防风多糖体内外免疫调节活性研究

目的采用体内外多指标免疫调节活性评价方法,研究防风多糖体内外免疫功能的调节作用。方法体外实验选用RAW 264.7小鼠巨噬细胞系,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖能力,中性红染色法检测巨噬细胞的吞噬能力,Griess法测定巨噬细胞NO释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)释放量。体内实验选用环磷酰胺诱导的免疫低下BALB/c小鼠,通过碳粒廓清实验探讨防风多糖对小鼠网状内皮系统吞噬功能,以小鼠免疫器官指数评价防风多糖对小鼠免疫器官的影响,并采用ELISA法测定小鼠体内免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)和补体(C3、C4)含量。结果体外实验结果表明,防风多糖能够显著提高巨噬细胞的增殖和吞噬能力,并促进巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-6,但对IL-1β的释放量影响不显著。体内实验结果表明,防风多糖可使免疫低下小鼠模型的吞噬能力和免疫器官指数显著提高,并使免疫低下小鼠体内的免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)和补体(C3、C4)的含量升高。结论防风多糖在体内外水平均具有较好的免疫调节活性,参与调节机体的特异性免疫和非特异性免疫。

基于免疫调节探讨葛根汤颗粒治疗小鼠病毒性肺炎的作用机制

目的研究葛根汤颗粒对甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)致小鼠病毒性肺炎模型的药效评价及免疫调节作用。方法ICR小鼠,13~15 g,分为正常对照组、模型对照组,磷酸奥司他韦阳性药对照组及葛根汤颗粒高、中、低剂量组(6.6、3.3、1.7 g-1·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,采用IAV(FM1株)病毒液感染建立小鼠病毒性肺炎模型,同时给予相关药物治疗。观察各组小鼠肺指数及肺指数抑制率,RT-PCR法检测肺组织核酸,ELISA法检测小鼠肺组织因子白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子TNF-α;同时采用IAV(FM1株)病毒液滴鼻感染小鼠,造成死亡保护模型,观察小鼠感染后2周内的死亡情况,计算小鼠的死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。结果葛根汤颗粒中剂量组肺指数及肺组织病毒载量显著降低(P<0.01),肺指数抑制率为50.73%;葛根汤颗粒高、中剂量组肺组织炎性因子IL-10含量显著降低(P<0.01)、葛根汤颗粒中、低剂量组肺组织炎性因子TNF-α含量显著降低(P<0.01);葛根汤颗粒3个剂量组肺组织炎性因子IL-6含量显著降低(P<0.01);模型组小鼠死亡率90%,平均存活天数9.45 d,葛根汤颗粒3个剂量组小鼠死亡率显著降低、平均存活天数显著延长,生命延长率显著提高(P<0.01)。结论葛根汤颗粒可通过调节模型小鼠免疫炎性因子水平达到改善病毒性肺炎小鼠免疫功能的作用,同时可显著降低模型小鼠肺指数和肺组织病毒载量,从而减轻模型小鼠的肺部炎性损伤;对模型小鼠有死亡保护作用。

枸杞多糖的免疫调节作用及其在畜禽生产中的应用研究进展

枸杞多糖(LBP)是枸杞叶、果中最重要的活性成分之一,因其无毒、可降解及良好的生物活性而被国内外广泛关注。LBP因具有免疫调节作用,作为免疫增效剂和良好的疫苗佐剂应用于畜禽养殖及疾病防治的实践和研究。本文综述了LBP结构与生物活性的关系、LBP的免疫调节作用及其在畜禽生产中的应用,以期为LBP在畜禽安全养殖、疾病防治中的研究及应用开发提供参考。

基于UPLC-MS/MS和网络药理学、分子动力学探讨红芪免疫调节机制

目的基于UPLC-MS/MS、网络药理学方法预测红芪免疫调节的核心靶点及作用通路,通过分子对接、分子动力学技术对网络药理学结果进行验证,探讨红芪入血成分免疫调节的作用机制。方法基于UPLC-MS/MS技术定性定量红芪入血成分;通过TCMSP、本草组鉴数据库筛选红芪入血成分对应靶点;以DisGeNET、OMIM、TTD、MalaCards数据库获取免疫相关疾病靶点;构建“红芪入血成分-免疫相关疾病”网络;进行GO、KEGG富集分析,绘制PPI网络;应用分子对接、分子动力学技术进行验证。结果UPLC-MS/MS法共鉴定8个原型入血成分,协同作用于101个靶点,参与免疫反应、基因表达的正调控、受体结合、细胞因子活性等538个生物学过程,涉及HIF-1、Toll样受体、JAK-STAT、T细胞受体、PI3K-Akt、FoxO等116条信号通路。核心靶点为MAPK14、PTGS2、MMP9、PPARG、CCND1等。分子对接结果显示,芒柄花素、毛蕊异黄酮与MAPK14的对接结合活性较高,分子动力学模拟进一步验证了芒柄花素、毛蕊异黄酮与MAPK14的结合具有较好的结构稳定性及结合亲和力。结论通过血清药物化学、网络药理学及分子动力学相互印证,揭示了红芪调节免疫的物质基础及机制,可为其作用机制研究提供科学依据。

miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

刺五加多糖纳米乳对小鼠的免疫调节和抗氧化作用

为了研究刺五加多糖纳米乳(Acanthopanax senticosus polysaccharide nanoemulsion,ASPS-NE)对小鼠的免疫调节和抗氧化作用,试验将70只ICR小鼠随机分成7组,分别为正常对照组、模型组、阳性组、刺五加多糖组及刺五加多糖纳米乳高、中、低剂量组,正常对照组每天按体重2 mL/kg皮下注射生理盐水,其余各组小鼠在试验第1,2,5天均按体重80 mg/kg皮下注射环磷酰胺建立免疫抑制模型;另外,阳性组每天按体重10 mg/kg皮下注射胸腺五肽,刺五加多糖组每天按体重62.5 mg/kg皮下注射刺五加多糖,刺五加多糖纳米乳高、中、低剂量组每天分别按体重125,62.5,31.25 mg/kg皮下注射刺五加多糖纳米乳,共7 d。末次给药24 h后处死小鼠后采集脾脏、心脏、肝脏及肾脏等脏器。分离脾细胞悬液,研究刺五加多糖纳米乳对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测腹腔巨噬细胞中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达情况,并检测组织器官中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)浓度。结果表明:与模型组比较,刺五加多糖纳米乳3个剂量组的OD450值极显著升高(P<0.01),能不同程度促进小鼠脾淋巴细胞增殖,以刺五加多糖纳米乳中剂量组增殖效果明显;刺五加多糖纳米乳3个剂量组巨噬细胞中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-αmRNA的相对表达量极显著上调(P<0.01),以刺五加多糖纳米乳中剂量组细胞因子的分泌和相关mRNA的表达量更高;刺五加多糖纳米乳3个剂量组组织的GSH-Px、CAT活性极显著提高(P<0.01),并极显著降低组织的MDA浓度(P<0.01)。说明刺五加多糖纳米乳可增强免疫抑制小鼠的免疫调节和抗氧化作用。

参杞强精颗粒对慢性疲劳综合征脾肾阳虚证大鼠免疫调节作用研究

目的:探讨参杞强精颗粒对慢性疲劳综合征(CFS)脾肾阳虚证模型大鼠的影响以及免疫调节作用。方法:将50只无特定病原体(SPF)级健康雄性斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,参杞强精颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组,采用游泳力竭实验造成大鼠体力疲劳,慢性束缚应激造成大鼠心理疲劳,同时给予番泻叶煎煮液灌胃造成脾肾阳虚证候,构建CFS脾肾阳虚证大鼠模型,造模成功后分别按照各组剂量灌胃,连续给药21 d后,测定各组大鼠的胸腺和脾脏指数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)浓度以及细胞因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)含量,MTT法检测脾脏T、B淋巴细胞增殖能力,流式细胞法检测各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群分布情况。结果:行为学结果显示,模型大鼠的体质量增长缓慢,精神萎靡,摄食水量减少,活动减少,便质稀软,力竭游泳时间减少,悬尾静止时间增加。药物干预后,与模型组比较,各给药组大鼠精神状态、体质量、摄食水量均显著改善,力竭游泳时间增加、悬尾静止时间减少(P<0.01或P<0.05);参杞强精颗粒各剂量组能显著提升大鼠胸腺和脾脏指数,提高IgG、Ig M、IgA浓度和IL-2、IL-6、IFN-γ的含量,显著提高脾脏T、B淋巴细胞增殖能力,也能提高CD3+、CD4+T淋巴细胞百分率和CD4+/CD8+T比值,降低CD8+T淋巴细胞百分率,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:参杞强精颗粒能显著改善慢性疲劳综合征脾肾阳虚证大鼠免疫功能,缓解疲劳症状,且具有很好的免疫调节作用。

白鲜皮免疫调节机制的网络药理学分析及验证

本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

白术多糖对动物免疫调节作用研究进展

随着集约化养殖规模的快速发展,畜禽疾病呈现传播快、易流行等特点,并且免疫抑制现象普遍存在,使我国畜禽疫病防控面临较大压力。白术是菊科植物白术的干燥根茎,是一味常用的补益类中药,现代医学研究表明,白术多糖是其主要活性成分之一。文章综述了近年来白术多糖在动物免疫方面的研究进展,为白术深入研究和临床开发应用提供参考。

基于阴火理论的中西医结合免疫调节治疗展望

免疫治疗已成为当今医学解决重大疑难疾病的突破口之一,但其面临的挑战仍然不少。当前,中医学的阴火理论受到广泛关注,被应用于多种疾病的治疗中,其机制与调节机体的免疫状态密切相关。本文在系统回顾中医药免疫调节研究进展的基础上,以挖掘阴火理论的科学内涵为切入点,讨论阴火理论下指导中西医结合免疫治疗的可能性和新思路。多种中药单体、有效部位或者复方免疫促进、免疫抑制或者双向调节作用,在免疫调节中展现了巨大的潜力。阴火理论与免疫调节的关联密切,阴火的产生与免疫异常、慢性炎症、代谢异常、应激等密切相关,临床运用阴火理论治疗相关疾病能够有效调节免疫功能,降低炎症水平。阴火理论是深入传承中医药原创理论精华,有效对接西医免疫相关理论的范例,但仍需开展相关系统生物学研究,进一步升华中医药理论和实践经验,从而发挥中医药的特色优势,解决重大疑难疾病防治中的免疫失调难题,赋予生命科学新内涵,推动临床应用、验证和创新发展。

粪菌移植改善慢性心衰患者免疫调节及心功能的疗效观察

目的:观察粪菌移植(FMT)改善慢性心衰患者免疫调节及心功能的疗效。方法:将86例慢性心衰患者随机分为对照组(n=43)和观察组(n=43),对照组接受常规治疗,观察组在其基础上联合FMT治疗。于治疗前后对比2组心功能、心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、免疫功能水平、炎性因子及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化,统计治疗期间不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组LVEDD、LVESD、HR、SBP、DBP、CD8^(+)T、IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α水平低于对照组低,LVEF、CD3^(+)T、CD4^(+)T水平高于对照组(均P<0.05)。观察组不良反应发生率(6.98%)与对照组(13.95%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FMT应用于慢性心衰患者的治疗中可有效改善心功能和心衰症状,纠正肠道菌群紊乱并调节机体免疫,安全可靠。

短链脂肪酸对支气管扩张症模型大鼠的免疫调节作用机制

[目的]探讨短链脂肪酸(SCFAs)对铜绿假单胞菌(PA)液诱导的支气管扩张症模型大鼠的免疫调节作用机制.[方法]采用随机法将20只SPF级大鼠分为对照组、模型组、SCFAs低剂量组和高剂量组.采用气管注射给予10~128 CFU/mL PA 0.5 mL的方法建立支气管扩张症大鼠模型,SCFAs低、高剂量组大鼠每日分别灌胃给予100、150 mg/kg SCFAs混合液(乙酸、丙酸、丁酸比例为3∶1∶1),对照组和模型组分别灌胃给予生理盐水10 mL/(kg·d),连续7 d.取各组肺组织行HE染色,采用ELISA法检测各组大鼠血清中NF-κB、GM-CSF、IL-17A及IL-22水平,采用Western blot法检测肺组织中STAT3、STAT5及TLR2蛋白表达情况.[结果]模型组大鼠支气管管腔扩张变形,管壁增厚,周围见大量炎性细胞浸润,纤维组织形成;SCFAs低、高剂量组大鼠支气管管腔变形有所恢复,炎性细胞浸润及纤维组织明显减少,且高剂量组改善更为明显.与模型组比较,SCFAs低、高剂量组NF-κB、GM-CSF、IL-17A及IL-22水平显著升高(P<0.05),高剂量组升高更为显著.与模型组比较,低、高剂量组STAT3及TLR2表达水平未见明显改变,STAT5表达水平显著降低(P<0.05),低、高剂量组间差异无统计学意义(P>0.05).[结论]SCFAs可促进炎症因子分泌,在PA诱导的支气管扩张症模型大鼠急性感染期发挥免疫调节作用,其机制认为可能与TLR2/NF-κB/STAT信号通路有关系.

刺玫根多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用

采用水提醇沉法提取刺玫根粗多糖,以Sevage法和TCA法脱蛋白,进一步分级醇沉法分离纯化得到较纯的60%醇沉物(RDRP)进行结构鉴定和活性评价。苯酚浓硫酸法测定出刺玫根多糖RDRP总糖含量为94.1%;高效凝胶渗透色谱法测定表明主要含有重均分子量为13.1 kDa,相对分散度为1.2的多糖;通过高效离子色谱法和红外光谱测定,鉴定刺玫根多糖为由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖等5种单糖组成的含有α-构型的中性吡喃多糖。环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型实验结果表明,与模型组相比,刺玫根多糖各剂量组小鼠的脾脏和胸腺指数明显升高(P<0.05,P<0.01);血细胞分析仪检测发现白细胞数、红细胞数、血小板显著升高(P<0.05);ELISA法检测血清中免疫相关蛋白IgG、IgM、IgA以及细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6与IL-2的分泌水平,结果显示,与模型组比较,刺玫根多糖组显著上调小鼠血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM浓度水平(P<0.01)及IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-6的含量(P<0.01);Western blot法测定各组TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB p65蛋白的表达水平,发现刺玫根多糖各剂量组脾脏中TLR4、TRAF-6蛋白极显著上升(P<0.01),高剂量组的MyD88蛋白极显著上升(P<0.01),其他组呈现上升趋势;刺玫根多糖各剂量组NF-κB p65蛋白均有上升趋势,因此其免疫调节作用机制可能与TLR/NF-κB通道有关。本研究初步阐明刺玫根多糖的基本结构特征和其免疫调节作用及其机制,为刺玫根多糖的开发应用提供一定价值的实验依据。

免疫调节剂联合吸入用复方异丙托溴铵溶液治疗慢性阻塞性肺疾病的效果

目的:探究免疫调节剂联合吸入用复方异丙托溴铵溶液治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的效果。方法:选择2017年1月—2019年1月在山东省青州荣军医院呼吸内科治疗的COPD患者80例,应用随机数字表法将其分为对照组(吸入用复方异丙托溴铵溶液)及观察组(联合免疫调节剂),各40例,对比两组临床疗效、炎症因子[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)]、肺功能[最大呼气量(PEF)、最大自主通气量(MVV)、第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV_(1)%pred)]、气道黏液高分泌[Toll样受体4(TLR4)、痰液干湿比重、黏蛋白5AC(MUC5AC)]、不良反应发生率。结果:观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组炎症因子比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组hs-CRP、TNF-α、PCT均较治疗前降低,且观察组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组肺功能指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组PEF、MVV、FEV_(1)%pred均较治疗前升高,且观察组均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组气道黏液高分泌指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组TLR4均降低,观察组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),痰液干湿比重、MUC5AC均降低,观察组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计意义(P>0.05)。结论:COPD采用免疫调节剂联合吸入用复方异丙托溴铵溶液治疗,效果显著,可改善患者肺功能,抑制炎症反应,缓解气道黏液高分泌状态,安全性较高。

鲍鱼多糖的大孔树脂纯化工艺及其免疫调节活性分析

目的:为提高鲍鱼多糖品质,对鲍鱼多糖的大孔树脂纯化工艺进行优化,并对纯化前后多糖的免疫调节活性分析评价。方法:以多糖保留率、蛋白质脱除率和色素脱除率的加权综合得分为指标,考察6种不同型号的大孔树脂对鲍鱼多糖的纯化效果,利用单因素实验和响应面分析法优化大孔树脂的纯化工艺条件,并通过体外细胞实验对纯化前后鲍鱼多糖的免疫调节活性进行研究。结果:HPD100的加权综合得分最高,对鲍鱼多糖的纯化效果最佳;HPD100纯化多糖的最佳工艺参数为多糖与树脂质量比1:42、吸附时间3.10 h,吸附温度35℃,在此条件下多糖保留率为97.58%±1.58%,蛋白质脱除率为30.20%±0.66%,色素脱除率为45.78%±1.01%,加权综合平均得分61.83%;体外细胞实验结果表明,纯化后鲍鱼多糖的免疫调节活性显著增强,RAW264.7巨噬细胞的增殖活力提高,NO、TNF-α和IL-6细胞因子分泌水平大幅增加。结论:本研究获得鲍鱼多糖的最佳大孔树脂纯化工艺条件,纯化后鲍鱼多糖的生物活性显著增强,可为高活性鲍鱼多糖的制备提供理论依据。

短期服用蛹虫草对不同状态小鼠的免疫调节作用

为研究短期服用蛹虫草对不同状态小鼠的免疫调节作用,探讨其作为免疫调节剂的应用价值,将KM系小鼠随机分为低倍组(DB组)、高倍组(GB组)和对照组(CK组),DB组和GB组连续灌胃不同剂量蛹虫草水溶液21 d,CK组灌胃同等剂量蒸馏水。测定小鼠体质量、脏器指数、血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、IgM、白细胞介素(interleukin,IL)-2和IL-10含量,外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群含量,肠道菌群组成结构及空肠Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2、TLR4、髓样分化因子88及核因子(nuclear factor)-κB表达量的变化。腹腔注射80 mg/kg mb环磷酰胺溶液诱导小鼠免疫抑制状态,在蛹虫草水溶液灌胃的第0、7、14、21天取材检测。结果显示,不同剂量蛹虫草对小鼠体质量、脏器指数、血清IgG、IgM、IL-2和IL-10水平、外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群含量均未产生显著影响(P>0.05)。蛹虫草可以上调小鼠肠道菌群Shannon指数和操作分类单元数量,增加肠道菌群多样性和丰富度。肠道益生菌Lactobacillus和Alistipes相对丰度明显升高(P<0.05),炎症促生菌Clostridium XIVa、Helicobacter及Lachnospiracea_incertae_sedis相对丰度显著降低(P<0.05)。不同剂量蛹虫草均引起小鼠空肠组织TLR4表达量显著降低(P<0.05),NF-κB表达量的降低程度与蛹虫草灌胃剂量呈正相关。蛹虫草能够提前恢复环磷酰胺导致的脏器损伤,显著提高免疫抑制小鼠IgM、IgG和IL-2水平(P<0.05),促进外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群的增殖。综上,短期服用蛹虫草可以降低肠道炎症的发生风险,不会引起正常免疫状态的失衡;蛹虫草可以通过增强体液免疫和细胞免疫促进机体免疫抑制状态的恢复,可用于免疫调节剂的开发和利用。

黑豆纳豆激酶粗提取物的免疫调节作用

以壶关大黑豆为原料发酵纳豆,分离得到黑豆纳豆激酶粗提取物(BNCE),对其结构进行初探,测定其酶活力和溶栓能力,并研究BNCE的免疫调节作用。通过红外光谱分析和扫描电镜对BNCE结构进行鉴定;分别使用纤维蛋白平板法和动物血块法测定BNCE的酶活及其对小鼠血块的体外溶栓作用;用MTT比色法探究BNCE对RAW264.7细胞增殖的影响;中性红染色法测定BNCE对RAW264.7细胞吞噬率的影响;ELISA法检测BNCE对RAW264.7细胞分泌IL-6、TNF-α和IL-1β的影响。结果表明,BNCE具有蛋白质的化学结构,表观呈现大小不同且无规则的碎片形状,具有一定的纤溶活性和体外溶栓作用。BNCE可以促进正常状态以及LPS激活状态下RAW264.7细胞的增殖,增强其吞噬率,并且有浓度依赖性。另外,BNCE还可以促进正常状态下的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β的分泌,抑制IL-6的分泌;也能抑制LPS激活状态下RAW264.7细胞IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌。因此,BNCE具有一定的免疫调节作用,在食品工业上可以作为保健食品的一种优质原料。

板蓝根多糖酶法脱蛋白工艺、组成分析与免疫调节活性研究

目的优化板蓝根多糖脱蛋白工艺,并进一步探讨其免疫调节活性,为板蓝根多糖的开发利用提供科学依据。方法通过单因素结合Box-Behnken响应面法优化酶法脱蛋白的最佳工艺条件;利用紫外可见光谱、傅里叶变换红外光谱、高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱和扫描电镜等方法对板蓝根多糖化学组成与结构特征进行分析;采用斑马鱼免疫低下模型探讨脱蛋白板蓝根多糖对斑马鱼体内中性粒细胞、巨噬细胞、IL-1β和IL-6含量的影响。结果酶法脱蛋白最佳工艺为:胰蛋白酶500 U·mL^(-1)、pH 8.0、酶解时间5 h、酶解温度37℃,脱蛋白率为(86.39±0.07)%,综合评分(91.15±0.37)%。紫外、红外光谱扫描和电镜扫描显示酶法可以除去粗多糖中含有的蛋白质,脱蛋白后相对分子量在5.82~60.26 kDa之间,单糖摩尔组成为甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=2.17∶0.96∶2.90∶83.25∶4.88∶5.84。免疫活性评价结果表明,脱蛋白后的板蓝根多糖浓度在50~300μg·mL^(-1)时,能显著增加斑马鱼免疫细胞密度,增加巨噬细胞增殖,降低免疫低下斑马鱼体内IL-1β和IL-6含量,从而发挥免疫调节作用。结论酶法可以有效去除板蓝根粗多糖中的蛋白质,脱蛋白后的板蓝根多糖具有一定的免疫调节作用。

经血源子宫内膜干细胞移植通过免疫调节缓解化疗引起的小鼠肠道损伤和菌群失调

目的:研究经血源子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,MenSCs)对化疗引起的小鼠肠道黏膜炎和菌群失调的治疗效果及潜在机制。方法:将小鼠随机分为正常组、顺铂(cisplatin,Cis)组和Cis+MenSC组,每组10只:Cis组和Cis+MenSC组小鼠采用腹腔注射Cis(2 mg·kg^(−1)·d^(−1),连续5 d)的方式建立小鼠化疗性肠黏膜炎模型,正常组小鼠经腹腔注射同等体积生理盐水;Cis+MenSC组小鼠经尾静脉移植MenSCs,而正常组与Cis组小鼠经尾静脉注射同等体积生理盐水。给药过程中观察小鼠体征及体重变化,实验结束后分离小鼠小肠、结肠部位,通过HE染色评估小鼠肠道组织形态学改变;免疫组化染色检测肠道组织中F4/80和IL-6阳性细胞率;Western blot检测肠道组织中肠道紧密连接蛋白、炎症因子及凋亡相关蛋白的变化;粪便微生物菌群16S rDNA扩增子测序检测小鼠肠道微生物群多样性和丰度的改变情况。结果:与Cis组小鼠相比,MenSCs移植组小鼠体重显著增加,HE染色显示小肠及结肠组织炎性细胞浸润减少,肠绒毛水肿减轻,腺体排列较有序;Western blot结果显示MenSCs移植可显著上调Cis损伤后小鼠肠道组织中紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达(P<0.05)。随后,免疫组化染色和Western blot结果显示MenSCs移植可显著降低Cis损伤后小鼠肠道组织中巨噬细胞数量(P<0.01),下调肠道组织中促炎因子IL-1β和IL-6和促凋亡蛋白Bax的表达(P<0.01);同时显著上调肠道组织中抑炎因子IL-10和抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达(P<0.01)。进一步粪便微生物测序结果显示,MenSCs移植可改善Cis诱导的肠道菌群失调,显著降低有害微生物艾森伯格氏菌(Eisenbergiella tayi)和人结肠厌氧棍状菌(Anaerotruncus colihominis)的丰度(P<0.01),同时显著增加肠道中有益微生物乳杆菌(Lactobacillus apodemi)的丰度(P<0.05),有助于恢复健康肠道菌群结构和功能。结论:MenSCs移植能够减轻化疗药物造成的小鼠肠道屏障损伤,减轻化疗相关小鼠黏膜炎的症状,有助于恢复肠道菌群稳态。

桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用

[目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。