人参皂苷Rb1减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、GsRb1给药组(低、中、高剂量组),气管内给予LPS造模,给药组在造模前3 d分别腹膜腔注射给予不同剂量GsRb1预处理,造模12 h将其麻醉,先采集肺泡灌洗液后再处死取出肺组织,计算肺湿/干比,试剂盒检测灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及肺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:高剂量GsRb1能明显降低肺组织湿/干比(P<0.05);中、高剂量GsRb1能明显降低肺组织MPO活性(P<0.05);高剂量GsRb1明显降低小鼠肺泡灌洗液IL-1β和TNF-α水平(P<0.05);高剂量GsRb1能明显降低肺组织NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:GsRb1可能通过调控NF-κB通路,减轻炎症反应,抑制LPS诱导的小鼠ALI。

人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gn-Rb1)对肝细胞癌(HCC)HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组(予以200μmol/L Gn-Rb1干预),采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA检测对细胞ROS生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH释放水平的影响;WB法、qPCR法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果:生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长(P<0.05)。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高(均P<0.01),p-AIFM1蛋白水平显著升高(P<0.05)。对HepG2细胞予以200μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低(均P<0.01),而LDH水平显著升高(P<0.05);相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1组细胞中KEAP1、PGAM5表达均显著升高而NRF2表达均显著降低(均P<0.05),p-AIFM1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。

人参皂苷Rb1通过载脂蛋白M/线粒体凋亡途径对肝癌的影响及机制研究

目的:探究载脂蛋白M(ApoM)/线粒体凋亡在肝癌中的作用,以及人参皂苷Rb1(Rb1)通过ApoM/线粒体凋亡途径对肝癌影响的潜在机制。方法:生物信息学分析筛选ApoM在肝癌中的差异性表达及临床验证;分子对接技术确定Rb1与ApoM的靶向结合,体外培养人肝癌细胞(HepG2),并进行细胞活力检测(CCK-8)筛选Rb1最佳干预浓度,克隆实验用于检测HepG2细胞的增殖情况,划痕实验用于检测HepG2细胞的迁移能力,采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bcl2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达,实时萤光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测ApoM及线粒体凋亡相关基因Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平。结果:生存分析发现ApoM低表达肝癌预后更差,分子对接提示Rb1与ApoM之间具有较高亲和力,克隆及划痕实验提示Rb1有效抑制HepG2细胞增殖,Western Blotting及RT-qPCR验证Rb1可以干预线粒体凋亡相关基因蛋白和mRNA表达。结论:揭示了ApoM/线粒体凋亡在肝癌中发挥重要作用,人参皂苷Rb1可能通过ApoM/线粒体凋亡途径影响肝癌的可能潜在机制。

基于RIP1/RIP3/MLKL介导程序性坏死通路探讨人参皂苷Rb1拮抗LPS诱导的黑质多巴胺神经元损伤机制

目的观察受体相互作用蛋白1(RIP1)/RIP3/混合激酶样蛋白(MLKL)介导的程序性坏死在脂多糖(LPS)诱导的大鼠黑质多巴胺能神经元损伤中的作用,探讨人参皂苷Rb1保护多巴胺能神经元的作用机制。方法将48只SD大鼠随机分为对照组、帕金森组、Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组,每组12只。对照组大鼠黑质内注射生理盐水2μL,然后连续14 d腹腔内注射生理盐水(2 mL/kg);帕金森组大鼠黑质内注射LPS 5μg(2μL),然后连续14 d腹腔内注射生理盐水(2 mL/kg);Rb1+帕金森组大鼠腹腔注射人参皂苷Rb1(20 mg/kg)3 d,第4天黑质内注射5μg LPS后,再连续14 d腹腔内注射人参皂苷Rb1(20 mg/kg);Nec-1+帕金森组大鼠黑质内注射LPS 5μg,然后连续14 d腹腔内注射Nec-1(2 mg/kg)。LPS注射后14 d,皮下注射阿扑吗啡(APO)观察大鼠行为学变化;免疫组化法观察黑质内多巴胺能神经元数量及小胶质细胞形态;高效液相色谱法测定纹状体中多巴胺(DA)及其代谢物高香草酸(HVA)、二羟苯乙酸(DOPAC)的含量;RT-PCR法检测黑质中白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达情况;化学试剂盒检测黑质中超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙结合适配器分子1(Iba-1)及程序性细胞坏死相关蛋白(RIP1、RIP3、MLKL)表达情况。结果皮下注射APO后,帕金森组大鼠出现明显的旋转行为,Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组大鼠旋转行为均较帕金森组明显改善。与对照组比较,帕金森组大鼠注射侧黑质内多巴胺能神经元大量丢失和小胶质细胞过度激活;注射侧纹状体中DA、DOPAC及HVA含量均明显降低(P均<0.05);注射侧黑质中SOD活性和TH蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),MDA含量和IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量及Iba-1、RIP1、RIP3、MLKL蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与帕金森组比较,Rb1+帕金森组和Nec-1+帕金森组大鼠注射侧黑质内多巴胺能神经元丢失和小胶质细胞激活情况均减轻;注射侧纹状体中DA、DOPAC及HVA含量均明显升高(P均<0.05);注射侧黑质中TH蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量及Iba-1、RIP1、RIP3、MLKL蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。其中Rb1+帕金森组大鼠注射侧黑质中SOD活性明显高于帕金森组(P<0.05),MDA含量明显低于帕金森组(P<0.05),但Nec-1+帕金森组SOD活性和MDA含量与帕金森组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论程序性坏死参与了LPS诱导的大鼠黑质多巴胺能神经元损伤,人参皂苷Rb1可通过抑制RIP1/RIP3/MLKL程序性坏死通路发挥抗炎及神经保护作用。

人参皂苷Rb1调节钙、钠通道影响受损心肌细胞的研究

目的 探讨人参皂苷Rb1(Gs-Rb1)减轻阿霉素(Dox)诱导的心肌细胞损伤,明确Gs-Rb1改善Dox心肌细胞损伤效应与其调节钠、钙通道有关,AMP依赖性蛋白激酶(AMPK)和/或钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)通路介导该作用。方法 提取大鼠左心室心肌细胞进行培养,将细胞随机分为7组:对照组(PBS)、Dox组、Gs-Rb1组、AraA(阿糖腺苷,AMPK抑制剂)组、AraA+Gs-Rb1组、KN93(CAMKII抑制剂)组及KN93+Gs-Rb1组,分别进行给药。ELISA法检测N末端B型利钠肽前体、AMPK和CaMKⅡ活性;DCFH-DA荧光探针试验检测线粒体内活性氧(mitROS)水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot检测总LTCC(t-LTCC)、L型电压门控钙通道(LTCC)、兰尼定受体(RYR2)、肌浆网钙ATP酶(SERCA2a)和钙钠交换体(NCX)蛋白表达。结果 Gs-Rb1显著降低心肌细胞NT-proBNP水平,该作用可被AraA显著抑制;Gs-Rb1升高心肌细胞AMPK活性被AraA完全抑制,不被KN93影响;Gs-Rb1降低心肌细胞CaMKII活性;Gs-Rb1降低细胞内ROS和mitROS水平;Gs-Rb1升高SERCA2a蛋白表达,降低NCX表达量;各组tLTCC差异无明显统计学意义(均P>0.05)。结论 Gs-Rb1降低Dox诱导心肌细胞NT-proBNP水平,通过调节LTCC再分布、增强RYR2表达、增加SERCA2a和抑制NCX等减轻心肌细胞损伤,AMPK或/和CaMKII通路介导该效应;Gs-Rb1显著抑制Dox诱导的心肌细胞氧化应激,此效应可被AMPK通路和/或CaMKII通路介导。

人参皂苷Rb1通过AMPK/SIRT1/PGC-1α轴调节线粒体裂变融合缓解哮喘气道炎症

哮喘(bronchial asthma)以气道炎症和高反应性为主要特征,严重危害人类健康^([1])。AMP-activated protein kinase(AMPK)作为氧化还原蛋白,能有效调节细胞内氧化应激,可通过激活高度保守的NAD+依赖性去乙酰化酶Sirtuin 1(SIRT1)/NF-κB通路抑制哮喘^([2])。PPARγcoactivator-1α(PGC-1α)在线粒体生物合成和功能调节中得到广泛应用^([3])。人参皂苷Rb1是人参根茎的重要提取物,具有抗炎,抗凋亡,能够抑制哮喘气道高反应性等作用^([4])。本研究探讨了Rb1可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号轴改善小鼠支气管上皮细胞在CRE诱导下发生的氧化应激线粒体动力学障碍,最终有效缓解哮喘气道炎症的发生和发展。

异功散中陈皮对脾虚大鼠MTL分泌和人参皂苷Rb1药动学影响及PK-PD相关性分析

目的通过比较异功散全方组与异功散去陈皮方组脾虚大鼠体内MTL分泌结果和人参皂苷Rb1药代动力学特征的差异,分析参数PK-PD相关性,探讨行气药能否增效补益剂。方法采用脾虚大鼠灌胃给药异功散全方(Y组)、异功散去陈皮方(Y-C组)、单味陈皮方(C组)及生理盐水(M组),于颈静脉不同时间点取血,运用液质联用方法检测人参皂苷Rb1血浆浓度、ELISA法检测MTL血浆浓度,拟合PK-PD模型。结果2个组药时曲线均呈双峰,Cmax、Tmax均有两个值,Y组两次达峰浓度均明显高于Y-C组(P<0.001),Y-C组第2次吸收量明显多于第1次(P<0.01)。灌胃后16、36h,各给药组大鼠血浆中MTL含量均明显增高(P>0.05),Y组>Y-C组>C组。PD结果为Y组EC_(50)、γ平均值低于Y-C组、Emax平均值高于Y-C组,与PK-PD模型拟合结果基本一致。PK-PD模型拟合结果为Y组Ka1、Ka2、AUC0-t、CL1、CL2、CL3、F、Tlag、EC_(50)、Emax平均值更大;Y-C组Vd1、Vd2、γ、Ke0值更大。结论脾虚大鼠体内人参皂苷Rb1及MTL血药浓度改变与灌胃所用异功散含陈皮有一定相关性。异功散中陈皮发挥增强补益剂补益功效的作用机制之一可能是通过促进异功散中人参皂苷Rb1的吸收增多、吸收速率增快,分布更集中于效应部位,使人参皂苷Rb1与MTL之间亲和力更强,从而导致MTL分泌增多,促进胃肠运动。

乙醇体系中金属离子催化转化人参皂苷Rb1的研究

人参皂苷Rb1是人参中的主要皂苷之一,但人体吸收量极少,而其衍生物Rg3、Rk1、Rg5却易于人体吸收,但其制备和分离成本较高。针对以上问题将人参皂苷Rb1在50%乙醇水溶液体系和无水乙醇体系中进行催化条件的优化,并分析其产物。实验发现,通过对金属离子催化效果的筛选,选取NbCl_(5)为反应催化剂;在50%乙醇水溶液体系中最优条件下反应,Rg3得率为18.29%;在无水乙醇体系中最优条件下反应,Rg3得率为49.45%。根据两组反应产物的对比,推测在50%乙醇水溶液体系反应时,水可能供给电子基团,并生成更多水合化合物即20(S)-25-OH-Rg3和20(R)-25-OH-Rg3;在无水乙醇体系反应时,电子基团可能无法供给,形成双键,生成其他化合物即Rk1和Rg5。该发现为金属离子催化人参皂苷以制备稀有人参皂苷的方法奠定了理论基础。

人参皂苷Rb1通过激活AMPK减轻大鼠创伤性骨关节炎

目的探讨人参皂苷Rb1(G-Rb1)治疗大鼠创伤性骨关节炎(PTOA)的分子机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、低、中、高剂量组和抑制剂组,每组12只。假手术组大鼠切开髌骨外侧皮肤后立即缝合伤口,其他组大鼠采用前十字韧带切断加半月板部分切除法建立PTOA动物模型。建模2 h后,假手术组和模型组大鼠灌胃2 mL生理盐水。低、中和高剂量组大鼠分别灌胃2 mL浓度为10,20,40 mg/(kg·d)的G-Rb1溶液。抑制剂组大鼠灌胃2 mL浓度为40 mg/(kg·d)的G-Rb1溶液,同时腹腔注射20 mg/(kg·d)AMPK抑制剂Compound C。各组大鼠均处理4周。采用苏木素伊红(HE)染色评价大鼠关节软骨形态。采用番红O/固绿染色法评价大鼠关节软骨退变,然后进行国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分。采用TUNEL染色检测软骨细胞凋亡情况。通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。通过RT-qPCR测定大鼠软骨中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、CollagenⅡ、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的mRNA水平。通过Western blot测定大鼠软骨中AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)的磷酸化水平。结果与模型组比较,低、中和高剂量组大鼠的软骨损伤和退变明显减轻,OARSI评分和软骨细胞TUNEL阳性率均剂量依赖性降低(P<0.05),血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平剂量依赖性降低(P<0.05),Bax和MMP-13的mRNA相对表达量均剂量依赖性降低(P<0.05),Bcl-2、CollagenⅡ、Runx2和BMP-2的mRNA相对表达量均剂量依赖性升高(P<0.05),AMPKα相对磷酸化水平剂量依赖性升高(P<0.05)。Compound C减弱了高剂量G-Rb1对PTOA大鼠的治疗效果(P<0.05)。结论G-Rb1通过激活AMPK减轻大鼠PTOA进程。

基于网络药理学探讨人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制

目的:利用网络药理学技术探讨中药人参皂苷Rb1治疗帕金森病的作用机制,为人参皂苷Rb1的临床合理应用提供科学理论依据。方法:通过在SwissTargetPrediction、SEA以及SuperPred数据库中预测人参皂苷Rb1的靶点;使用关键词“Parkinson Disease”在GeneCards和Omim数据库中获得有关帕金森疾病的相关的靶点;将人参皂苷Rb1与帕金森病的靶点相互映射,作Veen图,从而获得交集基因;然后使用Cytoscape3.8.2软件构建“药物-作用靶点”网络;将韦恩图中与帕金森病相关的21个共有药物靶点导入String(https://string-db.org/)数据库中,进行蛋白-蛋白相互作用预测,从而预测出核心靶点。将人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点导入到DAVID数据库中,得到GO分析结果和KEGG富集结果。利用AutoDock Vina对人参皂苷Rb1和关键靶点进行分子对接,验证其相互作用活性。结果:人参皂苷Rb1治疗帕金森病的核心靶点有4个,分别为BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR,相关通路28条。结合人参皂苷Rb1的生物学特性,发现人参皂苷Rb1治疗帕金森病可能是通过PI3K/Akt信号通路参与的生物调节过程,而此调节过程与细胞生物工程中的凋亡的相关机制密切相关。通过关键靶点与人参皂苷Rb1进行分子对接验证,靶点相互作用结合性高。结论:人参皂苷Rb1治疗PD可能是通过减少细胞凋亡的生物过程发挥作用,影响的相关的通路有PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路,通过与BCL2L1、VEGFA、FGF2、KDR等靶点产生作用。

食品级商业酶转化人参皂苷Rb1制备人参皂苷Rd研究

在11种不同厂家食品级商业酶中筛选出转化人参皂苷Rb1制备Rd活性最佳的酶,并利用单因素实验考察反应时间、酶量、初始pH及温度对转化效率的影响。结果显示,β-葡聚糖酶(庞博)的转化活性最高,其最佳转化条件为反应时间2 h,酶量0.3 mg/1.5 mg Rb1,pH 5.5和55℃,Rd转化效率为98.01%±1.19%(n=3)。β-葡聚糖酶(庞博)酶转化法是一种高效、绿色、安全的人参皂苷Rd制备方法。

人参皂苷Rb1调控线粒体自噬对脓毒症血管内皮的保护作用及其机制研究

目的研究人参皂苷Rb1通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成激酶3β(PI3K/AKT/GSK3β)信号通路调控线粒体自噬对脓毒症血管内皮的保护作用及机制。方法健康SPF级雄性昆明小鼠30只随机分为5组:假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、人参皂苷Rb1+脓毒症组(人参皂苷Rb1组)、PI3K抑制剂LY294002+人参皂苷Rb1+脓毒症组(LY294002组)和线粒体自噬抑制剂Mdivi-1+人参皂苷Rb1+脓毒症组(Mdivi-1组),每组6只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症小鼠模型,每组给予相应药物处理。术后观察小鼠一般情况,24 h后取主动脉组织样本,通过苏木素—伊红(HE)染色观察主动脉组织病理学改变,免疫组织化学法检测vWF、p-AKT、p-GSK3β及线粒体自噬相关蛋白Parkin的水平。结果Sham组及人参皂苷Rb1组小鼠一般情况及腹腔感染情况较轻,主动脉组织内膜结构完整,细胞排列较整齐,形态分布规则;CLP组和抑制剂组均可见不同程度的内膜损伤突起,中膜增生且排列紊乱,管壁厚薄不一。免疫组化结果显示,与Sham组比较,CLP组小鼠主动脉vWF、Parkin表达升高(P<0.05),p-AKT、p-GSK3β表达降低(P<0.05)。与CLP组比较,人参皂苷Rb1组vWF表达明显降低(P<0.05),p-AKT、p-GSK3β及Parkin表达升高(P<0.05)。与人参皂苷Rb1组比较,LY294002组p-AKT、p-GSK3β及Parkin表达降低,vWF升高(P<0.05),Mdivi-1组p-AKT及p-GSK3β表达差异无统计学意义(P>0.05),Parkin表达明显降低,vWF升高(P<0.05)。与LY294002组比较,Mdivi-1组p-AKT、p-GSK3β表达明显升高(P<0.05),Parkin表达降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1通过激活PI3K/AKT/GSK3β信号通路促进血管内皮细胞线粒体自噬,进而对脓毒症血管内皮起保护作用。

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,IFN-γ水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.05);人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化明显优于人参皂苷Rb1低剂量组(P<0.05);地塞米松组和人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠具有治疗作用,可改善过敏性哮喘大鼠肺损伤,减轻炎症反应,提高免疫功能,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

人参皂苷Rb1抑制β淀粉样蛋白_(25-35)诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨人参皂苷Rb1对凝聚态β AP25 35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法 通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测神经元tau蛋白磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK 3β)的蛋白表达水平。结果 凝聚态β AP25 35(20μmol·L-1)作用于皮层神经元12h,tau蛋白磷酸化水平和总tau蛋白水平均增高,同时GSK 3β蛋白表达也增多。用人参皂苷Rb1或GSK 3β特异性抑制剂氯 化锂预处理后,凝聚态β AP25 35诱导的tau蛋白的过度磷酸化受到明显抑制,同时GSK 3β的表达也降低。结论 人 参皂苷Rb1可通过抑制GSK 3β的表达来抑制凝聚态β AP25 35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化。

人参皂苷Rb1对H_2O_2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1对H2O2诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法在培养的新生大鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量组人参皂苷Rb1(20、40、80mg·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞内钙离子变化的影响。结果不同剂量组人参皂苷Rb1可以减少心肌细胞凋亡率、降低MDA含量、增加SOD活性、减少细胞内钙超载。结论人参皂苷Rb1可以抑制H2O2引起的新生大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与其抗脂质氧化和减少细胞内钙超载有关。

人参皂苷Rb1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积及脑组织和血清IL-1β的影响

目的研究人参皂苷Rb1对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,I/R)后脑梗死体积及脑组织和血清中炎症因子IL-1β的影响。方法采用线栓法建立大鼠I/R模型,将SD大鼠随机分为假手术组,模型组,人参皂苷Rb1低(20 mg/kg)、中(40 mg/kg)、高剂量(80 mg/kg)组,每组12只。假手术组大鼠仅做大脑中动脉栓塞手术,但不插入线栓。除假手术组外,另4组均接受线栓法制备大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,2 h后恢复大脑中动脉再灌注;人参皂苷Rb1各剂量组于脑缺血即刻腹腔注射,模型组给予等量生理盐水。观察各组大鼠脑缺血2 h再灌注损伤后24 h大鼠神经缺损程度评分、脑梗死体积、脑组织及血清IL-1β蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损程度评分提高(P<0.01),脑组织IL-1β阳性细胞数增加,血清IL-1β含量升高(P<0.05)。与模型组比较,人参皂苷Rb1中、高剂量组神经缺损程度评分降低(P<0.05,P<0.01),人参皂苷Rb1各剂量组梗死体积均缩小,脑组织IL-1β阳性细胞数减少,血清IL-1β含量降低(P<0.01,P<0.05)。与人参皂苷Rb1低剂量组比较,高剂量组神经功能缺损程度评分降低,梗死体积缩小,血清IL-1β含量升高(P<0.01,P<0.05)。结论人参皂苷Rb1(20、40、80 mg/kg)可能通过下调IL-1β的表达有效缓解大鼠局灶性脑I/R。

人参皂苷Rb1通过抑制NF-κB p65介导的炎症和氧化应激改善内皮细胞复制性衰老

【目的】本研究旨在探讨人参皂苷Rb1对内皮细胞复制性衰老的作用和机制。【方法】建立人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC)复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVEC衰老;将复制性衰老模型细胞分为0、20、40、80、100μmol/L Rb1组,不同浓度人参皂苷Rb1处理衰老细胞48 h后观察衰老指标SA-β-Gal染色和PAI-1蛋白变化,每组3个复孔;采用Western blot方法检测对照组(CPDL 2的HUVEC)、模型组(衰老细胞组)及人参皂苷Rb1组核因子κB p65(NF-κB p65)的活性,每组3个复孔;检测对照组、模型组及人参皂苷Rb1组细胞培养液中氧化应激和炎症指标,每组3个复孔。【结果】累计细胞群体倍增值(CPDL)16的HUVEC可作为复制性衰老模型;与0μmol/L Rb1组相比,80μmol/L Rb1组SA-β-Gal染色阳性细胞数和PAI-1蛋白表达均明显降低(P <0.001);复制性衰老细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活力明显低于对照组(P <0.001),而丙二醛(MDA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及NF-κB p65的活性均明显高于对照组(P <0.001),80μmol/L人参皂苷Rb1处理后SOD活力明显增加(P <0.05),MDA、IL-6、TNF-α的产量明显减少(P <0.05),NF-κB p65活性降低(P <0.001)。【结论】人参皂苷Rb1可通过抑制NF-κB p65介导的氧化应激和炎症反应延缓复制性内皮细胞衰老。

人参皂苷Rb1抗小鼠脑自然衰老及其对mTOR/p70S6K通路的影响

【目的】观察人参皂苷Rb1对小鼠脑组织自然衰老的作用,并探讨mTOR/p70S6K通路在其中的作用。【方法】27只C57/B6雌性小鼠购于中山大学实验动物中心,其中7只3月龄C57/B6雌性小鼠为青年组,20只22月龄C57/B6雌性小鼠为老年组,青年组小鼠予生理盐水(PBS)腹腔注射,老年组小鼠分别予PBS(对照)、低剂量Rb1(10 mg·kg-1·d-1)、高剂量Rb1(20 mg·kg-1·d-1)腹腔注射。6周后处死小鼠,取脑组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量、单胺氧化酶(MAO)活性,western blot技术检测血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、p-m TOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K蛋白表达情况。【结果】与青年小鼠比较,老年对照组小鼠脑组织中的MDA含量增多,MAO活性增加,PAI-1蛋白表达增多,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平增加。与老年对照组比较,注射Rb1的两组小鼠脑组织MAO活性,m TOR蛋白、p70S6K蛋白磷酸化水平均降低;此外,高剂量Rb1组MDA含量、PAI-1蛋白的表达降低。【结论】高剂量(20 mg·kg-1·d-1)人参皂苷Rb1可以减轻小鼠脑自然衰老;人参皂苷Rb1的这一抗衰老作用可能与m TOR/p70S6K通路密切相关。

人参皂苷Rb1与红景天苷对抗皮肤光老化作用的研究

目的:观察人参皂苷Rb1与红景天苷对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)辐照后人角质形成细胞光产物水平的影响及人参皂苷Rb1和红景天苷光保护作用机制。方法:使用含10%小牛血清的RMPI-1640培养液培养人角质形成细胞HaCaT,定量(60 J.cm-2)UVB照射细胞,MTT法检测细胞增殖活性;培养液中加入人参皂苷Rb1和红景天苷,测定UVB照射细胞后细胞中超氧化物岐化酶(SOD)、谷光甘肽(GSH)、氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:在暴露于UVB后,经人参皂苷Rb1和红景天苷处理,细胞内抗氧化酶SOD、GSH、CAT的活性提高,MDA的产生减少,与未用药组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:人参皂苷Rb1和红景天苷具有增加人角质形成细胞内抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化反应及抗氧化作用,可以用于对抗皮肤光老化。