高效价兔抗人免疫血清的制备

动物免疫血清是我们在医学教学、科研及临床检验工作中，经常用到的试剂，高效价免疫血清制备的关键在于佐剂的正确使用，抗原剂量要适中，免疫间隔时间长短要适当等，注意这些方面有利于高效价免疫血清的制备。

免疫血清、巨噬细胞及补体对体外培养旋毛虫肌幼虫的杀伤作用

为进一步了解旋毛虫成虫抗原免疫血清在体外对旋毛虫肌幼虫的杀伤情况 ,采用体外培养方法进行了免疫血清、免疫血清与巨噬细胞、免疫血清与巨噬细胞及补体对旋毛虫肌幼虫的杀伤试验。结果显示 :单纯免疫血清对体外培养的旋毛虫肌幼虫无明显杀伤作用 ,而免疫血清与巨噬细胞或免疫血清与巨噬细胞及补体联合对体外培养的旋毛虫肌幼虫均有杀伤作用 。

多抗原肽免疫血清体外阻断丙型肝炎病毒感染树鼠句肝细胞的初步研究

目的 探讨多抗原肽 (MAP)免疫血清在体外能否阻断丙型肝炎病毒 (HCV)感染树鼠句肝细胞 ,为研制HCV分子疫苗提供实验基础。方法 用兔抗MAP血清分别与两份感染血清按一定比例混合后接种于原代培养的树鼠句肝细胞中 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫组化、原位杂交分别检测细胞内或上清中正负链RNA ,细胞内HCVNS3抗原的表达情况 ,以及原位检测细胞内HCV负链RNA。结果 1份HCVRNA阳性血清与兔抗MAP血清按 1∶1混合后接种于培养的树鼠句肝细胞中 ,细胞内可检出HCV正负链RNA ,并有HCVNS3抗原的表达 ,而另外 1份HCVRNA阳性血清与兔抗MAP血清按 1∶1、5∶1、10∶1混合后接种于培养的树鼠句肝细胞中 ,细胞内未检测出HCV正负链RNA ,也未见特异性抗原表达。结论 兔抗MAP血清在体外能部分阻断HCV感染。

猪CD151重组抗原表达及其免疫血清的PRRSV感染抑制作用

用RT-PCR从猪巨噬细胞中扩增CD151胞外区编码序列,将其插入含细胞毒性T细胞相关抗原4胞外区序列的表达载体,重组载体转化大肠杆菌,SDS-PAGE检测重组蛋白表达;用包涵体纯化和尿素变性与复性法获得可溶性蛋白,纯化蛋白免疫小鼠,ELISA测定免疫血清抗体效价,Western-blot验证免疫血清特异性;以处理细胞或处理病毒方式,用免疫血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染抑制试验。结果表明:重组菌表达预期的32ku重组蛋白,获得的可溶性重组蛋白纯度较高;免疫血清抗体效价达1∶170 000,在猪巨噬细胞中能检测到预期的29ku蛋白,能抑制PRRSV感染MARC-145细胞,但有毒株差异性,处理病毒的感染抑制作用较强。结果提示猪CD151免疫血清能以结合细胞和结合病毒方式抑制PRRSV感染。

人lrg在大肠杆菌中的表达及表达产物的免疫血清制备和鉴定

目的 :在大肠杆菌表达人lrg ,制备鉴定人Lrg免疫血清 .方法 :构建pcTAT lrg重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;对表达的融合蛋白采用镍柱和SDS PAGE纯化 ;以纯化蛋白作为免疫抗原 ,对新西兰白兔实施多次免疫 (间隔时间分别为 1mo,3wk ,2wk) .结果 :获得兔抗人Lrg免疫血清 .经过ELISA和WesternBlot检测 ,效价在 1∶1 0 0 0以上 .真核细胞实验表明 ,6His TAT Lrg蛋白具有良好的穿透性 ,可以在 30min内从培养液进入细胞质 ;免疫组化实验表明Lrg是一种胞质蛋白 ;兔抗人Lrg免疫血清可有效应用于细胞和组织的检测 .结论 :制备得到兔抗人Lrg免疫血清 。

犬细小病毒免疫血清的研制与初步应用

采集广东本地犬细小病毒 (CPV)强毒株接种基础免疫犬 ,制备特效高免血清。结果表明 ,高免血清CPV抗体效价高达 1∶2 3 0 4 0 ,临床治愈率达 94 4% ,安全可靠 ,无毒副作用 ,治疗效果显著 。

弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1重组嵌合抗原免疫血清的制备与鉴定

目的制备与鉴定弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)重组嵌合抗原的特异性免疫兔血清。方法将已构建的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,分离上清液和包涵体,包涵体用2mol/L和4mol/L尿素梯度洗涤去杂蛋白,最后用8mol/L尿素溶解洗涤后的包涵体,进行十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),割胶回收目的蛋白,研磨成乳浊状后以背部多点注射免疫大白耳兔,制备免疫兔血清,以免疫扩散试验检测生成的特异性抗体,间接ELISA法测定免疫血清的抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析免疫血清的抗体特异性。结果免疫结束后,通过对流免疫扩散试验检测到了针对rROP2-P30的特异性抗体,间接ELISA法测定到其抗体滴度最高可达1∶12800,Western blotting分析结果表明,此免疫血清与可溶性的重组蛋白、包涵体形式的重组蛋白均能特异性结合。结论得到了针对rROP2-P30重组嵌合抗原的特异性免疫血清。

双歧杆菌免疫血清的制备及性质分析

通过动物免疫方法制备了长双歧(B.longum)和两歧双歧杆菌(B.bifidum)的免疫血清,经ELISA检测,血清效价达到1:1280。用此血清和乳制品中常见细菌反应,未见明显交叉反应,这一结果为双歧杆菌发酵乳制品中双歧杆菌的血清学检测提供了参考。

制备高效价细菌免疫血清的实验研究

目的 制备高滴度的细菌免疫血清 ,开展肥达氏反应的教学实验 ,节约经费 ,保证教学实验质量的提高。 方法 行颅内、脚掌、皮下注射采用弗氏不完全佐剂 +死或活细菌 ,及耳静脉注射途径注射细菌于家兔体内 ,制备免疫血清 ,测四种不同注射途径和两种注射法的抗体效价。 结果 四种注射途径的效价无差异。 结论 耳静脉注射法安全方便 ,操作易控制 。

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的肝组织学及免疫血清学短期疗效观察

目的观察阿德福韦酯治疗24周后的慢性乙型肝炎患者肝病理组织学及免疫血清学等变化。方法采用随机、平行对照的研究方法,将26例患者随机分为实验组14例和对照组12例,实验组接受阿德福韦酯10mg/d,对照组接受基础治疗1次/d,共治疗24周。治疗前后行肝穿刺活检并进行肝脏炎症活动度分级(G)和纤维化程度分期(S),采用酶联免疫吸附法检测血清透明质酸、PⅢ型胶原、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原。结果实验组治疗结束时肝功能复常优于对照组,与治疗组比,各项血清学指标均显著下降,对照组治疗前后PⅢ型胶原、层粘连蛋白下降不明显,肝病理组织学中炎症活动程度和纤维化程度与对照组相比明显减轻(P<0.05)。结论阿德福韦酯可以降低血清ALT水平,减轻肝脏炎症活动度,延缓肝纤维化进展。

用低龄动物制备高效价Et免疫血清的探讨

[目的]建立一种用低龄日本大耳白兔制备高效价迟钝爱德华氏菌(Edwardsiellatarda,Et)免疫血清的方法。[方法]先制备迟钝爱德华氏菌(Et)抗原。用日本大耳白兔作免疫动物,分2组试验,一组是2月龄组(T组),另一组是6月龄(S组)。采取耳缘静脉注射的方法,小剂量连续多次免疫日本大耳白兔,免疫后,收集免疫血清,然后用微量凝集反应法测定免疫血清抗体效价。[结果]凝集反应显示,在免疫剂量相同的情况下,第1次试血测Et免疫血清效价,S组的血清效价比T组的血清效价高,但在第2次试血测Et免疫血清效价时T组的血清效价与S组的血清效价一致。[结论]试验中所采用的T组动物(日本大耳白免)月龄较小,免疫后仍产生了与S组一致的高效价抗血清,说明用低龄日本大耳白兔制备高效价Et免疫血清的方法可行。

四种落叶松种子球蛋白免疫血清学的初步研究

本文对兴安落叶松、长白落叶松、华北落叶松和新疆落叶松种子的球蛋白进行了免疫血清学研究。通过双扩及免疫电泳分析，结果表明四种落叶松之间的抗原距离为零。这可提示用球蛋白进行免疫血清学方法不能鉴别这四个种。

β淀粉样肽与HbcAg/MIR融合蛋白的免疫血清在AD转基因细胞模型中的生物效应

目的研究β淀粉样肽(Aβ)与乙肝核心抗原主要免疫优势区(HbcAg/MIR)的融合蛋白(c-Aβ-c)在BL21/pET28原核表达体系的表达并进行腹腔内注射表达的融合蛋白免疫小鼠,检测免疫血清的免疫原性以及体外的生物学效应。方法应用分子克隆技术构建原核表达质粒pET-28a/c-Aβ-c并进行c-Aβ-c融合基因在BL21菌的IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白,用纯化的c-Aβ-c融合蛋白腹腔注射免疫动物,ELASA检测其抗Aβ抗体效价,MTT法和流式细胞术检测它应用于Alzheimer’sdisease(AD)转基因细胞的生物效应。结果表达的c-Aβ-c融合蛋白主要以包涵体形式存在于细菌的沉淀中,表达水平占细菌总蛋白量的30%以上。免疫小鼠血清中抗Aβ抗体效价达1∶16000,抗血清抑制了AD转基因细胞中Aβ的神经细胞毒性,明显降低了细胞凋亡的比率。结论c-Aβ-c融合蛋白具有良好的Aβ免疫原性,其动物免疫血清有效抑制Aβ肽的细胞毒性。

免疫血清的制备及效价测定在临床免疫学检验实验教学中的应用

高效价、高特异度的免疫血清是免疫学实验室必不可少的生物制剂,是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容[1]。而目前,在各大医学院校的医学实验课中学生更多应用的是市售的商品诊断试剂,虽然方便简单,但是学生对免疫血清的制备、效价的鉴定及制备的注意事项以及实验结果偏移与试剂的关系了解甚少,同时极大地增加了实验费用。

三种免疫血清制备方法的比较

目的 :比较评价三种兔抗人全血清制备的方法 ,分析各种方法的优缺点及其适用范围 ,找到一种操作简便效果理想同时又节省抗原的方法。方法 :12只成年雄性家兔随机分三组 ,分别制订不同的免疫方案进行免疫 ,获取兔抗人全血清。结果 :混合免疫法不仅适用于抗原较少的抗血清的制备 ,而且操作方法简便 ,效果理想。结论 :混合免疫法较稳定、免疫效果较好。

小鼠白细胞和免疫血清对卫氏并殖吸虫童虫生物学特性的影响

目的 观察小鼠白细胞及免疫血清协同作用对卫氏并殖吸虫童虫的超微结构以及活力与侵袭力的影响。方法 将小鼠白细胞、免疫血清及卫氏并殖吸虫童虫在体外培养进行抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (ADCC)试验 ;分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察童虫的活性或超微结构 ,并通过再感染实验检测经ADCC试验后的童虫对新宿主的侵袭能力。结果 卫氏并殖吸虫童虫与小鼠白细胞及免疫血清共同培养后 ,虫体表面出现肿胀、水泡、破损 ,体棘消失、感觉乳突变形或消失等改变 ,但活力与侵袭新宿主的能力不变。结论 小鼠白细胞在免疫血清协同作用下对卫氏并殖吸虫童虫有一定程度的损伤 ,损伤的部位主要在皮层 ,但不影响其活力及侵袭力。

SjAWMAg免疫血清和吡喹酮联用体内杀不同发育期血吸虫的实验研究

目的 观察日本血吸虫成虫表膜抗原(SjAWMAg)免疫血清与吡喹酮合用对不同发育期血吸虫的杀虫效果,探讨体液免疫在吡喹酮杀虫中的作用。 方法 提取 SjAWMAg,并用 SDS PAGE 对其进行鉴定,制备高滴度(1∶25 600)SjAWMAg抗血清,采用Western blot分析该血清与肺期童虫、肝期童虫及成虫抗原的反应性;将 SjAWMAg抗血清与吡喹酮合用治疗血吸虫感染后第2 d、第14 d和第35 d的小鼠,在感染后第49 d剖杀小鼠收获虫体,计算减虫率和减卵率。结果 Western blot分析表明,SjAWMAg抗血清与肺期及肝期童虫抗原存在交叉反应; 联合用药的 3 个治疗组(感染2、14、35 d)与单用吡喹酮组比较杀虫作用均有显著提高,减虫率分别提高了 38.79%、29.80%和 46.82%,其中以感染35 d治疗组提高最显著;减卵率分别提高了 62.04%,42.78%和 29.81%,以感染 2 d治疗组更为显著。结论抗SjAWMAg多克隆抗体与吡喹酮联合使用,均可提高吡喹酮对不同发育期血吸虫的杀灭效果,揭示体液免疫在吡喹酮杀血吸虫过程中具有重要作用,同时提示这种联合用药可能解决单用吡喹酮治疗血吸虫早期感染效果不佳的难题。

犬瘟热免疫血清制备和防治应用的研究

犬瘟热(Canine distemper)是由犬瘟热病毒(CDV)引起,主要危害幼犬的一种急性传染病。1991年夏秋季节,某警犬队犬群暴发犬瘟热,由于并发犬冠状病毒感染,发病率和死亡率明显高于以往历次发病。应用犬瘟热免疫血清进行被动免疫和治疗,取得满意效果。

免疫血清对旋毛虫感染性幼虫侵入肠上皮细胞及其发育的影响

目的观察旋毛虫感染性幼虫排泄分泌(ES)抗原与旋毛虫感染性幼虫表面抗原免疫鼠血清对幼虫侵入HCT-8肠上皮细胞及其发育的影响。方法将旋毛虫感染性幼虫接种至半固体培养基(RPMI1640培养基+1.75%琼脂糖)+HCT-8细胞中,37℃5%CO2培养12、24、36、72和96h后镜下观察幼虫发育情况;将幼虫接种至含免疫血清的半固体培养基+HCT-8细胞中,培养15min后镜下观察幼虫形态及其对肠上皮细胞的侵入情况,36h后应用间接荧光抗体试验(IFAT)观察幼虫蜕皮,并计数Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期幼虫。结果幼虫在半固体培养基培养12h可侵入HCT-8细胞单层,36～72h幼虫可蜕皮1～2次,培养96h可见早期成虫。在含ES抗原免疫血清与感染鼠血清条件下培养15min,幼虫头端可见免疫复合物形成的帽样结构,但在含表面抗原免疫血清、正常鼠血清或不含免疫血清条件下培养的幼虫头端则无帽样结构,头端带有帽样结构的幼虫不能侵入HCT-8细胞单层。在含ES抗原与表面抗原免疫血清条件下发育至Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比(2.25%、2.2%)均明显低于含正常鼠血清条件下培养的幼虫(24.7%)(P<0.05)。结论旋毛虫ES抗原免疫血清可阻止幼虫对肠上皮细胞的侵入,ES抗原及表面抗原免疫血清均可阻止部分幼虫的发育(蜕皮)。

免疫血清制备方法改良初探

目的探讨如何缩短制备免疫血清时间的方法,以适应其在实验教学中的需要。方法对家兔用伤寒“O”抗原菌液、绵羊红细胞(SRBC)连续接种5天后对其血清效价进行测定,并与传统免疫血清制备方法进行比较。结果伤寒“O”抗原菌液免疫血清效价为1∶1280,SRBC免疫血清效价为1∶1200。结论此免疫血清制备的方案所用时间短,效价高,适用于实验教学。