基于miR-486-5p、巨噬细胞极化探讨新风胶囊改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症的作用机制

目的:观察新风胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠巨噬细胞极化及miR-486-5p的影响,探究新风胶囊改善AA大鼠炎症的可能机制。方法:32只SD大鼠被随机分为两个不同组别:正常组(NC组,8只)和造模组(24只),通过对造模组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂,成功构建AA大鼠模型后,进一步随机细分为3组:模型组(MC组,8只)、新风胶囊组(XFC组,8只)以及miR-486-5p抑制剂组(miR-486-5p inhibitor组,8只)。于炎症诱导后的第14天开始给予相应药物和试剂,NC组及MC组持续21天灌胃等量的生理盐水,然后检测各组AA大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI);采用酶联免疫吸附法测定(ELISA)检测大鼠细胞因子白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4及IL-13;流式细胞术检测大鼠外周血CD86、CD206表达;RT-qPCR检测大鼠关节滑膜miR-486-5p表达。结果:(1)与NC组比较,MC组大鼠E、AI及IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达升高(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达降低(P<0.01)。(2)与MC组比较,XFC组和miR-486-5p inhibitor组E、AI、IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01)。(3)与miR-486-5p inhibitor组比较,XFC组IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01);IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);E、AI差异不明显(P>0.05)。结论:AA大鼠炎症与巨噬细胞极化和miR-486-5p表达有关,新风胶囊能明显改善AA大鼠关节炎症,其机制可能与抑制miR-486-5p表达,调节巨噬细胞极化有关。

益母草碱对骨关节炎大鼠细胞自噬的机制研究

目的探讨益母草碱对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞自噬和凋亡的影响以及PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)信号通路发挥作用。方法采用标准前交叉韧带横断术(ACLT)构建OA大鼠模型,将建模成功的大鼠分为OA组、益母草碱-L组、益母草碱-M组、益母草碱-H组,每组12只,另取12只为假手术组;HE染色检测各组大鼠软骨细胞形态变化;透射电镜观察各组大鼠软骨细胞超微结构;TUNEL法检测各组大鼠软骨细胞凋亡;RT-qPCR检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B mRNA表达水平;Western blot检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B蛋白表达水平。结果与假手术组相比,OA组大鼠软骨形态异常、结构模糊、表面出现裂缝、软骨细胞线粒体数量减少、少量自噬体存在,软骨细胞凋亡率、软骨组织P62 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织PINK1、Parkin、LC3B mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。与OA组比较,益母草碱-L、M、H组大鼠软骨形态逐渐恢复、结构逐渐清晰、表面裂缝减少、软骨细胞数量恢复、线粒体增多、自噬体数量增加,软骨细胞凋亡率、软骨组织P62 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织PINK1、Parkin、LC3B mRNA和蛋白水平显著升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论益母草碱可能通过激活PINK1/Parkin信号通路促进OA大鼠软骨细胞自噬,抑制软骨细胞凋亡。

京尼平苷对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响

目的:研究京尼平苷对类风湿性关节炎大鼠血清IL1β和TNFα的影响,进一步探讨该药物的作用机制。方法:建立Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿性关节炎模型。观察京尼平苷对实验性大鼠足肿胀的抑制作用;检测血清IL1β和TNFα的水平。结果:与模型组比较,京尼平苷可以延缓对侧肢体足肿胀发生的时间,抑制大鼠足肿胀的程度(P<0.01);用药后,中、高剂量给药组血清IL1β和TNFα水平明显低于模型组(P<0.01)。结论:京尼平苷在类风湿性关节炎大鼠中可以下调致炎因子IL1β和TNFα的水平,提示这可能与该药抑制实验性类风湿性关节炎病情进展密切相关。

佐剂性关节炎大鼠肺功能变化与Th1/Th2细胞、调节性T细胞的相关性研究

目的:探讨细胞因子、Th1/Th2细胞及调节性T细胞(Treg)、转录因子Foxp3在佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能损害中的作用机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组和模型(Model)组,每组12只,向Model组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,复制成AA模型。致炎48d后,观察两组大鼠足跖肿胀度(E)及关节炎指数(AI),HE染色观察肺组织病理学改变,计算两组大鼠肺系数(LI)、肺泡炎积分,免疫组化染色法检测Foxp3、TGF-β1蛋白表达情况。通过小动物肺功能仪检测肺功能,ELISA法测定细胞因子的变化,流式细胞术(FCM)测定Treg的表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠E、AI、LI、1s内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、血清TNF-α、Th1/Th2、肺组织TGF-β1、CD4+ CD25- T细胞的表达水平明显升高,且两者差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)、血清IL-10、CD4+ Treg、CD4+ CD25- Treg、肺组织Foxp3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,AA大鼠肺功能参数分别与E、AI、TNF-α、IL-10、Th1/Th2及CD4+ Treg、CD4+CD25+Treg、CD4+ CD25- T细胞、Foxp3、TGF-β1表达呈相关性,且相关有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:大鼠在致炎后对抗原刺激呈高敏反应状态,Th1/Th2状态失衡、CD4+ CD25- T细胞转化成CD4+ CD25+ Treg受阻,免疫调节功能紊乱,释放大量细胞因子和炎症介质,导致局部关节的病变和肺组织损害,从而发生AA肺功能降低。

不同脉冲波形电针对佐剂性关节炎大鼠的影响

目的 :探讨电针治疗佐剂性关节炎 (AA)最佳适宜的脉冲波形参数。方法 :将 4 0只Wistar大鼠随机分为 5组 ,电针观察组分别采用不同脉冲波形电针对AA大鼠进行治疗 ,以痛阈、关节肿胀度和炎症局部组织中 5 羟色胺 (5 HT)、β内啡肽 (β EP)、亮脑啡肽 (LEK)的含量为观察指标。结果 :治疗后不同脉冲波形电针组痛阈高于模型组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;电针组炎症局部肿胀度虽然高于正常组 (P <0 0 1) ,但较模型组为低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;电针组炎症局部组织中 5 HT含量低于模型组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;与模型组相比 ,声电波电针有升高炎症局部组织中 β EP和LEK含量的作用 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,断续波电针有升高 β EP的作用 (P <0 0 5 )。结论 :电针治疗AA最佳适宜的脉冲波形为声电波。

电针足三里关元对佐剂性关节炎大鼠β-内啡肽ACTH的影响

目的:主要探讨电针足三里、关元对佐剂性关节炎大鼠β-内啡肽、ACTH的影响;方法:60只大鼠随机分为5组,每组12只,空白对照组、模型对照组做捆绑处理、模型+电针足三里组、模型+电针关元组、模型+电针委中组分别捆绑后电针单穴,隔天1次,32天后测量比较各组β-内啡肽、ACTH值。结果:(1)造模后,大鼠足趾关节明显肿胀,模型对照组与空白对照组具有显著性差异(P<0.05);(2)模型对照组血浆β-内啡肽含量较空白对照组有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05);(3)模型对照组血浆ACTH含量明显高于空白对照组,具有显著性差异(P<0.05);(4)血浆ACTH含量与大鼠足趾关节肿胀度(跖围)呈正相关(P<0.05)。结论:电针足三里、关元能调节佐剂性关节炎大鼠的β-内啡肽、ACTH值;改善免疫功能。

Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型制备

目的:研究建立较为理想的寒湿痹型实验性类风湿关节炎模型。方法:采用不同浓度Ⅱ型胶原和弗氏佐剂联合应用于大鼠足部注射,诱导关节炎;测量大鼠足肿胀度,并计算肿胀率;检测血清唾液酸水平;观察滑膜组织病理学及超微结构变化。结果:低浓度Ⅱ型胶原和完全佐剂组大鼠关节肿势迅猛,近似于佐剂关节炎大鼠模型,高浓度Ⅱ型胶原和不完全佐剂组大鼠关节肿势和缓;各模型组大鼠血清唾液酸水平均高于正常对照组;滑膜组织的病理学变化与类风湿关节炎相符。结论:高浓度的Ⅱ型胶原加不完全佐剂给药组是较为理想类风湿关节炎大鼠模型,中医辩证属寒湿痹症,与之相比较,佐剂关节炎模型接近于湿热痹症。

逆灸对随后佐剂性关节炎大鼠早期及继发期炎性细胞因子和局部足肿胀的影响

目的:观察逆灸对随后佐剂性关节炎大鼠早期、继发期关节局部肿胀和炎症因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的影响。方法:实验于2004-08/12在北京中医药大学针灸学院针灸机理实验室进行。以随机数字表法将48只Wistar大鼠分6组:正常组、模型早期组、逆灸早期组、模型继发组、逆灸继发组和逆灸正常组各8只。正常组:不造模,不预灸;模型早期组:大鼠右后足掌皮下注射福氏完全佐剂0.1mL造成佐剂性关节炎模型,造模第3天取材;逆灸早期组:于造模前进行艾灸,大椎穴处施灸,每次1壮,隔日灸1次,共灸8次,并于灸结束后造模,造模第3天取材;模型继发组:造模,造模第16天取材;逆灸继发组:于造模前进行艾灸,并于灸结束后造模,造模第16天取材;逆灸正常组:正常大鼠进行艾灸,灸结束后取材。采用放射免疫、鼠足容积测量法,观察逆灸对随后佐剂性关节炎大鼠早期和继发期足肿胀率及血清的白细胞介素1β,肿瘤坏死因子α的影响。结果:48只大鼠均进入结果分析。①足肿胀率:模型组和逆灸组右足早期肿胀率均高于正常组(2.128±0.262)%,(1.301±0.250)%,(0.011±0.018)%,F=26.001,P<0.01,且逆灸组肿胀较正常组明显减轻(P<0.05);模型组和逆灸组右足继发期肿胀率均高于正常组(1.736±0.165)%,(1.156±0.230)%,(0.009±0.018)%,P<0.01,且逆灸?

当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值、IL-1β、TNF-α、COX-2的影响

目的探讨当归拈痛汤及其拆方对急性痛风性关节炎大鼠血尿酸值,大鼠滑膜组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、当归拈痛汤全方组(全方组)、当归拈痛汤拆方1组(茵陈等药组)、当归拈痛汤拆方2组(羌活等药组)和西药治疗组(西药组),先采用腺嘌呤合乙胺丁醇灌胃造成大鼠高尿酸血症模型,再在踝关节内注射尿酸钠(MUS)诱导大鼠急性痛风性关节炎模型。测定各组大鼠血尿酸值,应用免疫组化染色方法(S-ABC法)检测IL-1β、TNF-α、COX-2在大鼠滑膜组织中的表达。结果 (1)血尿酸值:中药各组中全方组、茵陈等药组、羌活等药组血尿酸值明显低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01),其中全方组下降最为明显;(2)IL-1β、TNF-α、COX-2值:中药各组中全方组、茵陈等药组、羌活等药组IL-1β、TNF-α、COX-2值分别明显低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01),其中全方组下降最为明显;西药组与全方组TNF-α含量相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论当归拈痛汤全方组及其拆方茵陈等药组、羌活等药组均有降低血尿酸的作用,并对急性痛风性关节炎的滑膜组织中炎性因子有抑制作用,其中以当归拈痛汤全方组作用最佳。

胶原性关节炎大鼠滑膜组织细胞因子基质金属蛋白酶3和组织金属蛋白酶抑制剂1表达的变化

目的:观察Ⅱ型胶原诱导的实验性关节炎动物模型组织细胞因子基质金属蛋白酶3和组织金属蛋白酶抑制剂1表达的变化,探讨基质金属蛋白酶3和组织金属蛋白酶抑制剂1在类风湿关节炎发病机制中的作用。方法:实验于2005-09/2006-11在白求恩国际和平医院中心实验室完成。①实验分组:健康雄性Wistar大鼠60只,体质量(100±20)g,随机选出50只以备造模,另外10只作为对照组。在造模成功的大鼠中再随机选出10只作为模型组。②实验方法:采用10mg牛Ⅱ型胶原与100mg弗氏不完全佐剂和60mg卡介苗充分研磨后,以每支每点0.1～0.2mL(1g/L)从大鼠背部尾根部多点皮下注射,于10d后按上述方法和剂量再次重复免疫和制作大鼠胶原性关节炎模型。③实验评估:初次免疫后7周,剥离膝关节滑膜,进行苏木精-伊红染色光镜下观察;切除另侧膝关节滑膜,免疫组织化学染色后,用Metamorph图像分析系统进行检测,计算每个视野基质金属蛋白酶3和组织金属蛋白酶抑制剂1的阳性面积比,以其作为阳性反应细胞密度。结果:纳入大鼠60只,20只进入结果分析。模型组大鼠关节组织中的基质金属蛋白酶3阳性密度为0.75±0.19,明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.01);组织金属蛋白酶抑制剂1的表达阳性密度为0.48±0.17,与对照组0.78±0.21比较明显降低,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:细胞因子基质金属蛋白酶3和组织金属蛋白酶抑制剂1表达的变化与胶原性关节炎大鼠的发病相关。

程氏蠲痹汤对佐剂性关节炎大鼠体内氧化应激的影响

为探究程氏蠲痹汤(Cheng Shi Juan Bi Tang,CSJBT)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠体内氧化应激的影响,文章选用弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导SD大鼠建立关节炎模型。动物随机分为正常组、模型组、雷公藤多苷组(glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)(剂量0.01 g/kg)和CSJBT组(剂量分别为2.55、5.10、10.20 g/kg)。大鼠在造模后的第15天灌胃给药,连续治疗2周后,考察CSJBT对AA大鼠足爪肿胀度、体质量及氧化应激相关指标的影响,并采用HE染色法观察其对AA大鼠关节组织病理学变化的影响。结果显示CSJBT可缓解AA大鼠的关节肿胀,增加其体质量,改善关节滑膜组织病理学变化,减少滑膜组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生以及血清中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和丙二醛(MDA)的水平,而升高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及谷胱甘肽(GSH)的水平。结果表明CSJBT对AA大鼠体内的氧化应激反应有较好的抑制作用。

电针足三里、关元对佐剂性关节炎大鼠IL-1,IL-2,IL-10,TNFα的影响

目的探讨足三里、关元对佐剂性关节炎大鼠白细胞介素（IL-1、IL-2、IL-10）、肿瘤坏死因子（TNFα）的影响。方法将60只健康SD大鼠（雄性4月龄）完全随机分为5组：空白组、模型组，足三里组、关元组、委中组，每组12只。除空白组和模型组外，其他各组分别电针刺激，隔天1次，32天后取大鼠血清，采用放射免疫法检测IL-1、IL-2、IL-10，TNFα值。结果①与模型组比较，足三里组、关元组、委中组IL-1，IL-2，TNFα降低，IL-IO升高，并有显著性差异（P〈0．01或0．05）。②与委中组比较，足三里组、关元组的各项指标均有显著性差异（P〈O．05）。结论电针足三里、关元能调节佐剂性关节炎大鼠的IL-1，IL-2，IL-10，TNFα值，其疗效强于委中。

蓬草除痹汤干预类风湿性关节炎大鼠骨吸收骨重建及细胞因子的表达

背景:实验研究显示,复方中药能有效下调RANKL或上调护骨素及调节RANKL/OPG轴而发挥中药抑制关节破坏和骨吸收的作用。目的:进一步验证中药蓬草除痹汤对类风湿性关节炎大鼠细胞因子及骨吸收和重建的影响。方法:取Wistar大鼠60只,随机分为6组,空白组、模型组、中药蓬草除痹汤高、中、低剂量组、雷公藤对照组。空白组不做处理,其余大鼠建立胶原诱导性关节炎大鼠模型,模型组不做处理,其他各组均为灌胃给药,1次/d,连续给药28d。结果与结论:与模型组比较,各治疗组可以显著抑制大鼠右足肿胀的程度(P<0.01或P<0.05)。各治疗组血清白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2水平均明显低于模型组(P<0.01),其中蓬草除痹汤中、高剂量组抑制作用明显优于雷公藤多甙片组(P<0.05)。各治疗组大鼠关节软骨下骨和骨小梁区核因子κB受体活化因子配体表达均低于模型组(P<0.01),护骨素关节软骨组织表达量均低于模型组(均P<0.01)。表明,蓬草除痹汤能有效改善胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症状,减轻骨侵蚀,其机制可能与下调血清中致炎因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α及前列腺素E2的水平,抑制类风湿性关节炎大鼠关节中核因子κB受体活化因子配体表达有关。

补肾祛痰方对肥胖肾虚型骨关节炎大鼠相关因子表达的影响

目的:通过荧光定量分析法研究补肾祛痰方对肥胖肾虚型骨关节炎(Osteoarthritis,OA)大鼠leptin、Ob-Rb、TNFα、INFγ、PGE_2、MMP-9、MMP-13与MMP-1的mRNA表达水平的影响。方法:大鼠分为正常组、模型组、补肾祛痰方低、中、高剂量组,硫酸氨基葡萄糖胶囊混悬液组。正常组与模型组ig生理盐水,各给药组按剂量ig给药,连续7d。末次给药后,处死大鼠,在无菌条件下获取大鼠双膝关节软骨碎片,经脱钙处理后,用荧光定量分析法检测大鼠膝关节软骨碎片中的leptin、Ob-Rb、TNFα、INFγ、PGE_2、MMP-9、MMP-13与MMP-1的mRNA水平。结果:与正常组比较,补肾祛痰方对肥胖肾虚型OA大鼠软骨组织中的Ob-Rb、TNFα、INFγ、PGE_2、MMP-9与MMP-1表达的影响均无统计学意义,而对肥胖肾虚型OA大鼠软骨组织中的leptin与MMP-13表达的影响有统计学意义;其中模型组中大鼠软骨组织中的leptin与MMP-13的mRNA表达水平都有明显增加(P<0.01);与模型组比较,补肾祛痰方组中、低剂量组与硫酸氨基葡萄糖胶囊混悬液组的LEP与MMP-13的mRNA表达水平均有降低(P<0.05),高剂量组中,LEP与MMP-13的mRNA表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论:本试验所建立的肥胖肾虚型OA大鼠模型稳定,为国内OA大鼠的研究提供新模型;补肾祛痰方可显著降低肥胖肾虚型OA大鼠膝关节中leptin与MMP-13的mRNA水平,为该方后期的临床研究提供理论依据。

逆灸对佐剂性关节炎大鼠保护效应的抗氧化机制研究

目的:探讨逆灸对完全弗氏佐剂关节炎(AA)大鼠的保护作用及抗氧化机制。方法:大鼠大椎穴逆灸(预先艾灸)。用AA大鼠模型,观察逆灸对AA大鼠早期和继发期原发关节组织病理学及下丘脑、血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果:与正常组比较,AA各组大鼠原发足踝关节滑膜炎症表现更为明显,早期重于继发期,继发期关节软骨呈现部分损坏。同时,AA各组大鼠血浆和下丘脑SOD活性下降(P<0.05或P<0.01);MDA含量增加(P<0.01)。与同期AA各组比较,逆灸可使原发足踝关节的组织病理学得到明显的改善,并使血浆、下丘脑SOD活性明显回升(P<0.05或P<0.01),血浆MDA明显下降(P<0.05),但仅使继发期AA大鼠下丘脑MDA有所下降(P<0.01),对早期下丘脑MDA影响不大(P>0.05)。逆灸还可使正常大鼠血浆SOD活性显著提高(P<0.05)。结论:逆灸对AA大鼠早期和继发期原发关节炎具有阻抑减轻的保护作用,这可能与逆灸调整早期及继发期血液及下丘脑自由基代谢失衡有关。

乌芍制剂对关节炎大鼠抗风湿机制的实验研究

目的 :探讨乌芍制剂抗风湿的作用机制。方法 :建立类风湿性关节炎 (RA)的动物模型 ,观察乌芍制剂对关节炎大鼠前列腺素 E2 (PGE2 )、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素 - 1β(IL- 1β)的影响及关节病理改变。结果 :乌芍制剂 (常规剂量和大剂量 )能改善关节炎大鼠的关节病理改变 ,对 PGE2 有明显抑制作用 (P=0 .0 0 9- 0 .0 0 0 ) ,但主要在致炎的 2周左右作用最为明显 ,而氨甲喋啶 (MTX)对 PGE2 无明显影响 (P=0 .1 0 4 ) ;乌芍制剂及 MTX能明显地抑制 TNFα和 IL- 1β的分泌 (P=0 .0 51 - 0 .0 0 0和 P=0 .0 1 1 - 0 .0 0 0 ) ,这种作用一直延续至致炎后 4周。结论 :乌芍制剂主要通过抑制前列腺素的产生和抑制细胞因子 TNFα和 IL-

不同浓度补肾通络方对膝骨关节炎大鼠OPG/RANKL系统mRNA的影响

目的:观察不同浓度补肾通络方对膝骨关节炎大鼠模型膝关节软骨组织OPG/RANKL系统的影响,分析本方对KOA骨破坏/重建的作用机制。方法:采用膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液法复制KOA模型,36只Wistar大鼠采用随机数字表法分为6组,分别为正常组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,观察不同浓度补肾通络方对KOA大鼠膝关节软骨组织OPG/RANKL系统mRNA表达水平的影响。结果:软骨OPG的mRNA水平是在模型组中含量最低(P<0.05),正常组中含量最高(P<0.05),中药中剂量组含量接近正常组,而在低剂量组中表达最少,且中剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RANKL的mRNA表达情况是模型组最高(P<0.05),正常组最低(P<0.05),不同浓度的中药对其影响不同,但中药高、中、低三个剂量组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。二者的比值变化趋势与OPG相类似,以模型组最小,正常组最大,随着中药浓度的升高,其比值逐渐增加,且中剂量组与高剂量组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾通络方能够提高KOA大鼠软骨OPG的mRNA表达水平,降低RANKL水平,具有双向调节OPG/RANKL轴的作用。既可促进成骨,又可抑制或延缓破骨,维持KOA大鼠模型中OB/OC活动的平衡,改善骨质代谢水平,缓解KOA病情进一步进展。

补肾活血方对去卵巢胶原诱导性关节炎大鼠垂体雌激素受体αmRNA表达的影响

背景:药理学研究显示,补肾活血方中的补肾中药如熟地、葛根等含有黄酮类物质,具有植物雌激素的作用特点,其中异黄酮具有雌激素受体调控剂的作用。目的:观察自拟补肾活血方对胶原诱导性关节炎大鼠血清雌二醇水平及垂体雌激素受体αmRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机分组设计、对照动物实验,于2006-05/2008-05在白求恩国际和平医院中心实验室完成。材料:健康Wistar雌性大鼠60只,随机分为2组:假手术组(n=10)和手术组(n=50)。手术组在卵巢切除术后2周复制胶原诱导性关节炎模型,选取关节炎指数≥5的大鼠再随机分为4组,每组10只:模型组、补肾活血方、甲氨蝶呤组和补肾活血方+甲氨蝶呤组。补肾活血方所用中药骨碎补、红花、熟地、仙灵脾、丹参、葛根等购自石家庄乐仁堂药店。常规煎煮,离心去杂,浓缩为1.3kg/L的水煎液,密封分装,4℃冷藏备用。方法:假手术组和模型组灌胃给予生理盐水,2mL/d;补肾活血组:补肾活血方煎液2mL/d灌胃;甲氨蝶呤组按2.6mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2mL,其余时间生理盐水灌胃2mL/d;补肾活血方+甲氨蝶呤组按甲氨蝶呤2.6mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2mL,另外补肾活血方煎液2mL/d;各组均持续6周。主要观察指标:腹主动脉采血用磁分离酶联免疫法检测血清雌二醇水平,同时取大鼠垂体采用反转录-聚合酶链反应检测大鼠垂体雌激素受体αmRNA的表达。结果:与模型组比较,甲氨蝶呤组雌激素受体αmRNA表达增加,但差异无显著性意义;补肾活血方+甲氨蝶呤组表达明显增加(P<0.01);补肾活血方表达量高于甲氨蝶呤组,低于补肾活血方+甲氨蝶呤组(P<0.05);补肾活血方、补肾活血方+甲氨蝶呤组与假手术组差异无显著性意义。与假手术组比较,模型组雌二醇水平明显降低。与模型组比较,3个治疗组雌二醇水平均有不同程度的提高,其中甲氨蝶呤组偏低,与模型组差异无显著性意义(P>0.05),补肾活血方+甲氨蝶呤组提高最明显,接近正常水平(P<0.01)。雌二醇与垂体雌激素受体αmRNA呈显著正相关(r=0.483,P<0.05)。结论:自拟补肾活血方具有拟雌激素样作用,可提高雌二醇水平,上调垂体雌激素受体αmRNA表达。