茶多酚体外诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究

目的探讨茶多酚诱导人肺癌细胞的凋亡作用及其相关机理。方法采用MTT法、激光共聚焦显微镜和流式细胞仪技术 ,体外观察茶多酚对肺癌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。结果不同浓度的茶多酚 (5 0、10 0、2 0 0、4 0 0 μg/ml)对肺癌细胞均有抑制作用 ,呈剂量依赖关系 ,抑制率 (% )分别为 2 8.6 9± 1.2 7、4 6 .19± 1.79、6 4.6 1± 1.2 9、75 .90± 1.96。在细胞增殖受到明显抑制时 ,细胞被阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S期及G2 /M期 ,同时诱导肺癌细胞凋亡 ,凋亡率 (% )分别为 4 .76± 0 .11、5 .78± 0 .38、10 .0 6± 0 6 7、2 4 .4 4± 0 .4 4。激光共聚焦显微镜双荧光标记可见细胞凋亡的形态学改变 ,与对照组比较 ,随着茶多酚浓度的增高 ,细胞内Ca2 +浓度、AnnexinV表达和蛋白酪氨酸磷酸酶基因 (PTEN)蛋白表达逐渐增高 ,细胞周期调控蛋白D1蛋白表达水平则呈逐渐下降。结论茶多酚可诱导人肺癌细胞的凋亡 ,其作用机制与改变细胞内Ca2 +浓度。

成人外周血来源树突状细胞体外诱导培养及成熟调控

人体内树突状细胞具有成熟和未成熟两种形态。前者是早期免疫应答的强有力的抗原递呈细胞。后者具有截然不同的生物学特性 ,且能诱导免疫耐受。本研究从成人外周血中分离前体细胞 ,利用单核细胞条件性培养液 ,培养出比较均一的未成熟及成熟阶段的树突状细胞。第一阶段 :从外周血分离出能粘附塑料的单核细胞 ,在GM- CSF+IL- 4存在条件下培养 6～ 7d;第二阶段 ,加入单核细胞条件性培养液促进树突状细胞分化成熟。仅经第一阶段培养的细胞主要为未成熟树突状细胞 ,仍然表达单核细胞的表面标志 CD14 ,具有活跃的内化活动 ,其MHC- II分子主要分布在胞内的 MIIC器室 ;经第二阶段培养的树突状细胞则具有成熟树突状细胞的全部特征 :典型的树突状形态 ,悬浮生长 ,MHC- II分子主要分布在胞膜表面 ,表达树突状细胞的特异性标志 CD83,刺激同种 T淋巴细胞增殖的能力强 ,并在脱离特定细胞因子环境 3d后仍能保持该性状不变。由于该途径培养成熟、未成熟树突状细胞完全受外部因素调控 。

龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元

[目的]观察龟板含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力。[方法]采用龟板含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NFP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。[结果]成年大鼠骨髓间充质干细胞受龟板血清诱导后神经元样细胞NF表达阳性,诱导后12 h,神经元样细胞NF阳性表达达到高峰。[结论]龟板含药血清可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元。

薯蓣皂苷的次皂苷元B体外诱导人慢性髓系白血病细胞K562凋亡的研究

背景与目的:我们从福州薯蓣的根茎中首次分离得到薯蓣皂苷的次皂苷元B(P.B),并发现P.B能够显著抑制多种人肿瘤细胞的增殖。本研究的目的在于探讨P.B是否通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法:采用荧光及透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度分析仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带,流式细胞术检测细胞凋亡时的变化。结果:10μmol/LP.B处理K562细胞24h时,细胞产生典型的核内染色质凝结、核片段化、细胞体积缩小及凋亡细胞表面膜出泡等形态学特征。10μmol/LP.B分别处理K562细胞6、12及24h时,能够使细胞产生明显的DNAladder和体积变化,呈一定的时效关系,并且亚G1峰的凋亡细胞随作用时间的延长而增加,分别为6.12%(6h)、35.6%(12h)和45.7%(24h)。结论:P.B可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。

体外诱导骨髓基质细胞向神经干细胞和成熟神经细胞分化的实验研究

探索骨髓基质细胞(BMSCs)分化为神经干细胞和成熟神经细胞的可行性 ,为BMSCs在神经科学领域的应用提供依据。以犬的BMSCs为实验对象 ,利用bFGF、RA、GDNF等作为增殖或分化诱导因子 ,对各阶段细胞进行免疫细胞化学鉴定。结果发现 ,增殖培养2 4～ 72h见细胞分裂像和克隆单位 ;诱导培养 3天 ,部分细胞开始表达NSE或GFAP ,继续增殖培养仍可见细胞克隆 (干细胞特性 ) ;诱导培养第 10天有成熟神经细胞形成 (成分鉴定证实 )。说明BMSCs在体外培养条件下 ,经过多种因子的“程序性”作用 ,可以向神经干细胞、成熟神经元及胶质细胞方向分化。提示BMSCs可作为“种子细胞”在神经科学领域加以利用。

体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究

目的 探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制。方法 无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面际志。分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2％FBS的DMEM,1×ITS讲行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT～PCR法检测AFP、白蛋白及C-met FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞。结果 MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34。诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P<0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P>0.05)。无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标。结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用。生长因子与其相幢受体之间,可能存在正反馈调节机制。

钩吻素子体外诱导人结肠腺癌LoVo细胞凋亡的实验研究

目的探讨钩吻素子(Kou)体外能否诱导LoVo细胞凋亡。方法以Kou(50 μmol/L)作用于LoVo细胞,经光镜、电镜和荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并用流式细胞仪检测细胞增殖周期状态。结果通过光镜、电镜和荧光显微镜观察均证实Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且凋亡百分率随Kou作用时间的延长而升高。经Kou作用后的肿瘤细胞,细胞周期状态发生明显变化,G0/G1期细胞从31.3%上升到42.3%,S期细胞从62.0%下降到38.7%。结论Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且存在时间依赖关系,Kou可抑制细胞DNA的合成,阻止细胞由G1期向S期转化。

土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375

cagA(+)幽门螺杆菌体外诱导肝细胞凋亡的观察

目的 探讨幽门螺杆菌对肝细胞系HepG2增殖与凋亡的影响。 方法 将不同浓度的cagA(+)Hp和cagA(- )Hp与HepG2共同培养 ,应用细胞计数 ,Hoechst 332 5 8细胞核荧光染色等技术 ,观察Hp菌液对体外培养HepG2细胞的增殖与凋亡的影响。结果 1 HepG2数随着cagA(+)Hp菌液浓度的增大和作用时间的延长而减少 ;2 HepG2凋亡率随着cagA(+)Hp菌液浓度的增大而升高。 3 未发现cagA(- )Hp对HepG2生长增殖与凋亡的影响。 结论 cagA(+)Hp对HepG2细胞具有明显的细胞毒作用 ,cagA(+)Hp抑制HepG2增殖 ,诱导凋亡 ,其效应与Hp菌液的浓度和作用时间呈明显正相关。

牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨

目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。

土槿乙酸体外诱导K562细胞凋亡的研究

目的 研究土槿乙酸体外对人白血病细胞 (K5 6 2 )凋亡的诱导作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 以不同浓度土槿乙酸分别处理 K5 6 2细胞 ,用琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜和倒置光显微镜、MTT法观察 K5 6 2细胞DNA带型、形态和抑制率的变化。结果 1× 10 - 5mol/ L土槿乙酸作用 30 h能有效诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,凋亡细胞有典型的形态学改变及 DNA梯形带形成。MTT法测定不同浓度土槿乙酸明显抑制 K5 6 2细胞系的生长 ,其 IC50值为 2× 10 - 6 m ol/ L。结论 土槿乙酸能成功诱导 K5 6 2细胞凋亡 。

体外诱导成熟树突状细胞的研究

目的 :探讨在体外从干细胞中诱导出成熟DC的适宜环境。方法 :分别将人胎肝、骨髓和脾细胞以及小鼠骨髓和脾细胞在体外用GM CSF和TNF α诱导 ,观察了第 3、5、7天DC的收获情况。进一步用S P免疫细胞化学染色检测了mBmDC和fLDC有关分子表达。结果 :在体外通过GM CSF和TNF α的作用 ,小鼠骨髓、人胎肝、骨髓细胞呈典型的毛刺状胞浆突起 ,第5天的收获率分别为 :39 5 %、6 7 2 %、12 9% ,而基本不能从脾细胞中诱导出成熟DC ,获得的DC能与MAbCD80、MAbCD40呈强阳性反应。结论 :在GM CSF和TNF α的共同作用下 ,能在体外从人胎肝、骨髓和小鼠骨髓干细胞中获得成熟DC ,其DC能表达高水平的B7 1和CD40分子 ,这为大量获取DC提供了一种简便可行的手段 ,为研究DC的生物学特征及其抗原提呈功能提供了丰富的材料 。

体外诱导胚胎干细胞定向分化为神经细胞的初步研究

目的 初步研究诱导胚胎干细胞ES D3细胞系向神经细胞定向分化可能性 ,为青光眼等视网膜视神经疾病的治疗提供可能的途径。 方法 以Buffalo大鼠肝细胞培养上清进行胚胎干细胞ES D3细胞系培养 ,参照Bain等方法进行改良 ,以视黄酸对ES D3细胞进行分化诱导 ,1d后加入阿糖胞苷 ,相差显微镜下观察细胞生长情况。 结果 加入视黄酸后 1d ,相差显微镜下可见散在 1个、2个或多个突起的神经样细胞。加入视黄酸后 2d、阿糖胞苷后第 1d ,可见大量 1条、2条或多条突起的神经样细胞 ,并相连成网络结构。 结论 视黄酸辅以阿糖胞苷在体外可成功诱导胚胎干细胞ES D3细胞系成为神经样细胞 ,并形成网络 ,结合我们裸鼠眼内接种ES D3细胞分化为神经细胞样细胞研究结果 ,胚胎干细胞定向分化及移植 。

黄芩甙体外诱导大鼠骨髓基质细胞成为神经细胞

目的 :探讨黄芩甙体外诱导成年大鼠骨髓基质细胞 (MSCs)分化为神经细胞的条件。方法 :采用黄芩甙诱导 6h后 ,继续维持诱导 6d。免疫细胞化学染色评价神经细胞特异性烯醇化酶 (NSE)、神经微丝 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)和波形蛋白 (vimentin)的表达率 ;Hoechst332 58染色评价细胞存活率。结果 :诱导 6d后MSCs形态改变 ,胞体成锥形 ,突起交织成网。免疫细胞化学染色NSE、NF、GFAP和vimentin表达率分别为 70 5 %± 1 1 6 % ,68 3 %± 1 3 4% ,<1 % ,<1 % ,细胞存活率为 88 4%± 5 0 %。结论 :黄芩甙可以诱导成年大鼠MSCs在体外分化成为神经细胞 。

体外诱导嗜水气单胞菌对喹诺酮类耐药及其耐药机制研究

【目的】探讨在亚抑菌浓度喹诺酮类药物培养后,嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila对喹诺酮类的药物敏感性变化及其耐药机制.【方法】以对喹诺酮类敏感的临床分离嗜水气单胞菌菌株和标准菌ATCC7966为研究对象,分别在含亚抑菌浓度萘啶酸(NAL)和环丙沙星(CIP)的培养基上逐步诱导培养.提取诱导菌的DNA,PCR扩增其gryA和parC基因,测序分析其喹诺酮类耐药决定区(QRDR)突变情况;测定诱导菌对诱导药物和11种非诱导药物的最小抑菌浓度(MIC)及添加外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)后的MIC,分析其敏感性变化与基因突变、外排作用的关系.【结果和结论】诱导后菌株对萘啶酸和环丙沙星的MIC分别提高了1 024和64 000倍,对非诱导药物也有不同程度提高;当萘啶酸和环丙沙星诱导浓度分别达到16和32μg/mL或以上后,诱导菌株gyrA基因编码的氨基酸分别发生Asp87→Tyr和Ser83→Arg的变化,但两者parC基因编码的氨基酸均没有发生突变;添加CCCP后,只有氟喹诺酮类药物的MIC值略有下降,提示嗜水气单胞菌对喹诺酮类耐药存在靶基因突变及主动外排作用等多种耐药机制.

体外诱导磁控胶囊内镜进入小肠的临床研究

目的探讨体外诱导磁控胶囊内镜(MCE)进入小肠的方法及应用价值。方法将40例接受MCE检查的患者随机分为两组:对照组在胃部检查结束后停止控制胶囊运动,使其随患者消化道蠕动进入小肠;研究组胃部检查结束后患者取右侧卧位,检查医生将胶囊移至幽门口,并调控磁球位置使其靠近患者右下腹,借助磁力诱导胶囊进入小肠。对比分析两组MCE胃部检查时间、胃部滞留时间、小肠通过时间及全小肠检查完成率的差异。结果对照组平均胃部检查时间为(32.50±11.71)min,与研究组(31.75±9.12)min比较差异无统计学意义(P>0.05)。胃部检查结束后,对照组的胃部滞留时间为(40.60±21.43)min,全小肠检查完成率为40%;研究组胃部滞留时间为(13.55±9.62)min,全小肠检查完成率为75%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组小肠通过时间为(329.25±90.00)min,与研究组(342.00±89.80)min比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外调控磁球位置结合患者体位改变可显著缩短MCE胃部滞留时间,提高全小肠检查完成率。

成年骨髓间质干细胞体外诱导分化成神经细胞研究

目的 探索成年骨髓间质干细胞（ABMMSC）诱导分化为神经细胞（神经元和神经胶质细胞）的可行性,为ABMMSC在神经科学领域内的应用提供参考。方法 以成年犬ABMMSC为实验对象,利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）、维甲酸（RA）、脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞系源神经营养因子（GDNF）等作为增殖及分化诱导因子,采用两步法进行增殖培养,分化诱导;免疫细胞化学法进行细胞性质鉴定。结果 加和bFGF、EGF后增殖培养48h,换液、去除非粘附细胞,再增殖培养72h,可见细胞分裂相（成纤维细胞样细胞）和簇样克隆形成（中小型细胞）。加入RA、BDNF、GDNF诱导3d,部分细胞有神经元特异性烯醇酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）成分表达;第10d可见有神经元、神经胶质形态样细胞形成。经细胞成分（NSE、GFAP）鉴定证实为神经元、神经胶质细胞。结论ABMSC在体外培养条件下,经过bFGF、EGF、RA、BDNF、GDNF等因子的“程序性”作用,可以向神经元、神经胶质前体细胞及其终末细胞方向分化。

丹酚酸B体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的观察丹酚酸B(SalB)干预体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs,对其进行分组诱导:SalB组(终浓度为250μg/L)、5-氮胞苷组(终浓度为10μmol/L)、SalB联合5-aza组(终浓度分别为250μg/L与10μmol/L),诱导24 h后继续培养4周,观察其形态学变化,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,实时荧光定量RT-PCR法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4、Desmin和a-actin mRNA的表达。结果诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT,与5-aza组相比,SalB组cTnT表达较低,SalB联合5-aza组cTnT表达升高;实时荧光定量RT-PCR结果显示各组均表达心肌分化早期基因,SalB联合5-aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他两组。结论SalB可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,其与5-aza联合诱导可明显提高MSCs向心肌细胞分化的能力。

人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究

目的:研究人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法:由人脐静脉获得间充质干细胞,纯化培养后用不同浓度的5-氮杂胞苷(5-azacytidine)诱导,透射电镜、免疫组化及RT-PCR鉴定诱导后细胞。结果:经5-氮杂胞苷诱导后的脐带血间充质干细胞在透射电镜下观察到细胞内有明显的肌丝,横纹样结构形成,核呈卵圆形,位于细胞中央位置,胞质中可见富集的糖原颗粒及线粒体结构。免疫组化可见肌钙蛋白Ⅰ染色阳性。RT-PCR方法显示能表达缝隙连接膜通道蛋白Connexin-43基因。结论:人脐带血间充质干细胞可在体外经5-氮杂胞苷诱导分化为具有典型结构的心肌细胞。

成人骨髓间充质干细胞的体外诱导培养及向脂肪细胞的定向分化

目的 :确定人骨髓的间充质干细胞 (MSCs)体外培养扩增、培养 ,向脂肪细胞表型转化的方法 ,并了解其生物学特性变化。方法 :用 Percoll分离液 (1.0 73g/ ml)分离成人 MSCs,传代培养。流式细胞仪检测表面标记物CD14 ,CD34,CD4 5 ,CD4 4,VLA- 1,HLA- DR和细胞周期 ,用 1-甲基 - 3-异丁基 -黄嘌呤、吲哚美辛、牛胰岛素、地塞米松实现向脂肪细胞的定向诱导分化。油红 O染色 ,光镜下观察橙红色脂滴沉着的细胞比例。结果 :分离培养获得贴壁细胞 ,流式细胞仪检测 CD14 ,CD34,CD4 5 ,HL A- DR阴性 ,CD4 4阳性 ,VLA- 1表达微弱。G0 / G1期细胞约为86 %。诱导 72 h后出现脂滴 ,第 3周油红 O染色示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :从人骨髓分离、体外诱导培养间充质干细胞 ,可定向促进向脂肪细胞表型转化。