人类端粒酶基因反义核酸对恶性肿瘤细胞端粒酶抑制的实验研究

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 62细胞、Hep 2细胞端粒酶活性和K5 62细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 62细胞、Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后K5 62细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 62细胞和Hep 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 62细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 。

宫颈癌及癌前病变中人类端粒酶基因的临床研究进展

宫颈癌是全世界妇女中发病率最高的生殖道肿瘤,宫颈癌的早期诊断和病情监测在改善患者预后有重要的作用.人类端粒酶RNA基因（hTERC）是人类端粒酶最重要基因,研究显示人类端粒酶RNA的生物学特性与宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的发生、发展密切相关,该基因在预测宫颈癌前病变恶变方面有潜在的重要价值.本文对近年hTERC在宫颈癌前病变及宫颈癌发病中作用及临床应用前景相关研究进行综述。

新疆维、汉妇女宫颈癌人类染色体端粒酶基因的研究

目的:探讨维吾尔族(维族)、汉族妇女宫颈癌在感染HPV高危亚型之后,其致癌机制——人类染色体端粒酶(TERC)基因扩增的特点及差异性。方法:采用荧光原位杂交技术(FISH)检测23例维吾尔族和22例汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增的情况。结果:23例维吾尔族宫颈癌患者TERC基因扩增率为86.96%,22例汉族宫颈癌TERC扩增率为90.90%。随着临床分期增高,维吾尔族、汉族宫颈癌患者的TERC基因扩增均无明显增加。维吾尔族、汉族宫颈癌在HPV各亚型感染之间,TERC基因平均扩增倍数差异无统计学意义。维吾尔族宫颈癌总的TERC基因扩增倍数与汉族差异有统计学意义,主要与维吾尔族宫颈癌患者中多重感染的比率高于汉族宫颈癌有关。结论:TERC基因的扩增在维、汉族宫颈癌的发生中均为早期事件。维吾尔族宫颈癌患者中多重HPV高危亚型感染比例较高,导致TERC基因扩增明显,可能是维吾尔族宫颈癌发病率高于汉族的原因之一。

人类端粒酶逆转录酶基因转染对足叶乙甙诱导Raji细胞凋亡的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因转入Raji细胞后足叶乙甙 (VP 16 )对细胞凋亡的影响。采用脂质体介导的转染方法将重组的hTERT基因转入Raji细胞 ,G4 18筛选 ;采用间接免疫荧光标记法及端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定法检测hTERT蛋白表达水平和端粒酶活性的变化 ;姬姆萨染色及流式细胞仪观测细胞凋亡。结果发现 :转染hTERT入Raji细胞后 ,其表达hTERT的蛋白及端粒酶活性显著增加 (P <0.0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 4 8h、72h对细胞生长抑制作用不如转染空载体组及未转染组明显 (P <0 .0 5 )。 10 μmol/LVP 16作用转染hTERT的Raji细胞 72h ,光镜下仅可见到很少量的细胞出现凋亡 ,流式细胞仪测定的细胞凋亡率 (4.34±1.0 3) %显著降低 ,分别与转染空载体组 (33.2 1± 3.12 ) %及未转染组 (31.6 3± 3.0 6 ) %比较 ,P <0.0 5。表明端粒酶活性过表达可使Raji细胞对VP

人类端粒酶逆转录酶基因反义核苷酸对白血病细胞端粒酶活性的影响

为了探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对原代培养的急性髓性白血病(AML)和慢性髓性白血病 (CML)细胞端粒酶活性的影响 ,采用间接免疫荧光标记方法 ,通过流式细胞术检测hTERT基因ASODN作用于AML和CML细胞后hTERT蛋白表达含量的变化 ,采用端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫测定 (PCR ELISA)法检测白血病细胞端粒酶活性的改变。结果显示 :hTERTASODN作用于AML和CML细胞2 4 ,48和 72小时后 ,hTERT蛋白表达水平不断降低 ;同时 ,AML和CML细胞端粒酶活性均逐渐受到抑制。结论 :hTERT基因ASODN可以通过特异性地抑制AML和CML细胞hTERT蛋白的表达 。

人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的:研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法:采用PCRELISA法检测HeLa细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果:经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论:hTR的反义寡核苷酸显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。

宫颈液基细胞学端粒酶基因扩增检测的意义

目的探讨人类染色体端粒酶(hTERC)基因在宫颈不同上皮内病变中的扩增情况及差异性,为临床治疗宫颈疾病提供依据。方法收集液基细胞学(LCT)剩余液体121例。经活检证实,正常或良性病变30例、CIN158例、CIN218例、CIN36例、浸润性鳞癌9例。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈脱落细胞内hTERC基因扩增情况。结果 hTERC基因在不同病例中扩增率分别为:正常或良性病变6.67%(2/30);CIN122.41%(13/58);CIN272.22%(13/18);CIN3100%(6/6);鳞癌100%(9/9)。随着病变级别的增高,TERC基因扩增率不断升高。正常及CIN1者hTERC基因扩增率显著低于CIN2及CIN2以上者(P<0.01)。CIN2以上病变hTERC基因扩增敏感度为84.85%,特异度为93.34%。结论在宫颈的不同上皮病变中都有可能发生TERC基因的扩增,且随着病变程度的加重基因扩增发生率升高。

人端粒酶RNA组份基因与宫颈病变的研究进展

现代细胞遗传学和分子生物学研究表明,人类大多数实体肿瘤细胞常表现为染色体不稳定性,即染色体数目的改变和结构异常。宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中,涉及到最重要的基因可能是人类染色体端粒酶基因(hTERC基因,位于3q26.3)。该基因的扩增可阻止细胞凋亡,因而可导致肿瘤产生。现就近年hTERC基因的研究进展作一综述。

端粒酶与人乳头瘤病毒及宫颈病变的关系研究进展

宫颈癌严重危害女性健康,人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要危险因素,但只有一部分HPV感染的患者最终发展为宫颈浸润癌。HPV感染后引起的端粒酶活性改变与宫颈病变息息相关。其不仅在宫颈病变的发生、发展过程中起重要作用,而且也可用于宫颈病变的疗效评估。宫颈癌发生前有一个循序渐进且可逆转的癌前病变过程;因此,早预防、早发现、早治疗就显得格外重要。该文对近年来端粒酶中的h TERT、h TERC与HPV、宫颈病变的关系研究进展进行了综述,希望为未来宫颈癌的防治提供新思路。

新疆维吾尔族、汉族妇女宫颈病变人类染色体端粒酶基因扩增与人乳头瘤病毒感染相关性研究

目的:探讨新疆地区维吾尔族(维族)、汉族妇女宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(human telomerase gene,hTERC)的表达差异及其与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)高危亚型感染的相关性。方法:采用荧光原位杂交技术,比较50例维族和52例汉族宫颈病变患者hTERC基因扩增情况,同时检测HPV感染情况。结果:维族宫颈病变患者hTERC基因扩增率为62.00%,汉族宫颈病变hTERC基因扩增率为51.92%。随病变进展,维、汉族宫颈病变患者hTERC基因扩增均明显增加。维、汉族宫颈癌hTERC基因平均扩增倍数,在HPV各亚型感染组间差异无统计学意义(P>0.05),但在HPV多重感染和单一感染间差异有统计学意义(P<0.05)。维族宫颈病变总hTERC基因扩增倍数与汉族差异有统计学意义(P<0.05)。结论:hTERC基因扩增与高危型HPV感染有关,可能是宫颈癌进展的预测指标;多重HPV高危亚型感染可能是维族宫颈癌发病率高的原因之一。

hTERC基因和C-MYC基因在宫颈病变筛查和诊断中的应用

目的检测宫颈脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(telomerase human gene,hTERC)和人髓细胞增生原癌基因(myelocytomatosis oncogene,C-MYC)的表达,探讨在宫颈病变的筛查和诊断中其所具有的实用价值。方法宫颈癌筛查患者均行宫颈脱落细胞中hTERC基因和C-MYC基因阳性表达的检测。结果(1)在正常组,低度宫颈上皮内瘤变组,高度宫颈上皮内瘤变组,宫颈浸润癌组,hTERC基因异常表达,且各组间差异比较有统计学意义(P<0.05);(2)在正常组,低度宫颈上皮内瘤变组,高度宫颈上皮内瘤变组,宫颈浸润癌组,各组间C-MYC基因的表达率比较存在差异,且有统计学意义(P<0.05)。结论(1)hTERC基因在正常组及不同级别的宫颈病变组均异常表达,且阳性率随着病变程度的增加而上升,可作为检测子宫颈癌癌前病变的生物遗传学指标,可期望成为筛查早期宫颈癌的方法之一;(2)C-MYC基因在正常组及不同级别的宫颈病变组异常表达,且阳性率随着病变程度的增加而增加,可作为检测子宫颈癌癌前病变的指标,且可期望成为早期宫颈癌筛查中一种新的检测手段。

人类染色体端粒酶基因检测在子宫颈病变筛查中的研究进展

在子宫颈上皮内瘤变（CIN）进展为浸润性子宫颈癌的过程中，人类染色体端粒酶（hTERC）基因扩增随子宫颈病变的不同阶段而变化，并且对于子宫颈病变的早期诊断及子宫颈癌发展的监测具有重要的临床价值。hTERC基因有望成为子宫颈高危病变筛查的一种有效的特异标志物。

FISH技术检测HTERC基因在宁夏部分地区宫颈癌早期筛查中的临床意义研究

目的评估人染色体末端酶基因(HTERC)检测在宫颈病变筛查中的临床意义。方法收集120例患者,根据细胞学TCT分为正常组23例,异常细胞组88例,宫颈癌9例。人乳头瘤病毒(HPV)阳性(77例),HPV阴性(43例);组织病理学诊断分为宫颈炎组28例,宫颈上皮内瘤变组78例,宫颈癌组14例。同时选取23例未见上皮内细胞病变(NILM)妇女为对照组,应用荧光免疫杂交技术进行检测,以HTERC基因在该组中的表达建立实验阈值。结果①对照组阈值是8.7%,即对照组每例病例中发生扩增的细胞不超过8.7%。②HTERC基因在所有细胞学异常组与NILN组中比较,HTERC基因阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。③HTERC基因在HPV感染组与非感染组间中的表达差异有统计学意义。④组织病理学分级中,HTERC基因的阳性表达率随着病变级别的递增,差异有统计学意义(P<0.05),且HTERC基因的阳性表达在宫颈癌组中明显高于CIN组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论①HTERC基因随着宫颈病变级别的递增显著扩增,提示HTERC基因可作为宫颈癌前期病变进程中预测指标;②HTERC基因扩增与高危型HPV感染有相关性。

hTERT基因反义核酸促进顺铂诱导原代急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究

目的 :利用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的反义寡核苷酸 (ASPS -ODN)抑制人原代急性淋巴细胞白血病 (ALL)细胞hTERT基因表达后 ,观察顺铂对ALL细胞凋亡的影响。方法 :采用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达量的变化 ;以台盼蓝拒染法计数细胞数 ,确定细胞的增殖情况 ;Hoechst 332 5 8和PI双染色法观察凋亡细胞的形态变化 ;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 :hTERT反义核酸作用于ALL细胞 72hhTERT蛋白表达阳性率为 (32 17± 3 0 0 ) % ,与空白对照组 (6 6 31± 2 84 ) %及正义核酸作用组 (6 2 5 6± 6 11) %比有显著差异 (P <0 0 5 ) ;而正义核酸作用组与空白对照组比无显著差异 (P >0 0 5 )。hTERT反义核酸作用于ALL细胞 2 4h加入顺铂 ,再共同作用 4 8h ,ALL活细胞均数为 1 75 0× 10 8cells/L ,与单用顺铂组 (2 0 90× 10 8cells/L)及hTERT正义核酸联用顺铂组 (1 990× 10 8cells/L)相比 ,对细胞抑制明显增强 (P <0 0 5 )。hTERTASPS -ODN作用于ALL细胞 2 4h再加入顺铂作用 4 8h ,细胞出现典型的凋亡形态学改变。hTERTASPS -ODN与 2 5 μmol/L顺铂联合作用于ALL细胞 4 8h的凋亡细胞百分率 (37 85± 2 4 4 ) %分别同SPS -ODN与顺铂联合作用组 (15 16±2

hTERC基因在子宫内膜组织中表达及临床意义

目的:研究子宫内膜组织hTERC基因表达的情况,探索hTERC基因在子宫内膜癌发生发展中的关系。方法:收集正常子宫内膜、子宫内膜增生症(单纯型增生、复杂型增生、不典型增生)及子宫内膜癌组织石蜡切片各25例,共125例标本行hTERC基因FISH检测。结果:子宫内膜正常组、子宫内膜单纯型增生组、子宫内膜复杂型增生组、子宫内膜不典型增生组及子宫内膜癌组织中hTERC基因阳性表达率分别为20%(5/25)、52%(13/25)、28%(7/25)、20%(5/25)、36%(9/25),子宫内膜单纯性增生阳性率高于正常组和不典型增生组,差异统计学有意义(χ~2=5.5556,P=0.0184),子宫内膜癌组阳性率高于子宫内膜正常组,但经检验两组hTERC基因扩增阳性率没有统计学差异(χ~2=1.5873,P=0.2077)。按子宫内膜癌临床分期,I/II期hTERC基因阳性率为40%(8/20)、III/IV期20%(1/4),虽然差异没有统计学意义(P=0.6206),但临床观察hTERC基因在早期临床期别有高阳性扩增。按子宫内膜样腺癌细胞分化程度,高分化hTERC基因阳性率22.22%(2/9)、中分化50%(4/8)、低分化37.5%(3/8),hTERC基因随着腺癌分化程度越差扩增阳性率增高,但经Fisher检验没有统计学差异(P=0.5165)。结论:本研究通过FISH检测子宫内膜组织hTERC基因表达情况得出,子宫内膜单纯性增生阳性率最高,子宫内膜癌患者较正常子宫内膜组织hTERC基因有扩增趋势,并随着癌细胞低分化hTERC基因扩增增加,提示子宫内膜恶性病变可能与hTERC表达异常相关,hTERC基因表达异常预测子宫内膜病变风险增高,可指引临床病情观察诊治。

hTERC基因与TCT、HPV检测在宫颈病变病理诊断中一致性的确定

目的探讨人染色体端粒酶基因(hTERC)与液基细胞学(TCT)检测结合高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈病变筛查与诊断中的价值。方法选择行TCT、HPV检测的120例患者,均在阴道镜下取宫颈组织病理检查和hTERC基因的检测,最终以病理检查结果为金标准。结果 hTERC基因的阳性表达率随着细胞学分级的递增而增加且与高危型HPV的持续感染密切相关。hTERC与TCT两者联合(71/71)检测出宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞癌的比率高于单独使用TCT检测的比率81.44%(79/97)。结论 hTERC基因检测是TCT和HPV检查方法的有力补充;三者联合,有助于宫颈癌早期诊断和治疗后随访。

FISH检测两种基因在宫颈癌筛查中的价值

目的探讨荧光原位杂交(FISH)检测人类染色体末端酶基因(hTERC)和c-MYC基因扩增在宫颈癌筛查以及疾病转归中的预警价值。方法收集符合条件的妇科门诊患者宫颈标本1 000例,行液基细胞学(TCT)和hTERC、c-MYC基因检测,任一项阳性者在阴道镜下取活检。病理异常者分别在第3、6、12个月重复行细胞学和基因检测及阴道镜随访。结果 hTERC和c-MYC阳性率分别为7.3%、4.6%。无论是细胞学或者病理学分类,两种基因的异常扩增率均随着病变级别加重而升高(P<0.05)。两基因表达也呈正相关性(P<0.01)。随访发现5例患者存在恢复缓慢或疾病进展甚至术后复发,其中4例为hTERC和c-MYC共同表达的患者。hTERC基因的灵敏度和约登指数高于c-MYC,但是特异度较低。结论 hTERC基因和c-MYC基因的异常扩增阳性率随宫颈病变程度、宫颈细胞异常程度增加而增加。两者可以与细胞学互为补充,用于宫颈病变初筛和高度病变风险的评估。

hTERC基因在预测宫颈上皮内瘤变Ⅰ进展和转归中的价值

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测宫颈石蜡包埋切片中人类染色体端粒酶RNA(h TERC)基因扩增情况,在预测宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ进展和转归中的价值。方法:收集55例CINⅠ患者的宫颈石蜡包埋病理标本,随访后根据病理学确诊情况分为3组,CINⅡ、Ⅲ及宫颈癌组(进展组)13例、CINⅠ组(持续组)19例、正常或炎症组(转归组)23例。采用FISH技术检测不同组中宫颈石蜡包埋切片中h TERC基因扩增情况。结果:共有54例CINⅠ患者的宫颈石蜡包埋病理标本纳入研究,h TERC基因扩增阳性22例,其中进展组12例,持续组9例,转归组1例,阳性率分别为进展组100.00%,持续组47.37%,转归组4.35%。3组h TERC基因扩增阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。异常信号比2∶3、2∶4、4∶4和N∶≥5的细胞数比例3组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:采用FISH技术检测宫颈石蜡包埋切片中h TERC基因扩增情况可以预测CINⅠ的进展和转归;异常信号比为4∶4和N∶≥5可能可以用来预测CINⅠ的进展。

hTERC基因检测与HC2、SPR技术检测HPV在宫颈病变中的诊断价值

目的研究在不同宫颈组织中hTERC基因的表达情况及其与高危型HPV阳性的相关性,探讨其在宫颈病变中的诊断价值。方法选取昆明医科大学第二附属医院就诊的1200例宫颈癌筛查患者,分别用HC2、SPR法和FISH技术获取HPV感染和hTERC基因扩增情况,任何具有阳性结果的患者均通过组织活检作为确诊金标准。根据病理活检结果进行分组:正常组32例,CINI38例,CINII-CINIII66例,宫颈癌14例。结果hTERC基因在各宫颈病变分组中的表达率分别为12.5%、34.21%、53.03%、85.71%,hTERC基因表达率在各病理级别间的差异有统计学意义(χ^2=28.90,P=0.000);随着宫颈病变的进展,HC2、SPR技术检测HPV感染率逐渐升高,hTERC基因表达也随着增长,且与二者呈正相关(r1=0.538,P 1=0.000;r2=0.796,P2=0.000)。结论hTERC基因异常扩增和HPV感染率随组织病变升级而升高,二者联合检测对判断早期宫颈病变有指示作用。

宫颈病变组织中人类染色体端粒酶基因表达与人乳头瘤病毒亚型感染相关分析

目的探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(human telomerase RNA component,hTERC)的表达及人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型感染情况,及其在宫颈癌筛查中的意义。方法宫颈病变患者宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)I组41例、CINⅡ组29例、CINⅢ组35例及宫颈癌组(SCC组)24例,并选择同期体检健康者20例为对照组,各组均行宫颈液基细胞学检查及HPV DNA检测,并采用荧光原位杂交技术检测hTERC基因扩增情况。结果 hTERC表达阳性率CINⅠ组(7.31%)、CINⅡ组(34.48%)、CINⅢ组(62.86%)及SCC组(75.00%)与对照组(0)比较差异均有统计学意义(P<0.05),CINⅢ组与SCC组高于CINⅠ组(P<0.05);hTERC表达阳性率与宫颈病变程度呈正相关(r=0.931,P=0.031);对照组、宫颈癌前病变组(CINⅠ组+Ⅱ组+Ⅲ组)与SCC组HPV DNA阳性率分别为15.00%,45.71%,87.50%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERC表达与高危型HPV感染呈正相关(r=0.381,P=0.002)。结论 hTERC扩增在宫颈高度病变及宫颈癌患者中比例较高,与高危型HPV感染有关,可能是宫颈癌进展的预测性指标。