白细胞免疫球蛋白样受体(leukocyte immunoglobulin like receptors,LILRs),是一类具有高度序列同源性的免疫球蛋白超家族,该家族位于人类19号染色体白细胞受体复合体区域,这一区域包含多种免疫球蛋白超家族受体。LILRs包含11个功能基因...白细胞免疫球蛋白样受体(leukocyte immunoglobulin like receptors,LILRs),是一类具有高度序列同源性的免疫球蛋白超家族,该家族位于人类19号染色体白细胞受体复合体区域,这一区域包含多种免疫球蛋白超家族受体。LILRs包含11个功能基因和2个没有功能的假基因,功能基因根据行使的功能不同又分为2大类:①活化性受体,包含LILRA1-A6;②抑制性受体,包含LILRB1-B5。根据在染色体上的位置不同,LILRs基因簇可以分为着丝粒簇和端粒簇,着丝粒簇和端粒簇从相反的方向转录[1],基因排列顺序如图1所示。展开更多
目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼...目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。展开更多
文摘白细胞免疫球蛋白样受体(leukocyte immunoglobulin like receptors,LILRs),是一类具有高度序列同源性的免疫球蛋白超家族,该家族位于人类19号染色体白细胞受体复合体区域,这一区域包含多种免疫球蛋白超家族受体。LILRs包含11个功能基因和2个没有功能的假基因,功能基因根据行使的功能不同又分为2大类:①活化性受体,包含LILRA1-A6;②抑制性受体,包含LILRB1-B5。根据在染色体上的位置不同,LILRs基因簇可以分为着丝粒簇和端粒簇,着丝粒簇和端粒簇从相反的方向转录[1],基因排列顺序如图1所示。
文摘目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。