Eg95基因疫苗不同免疫途径的体液免疫应答比较

目的:用构建的细粒棘球蚴 95 (Eg95 )抗原基因真核表达重组质粒 pc DNA3- Eg95 ,直接免疫小鼠 ,观察其所诱导的体液免疫反应。方法:碱裂解法大量提取重组质粒 ,采用肌肉注射、静脉注射、皮下注射 3种免疫途径和不同剂量的重组质粒免疫小鼠 ,用 EL ISA法测定小鼠血清抗体滴度。 结果:在相同剂量下 ,重组质粒免疫小鼠刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、皮下和静脉注射 ,阳性反应率由高到低依次为皮下、肌肉和静脉注射。以肌肉注射方式免疫小鼠的抗体反应维持时间较长 ,主要产生 Ig G2 a为主的抗体。 结论 :用 pc DNA3-Eg95重组质粒

中华鳖对温和气单胞菌体液免疫应答规律的研究

从健康中华鳖血清中提取抗体并用Sephadex及DEAE 5 2进行了纯化 ,再免疫新西兰白兔制备兔抗鳖抗体的抗血清 ,纯化后以辣根过氧化物酶 (HRP)标记酶标复合物 ,方阵滴定法确定酶标复合物的最适稀释度为 1/ 32 0 0。用温和气单胞菌TL970 42 4株制成铝胶佐剂灭活苗免疫健康中华鳖 ,经一次免疫和二次免疫后 ,分别在不同时间采集血清 ,用ELISA法测定血清抗体变化规律 ,结果表明中华鳖对该菌苗产生良好的体液免疫应答 ,免疫后 2 0d抗体水平达到高峰 ,在测定期间内二次免疫组的抗体水平高于一次免疫组 ,表明中华鳖存在着二次免疫应答 ,但与哺乳类相比 ,中华鳖的二次应答则相对较弱。免疫后 90d对一次免疫组的鳖进行了攻毒试验 ,10d后免疫鳖 10 0 %存活 ,而非免疫对照组鳖则 10 0 %死亡 ,表明温和气单胞菌TL970 42 4株灭活苗免疫效果良好。

猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗体液免疫应答的影响

采用ELISA方法对单独接种猪瘟疫苗组(CSFV组,n=3)、PCV2感染且出现病毒血症后接种猪瘟疫苗组(PCV2/CSFV组,n=3)及PCV2感染同时接种猪瘟疫苗组(CSFV/PCV2组,n=3)不同时相血清中的猪瘟抗体进行检测;并对PCV2感染对照组(PCV2组)及PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和PCR检测。结果表明,在接种后52 d CSFV组血清中抗体的阻断值显著高于CSFV/PCV2组(P<0.05);接种后42 d和52 d CSFV组平均抗体效价明显高于PCV2/CSFV和CSFV/PCV2组,其中在52 d CSFV组抗体阳性率达100%(3/3)而PCV2/CSFV和CSFV/PCV2在相应时相抗体阳性率仅为67%(2/3)。结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制猪瘟疫苗特异性的抗体反应。

HBV与HCV融合DNA疫苗的构建及其体液免疫应答

目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因(S区基因)与丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原基因(C区基因)的嵌合真核表达载体,观察preS1和preS2基因对HBV表面抗原及HCV核心抗原体液免疫的影响。方法用PCR方法,分别扩增HBVS区基因和HCVC区基因。将S区基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,酶切鉴定后,再将C区基因克隆至S区基因的下游。测序正确后,大量提取质粒并免疫Balb/c小鼠,用ELISA法检测抗HBs和抗HCV抗体。结果成功地扩增出目的基因片段,克隆后酶切鉴定结果正确,序列分析与文献报道相一致。免疫后检测到抗HBs和抗HCV抗体。preS1与preS2基因对构建的融合DNA疫苗的体液免疫应答有一定的抑制作用。抗HBs抗体的产生低于只含S基因的真核表达载体;preS1基因对抗HCV抗体的产生具有抑制作用,而preS2无影响。结论不同长度的HBVS区基因可影响抗HBs和抗HCV抗体的产生。

接种Aβ_(42)全肽疫苗恒河猴的特异性体液免疫应答

目的: 观察恒河猴接种Aβ42肽疫苗后的特异性抗体的产生。方法: 将 5只雄性恒河猴分别在 0、2、6、10、14、18、22wk肌内注射Aβ42肽疫苗; 用ELISA法检测恒河猴血清抗Aβ42抗体水平及IgG亚类; 用Westernblot检测血清抗Aβ42抗体的特异性; 免疫组化染色法观察抗血清对Tg2576转基因小鼠脑组织中Aβ斑的识别。结果: 疫苗接种后第 8周, 恒河猴血清中出现明显的抗Aβ42抗体, 抗体水平随着接种次数的增加而升高, 第 24周达 1∶4 320, 以后抗体水平开始下降。产生的抗Aβ42抗体以IgG1和IgG2为主 (IgG2 /IgG1 >1)。血清抗Aβ42抗体具有高度特异性, 可识别Tg2576转基因小鼠脑组织中的Aβ斑。结论: Aβ42肽疫苗可有效地诱导恒河猴产生特异性体液免疫应答。

HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测ＤＮＡ疫苗编码的ＨＣＶ核心蛋白的表达。结果：３０％（３／１０）免疫小鼠产生ＨＣＶ核心蛋白抗体，该抗体能检测到重组质粒在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达的ＨＣＶ核心蛋白。

C3d分子多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用

目的研究C3d分子对多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用。方法通过PCR方法合成多表位HME基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pcDNA3.1-3C3d,构建多表位DNA疫苗pcDNA3.1-HME和pcDNA3.1-HME-3C3d,经肌肉注射免疫小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,且pcDNA3.1-HME-3C3d免疫组小鼠的抗体水平明显高于pcDNA3.1-HME免疫组。结论C3d可增强多表位DNA疫苗的体液免疫应答水平。

CpG ODN增强免疫力低下小鼠对乙肝疫苗的体液免疫应答

目的 探讨CpGODN对免疫力低下小鼠的体液免疫增强作用。方法 选用老年C57BL/ 6小鼠和免疫抑制模型小鼠 ,将重组HBsAg疫苗和CpGODN同时或单独肌注到小鼠体内 ,2周后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3周后摘除眼球取血 ,用ELISA方法检测抗HBsAgIgG抗体。 结果 免疫抑制模型中同时注射CpGODN和疫苗组产生的IgG抗体绝对量是单独注射疫苗组的 2倍 ;老年鼠组中 1 0 μg和2 0 μgCpGODN与疫苗同时注射组产生的IgG抗体绝对量分别是单独注射疫苗组的 3倍和 4倍。

草鱼的体液免疫应答及抗体产生细胞

以草鱼出血病病毒和牛血清白蛋白 (BSA)为抗原接种草鱼 ,比较了草鱼对两种抗原的体液免疫应答情况。结果显示 ,在接种了BSA的草鱼中 ,14d后检测到抗体 ,其效价在 2 8d达到峰值 ;而接种了出血病病毒的草鱼 ,在 2 1d后检测到抗体 ,抗体效价在 35d达到峰值。用FITC BSA检测免疫BSA草鱼的抗体产生细胞 ,探讨了抗体产生效价与抗体细胞数量的关系。

重建SCID小鼠免疫功能对肝癌抗原的体液免疫应答

为在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人免疫Ｂ淋巴细胞，将１２～１４周龄的胎儿肝细胞（１～２）×１０１０／Ｌ腹腔注射于ＳＣＩＤ小鼠，然后再分次接种肝癌细胞。用ＥＬＩＳＡ法于第４，５，６周连续检测ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠血清人ＩｇＧ；用免疫组化ＡＢＣ法检测各种组织中的人淋巴细胞。各实验小鼠均检测到人ＩｇＧ的存在，最高为３９１μｇ／Ｌ，且随时间的延长呈上升趋势。在ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠肝、脾及腹腔接种瘤组织的周边，可见人ＣＤ３＋和ＣＤ２０＋的淋巴细胞。上述结果表明，用人胎肝细胞移植可在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人淋巴细胞，并对人肝癌细胞抗原产生免疫应答，分泌一定水平的抗人肝癌的抗体。提示：用人胎肝细胞在ＳＣＩＤ小鼠体内可建立人免疫系统的部分功能。

纤毛蛋白与绵羊白细胞介素2融合基因工程疫苗对实验动物的体液免疫应答

将转化节瘤拟杆菌 (D .nodosus)纤毛蛋白 (Pili)和绵羊白细胞介素 2 (oviIL2 )融合基因表达质粒的工程菌BL_2 1,在含梭苄青霉素营养肉汤培养基中表达 ,离心获得菌体沉淀物 ,裂解后配制成Pili_oviIL2融合基因工程疫苗。用加佐剂和不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗分别接种 2只健康家兔 ,2 1天后接种第 2次 ;定期采血 ,用对流免疫电泳检测试验兔的体液免疫反应。结果发现 ,加佐剂和不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗免疫兔 7天即可产生相应抗体 ,抗体在免疫血清中可维持 6个月以上。进一步试验将不加佐剂的Pili_oviIL2融合基因工程疫苗接种 3只健康绵羊 ,同样 2 1天后接种第 2次 ,定期采血 ,用对流免疫电泳检测试验绵羊的体液免疫反应。同时用Pili基因工程疫苗接种 2只绵羊作对照。结果 3只绵羊接种Pili_oviIL2融合基因工程疫苗后 ,分别于 7天和 14天产生相应的抗体 ,而接种Pili基因工程疫苗的绵羊于 2 8天产生相应的抗体 ;被免疫绵羊血清中的抗体可维持 6个月以上。用Pili_oviIL2融合基因工程疫苗接种兔和绵羊的免疫试验表明 ,Pili_oviIL2融合基因工程疫苗具有较好的体液免疫应答反应 。

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答(英文)

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFNγ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果小鼠接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后抗体最高滴度达1∶1024,培养上清液中IFNγ达(532.0±45.4)pg/mL;实验组小鼠脾淋巴细胞刺激指数为3.94±0.25,其抗原特异性反应明显高于对照组。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗能刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫。

鼠疫溶菌疫苗免疫小鼠的体液免疫应答

为选择以F1抗原为主要有效成分的鼠疫溶菌疫苗(Whole cell lysate of Yersinia pestis vaccine,WCLY)的免疫程序,设计了这组试验。在37℃培养鼠疫EV菌,通过超声波裂解法制备鼠疫溶菌疫苗。设计(0,2周)、(0,4周)、(0,2,4周)三种免疫程序,以每剂总蛋白量7.9μg、31.5μg和126.0μg三个剂量皮下接种NIH小鼠。分别在第一针免疫后2、4、8、12周采集血清,通过间接ELISA检测抗鼠疫菌F1抗原和总抗原抗体。结果显示:免疫后血清抗体上升很快,2周内即可测出;无论哪种免疫程序,至12周时抗体滴度仍保持高水平;加强免疫后,抗体水平在4周或8周达到较高,可与活疫苗免疫者相比;溶菌疫苗的接种剂量为7.9μg时,动物只出现轻度不良反应。提示鼠疫溶菌疫苗需要两剂免疫,最短可间隔2周,接种剂量应不超过7.9μg,疫苗中应富含F1抗原。

恶性疟原虫CSP基因重组蛋白及DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答比较

本文利用恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白 (PfCSP)基因DNA质粒通过不同途径、不同剂量免疫小鼠 ,观察其产生的体液免疫应答反应 ,并将其与相应的重组表达蛋白疫苗进行比较。结果显示 :DNA免疫刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、静脉和皮下 ;宿主对DNA免疫存在一定的剂量依赖性 ;ELISA和Dot -ELISA检测免疫后 4周和 7周 ,DNA质粒组刺激机体产生抗体的滴度均显著低于相应的重组蛋白组。表明PfCSPDNA疫苗与重组表达蛋白疫苗均可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答 。

重组(酵母)乙型肝炎疫苗接种母鸡的体液免疫应答

近年来,对鸡抗体研究较多,现已证明用病原体免疫母鸡可诱发机体产生特异性抗体,但用重组酵母乙肝疫苗刺激母鸡诱发免疫应答的研究还未见报道.为此本实验采用重组酵母乙肝疫苗免疫母鸡,观察其血清特异性抗体变化及其诱发体液免疫应答水平及免疫应答持久性.

多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答

目的研究多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答。方法制备多表位DNA壳聚糖微球疫苗pcD-NA3.1-HME-3C3d,经鼻腔免疫小鼠,蛋白检测微孔试剂盒检测小鼠特异性IgG抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,DNA壳聚糖微球疫苗的抗体水平明显高于DNA疫苗。结论壳聚糖微球疫苗投递系统可提高多表位DNA疫苗的免疫应答效果。

卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的：用卵巢癌抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ代替肿瘤抗原免疫动物，观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应。方法：将６Ｂ１１ｓｃＦｖ交联钥孔虫戚虫血蓝素，辅以弗氏佐剂反复免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗血清。采用间接法ＥＬＩＳＡ，竞争抑制ＥＬＩＳＡ及免疫流式细胞法分析抗血清特性。结果：经ＥＬＩＳＡ检测显示，由６Ｂ１１ｓｃＦｖ刺激产生的抗抗独特型单链抗体（Ａｂ３）能与６Ｂ１１ｓｃＦｖ和卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６９特异性结合。竞争抑制ＥＬＩＳＡ表明，Ａｂ３能有效抑制卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９（Ａｂ１）与ＯＣ１６６９的特异性结合。免疫流式分析结果可见，Ａｂ３能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系ＯＶ１细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ细胞表面结合。从以上结果可以证明Ａｂ３与Ａｂ１的抗原结合特性相同。结论：６Ｂ１１ｓｃＦｖ能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应，具有模拟抗原的作用。

T细胞免疫BALB/c小鼠诱导调节性体液免疫应答的研究

目的 :研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性体液免疫应答。方法 :用经γ射线照射的体外扩增的活化OVA特异T细胞克隆免疫BALB c小鼠 ,FACS法分析血清中抗T细胞抗体水平 ,免疫共沉淀法分析靶抗原。结果 :T细胞免疫能诱导BALB c小鼠产生抑制T细胞增殖的抗T细胞抗体 ,这种抗体不是多克隆活化的结果 ,其靶抗原可能是T细胞上 93、87、5 5和 4 5kD的蛋白。结论

5-羟色胺对大鼠体液免疫应答的影响

本研究用神经药理学方法改变大鼠全身、中枢或外周5-羟色胺(5-HT)的含量,并使用5-HT受体的拮抗剂,观察初次体液免疫应答有无变化,从而探讨5-HT调节体液免疫功能的作用途径和作用机制。结果发现:大鼠腹腔注射5-羟色氨酸(5-HTP)后,体液免疫应答减弱。腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)后,免疫应答增强。用去甲丙味嗪(DMI)预处理,然后侧脑室注射5、7-双羟色胺(5、7-DHT);或者单独侧脑室注射5-HT,免疫应答都无显著变化,腹腔注射5-HT后,免疫应答减弱。给予赛庚啶阻断5-HT的受体后,免疫应答增强。本研究结果提示:5-HT对体液免疫应答具有抑制作用;此作用是通过外周途径实现的;其机制可能与免疫细胞上的5-HT受体有关。

日本血吸虫保护性免疫机制的研究——体液免疫应答

本文应用辐照致弱日本血吸虫童虫疫苗、冷冻辐照致弱童虫苗和速冻致死童虫苗免疫雌性C_(57)BL/6小鼠,免疫后检测体液免疫应答动态变化。结果及相关分析表明抗膜抗体和依赖补体的抗体杀伤作用在抗血吸虫感染中起到一定作用,而抗可溶性抗原抗体和脾脏中B淋巴细胞百分数与保护力之间缺乏相关性。