人参抗肿瘤的活性成分与作用机制研究进展

恶性肿瘤是当今威胁人类健康的疑难病症之一。目前临床多数抗肿瘤药物对肿瘤细胞靶向性不强,杀灭肿瘤细胞的同时可对正常细胞造成严重损伤,一定程度上损伤机体重要器官,长期用药会降低肿瘤细胞的敏感性。传统中医药辨证、辨病、辨体论治的特点及中药多成分、多靶点的特性在肿瘤的治疗中的优势逐渐凸显,中药与抗肿瘤药物联用在增强抗肿瘤药效的同时,还能降低化疗药物的副作用,近年来逐渐成为研究热点。现代药理研究表明人参具有较强的抗肿瘤作用,其主要抗肿瘤活性成分包括:人参皂苷中的Rh2、Rg3、Rh1、CK和人参多糖,能有效抑制肺癌、黑色素瘤、肝癌、乳腺癌、恶性胶质瘤、胃癌等,其中抗肿瘤机制包括:促进肿瘤细胞内源性和外源性凋亡、抑制肿瘤细胞增殖迁移、抑制肿瘤上皮间质转化、抑制肿瘤细胞血管新生、诱导肿瘤细胞内质网应激、抑制肿瘤细胞多药耐药性、提高机体免疫力等。本文综述了人参有效成分及代谢产物的抗肿瘤机制,提出加强人参抗肿瘤的动物及细胞研究、抗肿瘤现代药理机制研究、与化疗药物联合抗肿瘤以降低肿瘤耐药性及提高人参中有效成分的转化及生物利用度四点思考,以期为人参在临床抗肿瘤应用和人参抗肿瘤成分的开发提供参考。

HPLC法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2

目的:建立高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2的方法。方法:采用ODSC_(18)(4.6mm×150mm)色谱柱,流动相乙腈0.05%磷酸水,梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长203nm,柱温35℃。结果:人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2分离效果良好,线性关系良好,相对标准偏差和回收率符合2010年版中华人民共和国药典要求。结论:本方法简便、准确、稳定、重现性好,可用于上述人参皂苷的含量测定。

人参苷-Rh_2的研究进展

本文报道有关人参苷-Rh_2研究的新进展,其中包括提取、分离;化学修饰;半合成的制备方法,以及生理活性与构效关系等方面内容。以期达到更加深入研究,创制低毒高效天然化合物抗癌新药为目的。

UPLC-MSMS法在西洋参、人参、红参中3种人参皂苷的含量研究与应用

目的:建立一种可以同时测定西洋参、人参、红参中3种人参皂苷的UPLC-MSMS法。方法:采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),0.3 mL/min的流速,以0.1%甲酸水溶液和四氢呋喃-乙腈溶液(5∶95)为流动相进行梯度洗脱,使用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)的模式。结果:拟人参皂苷F11、人参皂苷Rf、Re分别在0.005μg/mL~0.20μg/mL、0.01μg/mL~0.40μg/mL、0.01μg/mL~0.40μg/mL的浓度范围内,呈良好的线性关系;3种人参皂苷的平均回收率分别为93.9%(RSD=1.9%)、91.9%(RSD=2.3%)和101.3%(RSD=4.1%),检出限分别为0.0005μg/mL、0.001μg/mL、0.003μg/mL,定量限分别为0.0017μg/mL、0.003μg/mL、0.010μg/mL。结论:该法具有准确,快速,灵敏,简便的特点,适用于西洋参、人参、红参3种人参皂苷化合物含量测定。

红曲霉-人参双向固体发酵产物成分变化的初步分析

目的利用TLC和HPLC定性分析红曲霉-人参粉末双向固体发酵产物主要成分的变化。方法红曲霉接种于以人参为发酵基质的固体培养基。取人参和人参发酵产物的甲醇提取液,TLC测定它们的酸式monacolin K,HPLC法测定其人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rg3。结果人参经过红曲霉发酵后,TLC检测出活性成分酸式monacolin K,HPLC证实了人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含有量降低,但发酵液中出现人参皂苷Rg3。结论红曲霉-人参粉末双向固体发酵使人参皂苷转化成稀有的人参皂苷Rg3,并保存红曲霉中的酸式monacolin K.

人参水提物在Caco-2模型的吸收特征

目的建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征。方法将Caco-2细胞以1×105个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的P app值来评价模型的完整性、紧密性和通透性。进行人参水提物AP-BL和BL-AP两个方向的转运实验,用HPLC/MS对标志性成分进行分析,计算P app、外排比(Efflux ratio)和转运量。结果 TEER值和阳性对照药的P app值均达到要求。水提物中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Ro的P app AP-BL分别为(4.97±1.28)×10-6、(3.88±0.93)×10-6、(2.54±0.18)×10-6、(2.51±0.44)×10-6、(2.21±0.46)×10-6和(0.65±0.09)×10-6cm·s-1,P app BL-AP分别为(4.61±0.67)×10-6、(4.32±0.83)×10-6、(3.05±0.37)×10-6、(3.53±0.27)×10-6、(3.24±0.24)×10-6和(1.45±0.16)×10-6cm·s-1。人参皂苷Rg1单体的P app AP-BL为(0.39±0.02)×10-6cm·s-1,P app BL-AP为(0.47±0.01)×10-6cm·s-1。结论 Caco-2细胞单层模型建立成功。水提物中三醇型人参皂苷的吸收优于二醇型,吸收一般;齐墩果烷型人参皂苷Ro吸收差,可能存在主动外排作用。水提物中其它成分可促进人参皂苷Rg1的吸收。

UPLC-MS/MS法同时测定妇康片中11种人参皂苷的含量

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定妇康片中拟人参皂苷F_(11)及人参皂苷Rf、Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rb_(2)、Rb_(3)、Rg_(2)、Rg_(3)、Rc、Rd的含量。方法分析采用Phenomenex Kinetex F_(5)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相乙腈-2 mmol/L甲酸铵,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式。结果11种人参皂苷在各自范围内线性关系良好(r>0.9900),平均加样回收率97.40%~103.74%,RSD 1.76%~3.48%。结论该方法灵敏实用,重复性好,可用于妇康片中人参的质量控制。

高效液相色谱-串联质谱法分析人参配方颗粒中18种人参皂苷成分

建立了高效液相色谱-串联质谱检测人参配方颗粒中18种人参皂苷定性定量的分析方法。样品经80%甲醇超声提取,采用Agilent Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.7μm)分离,以0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾负离子模式,进行预设定多反应监测(sMRM)模式检测。结果显示,18种目标分析物在各自线性范围内线性良好,相关系数均大于0.9970。平均加标回收率为94.5%~105.2%,RSD为1.6%~3.9%。采用本方法对12份样品进行测定,发现4份样品中检测出拟人参皂苷成分。所建方法快速、可靠、灵敏,适用于人参配方颗粒中18种人参皂苷的定性及定量分析。

枯草芽孢杆菌LM 4-2发酵人参芦头生物转化人参皂苷Rd的研究

人参为我国传统的食药同源资源,但由于潜在的催吐等副作用,在人参炮制过程中需要做去芦处理,导致大量的人参芦头被丢弃,造成了严重的资源浪费,如何减少浪费、提高人参的综合应用需要进行相应研究。该研究建立了基于超高液相色谱法的人参皂苷检测方法,通过对13种人参皂苷单体进行测试,验证了该检测方法的准确性与可靠性。采用生物转化的方法,从6株候选菌株中筛选出转化人参皂苷Rd产量最高的菌株Bacillus subtilisLM 4-2,推测人参皂苷Rd经由Rc水解途径转化而来,进一步通过单因素试验与响应面试验设计,确定了菌株LM 4-2的最佳发酵条件为发酵时间20 d,温度30℃,料液比1∶4.3(g∶mL),接种量7.5%,该优化条件下Rd产量为(6.375±0.006)mg/g。同时,研究还对人参芦头发酵提取物的抗氧化性和抑菌效果进行了测定,抗氧化性试验发现DPPH自由基的清除率随着提取物浓度的增加而增加,提取物质量浓度为50 mg/mL时,DPPH自由基的清除率为82.55%;抑菌试验结果表明,在提取物质量浓度达到1.0 mg/mL时,对测试菌株金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌和大肠杆菌均能产生抑制作用,发酵液对3种测试菌株的最低抑制浓度分别为1.0、0.75和1.0 mg/mL。这些研究为通过菌株LM 4-2发酵人参芦头转化人参皂苷Rd、提高人参芦头的应用价值提供了参考。

用脑内透析法测定人参茎叶皂甙及其单体对大鼠纹状体DOPAC、HVA及5-HIAA的影响

用脑内透析法结合高效液相——电化学检测技术的研究发现人参茎叶皂式和单体皂甙Rg_1、Rh_1可显著降低清醒自由活动大鼠脑纹状体细胞外液中DOPAC和HVA的含量,而对5-HIAA却无显著影响。Rg_2和Re对DOPAC、HVA和5-HIAA则均无显著影响。

HPLC法同时测定参附注射液中五种人参皂苷的含量

目的:建立同时测定参附注射液中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd 5种主要皂苷成分含量测定高效液相色谱法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(B)-水(A)二元梯度洗脱;在203 nm波长下进行含量测定。结果:表明人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd分别在31.72~158.60、11.43~57.15、129.87~649.35、117.30~586.50、18.71~93.55μg·mL^(-1)线性范围内线性关系良好(相关系数均大于0.995),平均加样回收率分别为98.28%、98.14%、99.40%、96.80%、98.63%。结论:同时测定参附注射液中上述5种成分,方法简便、准确、分离度好、重现性好,可用于参附注射液的质量控制;采用此种多成分、多指标评价中药注射剂的方法,更能体现产品的活性成分群及功能主治,控制产品有效性。

HPLC-ELSD法测定血塞通注射液中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rd

目的采用HPLC-ELSD法同时测定血塞通注射液(三七)中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd。方法采用Venusil XBP C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温30℃,雾化管温度36℃,漂移管温度70℃,载气压力25 psi(1 psi=6.895 kPa)。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd分别在2.78～27.8μg/mL,9.24～92.4μg/mL,0.384～3.84μg/mL,5.55～55.5μg/mL,1.904～19.04μg/mL呈良好线性关系;血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd平均回收率(n=6)分别为97.60%、100.71%、98.14%、100.94%、99.69%。结论该方法简便、准确、分离好,灵敏度高,重复性好,无干扰,可用于血塞通注射液的质量评价及三七制剂的质量控制。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

含巴西人参中药复方颗粒剂制备工艺优化

目的 优化含巴西人参中药复方颗粒剂制备工艺。方法 在单因素试验基础上,以赋形剂[可溶性淀粉+环糊精(1∶3)]用量、乙醇体积分数、乙醇用量为影响因素,成型率、粒度、溶化率、休止角、吸湿率、感官评价的综合评分为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。结果 最优条件为赋形剂用量50 g, 89%乙醇用量16 mL,巴西人参中药复方浸膏冻干粉、可溶性淀粉、环糊精用量比例50∶12.5∶37.5,制软材,制粒,在60℃下干燥1 h,综合评分为98.83分。结论 该方法稳定可行,所得含巴西人参中药复方颗粒剂体验感较好,可为其后续规模化生产奠定基础。

人参有效成分及其复方研究进展

本文简要回顾了人参有效成分提取分离研究的历程并概述人参有效成分及其复方研究新进展状况,例举复方制剂研究新进展,阐述人参复方研究与开发的重要地位。重点分析研讨复方糖皮质激素、人参降糖胶囊、双参叶皂苷、炳翰复合人参粉、炳翰人参花茶功效作用及其科学依据,为今后人参产业高端开发提供借鉴。

人参茎叶中丙二酰基人参皂苷对APAP诱导的小鼠肝损伤的保护及作用机制

建立对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠肝损伤模型,研究人参茎叶中丙二酰基人参皂苷提取物(MGR)对小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其潜在作用机制。小鼠随机分为空白组、APAP模型组、MGR高剂量和低剂量组,建立肝损伤模型并给药。检测小鼠血清中的丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肝组织中的丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,并通过切片观察病理学变化。与APAP组相比,MGR组中MGR降低了小鼠血清中的ALT、AST、IL-1β、TNF-α水平的升高,并抑制了MDA的升高和GSH的降低。蛋白印迹分析显示,MGR提高了小鼠p-PI3K、p-AKT和Bcl-2的表达,降低了小鼠Bax的表达。MGR对APAP诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与炎症,氧化应激,细胞凋亡有关。

人参二醇类皂苷的生物转化动态及人参稀有皂苷C-K或F2的制备

为了低成本有效制备人参稀有皂苷C-K或F2,将A.nigerg.848菌酶用于转化含有人参皂苷(质量分数)分别为49.6%Rb1,25.9%Rd,19.3%Rc和5.23%Rb2的西洋参二醇混合皂苷.霉菌发酵时,采用人参二醇皂苷诱导物比人参提取液诱导物的产酶总活力提高10%~15%.所产的2种诱导酶均能水解人参二醇皂苷的3-O-和20-O-多种糖基,均为人参皂苷酶Ⅰ型;但是人参二醇皂苷诱导物所产酶几乎全部转化人参二醇皂苷为C-K,而人参提取液诱导物所产酶则残留中间产物.使用黑曲霉人参二醇皂苷诱导所产酶,在转化西洋参二醇皂苷的动态研究中发现,酶反应1.5~2.5h,主要为产物F2;酶反应12h后,主要产物为C-K皂苷.基于此,40g人参二醇类皂苷在45℃粗酶反应24h,经处理得到含C-K质量分数为87%的23g酶反应产物,C-K转化率达85%(摩尔分数).用40g西洋参二醇皂苷在45℃粗酶反应2.5h,经处理得到含有质量分数为58%的F2和27%的C-K的26g酶反应产物,F2转化率为50.4%,C-K转化率为29.5%.通过人参二醇皂苷诱导的黑曲霉粗酶转化人参二醇类皂苷动态研究,建立了C-K转化率为85%,F2转化率为50%的制备方法,为大批量制备提供了基础依据.

HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg_1、Re、Rd的含量

目的建立HPLC-ELSD法测定人参茎叶中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的方法。方法采用Diamonsil(钻石)C18柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)和水(B)按不同体积比混合,梯度洗脱程序:0-30min,21%A;30-35min,21%-33%A;35-60min,33%A;60-65min,33%-21%A;65-70min,21%A;流速为1.0ml/min,雾化温度35℃,蒸发温度50℃,载气N2,压力1.5Bar。结果人参皂苷Rg1、Re、Rd分别在1.06-7.95μg、1.94-14.55μg、1.26-9.45μg范围内呈良好的线性关系。3种人参皂苷的平均回收率分别为96.75%(RSD=1.99%)、97.77%(RSD=1.33%)、96.30%(RSD=1.26)。结论本方法灵敏、简便、准确,可用于人参茎叶中人参皂苷的含量测定。

人参皂苷Rg1干预小鼠巨大肩袖损伤后的肌肉退变

背景:肩袖肌退变(肌肉萎缩、纤维化和脂肪浸润)是肩袖撕裂后出现的常见问题,严重影响肩关节功能和手术预后。人参皂苷Rg1具有抗氧化、抗细胞凋亡、降血脂等生物效应,然而人参皂苷Rg1对肩袖损伤后肌肉退变的影响未见报道。目的:探讨人参皂苷Rg1对巨大肩袖损伤小鼠肌肉退变的影响。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组,每组15只。假手术组小鼠切开右肩皮肤后缝合,其余3组小鼠均行右侧肩关节肩袖损伤造模,模拟巨大肩袖撕裂手术切断冈上肌肌腱和肩胛上神经压迫。术后假手术组和模型组腹腔注射生理盐水0.5 mL;人参皂苷Rg1低、高剂量组予以腹腔注射人参皂苷Rg130,60 mg/kg,1次/d,共注射6周。末次注射后次日予以步态分析评估小鼠肢体功能,安乐死后取术侧冈上肌测量肌肉萎缩率、肌肉收缩力,肌肉组织进行油红O染色、Masson染色,RT-PCR检测萎缩、纤维化、脂肪浸润相关基因的表达。结果与结论:①与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、步长显著增加(P<0.05);②与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌纤维横截面积、冈上肌收缩力显著增加(P<0.05),湿肌质量减少比率、脂肪浸润面积比率、胶原纤维面积比率显著下降(P<0.05);③与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌肉组织中萎缩、纤维化和脂肪浸润相关基因的表达显著下降(P<0.05);④人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、冈上肌收缩力、肌纤维横截面积无统计学差异(P>0.05),人参皂苷Rg1高剂量组其他指标均优于低剂量组(P<0.05);⑤结果说明,人参皂苷Rg1能显著减轻小鼠巨大肩袖撕裂后肩袖肌萎缩、纤维化和脂肪浸润,并有利于肌肉力量及肢体功能的改善。