冷冻保存技术在蜜蜂精液保存中的研究与应用

蜜蜂精液冷冻保存对蜜蜂种质资源保护和品种改良具有重要意义,有利于蜜蜂育种中的后裔测定和基因组选择,加快育种进程。蜜蜂精子结构特殊,冷冻保存对其活力和受精率有较大影响,目前该技术尚未广泛应用。该文综述了蜜蜂精液冷冻保存的研究简况、蜜蜂精子的结构、冷冻损伤机理和精液冷冻技术的研究进展,以期为今后进一步优化改进蜜蜂精液冷冻保存技术提供参考。

水苏糖对秦川牛精液冷冻保存效果的影响

试验主要探究在牛精液冷冻稀释液中添加水苏糖对秦川牛精液冷冻保存效果的影响。添加不同浓度(0、20、40、60、80 mg/mL)水苏糖到牛精液冷冻基础稀释液中,检测冷冻-解冻后秦川牛精子运动性能、质膜完整性、顶体完整率、线粒体活性及抗氧化性相关指标。结果表明,与对照组相比,40 mg/mL水苏糖处理显著(P<0.05)提高冷冻-解冻后精子活力(43.83%)和顶体完整率(78.70%);质膜的完整性和线粒体活性在随着水苏糖浓度的增加显著提升,但质膜的完整性在不同水苏糖浓度之间差异不显著(P>0.05);同时,40 mg/mL水苏糖组显著提高GSH-Px酶和CAT酶的活性(P<0.05),并显著降低精子细胞中的MDA含量(P<0.05)。综上表明,40 mg/mL水苏糖处理显著提升冷冻-解冻后牛精子品质和抗氧化能力,对秦川牛的冷冻精液具有较好保存效果。

香菇多糖和冷冻平衡时间对猪精液冷冻保存效果的影响

为了研究香菇多糖和冷冻平衡时间对猪精液冷冻保存效果的影响,试验在公猪精液的冷冻稀释液中添加0.6 mg/mL的香菇多糖,冷冻平衡0,30,60,90,120,150 min后,分别采用观察法、异硫氰荧光棒标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色法、低渗肿胀法和吖啶橙染色法检测冻后猪精子的活率、顶体完整率、质膜完整率和DNA完整性。结果表明:冻后猪精子的活率和顶体完整率随着平衡时间的延长呈先升高后降低的趋势,在平衡90分钟时达到最高,分别为45.19%、55.74%;冻后猪精子的质膜完整率在平衡30,60,120,150 min之间差异不显著(P>0.05),在平衡90分钟时最高,达到51.47%,显著高于其他平衡时间质膜完整率(P<0.05);冻后猪精子DNA完整率在平衡30,60,90,120 min之间差别不显著(P>0.05),其中平衡90 min时最高,为44.56%。说明冷冻稀释液中添加0.6 mg/mL香菇多糖并平衡90 min能显著提高猪精液的冷冻保存效果。

聚蔗糖对猪精液冷冻保存效果的影响

为研究聚蔗糖对猪精液冷冻保存效果的影响,本实验分别在基础稀释液中添加不同浓度(0、10、20、30、40、50μg/mL)的聚蔗糖,检测冷冻后精子的活率、线粒体活性、质膜完整性、顶体完整性、DNA完整性,分析聚蔗糖对大白猪精液的冷冻保存效果。结果表明:与对照组相比,20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组冻后猪精子的活率显著提高;20、30、40μg/mL聚蔗糖组的线粒体活性显著提高;10、20、30、40μg/mL聚蔗糖组的质膜完整性显著提高;20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组的顶体完整性显著提高;10、20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组的DNA完整性显著提高。本实验结果说明在基础稀释液中添加30μg/mL的聚蔗糖能有效提高猪精液的冷冻保存效果。

黄芩多糖对长白猪精液冷冻保存效果的研究

本研究旨在探讨不同浓度的黄芩多糖添加方案对猪冷冻精液保存效果的影响。猪冷冻处理的精液共6组,分别为空白对照组和添加不同浓度黄芩多糖的试验组(在冷冻稀释液中分别添加0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g/L黄芩多糖),对冷冻-复苏的精液进行精子活力及相关运动参数、精子质膜完整性、顶体完整率等指标检测。结果表明:与空白对照组相比,添加0.4 g/L的黄芩多糖对冷冻-复苏后的精子直线速度、曲线速度、平均路径速度、顶体完整率、DNA完整率和精子抗氧化酶活性均有提高(P<0.05)。0.6 g/L黄芩多糖组精液冷冻复苏后精子的运动参数、顶体完整率及抗氧化酶活性与0.4 g/L黄芩多糖组无显著差异。此外,0.8 g/L黄岑多糖组的质膜完整率及直线性高于其他组(P<0.05)。综上所述,添加不同浓度的黄芩多糖均可提高猪冷冻精液品质,其中提高猪冷冻精液保存质量的最适添加量是0.4 g/L。

体细胞冷冻保存技术及其在动物遗传资源保护中的应用研究进展

体细胞冷冻保存技术是指将体细胞置于超低温条件下,新陈代谢几乎停止,从而长期保存体细胞的一种技术,该技术对于体细胞克隆、诱导性多能干细胞等具有重要意义,同时也是建立动物体细胞库的关键技术。本文综述了体细胞冷冻保存原理与冷冻损伤机制、新型冷冻保护剂、冷冻保存方法以及冷冻保存技术在动物遗传资源保护上的应用,以期为体细胞冷冻保存技术的研究与应用提供参考。

稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存

为建立稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子超低温冷冻保存技术,研究了稀有鮈鲫精子在不同种类和浓度稀释液与抗冻剂、降温程序中的冷冻保存效果,并开展授精实验,以期建立稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存方法。首先,比较了5种精子稀释液对稀有鮈鲫精子活力的影响,发现在BSMIS(Buffered Sperm Motility-inhibiting Solution)稀释液中,精子活力最高(95.55±2.35)%,精子曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)和平均路径速度(VAP)分别为(103.00±29.82)、(84.00±26.21)和(126.67±27.57)μm/s,寿命(37.67±0.58)s,与鲜精无显著差异(P>0.05);其次,筛选了不同浓度的6种渗透性抗冻剂,发现当BSMIS稀释液含有10%甲醇时,精子活力最高(22.33±2.08)%;再次,筛选和优化了不同浓度的非渗透性抗冻剂,发现当BSMIS稀释液含有8%甲醇和90 mmol/L葡萄糖时,精子活力最高(46.00±4.00)%,且VCL、VSL和VAP分别为(125.02±7.42)、(107.10±4.92)和(116.99±6.34)μm/s,寿命(32.67±2.52)s,其中VSL、VAP与鲜精相比无显著差异(P>0.05)。最后,比较了4种液氮蒸气中平衡高度和3个液氮蒸气中平衡时间对稀有鮈鲫精子冷冻保存效果的影响,发现液氮蒸气中平衡高度为3 cm且平衡时间为10min时,精子活力显著高于其他实验组。采用流式细胞仪检测冻精质膜完整性、线粒体活性和DNA完整性,分别为(55.78±2.13)%、(56.18±0.64)%和(55.07±2.00)%。进一步通过授精实验评估冻精质量,冻精受精率和孵化率分别为(87.31±1.38)%和(98.84±1.02)%,与鲜精无显著性差异(P>0.05)。上述结果表明,稀有鮈鲫精液以BSMIS稀释液、8%甲醇和90 mmol/L葡萄糖为抗冻保护液,液氮蒸气中3 cm处平衡10min后置于液氮的超低温冷冻保存效果最好。研究初步建立稀有鮈鲫精子超低温冷冻保存技术,为其种质资源的长期保存提供技术支撑。

几种抗氧化剂对马精液冷冻保存效果的影响

马精液的冷冻保存效果与其他家畜相差很大,这主要是由于马精液对冷冻过程更敏感,表现出更高的氧化应激与质膜损伤率,因此,需要找出更有效的方法来提高马精液冷冻保存效果。试验选取抗氧化剂谷胱甘肽(Gsh)、牛磺酸(Tau)、维生素C、蛋氨酸(Met)和原花青素(OPC),加入精液稀释液中,用精子分析仪测定冻融后马精液的总体活力(TM)、前进式活力(PM)、快速运动精子比例(RAP)、平均路径速度(VAP)和直线性(LIN),以评估不同抗氧化剂对马精液冷冻效果的影响;进一步试验选取牛磺酸为基础抗氧化剂,组合添加其他抗氧化剂后,评测抗氧化剂组合对马精子冻融后保存效果的影响;然后,选择在精液离心前、冷冻前和冷冻解冻后添加抗氧化剂,评估不同的抗氧化剂添加程序对马精液冷冻效果的影响。结果表明:单独添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂的试验组2,3,4,5马精子活力参数均有提高;不同抗氧化剂组合试验中,添加谷胱甘肽与蛋氨酸的试验组9的抗氧化效果最好,马精子活力参数指标均高于对照组,而添加牛磺酸、谷胱甘肽、蛋氨酸的试验组8的抗氧化指标多数偏低;不同时间添加抗氧化剂牛磺酸,离心前添加的试验组10的马精子活力参数最高,冷冻前添加的试验组11次之,二者均显著高于冷冻前后二次添加的试验组12(P<0.05)。说明在精液稀释液中添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂是有益的,但牛磺酸与其他抗氧化剂配合没有达到很好的抗氧化效果;抗氧化剂适宜在离心前或冷冻前添加,而冷冻前后二次添加抗氧化剂可能对精子有伤害。

猪胚胎冷冻保存的研究进展

胚胎冷冻保存对于胚胎的远距离移植和遗传资源的保护具有重要意义。然而,猪胚胎由于其胞质脂肪含量高,对低温敏感,增加了其保存难度。研究表明,通过降低脂质含量、优化培养基成分、保护细胞骨架以及恢复线粒体功能等方式,能够提高猪胚胎冷冻保存技术的效率,从而促进其广泛应用。因此,本文介绍了胚胎冷冻保存技术,总结了提高胚胎冷冻效率的多种方法和措施。同时,笔者团队将通过讨论猪胚胎的内在特性以及低温保存对转录组改变的影响,进一步关注猪胚胎低温保存的机制,从而更好地了解和推进猪胚胎低温保存的研究。

承德无角山羊耳成纤维细胞系的建立与冷冻保存研究

【目的】试验以甜菜碱作为冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行冷冻保存,旨在优化冷冻保护效果,以期在细胞水平上长期保存这一地方品种家畜的遗传资源。【方法】采用组织块培养法建立承德无角山羊耳成纤维细胞系,利用甜菜碱作为冷冻保护剂对其进行玻璃化冷冻,以不同浓度(5%、10%、15%、20%及25%)甜菜碱为试验组,以不同浓度(10%和20%)二甲基亚砜(DMSO)为对照组,对承德无角山羊耳成纤维细胞进行冷冻,复苏后检测细胞的存活率、增殖活力以及细胞中B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达量,同时评估甜菜碱的毒性。【结果】本研究建立的承德无角山羊耳成纤维细胞系生长态势良好,细胞纯度较高,细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性,生长曲线呈S型,达到了建立成纤维细胞系的要求;当甜菜碱浓度为15%时细胞存活率最高,达90.86%,极显著高于对照组(P<0.01),细胞增殖活力及Bcl-2/Bax基因表达量均显著高于对照组(P<0.05),且甜菜碱的毒性远低于传统冷冻保护剂DMSO(P<0.05)。【结论】试验成功以甜菜碱作为单独的冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行低温冷冻保存,从而保护了承德无角山羊的遗传资源。

Mito-TEMPO对猪精子冷冻保存效果的研究

【目的】筛选最佳的Mito-TEMPO浓度并探究其对猪精子冻后质量、抗氧化能力及线粒体功能的影响,为改善猪精子冷冻保存方法提供参考依据。【方法】在冷冻Ⅰ液中添加0.5、5.0、50.0和500.0μmol/L Mito-TEMPO,通过评估冷冻解冻后各组精子的动力学参数和活率,筛选出适用于猪精液冷冻保存的Mito-TEMPO浓度。检测冷冻解冻后猪精子的质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数(DFI)、活性氧(ROS)水平、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,以及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量。【结果】与新鲜组(F组)相比,冷冻解冻后精子的动力学参数和活率显著降低(P<0.05,下同),而添加Mito-TEMPO对冻后精子动力学参数和活率均有不同程度的改善,以50.0μmol/L Mito-TEMPO最有效。与F组相比,冻后猪精子的质膜和顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ~Ⅴ含量显著降低,CAT和T-SOD活性也显著降低,DFI、ROS水平、MDA含量显著升高。与冷冻对照组(C组)相比,50.0μmol/L Mito-TEMPO组(M组)中精子的质膜完整率、顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ含量显著升高,DFI、ROS水平、MDA含量显著降低,CAT和T-SOD活性显著提高。【结论】Mito-TEMPO对猪精子具有冷冻保护作用,且Mito-TEMPO的最佳浓度是50.0μmol/L,可通过提高冷冻解冻后猪精子的抗氧化能力和线粒体功能来改善精子质量。

离子交联海藻酸盐水凝胶在细胞培养和冷冻保存中的研究

近年来,水凝胶在细胞和类器官培养和冷冻保存方面表现出显著优势,尤其在细胞冷冻保存方面。在该研究中,选用喷雾法,以三价铁和钙为交联剂,采用低成本且易获得的喷枪制备了海藻酸钙和海藻酸铁水凝胶,并用该方法包封了HEK293T细胞和HepG2细胞,研究了不同交联液对包封细胞时细胞存活率的影响,发现交联时间越长对细胞损伤越大,与海藻酸钠溶液交联后发现凝胶后降低了细胞在交联液中的损伤。还制备了不同质量分数海藻酸钠溶液(1%、1.5%、3%)与CaCl_(2)(0.2 mol/L)交联的水凝胶,包封HEK293T细胞并培养7 d,发现细胞均可以很好地在水凝胶中培养。最后,研究了包封后细胞冷冻保存的存活率,结果表明:HEK293T细胞和HepG2细胞在两种体积分数的二甲基亚砜(DMSO)为保护剂的前提下存活率均显著高于未包封组,包封前HEK293T细胞的存活率为33.16%±2.70%(10%DMSO)和16.75%±2.3%(5%DMSO),而包封后的细胞存活率增至76.51%±5.32%(10%DMSO)和60.86%±2.41%(5%DMSO)。对于HepG2细胞,细胞存活率则从包封前的48.93%±3.06%(10%DMSO)和36.22%±2.54%(5%DMSO)增至包封后的78.79%±4.43%(10%DMSO)和64.64%±3.13%(5%DMSO)。在乙二醇(1 mol/L)+丙二醇(1.5 mol/L)+海藻糖(1 mol/L)作为保护剂的前提下,玻璃化保存的HEK293T细胞的存活率由包封前的33.5%±0.8%增至79%±3.76%。数据表明,冷冻保存后包封细胞的存活率明显高于未包封细胞,离子交联海藻酸盐水凝胶可以在细胞冷冻保存中保护细胞。

聚乙二醇与维生素E联用对沂蒙黑猪精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在研究聚乙二醇(PEG)与维生素E联用对沂蒙黑猪精液冷冻保存效果的影响。实验共分为6组,将基础稀释液以1:1的比例缓慢加入精液中,然后按照1:4的比例分别添加100 mg/L维生素E溶液(E100组)、300 mg/L维生素E溶液(E 300组)、100 mL/L PEG+100 mg/L维生素E溶液(P+E 100组)、100 mL/L PEG+300 mg/L维生素E溶液(P+E 300组)、100 mL/L PEG溶液(PEG组)和无处理冷冻保存液(对照组)。结果表明:与对照组相比,维生素E组和PEG+维生素E组精液解冻后其精子活力、顶体完整性、精子的抗氧化性及线粒体膜电位等指标均提高(P<0.05),PEG组以上指标均无显著差异;相同条件下,添加较高浓度的维生素E对精液冷冻保存质量的提升效果优于低浓度维生素E添加组(P<0.05);与单独添加维生素E相比,联合添加PEG与维生素E通过提高精子活力、质膜完整性、抗氧化能力和线粒体膜电位等指标进一步改善了冷冻精液解冻后的质量(P<0.05)。由此可见,联合添加PEG与维生素E可显著提高沂蒙黑猪精液的冷冻保存效果,原因可能是PEG促进了维生素E的溶解,提高了维生素E在猪精液冷冻保存液中的浓度所致。

黄芪多糖对绵羊精液冷冻保存的影响

【目的】试验旨在研究稀释液中添加黄芪多糖对杜泊种公羊精液冷冻保存效果的影响。【方法】使用假阴道法采集6只成年杜泊种公羊的精液,将活率>80%的精液混合,使用Tris-果糖-海藻糖-柠檬酸基础稀释液和降温稀释液对绵羊新鲜精液进行逐步稀释,低温缓慢降温到4℃后,分别于含黄芪多糖(0、0.01、0.05和0.1 mg/mL)的冷冻稀释液中进行平衡处理,将平衡后的精液分装于0.25 mL冻精细管中,置于液氮上方熏蒸后于液氮中冷冻保存。通过精子辅助分析系统检测冷冻-解冻后精子质量指标(活力和活率)和精子运动参数(平均路径速度、曲线运动速度、直线运动速度、摆动指数、线性度和直线运动指数),采用精子低渗肿胀试验检测质膜完整性,使用双荧光染色检测精子DNA完整性和线粒体活性。【结果】精液冷冻前后,绵羊精子活力、活率和运动能力均明显降低。0.01 mg/mL黄芪多糖添加组精液冷冻解冻后精子活力、活率、平均路径速度、线性度、摆动指数以及线粒体活性均显著高于其余各组(P<0.05);0.01 mg/mL黄芪多糖组精子曲线运动速度、直线运动速度、直线运动指数以及质膜完整性和DNA完整性均显著高于对照组和0.10 mg/mL黄芪多糖组(P<0.05),与0.05 mg/mL黄芪多糖组间差异不显著(P>0.05)。【结论】冷冻稀释液中添加0.01 mg/mL黄芪多糖能够保护绵羊精子结构,有效提高冷冻-解冻后绵羊精子活力、活率和运动能力,改善绵羊精液冷冻保存效果。

鸡血藤提取物对藏鸡精子低温及冷冻保存效果的研究

为探究鸡血藤提取物对藏鸡精液低温及冷冻保存的作用,本实验采集健康的25周龄藏鸡精液,在精液中添加浓度为0.01、0.03、0.05、0.1 mg/mL的鸡血藤提取物进行低温与冷冻保存,对照组用不含鸡血藤提取物的稀释液稀释,检测保存后精子的活率、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等指标。结果表明:在4℃保存条件下,与对照组相比,添加终浓度为0.01mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高保存24、48h时的精子活率、精液中SOD活力,显著降低精液中MDA含量。在精液冷冻保存中,与对照组相比,添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高解冻后精子活率、精液中SOD活力,而显著降低精液MDA含量。本实验结果证明在藏鸡精液低温或冷冻保存时添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可有效提升精子质量。

冷冻保存富血小板血浆对创伤修复的影响及体外机制研究

目的评估-80℃超低温冷冻保存后冻融的富血小板血浆(PRP)对伤口愈合相关细胞的影响,揭示超低温冻融的PRP在创伤修复中的机制,明确低温冷冻保存PRP对促进伤口愈合应用的可行性和有效性。方法使用未激活的新鲜PRP、钙离子激活的新鲜PRP和冻融后PRP分别与巨噬细胞、成纤维细胞和血管形成细胞共培养,测定比较巨噬细胞极化与炎症反应相关因子的表达及细胞迁移率和增殖率等多项指标,分析PRP对巨噬细胞极化、炎症及细胞增殖的影响。结果与对照组比较,超低温冻融后的PRP使巨噬细胞M1样极化基因iNOS表达降低(P<0.0001),NO分泌减少(P<0.001),尿素含量增加(P<0.0001),M1相关炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)降低(P<0.001),白细胞介素(IL)-1分泌降低(P<0.001),M2相关抗炎因子IL-10、IL-12分泌水平增加(P<0.01,P<0.05)。此外,冻融PRP共培养明显促进细胞迁移,提高了血管形成效率,高于新鲜PRP组(P<0.01),与激活PRP组效果相当。细胞活死染色和CCK-8增殖实验也显示与冻融PRP共培养的L929和HUVEC细胞增殖率均显著增加(P<0.01)。结论-80℃超低温冷冻保存后的PRP能够显著增强细胞的迁移、分化和增殖能力,同时抑制炎症因子产生,促进巨噬细胞的M2样极化。低温冷冻保存可被视为一种有效的PRP保存方法。

鸡皮肤组织的冷冻保存以及复苏后成纤维细胞的培养

试验旨在探究程序化低温保存时两种渗透性冷冻保护剂对鸡皮肤组织保存的影响。从孵化9 d的鸡胚中分离皮肤组织,剪碎为1 mm^(3)大小的组织块,对组织块冷冻保存后复苏培养并统计复苏率,通过CCK8试验、EDU试验检测冻存复苏后细胞的增殖能力、PI染色检测细胞周期分布、JC-1检测线粒体膜电位检测,qRT-PCR检测标记基因的差异表达。结果显示:使用15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的组织块复苏效率分别为(95.8±1.4)%和(92.5±2.5)%,显著高于其他冷冻保护剂组合(P<0.05)。CCK8和EDU试验中,15%的二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的细胞与对照组相比细胞增殖速度无显著差异(P>0.05);与对照组相比,15%二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的成纤维细胞G1、G2、S期都未有显著差异(P>0.05);线粒体膜电位检测显示20%甘油保存的组织块培养的成纤维细胞其膜电位与对照组相比出现了显著下降(P<0.05),15%二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的成纤维细胞标记基因的表达水平与对照组相比无显著差异(P>0.05)。结果表明,15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的鸡皮肤组织块复苏效率无显著差异,但是15%二甲基亚砜的冻存效果要优于20%甘油。

猪精液冷冻保存技术研究进展

猪精液冷冻保存技术对生猪产业发展有重要意义,有利于提高优秀种公猪的利用率以及实现优秀种质资源的长久保存,促进种猪场降本增效。目前中国猪精液冷冻保存技术取得了一系列进步,国内应用猪冻精配种的受胎率以及产活仔数基本达到了国外冻精配种水平。但是,由于冻融过程会对猪精子造成一定程度的损伤,精子的受精能力下降,受精窗口期缩短,国内、外应用冻精配种的生产成绩仍与常温保存精液存在不小差距。文章回顾了国内、外猪精液冷冻保存技术的发展历程,介绍了猪精液和精子的基本特点,简述了降温过程造成精子损伤的机理,并从冷冻稀释液成分这一角度分析介绍了减小冷冻损伤的机理与方法,如添加冷冻保护剂减少细胞内外冰晶形成、维持细胞内外渗透压以及稳定细胞膜结构;添加抗菌物质抑制解冻后细菌的快速繁殖;添加抗氧化物降低活性氧水平,缓解氧化应激,保护精子结构和受精能力等,最后对猪精液冷冻保存技术未来的发展方向进行展望,以期为相关研究以及实际应用提供参考。

3种新型抗冻材料应用于配子及胚胎冷冻保存的研究进展

配子及胚胎的冷冻保存是将配子及胚胎在超低温条件下冷冻,达到可以长期保存的目的。冷冻保存技术在种质资源保护、保存和改良动物基因等方面发挥重要作用。由于传统冷冻保护剂具有毒性,目前研究人员正致力于开发毒性低、抗冻效果显著的新型抗冻材料,如抗冻蛋白、纳米材料和聚合物。本文简述了冷冻保存技术的原理及存在问题,综述了3种新型抗冻材料的抗冻机制及应用进展,并从材料工程的角度为冷冻保存配子及胚胎提供一个新的视角,为更多新型材料的开发拓展新思路。

台湾泥鳅精子超低温冷冻保存技术研究

为建立台湾泥鳅精子超低温冷冻保存方法,采用显微镜观察精子活率,流式细胞术检测质膜完整性,研究4种稀释液[Hank′s平衡盐溶液(HBSS)、D-15、D-17、鱼用任氏液],5种抗冻剂(甲醇、乙二醇、丙二醇、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺)在4个体积分数(2.5%、5.0%、7.5%、10.0%),不同平衡时间、熏蒸高度和时间、解冻温度和时间对台湾泥鳅精子超低温冷冻保存的影响。试验结果显示:以Hank′s平衡盐溶液为稀释液的精子活率最高,为(45.28±5.75)%;以5%甲醇作为抗冻剂的台湾泥鳅精子活率和质膜完整比例最高,分别为(51.25±5.03)%和(81.70±2.35)%;最佳平衡时间为30 min,最佳熏蒸高度和时间为9 cm和10 min,最后将冻精在37℃水浴锅中解冻10 s的解冻效果更佳。用冷冻复苏的台湾泥鳅精子进行人工授精,受精率达(68.94±6.22)%。综上,用Hank′s平衡盐溶液稀释台湾泥鳅鲜精,与甲醇1∶1混合至终体积分数为5%,放于4℃平衡30 min,而后装入麦管,在液氮面上方9 cm处熏蒸10 min后投入液氮保存可作为台湾泥鳅精子超低温冷冻的保存方法,解冻时在37℃水浴锅中解冻10 s,可获得更好的解冻效果。