伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型返祖性研究

细菌细胞壁的合成受到抑制或完整性被破坏而成为细胞壁缺陷型后,可有两种类型:不稳定 L 型(unstable L—form)和稳定 L 型(stable L—form)。不稳定 L 型未涉及基因型的改变,因此在无诱导剂的环境中可重新合成细胞壁而返祖。不稳定 L 型在自然界及人或动物体内广泛存在,同某些疾病的慢性过程或反复发作以及传染病非流行期病原体的保存有关。稳定 L 型在无诱导剂的环境中不能自发返祖。研究表明,稳定 L 型的染色体 DNA 片段缺失,系染色体畸变。稳定 L 型可丧失其亲代细菌型具有的多种性状和表达某些特殊性质,如细胞膜含类固醇。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型外膜蛋白和染色体DNA酶切研究

非高渗培养基传代培养的伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型丧失了主要外膜蛋白、特异性表面抗原和染色体DNA部分片段,保留了沙门氏菌共同的内部抗原和形成L型独特的表面抗原。提示伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型多种特性的丧失同其基因或主要外膜蛋白的缺失有关。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型蛋白图谱

蛋白质是细菌细胞的主要有机构成,同细菌的生理活动、抗原性、致病性等特性密切相关。我们前文报道伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型丧失了其亲代经典细菌具有的多种特性,认为同 L 型细胞壁缺失或基因结构的改变有关。本文用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法分析了伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型及其亲代经典细菌的菌体蛋白构成,研究其分子生物学方面的表现型特征。材料和方法一、菌株:营养琼脂培养基传代保存的伤寒杆菌 H_(?)(ST)和甲型副伤寒杆菌(SP)的稳定 L 型及其亲代经典细菌。二、菌体蛋白的制备:各菌株营养琼脂24小时培养物用灭菌蒸馏水洗三次。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型抗原研究

本文对伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型抗原结构及其同亲代细菌型抗原的相互关系进行了研究,现报道如下。材料和方法一、L型菌株:按文献方法获得营养琼脂传代培养的伤寒杆菌H901L型(LST)和甲型副伤寒杆菌L型(LSP)。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型染色体DNA内切酶谱

细菌细胞壁的完整性被破坏或其合成受到抑制后,在一定条件下可以 L 型生存。传统认为 L 型是表型变异,在无诱导剂存在的环境中可重新合成细胞壁而返祖,但近年来已发现有些 L 型是稳定的,在无诱导剂的培养基中生长不能自发返祖。我们用青霉素诱导伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌形成 L 型,在不含诱导剂的非高渗透性培养基或常规细菌学培养基中经一年余时间数十代培养未发生自发返祖,表明这些 L 型具有稳定的遗传性质。本文提取伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型和细菌型的染色体 DNA,用核酸内切酶消化。研究其 DNA 内切酶谱特点以及稳定 L

鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用

为探讨鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的交叉免疫保护作用 ,用IL 1作为佐剂 ,将伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种小鼠 ,再以不同剂量的鼠伤寒杆菌攻击 ,观察小鼠的存活情况。当用IL 1作为佐剂时 ,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD的小鼠在 2LD50 鼠伤寒杆菌攻击后 ,3天和 7天的存活率均明显高于对照组 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ,当以 5LD50 鼠伤寒杆菌攻击时 ,小鼠 7天的存活率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结果说明伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种后对鼠伤寒杆菌的攻击可产生一定的免疫保护作用 ,也进一步说明了Fe SOD是沙门氏菌的共同保护性抗原。

伤寒杆菌SOD抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响

为了制备伤寒杆菌ＳＯＤ抗体，研究该抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响，探讨ＳＯＤ 与伤寒杆菌抗吞噬作用的关系。采用纯化的伤寒杆菌（Ｓｔｗ ｌ）Ｆｅ－ＳＯＤ 免疫家兔制备兔抗Ｆｅ－ＳＯＤ抗体。利用ＥＬＩＳＡ 法检测抗体的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗体的特性。用不同浓度的抗体预先处理伤寒杆菌，然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验。试验结果抗体的ＥＬＩＳＡ 效价为１∶１０２４０，免疫电泳结果显示纯化的Ｆｅ－ＳＯＤ 及伤寒沙门氏菌无细胞溶解物与Ｆｅ－ＳＯＤ抗体在相同位置各形成一条沉淀线。双向琼脂扩散试验结果显示该抗体与牛红细胞ＳＯＤ 不形成沉淀线，抗体对酶活性抑制试验结果显示抗体可抑制伤寒杆菌及鼠伤寒杆菌无细胞溶解物中部分ＳＯＤ 活性，对牛红细胞ＳＯＤ 的抑制率较低。小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒杆菌的吞噬杀菌结果显示经１ ｍ ｌ抗体处理的细菌在６０ ｍ ｉｎ、１２０ ｍ ｉｎ 时和经２ ｍ ｌ抗体处理的细菌在３０ ｍ ｉｎ、６０ ｍ ｉｎ 及１２０ ｍ ｉｎ 时ＣＦＵ值明显低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）。伤寒杆菌ＳＯＤ 抗体可促进小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒杆菌的杀灭，说明此抗体具有免疫保护作用，也间接地说明了伤寒杆?

鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD的抗体应答及对鼠伤寒杆菌攻击的免疫保护作用

目的 探讨鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD后血液和粘膜系统的抗体应答及免疫保护作用。方法 用IL - 1作为佐剂 ,将伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种小鼠 ,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答 ,并用鼠伤寒杆菌攻击小鼠 ,观察小鼠的存活情况 ,以确定免疫保护作用。结果 当用IL - 1作为佐剂时 ,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD的小鼠血液和肠液中可产生高水平特异性IgG和IgA ;而腹腔注射仅在血液中产生高水平特异性IgG。另外发现经鼻腔接种伤寒杆菌Fe SOD的小鼠在 2LD50 鼠伤寒杆菌攻击后 ,3d和 7d的存活率均明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,且以 5LD50 鼠伤寒杆菌攻击时 ,小鼠 7d的存活率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 结果说明伤寒杆菌Fe SOD经鼻腔接种后可引起小鼠粘膜系统和血液中的抗体应答 ;对鼠伤寒杆菌的攻击可产生一定的免疫保护作用 ,也进一步说明了Fe SOD是沙门菌的共同保护性抗原。

大理地区伤寒、副伤寒杆菌感染状况及药敏分析

目的分析大理地区伤寒、副伤寒杆菌的感染状况及耐药状况,为临床诊断和治疗提供科学依据。方法用回顾性方法统计分析3年来,本院分离出的96株伤寒、副伤寒杆菌的标本来源、菌型分布、耐药状况。结果96株感染菌株中,有84株来自于血液培养标本,12株来自粪便培养标本。菌型分布以甲型副伤寒杆菌为主,占85.42%;其次为伤寒杆菌和乙型副伤寒杆菌,分别占11.45%和3.12%;未检出丙型副伤寒杆菌。分离出的96例感染菌株对亚胺培南的耐药率为零;对所选头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖甙类抗菌素的耐药率均小于15%;对氨苄西林的耐药率较高,为39.58%。结论大理地区伤寒、副伤寒杆菌感染菌型以甲型副伤寒杆菌为主。除氨苄西林外,感染菌株对其它所选抗菌素表现出较好的抗菌活性,耐药率较低。为防止耐药菌株增加,建议临床医生依据培养、鉴定及药敏结果,正确诊断及使用敏感抗菌素。

固相间接血凝法检测伤寒杆菌O抗体及其临床初步运用

建立了固相间接血凝法（SP－PHA）用于检测伤寒杆菌O抗体，并与间接血凝法（LPS－PHA），酶联A蛋白ELISA法及经典的肥达氏试验作了比较，SP－PHA法敏感性优于LPS－PHA。肥达氏试验（Widals）与酶联A蛋白ELISA法（SPA－ELISA）相近。伤寒患者血清O抗体阳性率为88．2％（15／17），发热待查阳性率为3．6％（2／55），30例献血员血清O抗体均为阴性。该法敏感、特异、快速、结果直观、试剂易得，可在基层实验室推运用.

两种伤寒杆菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原免疫血清制备方法的比较

为了制备高效价的兔抗伤寒杆菌免疫血清,为凝集反应、肥达氏反应提供抗体,比较了两种不同的免疫抗原制备抗体的免疫效果,结果发现T1(H)抗原较(O)菌液抗原制备抗体效果更为理想,均能用于以上两种反应。

伤寒杆菌内毒素诱导的SD大鼠全葡萄膜炎

【目的】用伤寒杆菌内毒素在SD大鼠建立葡萄膜炎模型。【方法】将 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素注射于SD大鼠双足底部 ,观察眼部临床改变和组织学改变 ,并测定房水中蛋白浓度。【结果】内毒素注射 4h后出现炎症 ,以后炎症加重 ,表现为瞳孔缩小、前房明显闪辉、细胞和渗出 ,甚至出现后房积脓 ,于 2 4h发现房水蛋白浓度显著增高 ,虹膜睫状体、视网膜以及脉络膜有大量的白细胞及一定量的单核细胞和淋巴细胞浸润。【结论】伤寒杆菌内毒素在SD大鼠诱导出严重的葡萄膜炎 ,它可作为人类全葡萄膜炎的动物模型。

火把花根治疗伤寒杆菌内毒素所致大鼠葡萄膜炎

目的 观察中药火把花根片对伤寒杆菌内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎动物模型的治疗作用。方法 用中药火把花根片治疗伤寒杆菌内毒素诱导的葡萄膜炎动物模型,并设立不造模的空白对照组、生理盐水对照组和醋酸强的松治疗组作为对照,通过临床观察和病理学研究,探讨火把花根片对葡萄膜炎的治疗作用。结果 火把花根片治疗组与生理盐水治疗组相比炎症明显减轻,火把花根片治疗组与强的松治疗组的疗效相比没有显著差异。结论 火把花根片对伤寒杆菌内毒素诱导的动物模型有与强的松一样明显的治疗作用。

狼爪瓦松提取物对伤寒杆菌和痢疾杆菌的抑菌活性机制

研究狼爪瓦松提取物对伤寒杆菌和痢疾杆菌的抑菌效果及机理.实验结果表明:乙酸乙酯相、石油醚相和氯仿相对伤寒杆菌和痢疾杆菌有明显的抑菌效果,与对照组相比差异极显著(p<0.01),各提取物对实验菌的最小抑菌质量浓度(MIC)差异较大,乙酸乙酯和石油醚提取液对伤寒杆菌的MIC为1.5 mg/mL,乙酸乙酯提取液对痢疾杆菌的MIC为1mg/mL;各种瓦松提取液作用于伤寒杆菌和痢疾杆菌可导致菌体内有电解质渗透,与对照组相比差异显著(p<0.05),即瓦松提取液可能通过干扰细菌细胞壁的合成以及抑制生物被膜的形成而抑制伤寒杆菌和痢疾杆菌生长,其抑制作用随提取液质量浓度的提高及作用时间的延长而提高.

伤寒杆菌耐喹诺酮类机理研究

以伤寒杆菌临床分离的喹诺酮类敏感株 S2 75与其诱导耐药株 RG1 与 RG2 ,对有关伤寒杆菌耐喹诺酮类机制进行了研究。结果发现与伤寒杆菌 S2 75相比较 ,RG1 与 RG2 对喹诺酮类、四环素、氯霉素敏感性明显降低 ,对头孢唑林 ,亚胺培南敏感性有所增加。喹诺酮类对 DNA旋转酶活性 5 0 %抑制剂量 ,RG1 与RG2 较 S2 75呈 3～ 8倍增加 ,S2 75与 RG1 、RG2 旋转酶亚单位交叉重建及 DNA旋转酶 A亚单位基因 (gyr A)喹诺酮耐药决定区 PCR- RFL P分析表明 A亚单位变异为耐药原因之一。细菌对氧氟沙星聚积测定 ,RG1 与RG2 分别为 S2 75之 1/ 2与 1/ 8,经 CCCP处理后 ,分别上升为 S2 75原水平与 S2 75之 1/ 2水平。外膜蛋白分析示 RG2 5 5 k D蛋白带消失 ,同时伴生化反应改变。表明伤寒杆菌耐喹诺酮类机制存在 DNA旋转酶变异 ,药物主动外运及外膜通透性改变。

表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定

目的 研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。 方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２ ０００处有１条可与抗ＭＧ７ ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。

幽门螺杆菌尿素酶减毒鼠伤寒杆菌疫苗诱导小鼠黏膜免疫应答的研究(英文)

目的研究表达幽门螺杆菌(H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗口服免疫Balb/c小鼠后的黏膜免疫应答状况。方法将已构建成功的表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-Ureb口服免疫Balb/c小鼠，12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应。结果疫苗组小鼠胃黏膜炎症程度的差异无统计学意义。结论表达H.pylori UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB能够诱导小鼠产生抗H.pylori的黏膜免疫，可用作抗H.pylori感染的口服疫苗。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因在减毒鼠伤寒杆菌中的表达

目的 制备能表达幽门螺杆菌 (Hp)尿素酶 B亚单位(Ure B)的减毒鼠伤寒杆菌 ,初步确定其是否可用作抗 Hp的口服疫苗 .方法 应用 PCR扩增 Hp Ure B基因片段 ,测序后克隆入原核表达载体 PTc0 1,转化 L B5 0 0 0修饰后再转化SL32 6 1,得到重组的减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1/ PTc0 1- Ure B.应用抗 Hp菌体蛋白兔血清行 Western- blot检测 Ure B在SL 32 6 1中的表达 .SL 32 6 1/ PTc0 1- Ure B在 L B培养基上连续传代 6 0代以确定其稳定性 .结果 从 Hp基因组 PCR扩增出 170 0 bp片段 ,测序为 Ure B基因序列 .酶切及 PCR鉴定提示 PTc0 1- Ure B原核表达载体的构建以及转化减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1是成功的 .Western- blot显示 SL32 6 1/ PTc0 1-Ure B表达约 6 1KD的蛋白 ,与 Hp U re B亚单位相符 .体外连续培养 6 0代未见 PTc0 1- Ure B质粒丢失及其对宿主菌的毒性 .结论 减毒鼠伤寒杆菌 SL32 6 1/ PTc0 1- Ure B表达的Ure B蛋白具有免疫原性 ,有望用作抗 Hp感染的口服疫苗 .

幽门螺杆菌尿素酶减毒鼠伤寒杆菌疫苗诱导小鼠粘膜免疫应答的研究

目的:观察口服减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗后小鼠的粘膜免疫应答状况。方法:将已构建成功的表达幽门螺杆菌(H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应。结果:疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性抗体IgA和IgG,病理学检查显示疫苗组小鼠较对照组小鼠胃粘膜炎症程度差异无统计学意义。结论:表达H.pyloriUreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB能够诱导小鼠产生抗H.pylori的粘膜免疫,可用作抗H.pylori感染的口服疫苗。

伤寒杆菌和柯萨奇病毒诱导小鼠肠道粘膜免疫应答的实验研究

目的 建立适用于实验的免疫鼠模型 ,并确定建立免疫鼠模型的最佳剂量和时相。方法 用免疫血清学测定和光镜及电镜方法研究经口伤寒杆菌 (salmonellatyphi,ST)和柯萨奇病毒 (coxsackievirus ,CV)诱导的小鼠肠道粘膜免疫应答。结果 ST和CV均可引起肠道粘膜免疫应答。ST经口灌注造模较为适宜的剂量为 10 3 个菌 /ml,CV的剂量为 10 -12 单位 /ml,两者第 2次灌注后 7天为最佳时相。此时小鼠回肠和回肠集合淋巴小结及肠系膜淋巴结内淋巴细胞明显增多 ,集合淋巴小结明显增大 ,淋巴细胞增殖活跃 ,且未发生病理改变。结论 ST和CV是研究肠道粘膜免疫建立免疫鼠模型较理想的实验工具。