生长,改变细胞内抗氧化酶活性,较高浓度时可引起细胞氧化损伤。

姜黄素拮抗亚砷酸钠所致的DNA链断裂损伤

目的 观察姜黄素对亚砷酸钠诱发小鼠体内免疫器官细胞DNA链断裂损伤的拮抗作用。方法 用单细胞凝胶电泳法。结果 亚砷酸钠单独染毒后的DNA链断裂损伤的高峰期各器官不同 ,脾脏为染毒后 1h ,胸腺和骨髓在染毒后 3h。姜黄素拮抗亚砷酸钠引起的各器官DNA链断裂损伤的作用在高峰期明显 ,表现为彗星细胞百分比降低 ,并有量效关系。结论 姜黄素可以预防亚砷酸钠诱发的小鼠脾脏、胸腺和骨髓细胞的DNA链断裂损伤。

亚砷酸钠和砷酸钠对细胞缝隙连接间通讯的影响

为深入探讨砷的致癌机制，利用Ｖ７９细胞代谢协同实验，探讨了亚砷酸钠及砷酸钠对细胞缝隙连接间通讯的影响。研究结果显示，亚砷酸钠可明显抑制Ｖ７９细胞间的代谢协同。在低浓度（０．００８～０．２μｍｏｌ／Ｌ）范围内，其抑制作用呈剂量－反应关系。砷酸钠对Ｖ７９细胞的代谢协同亦能产生抑制作用，但剂量－反应关系不明显。亚砷酸钠对代谢协同的抑制作用明显大于砷酸钠。研究提示抑制细胞缝隙连接间通讯可能是砷的一个重要致癌机制。

亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响

目的:探讨亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响。方法:使用原代培养的人真皮成纤维细胞和表皮细胞 ,采用直接细胞计数法和 MTT法检测亚砷酸钠对两种细胞系生长的影响。 结果:成纤维细胞较表皮细胞易于培养 ;MTT法检测 ,不同剂量的亚砷酸钠与对照组比较 ,吸光度值均有提高 ,有剂量 -效应关系 (P <0 .0 1) ;0 .5～8.0 μm ol/ L 的亚砷酸钠对成纤维细胞有明显增殖作用 ;低浓度 (0 .8μmol/ L、1.6 μm ol/ L)对表皮细胞有明显的增殖作用 ,浓度高于 3.2 μm ol/ L 时 ,表皮细胞生长受抑制 ;10 .0 0 μmol/ L 亚砷酸钠对成纤维细胞有毒性作用。 结论 :无机砷诱导人皮肤细胞的增殖作用可能是引起慢性砷中毒皮肤损伤的重要原因 。

亚砷酸钠致Chang liver细胞氧化应激作用的研究

目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人肝细胞株Chang liver的氧化应激作用。方法采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测NaAsO2(0、0.1、1、5、10、20、30、50、80、100、200μmol/L)对Chang liver细胞活力的影响,利用2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,利用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,0.1μmol/LNaAsO2组细胞活力显著增强(P<0.05);10～200μmol/LNaAsO2浓度范围内,细胞活力随NaAsO2浓度升高而下降(P<0.05)。在0～30μmol/LNaAsO2浓度范围内,随着NaAsO2浓度的增高,细胞内ROS水平升高(P<0.05),SOD活力降低(P<0.001),MDA含量升高(P<0.001)。结论氧化应激可能是NaAsO2对Chang liver细胞毒性作用的机制之一。

亚砷酸钠对HaCaT细胞的氧化应激作用

目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤永生化角质形成细胞株(HaCaT)的氧化应激作用。方法用AlamarBlue还原法检测NaAsO2对细胞活力的影响,用PI染色法检测细胞的凋亡和坏死率,利用2′7′二乙酰二氯荧光素(DCFHDA)检测细胞内ROS水平,同时用荧光法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量。结果0001μmolL至1μmolL组的AlamarBlue还原率显著高于对照组,而10μmolL以上组的AlamarBlue还原率下降,20μmolL组的凋亡和坏死率显著高于对照组,各实验组的DCF荧光强度与对照组相比明显提高,1μmolL以上组细胞内GSH水平增高,5μmolL组GSSG水平增高。结论各浓度砷引起HaCaT细胞内ROS增多,低浓度时促进细胞增殖,高浓度则抑制细胞活力,砷诱导HaCaT细胞内的GSH增多,发挥解毒作用。

磁搅拌条件下β-环糊精与亚砷酸钠加合物的形成、谱学特性与热分解行为(英文)

傅里叶变换利用红外光谱、粉末X射线衍射、微分热重分析、气相色谱-飞行时间质谱、紫外光谱、1H核磁滴定以及电喷雾质谱等分析手段对β-环糊精(β-CD)和亚砷酸钠(SA)形成的分子-离子加合物SA-β-CD进行了详细表征.结果显示,主-客体之间分子-离子相互作用是导致SA-β-CD的谱学特性(在固态或在溶液中)与热分解行为相异于主、客体自身行为的重要原因.而在气相色谱-飞行时间质谱条件下发生的氧化还原反应以及在电喷雾质谱条件下出现的Na+-β-CD(摩尔比为1∶1)超分子离子复合体进一步揭示了这种分子-离子加合作用的复杂性与独特性.

亚砷酸钠对淋巴细胞毒性及抗氧化物拮抗作用

目的 研究不同浓度的亚砷酸钠对体外培养的大鼠淋巴细胞活力的影响及亚硒酸钠和抗坏血酸的拮抗作用。方法 体外分离大鼠外周血淋巴细胞后 ,施加处理因素 ,在 37℃条件下恒温培养 ,用水溶性染料 (AlamarBlue)摄入法定量检测淋巴细胞活力。结果 亚砷酸钠浓度大于 5 μmol/L时 ,AlamarBlue的还原率显著低于对照组 ,且呈剂量反应关系 ;用 5 μmol/L的亚硒酸钠预处理细胞 2 4h后 ,10 μmol/L亚砷酸钠组AlamarBlue的还原率显著增高 ,接近空白对照组还原率 ;而用 5 0 μmol/L的抗坏血酸预处理后 ,还原率有所增高 ,但未达到对照组水平。 结论 亚砷酸钠可抑制淋巴细胞活力 ,抗氧化物可一定程度的拮抗三价砷的细胞毒性作用。

硫酸镍、亚砷酸钠所致转化细胞的凝集试验

为了从细胞表面的变化来观察转化细胞的特性，对于经硫酸镍、亚砷酸钠染毒的ＳＨＥ细胞，用ＣｏｎＡ进行了凝集试验。结果表明，两染毒组的凝集试验均呈阳性，且与ＣｏｎＡ浓度呈依赖关系。

亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞生长和3MST表达的影响

神经母细胞瘤是儿童最常见的恶性肿瘤之一。因其恶性程度高，手术加化疗的方案对于侵润性的神经母细胞瘤效果不佳。砷，俗名砒霜，很早被用来治疗急性粒性白血病。现在发现砷对神经母细胞瘤、胶质瘤，以及来源于肝脏、前列腺、肾脏、子宫颈和胆囊等固体肿瘤也有效［1］。然而，其作用机制尚未完全明了。有报道，肿瘤细胞H2 S合成酶表达上调［2］。那么，砷是否可通过下调H2 S合成酶的表达发挥抗癌作用？本实验采用SH－SY5Y细胞和亚砷酸钠（ NaAsO2）对此问题进行了探讨。

亚砷酸钠对皮肤细胞角化相关基因表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人角质形成细胞角化相关因子mRNA表达的影响,为进一步阐述砷致皮肤角化机制的研究提供依据。方法用浓度为0.00(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基培养HaCaT细胞24、48、72、96 h;采用MTT还原法检测细胞生长情况;采用实时荧光定量PCR法检测HaCaT细胞角蛋白1(Keratin1,K-1)、角蛋白10(Keratinl0,K-10)的mRNA的表达水平。结果 (1)1.30μmol/L的亚砷酸钠染毒能显著促进HaCaT细胞增殖,3.25μmol/L、6.50μmol/L的亚砷酸钠染毒48 h开始抑制HaCaT细胞的增殖,且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)1.30μmol/L的亚砷酸钠染毒HaCaT细胞24 h能促进K1和K10mRNA的表达上调,3.25μmol/L、6.50μmol/L的亚砷酸钠染毒72 h可使HaCaT细胞中K1、K10 mRNA的表达显著下调,且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论亚砷酸钠浓度<1.30μmol/L时,对人皮肤细胞的促增殖作用明显,促进皮肤角化进程;K1、K10的上调在皮肤细胞增殖和角化的过程中发挥一定作用。

亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞存活率及金属硫蛋白含量的影响

目的:了解亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞活性及金属硫蛋白(MT)表达的影响。方法:无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠(2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组)作用于淋巴细胞,采用四噻唑兰还原法测定不同染毒时间(24、48、72h)各染毒剂量组淋巴细胞存活率,采用银饱和-血红蛋白原子吸收分析法测定各组MT含量。结果:低浓度亚砷酸钠(2、5μmol/L)组细胞存活率较对照组明显升高(P<0.05);其它各组细胞存活率随染毒剂量增加而降低,与对照组及2、5μmol/L染毒组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量亚砷酸钠染毒一定时间后细胞MT含量增加,且存在时间-剂量交互效应(P<0.05),MT含量在染毒48h左右达到高峰,其中2、5μmol/L组MT含量高于对照组及其它各剂量组。结论:低剂量砷可促进淋巴细胞的体外存活,并可诱导其MT合成增加。

亚砷酸钠影响免疫功能相关基因表达水平的研究

目的:利用基因芯片技术研究亚砷酸钠对免疫功能相关基因表达的影响 ,探讨砷的分子遗传学机制。方法 :将肝细胞 c DNA克隆库的基因点在芯片上 (每个克隆的基因尚未知 ) ,然后与暴露于不同砷浓度肝细胞中得到的 c DNA第一链杂交 ,对表达有差异的基因进行基因测序 ,再明确基因 ,最后筛选出与免疫功能相关的基因。 结果 :砷可通过抑制细胞角蛋白 8基因 (CK8)和人类白细胞抗原 A基因 (HL A- A)的表达来影响机体免疫功能。 结论 :从基因水平研究砷对免疫功能的作用机制是可行的 。

亚砷酸钠诱导HSP 72在大鼠肝脏热缺血–再灌注损伤中的保护作用

目的:观察亚砷酸钠(SA)诱导大鼠肝脏产生热休克蛋白72(HSP72)的过程及其抗肝脏热缺血-再灌注损伤的作用。材料与方法:将24只SD大鼠随机分成SA组(预先给予SA6mg/kg)和对照组(预先给予生理盐水)。24h后,两组均阻断肝脏中、左叶血供60min,再灌注3、6h;分别用Westernblot检测肝脏中的HSP72表达;外周血测定ALT、AST、LDH;组织学作HE染色、免疫组化测定HSP72。结果:注射SA6mg/kg后12h肝脏开始产生HSP72,24h达到高峰,并持续至60h。肝脏热缺血60min再灌注3、6h后,SA组HSP72显著表达,血清ALT、AST、LDH显著下降(P<0.05),组织学检查显示肝脏损伤明显减轻。结论:SA可诱导大鼠肝脏产生HSP72;SA预先诱导肝脏产生对HSP72可使肝脏抵御热缺血鄄再灌注损伤。

亚砷酸钠处理前后人胚胎皮肤细胞基因表达变化的基因芯片研究

目的应用基因芯片技术研究亚砷酸钠(NaAsO2)处理前后人胚胎皮肤细胞(HES)基因表达的变化。方法提取NaAsO2处理前后HES细胞的总RNA,纯化为mRNA并反转录成cDNA。分别用Cy3和Cy5两种不同的荧光染料标记成探针,与载有4096个靶基因的表达谱芯片进行杂交,通过扫描、计算机软件分析寻找经NaAsO2作用后差异表达的基因。结果共筛选出包括细胞凋亡、DNA合成修复、原癌基因和抑癌基因等差异表达基因125个,其中65个表达上调,60个表达下调。结论NaAsO2能引起HES细胞内多种基因的表达变化。

亚砷酸钠对大鼠肝线粒体和微粒体酶的影响

研究了亚砷酸钠在体内、体外对大鼠肝线粒体丙酮酸脱氢酶（ＰＤＨ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和微粒体酶细胞色素Ｐ－４５０、ｂ５、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－细胞色素Ｃ还原酶、谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）的影响；并通过观测亚砷酸钠与亚硒酸钠的作用及其对肝谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽含量和线粒体脂质过氧化的影响，探讨亚砷酸钠的作用机理。结果表明：连续７天腹腔注射２０ｍｇ／ｋｇ的亚砷酸钠，线粒体ＰＤＨ、ＳＤＨ被抑制，分别相当于对照组的５１％和５８％。而亚硒酸钠可有效拮抗砷对ＰＤＨ、ＳＤＨ的抑制作用。亚砷酸钠显著降低肝ＧＳＨ的含量，并增强线粒体膜脂质过氧化作用（Ｐ＜０．０５）。在体内试验中，亚砷酸钠对谷胱甘肽过氧化物酶和肝微粒体酶无明显影响。亚砷酸钠在体外实验中，浓度在１０－７～１０－３ｍｏｌ／Ｌ的范围内，抑制ＳＤＨ的活力，提高ＧＳＨ的含量，且呈剂量－效应关系。结果提示。

亚砷酸钠亚慢性染毒对小鼠肝脏肾脏的损伤作用

目的了解亚砷酸钠亚慢性染毒对小鼠不同脏器的毒性作用及砷在不同脏器中的蓄积情况。方法采用亚慢性毒性实验方法。昆明种小鼠60只,按体重随机分成正常对照组(C)、低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H)4组,每组15只,分别自由饮用蒸馏水及0.125 mg/kg0、.5 mg/kg和2.0 mg/kg的亚砷酸钠水溶液,连续染毒90 d,实验结束后光镜下对各组小鼠肝脏和肾脏进行组织学观察,采用火焰原子吸收法检测小鼠肝、肾组织砷含量。结果不同剂量的亚砷酸钠能破坏小鼠肝、肾脏器的正常结构,肝脏和肾脏组织砷含量随着砷染毒剂量的增加而增加(P<0.01)。结论小鼠经不同剂量的亚砷酸钠染毒90 d后,可出现肝脏、肾脏等脏器损伤,推测砷在脏器的蓄积是造成损害作用的物质基础。