花生冠腐病病原菌的分离鉴定及生物学特性研究

为减少冠腐病对花生生产带来的损失,从安徽省不同花生产区采集冠腐病病株分离病原菌,对其进行致病性测定、形态鉴定和分子生物学鉴定,并对其生物学特征进行研究,室内筛选抑菌效果较好的化学药剂。结果表明,引起安徽省花生冠腐病的病原菌为黑曲霉(Aspergillus niger),该菌的致死温度为59℃(15 min),在pH 7的PDA培养基上生长最快。药剂筛选结果表明,50%多菌灵可湿性粉剂和43%戊唑醇悬浮剂效果最好;75%百菌清可湿性粉剂次之;其次是70%代森锰锌可湿性粉剂;3%甲霜恶霉灵水剂与对照无明显差异。

内蒙古地区自然发酵乳中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株筛选

鲜乳及其发酵乳是牧民日常饮食中主要的营养物来源之一,其中含有丰富的乳酸菌资源。为了从纯培养角度了解不同乳源中乳酸菌的菌群结构并获取其中宝贵的乳酸菌菌种,该研究采用纯培养技术从内蒙古牧区21份样品中分离得到411株乳酸菌,包括10个属,21个种。其中乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分离株的数量最多,其次为瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)和马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)。优势菌群分析发现不同乳源的菌群结构差异较大,酸马乳的菌群多样性最丰富,马乳酒样乳杆菌是其优势菌种之一。根据酸马乳低pH值、低酒精含量的特点,从93株马乳酒样乳杆菌中筛选出4株在低pH值(pH 3.0)和6%(体积分数)乙醇环境下耐受性较好的菌株,然后进一步研究其人工胃肠液耐受性、乙醇耐受性和对3种食品中常见致病菌的抑菌能力。最终筛选出2株马乳酒样乳杆菌分别为:IMAU12331与IMAU12208,具有较好的耐受性和抑菌特性,可作为潜在益生菌开发利用,具有较高的潜在应用价值。

兔源肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏菌的分离鉴定及小鼠感染试验

为确定某规模化兔场仔兔呼吸道感染合并腹泻引起死亡的原因,无菌采集病兔气管、肺、肝组织进行病毒和细菌检测。通过细菌分离培养、革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA序列同源性比对分析,确定分离菌株种属。通过药物敏感性试验、耐药基因检测及动物回归对分离菌株的耐药性和致病性进行分析。结果显示,病毒检测结果均为阴性;从同一只仔兔的肺脏、气管中分离得到2株肺炎克雷伯氏菌,分别将其命名为KF1、KQ2,从肝脏中分离得到1株大肠埃希氏菌并将其命名为EG3。药敏试验结果显示,菌株KF1、KQ2和EG3均对黏菌素和氨苄青霉素钠耐药,对阿米卡星和氟苯尼考敏感。3株菌均检出耐药基因mcr-1和bla TEM。动物致病性试验显示,KF1组小鼠5 h后死亡50%,24 h全部死亡;混合组小鼠12 h后全部死亡;KQ2和EG3组48 h全部死亡。以上研究表明,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌的混合感染是引起仔兔死亡的主要原因,3株分离株单独及混合感染均能引起试验小鼠死亡。

珲春敬信湿地候鸟白额雁恶臭假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

[目的]了解中、俄、朝边境地区珲春敬信湿地候鸟携带病原菌情况,为候鸟疫病防控提供科学依据。[方法]本研究在珲春敬信湿地采集155份候鸟白额雁新鲜粪便样本,用PBS进行稀释,接种到LB固体培养基和血液琼脂培养基上培养,挑取单个菌落进行分离纯化后,采用革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增及测序等方法进行细菌分离鉴定,并对分离菌进行耐药性分析。[结果]分离菌为革兰阴性菌,呈紫红色短杆状。生化鉴定结果显示,分离菌尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、半固体等呈阳性;硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐等呈阴性。PCR扩增出大小为1 500 bp的单一条带,扩增序列与NCBI中恶臭假单胞菌MZ836867序列相似性最高,为99.6%。系统进化树显示,分离菌与恶臭假单胞菌MZ836867属于同一个分支,说明分离菌为恶臭假单胞菌。药敏试验结果显示,分离菌对氯霉素、复方新诺明、诺氟沙星等13种药物敏感;对多黏菌素B、克林霉素、亚胺培南等9种药物中介;对万古霉素、氟苯尼考、林可霉素、苯唑西林等8种药物耐药,其中对林可霉素、苯唑西林2种药物耐药性最强。[结论]本研究从珲春敬信湿地候鸟白额雁粪便中成功分离出具有耐药性的恶臭假单胞菌,为珲春敬信湿地候鸟白额雁肠道菌群的深入研究提供了参考。

鹿源藿香假丝酵母菌DZ018的分离鉴定及其体外益生特性研究

[目的]从梅花鹿瘤胃液中分离和鉴定出具有益生菌潜能的酵母菌,并对其体外益生功能进行评价,为其在动物营养与饲料中应用以及鹿源益生菌制剂的研制提供参考。[方法]采用YPD固体培养基从健康雄性梅花鹿瘤胃液中分离出酵母菌菌株,对分离株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定,测定其生长性能及产酸性能,并绘制生长曲线;探究其在不同pH、不同浓度胆盐及人工胃液和人工肠液中的耐受性;采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株的药物敏感性,并对菌株进行小鼠安全性试验。[结果]从梅花鹿瘤胃液中分离到1株优势酵母菌,并将其命名为DZ018,其菌落菌体形态特征、生理生化特性和ITS rRNA序列均与藿香假丝酵母菌(Candida rugosa)的特征相符。生长性能测定结果显示,分离株在YPD液体培养基中生长迅速,培养2 h时进入对数生长期,且具有一定的产酸能力。耐受性评价结果显示,分离株对低pH有较好的耐受性,在pH为2.5~6.5范围内均能正常生长,最适生长pH为4.5;对胆盐耐受性较强,在0.3%和1.0%胆盐中存活率均>100%,在2.0%胆盐中存活率可达74.27%;在人工胃液和人工肠液中的存活率分别为31.64%和64.80%。药敏试验结果显示,分离株对氟胞嘧啶、氟康唑和酮康唑表现敏感,对两性霉素B耐药。小鼠安全性试验结果显示,分离株对小鼠生长性能和脏器系数均无不良影响。[结论]本研究从梅花鹿瘤胃液中分离获得1株具有一定益生潜力的藿香假丝酵母菌DZ018,其耐受性强、安全性好。试验结果为鹿源益生菌在鹿科动物生产中的应用及微生态制剂的开发提供参考和理论依据。

月季白粉病菌重寄生菌的分离鉴定

以患有白粉病的月季叶片为试材,采用组织分离法分离重寄生真菌,并依据回接验证确定其寄生能力,结合形态学特征及rDNA-ITS序列鉴定重寄生菌的种类,以期为该病的防控提供参考依据。结果表明:从具有典型症状的病叶上分离得到13株重寄生真菌,寄生能力强的代表性菌株KMR3和KMR12寄生闭囊壳后,白粉孢子胞壁破碎,内含物释出。菌株KMR3菌落初期为白色,后期逐渐发展为棕褐色菌落,分生孢子为棕褐色,卵形、长棒状、椭圆形或倒梨形,ITS序列与Alternaria alternata(MT482506.1)、Alternaria arborescens(PP097783.1)等均有99%的相似性,在系统进化树中,菌株KMR3的序列和Alternaria alternata(MT482506.1)、Alternaria arborescens(PP097783.1)的距离最近;菌株KMR12菌落初期为白色,后期逐渐发展为棕褐色或浅黄色菌落,分生孢子呈棕褐色或黑褐色,椭圆形、卵形、棒状或倒梨形,ITS序列与Alternaria angusstiovoidea(MK910070.1)、Alternaria longipes(MK675101.1)等均有100%的相似性,在系统进化树中,菌株KMR12的序列和Alternaria angusstiovoidea(MK910070.1)、Alternaria longipes(MK675101.1)的距离最近。利用形态特征和ITS序列分析,鉴定出菌株KMR3和KMR12为链格孢属。

谱系1和8重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定与遗传进化分析

2023年从广西疑似发生猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场的病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,将其命名为GXWZ20230831。采用RT-PCR扩增其全基因组序列并测序,分析遗传进化特点。结果显示,GXWZ20230831能够在Marc-145细胞上增殖,且产生明显的细胞病变;该毒株全基因组长度为15019个核苷酸(nt),与基因2型PRRSV谱系1 NADC30-like毒株的同源性最高,为94.0%,与基因1型PRRSV代表毒株Lelystad virus同源性最低,仅为60.0%;通过Nsp2氨基酸序列比对,结果发现GXWZ20230831存在NADC30-like典型的131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失模式;与美洲型代表株VR2332相比,GXWZ20230831的GP5蛋白在非中和抗原表位发生了V27A、V185A以及R191K 3处突变,同时在GP5蛋白中存在4个潜在的N-糖基化位点;构建的全基因组序列、nsp2基因、ORF5基因遗传进化树均显示该毒株处于谱系1的分支;重组分析表明,GXWZ20230831是1株以谱系1经典毒株NADC30为骨架,谱系8毒株提供重组片段的重组毒株,重组断点位于基因组的nsp1(458-1821 nt)和Nsp4(5405-8179 nt)中。研究结果可为掌握广西地区的PRRSV遗传变异规律提供参考,为制定防控措施提供科学依据。

昭苏地区马源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解新疆昭苏地区患呼吸道疾病马携带的细菌性病原,该研究从昭苏某规模化马场采集呼吸道症状鼻拭子样品11份,进行细菌的分离纯化,通过革兰氏染色、形态特征观察、生化试验、PCR鉴定,并进行药敏试验,共分离出7株金黄色葡萄球菌。采用K-B纸片法对7株金黄色葡萄球菌进行药物敏感性检测,结果显示7株金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类和糖肽类药物耐药,对红霉素表现为中介,对喹诺酮和四环素类药物敏感。

一株鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药物筛选

为探究引起父母代种鸡腿部瘫痪、关节肿胀的病原并制定有效的治疗方案,本研究收集山东省某肉种鸡场表现瘸腿、瘫痪症状的病鸡,采用改良Frey氏培养基成功分离与纯化了滑液囊支原体(Mycoplasma Synoviae,MS)。随后,利用PCR技术扩增了MS 16S rRNA基因序列,并进行序列比对。同时采用MS野毒株PCR检测试剂盒对分离菌株进行鉴定,并测定不同抗生素对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)和药物的临床应用评估。结果显示,从山东省某肉种鸡场具有瘸腿、瘫痪症状的患病鸡中成功分离并鉴定出一株MS,命名为MS-17103株。该菌株具有典型的支原体菌落形态,经PCR鉴定为MS野毒株阳性。药敏试验结果显示,MS-17103株对盐酸沃尼妙林(MIC为0.00076mg/L)和泰万菌素(MIC为0.00153mg/L)敏感。在感染过MS的种鸡场进行药物应用,结果显示两种药物均能有效降低鸡群感染MS的阳性率。本研究结果为后期该病的治疗方案提供了重要的参考依据。

山东鸭源粪肠球菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为探究引起山东省某规模肉鸭养殖场雏鸭死亡的原因,本试验在病死鸭病变肝脏组织中分离到疑似粪肠球菌病原菌。通过细菌分离培养、形态观察、生化试验鉴定、16S rRNA序列分析鉴定病原菌,对分离菌进行抗菌药物敏感性试验,以便精准用药防控。结果显示:分离菌为粪肠球菌,且该菌株多重耐药性较强,对阿莫西林、安普霉素敏感,对头孢噻肟、氟苯尼考、卡那霉素、恩诺沙星、氨苄西林、多黏菌素耐药。本研究为鸭源粪肠球菌的临床防控提供了参考依据。

副鸡禽杆菌分离鉴定及饮水免疫攻菌保护研究

为研究能针对性保护鸡群,且使用方便的鸡传染性鼻炎疫苗,本研究从江苏某养殖集团发病鸡群中分离得到一株致病力较强的副鸡禽杆菌,命名为HS株。对HS株进行了16s RNA的测序鉴定,并进行动物回归试验,确定最小致病力剂量。根据测序鉴定结果。

鸡源产气荚膜梭菌分离鉴定和药敏试验及枯草芽孢杆菌对其抑制作用

为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌BSGZ7对产气荚膜梭菌的抑菌效果。结果显示,从肠道样品中分离到7株A型和2株G型产气荚膜梭菌,9株分离菌和1株标准菌均对阿莫西林、青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、头孢氨苄、氟苯尼考、头孢曲松具有较高的敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素、链霉素、磺胺异恶唑、林可霉素、红霉素、多黏菌素B等抗菌药物普遍耐药,枯草芽孢杆菌BSGZ7发酵液均对10株菌有抑菌效果。结果表明枯草芽孢杆菌对产气荚膜梭菌具有一定抑菌作用,有望成为防控鸡坏死性肠炎的新型绿色安全的抗菌制剂,同时也为临床上鸡坏死性肠炎的防控和治疗提供了参考依据。

鸡源暹罗芽孢杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

[目的]从鸡肠道内筛选出兼具高产酶活性和抑菌特性的芽孢杆菌,并测定其益生特性,为家禽微生态制剂的开发提供优质原籍菌株,以促进家禽产业的健康发展。[方法]试验以白羽肉鸡为对象,从其肠道内容物及黏膜中筛选菌株,通过形态学观察、产酶活性和抑菌特性测定筛选出优质芽孢杆菌;进一步测定分离株的菌落菌体形态、体外生长特性、耐受性、肠道黏附性和药物敏感性,评估其基本益生特性;利用生理生化和分子生物学试验鉴定分离株的种属类型。[结果]本试验分离纯化获得9株菌株,分别命名为P1~P9。形态学鉴定结果显示,7株为革兰阳性菌,2株为革兰阴性菌。通过产酶活性和抑菌特性筛选出最优分离株P2,其蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、脂肪酶的产酶透明圈直径分别为46.86、41.52、20.70、14.47 mm,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门菌的抑菌圈直径分别为14.77、24.05、19.19 mm。分离株P2的菌落形态为圆形、乳白色,表面有褶皱凸起,不透明,具有黏稠感,为短杆状菌,单个菌体大小为(1.46±0.07)μm×(0.81±0.03)μm。分离株P2的生长性能良好,对强酸和强胆盐具有很强的耐受性,具有一定的肠道黏附性,其黏附能力为146.52 CFU/cell。药敏试验结果显示,分离株P2对庆大霉素、卡那霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、链霉素、氯霉素、红霉素表现敏感。生理生化和分子生物学鉴定结果显示,分离株P2为暹罗芽孢杆菌,并将其命名为CPU-B1。[结论]本研究筛选得到1株鸡源暹罗芽孢杆菌CPU-B1,该分离株产酶活性和抑菌特性强,具有优异的生长特性、耐受性、肠道黏附性,可进一步开发为微生态制剂应用于家禽产业中。

阿拉善双峰驼脓肿病病原分离鉴定与药敏试验

近年来,双峰驼脓肿病呈现高发趋势,严重威胁骆驼养殖产业的健康发展。论文基于阿拉善双峰驼脓肿病自然病例,采集其脓液与痂皮进行病原分离纯化,采用形态学和扫描电镜观察分离菌形态特征,扩增分离菌16S rDNA进行碱基序列比较分析,并结合CLSI标准进行药物敏感性试验。结果显示,从病料样品中分离得到3种病原菌,经形态学和分子生物学鉴定为金黄色葡萄球菌、松鼠葡萄球菌和奇异变形杆菌。药物敏感性试验表明,16种抗菌药物中环丙沙星和左氧氟沙星对3种病原菌均表现敏感,对指导临床兽医合理用药具有重要实用价值。

广东罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及生物学特性分析

本研究旨在明确当前罗非鱼无乳链球菌流行状况和生物学特性,为鱼源无乳链球菌病防控提供新的数据。本研究于2019—2020年,从广东罗非鱼主养区茂名、湛江地区采集病样进行无乳链球菌的分离鉴定。用PCR方法对分离株血清型及4个主要毒力基因进行检测,通过纸片法对分离菌株进行31种抗菌药物药敏试验和多重耐药研究,利用斑马鱼模型进行了致病性试验。结果显示:从261份病样中分离到35株无乳链球菌;血清型检测表明无乳链球菌分离株的血清型均为Ia型;主要毒力基因的检测证明,cylE、sodA、gapC基因在所有鱼源分离株及人源、牛源和鱼源参考株中检出率均为100%,而scpB只在人源参考菌株中检出;药敏试验结果发现,无乳链球菌分离株对19种抗菌药敏感率为90%以上,对6种抗菌药耐药率为50%以上,分离株的耐药基因型和表型部分一致,无乳链球菌分离株均多重耐药,其中5重及以上耐药的菌株为27株,占总菌株数的77.1%;斑马鱼致病试验表明,无乳链球菌分离株可导致斑马鱼不同程度的发病死亡。本研究明确了当前罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因、耐药特性和致病性,为广东乃至全国罗非鱼无乳链球菌病的防控提供了参考。

橄榄仁抗氧化肽的分离鉴定及分子对接

该研究利用酶解法结合凝胶色谱柱从橄榄仁中分离纯化得到6个抗氧化肽,采用分子对接模拟6种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的结合机制。采用酶解法从橄榄仁中提取抗氧化活性肽,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,从6种商用酶中筛选出最适蛋白酶为木瓜蛋白酶,以底物浓度、酶底比、酶解时间、温度进行单因素试验,选取影响酶解反应的3个因素(酶底比>温度>时间)进行响应面法优化得出最佳工艺条件为底物质量浓度50 g/L、酶底比为3.3%(质量分数)、温度20℃、时间88 min。对最优条件下的粗肽液进行SephadexG-25和SephadexG-15分离纯化得到6个具有良好活性的抗氧化肽,分别为WLSF、TSVLR、LVYLVR、AGGKPFQ、YYPFKGFA、AFNVDERLAR。TSVLR显示出最高的DPPH自由基清除活性81.07%和羟自由基清除能力42.48%。分子对接研究表明,纯化的肽通过疏水效应和氢键与抗氧化相关的关键蛋白SOD有效结合。结果表明,橄榄仁可作为天然食物来源制取功能性食品的一个新的探究方向。

鸡源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定、药敏试验与毒力基因检测

鼠伤寒沙门菌是一种重要的人兽共患病病原,不仅影响养禽业的健康发展,还对禽类产品安全构成严重威胁,本研究主要是对鸡源鼠伤寒沙门菌进行分离鉴定、药敏试验和毒力基因的测定。首先采集病死产蛋鸡的脾脏组织进行分离培养和染色镜检,以及16S rRNA基因的PCR鉴定,然后用圆纸片扩散法测定分离株对26种药物的敏感性,用PCR方法检测分离株的28个毒力基因。结果显示,分离株在普通营养琼脂和血琼脂培养基上形成灰白色菌落,在麦康凯培养基上为无色菌落,在BS培养基上为黑色带金属光泽的菌落;染色镜检结果显示分离株为革兰阴性的红色短杆菌;16S rRNA基因测序结果显示,分离株与鼠伤寒沙门菌OLF-FSR1-WB-Sparrow-ST-87的相似性为99.86%,与10个鼠伤寒沙门菌参考菌株的同源性介于99.5%~100%;药敏试验结果表明,分离株对环丙沙星最为敏感,抑菌圈直径达30 mm;除sseC基因未检测出外,其余27个毒力基因的测序结果与参考菌株对应毒力基因的相似性介于98.58%~100%。本研究成功从病死产蛋鸡分离鉴定出一株鼠伤寒沙门菌菌株FY2021,为深入研究鼠伤寒沙门菌的致病机理和禽源沙门菌病的防控提供参考依据。

患病异育银鲫中嗜冷黄杆菌的分离鉴定及组织病理学观察

为确定越冬期内江苏多地异育银鲫暴发性死亡的原因,本研究利用高通量测序比较了健康样品和患病样品的微生物群落多样性和结构组成的差异,分析了异育银鲫病害暴发过程中的细菌类型及特性。结果显示,在属水平上,患病样品中黄杆菌属丰度最高。在种水平上,患病样品中嗜冷黄杆菌的丰度最高,分别达到63.01%和61.31%,显著高于健康组的1.55%。根据微生物群落特征分析结果,从患病样品体表的病灶处分离出优势病原菌NJ01,通过细菌形态学、生理生化分析、16S rDNA序列比对确定NJ01菌株为嗜冷黄杆菌。人工感染NJ01菌株14 d后,1.7×10^(6)和1.7×10^(7) CFU/mL两组的死亡率达到100%,感染症状和自然发病症状一致。组织病理学观察发现,病鱼的肌细胞坏死,间质中充满了淋巴细胞;肝脏中细胞溶解坏死,细胞核消融;在脾脏中发现脾细胞散在坏死,伴随着充血的症状;肾小管上皮脱落,肾间质存在大量淋巴细胞。药物敏感实验结果显示,NJ01菌株对头孢西叮、头孢哌酮、庆大霉素和克拉霉素等敏感。研究表明,优势菌NJ01是致病菌,可通过扰乱机体正常的免疫和代谢功能导致疾病的发生。本研究首次报道了嗜冷黄杆菌在异育银鲫中的致病性,这将为大宗淡水鱼“越冬综合征”的药物防治及其致病机理研究提供参考依据。

云南不同蚕区僵蚕致病菌株的分离鉴定及致病力差异研究

[目的]了解云南省不同蚕区家蚕僵蚕病原的多样性及不同来源白僵菌菌株对家蚕的致病力差异。[方法]从云南省9个县(市)收集僵蚕样品,分离纯化获得病原菌,通过观察菌株的形态特征、产孢结构,并结合菌株核糖体rDNA-ITS序列的系统发育分析,确认病原种类。同时测定分析不同地理来源以及不同孢子浓度的球孢白僵菌菌株对家蚕致病力的影响。[结果]形态学和ITS序列分析发现,云南蚕区僵病病原菌属于白僵菌属(Beauveria)、虫草菌属(Cordyceps)和绿僵菌属(Metarhizium),其中以球孢白僵菌(Beauveria bassiana)和莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)为主要病原,分别占57.58%和30.30%。不同地理来源的球孢白僵菌株对家蚕幼虫的致病力存在一定差异,供试菌株侵染后,家蚕的僵蚕率在72.5%~95.0%,半致死时间(LT50)在5.093~7.133 d,其中LL1-1菌株的僵蚕率最高(95.0%),半致死时间最短(5.093 d),致病力最强;CB1-2菌株的僵蚕率较低(75.0%),半致死时间最长(7.133 d),致病力最弱。随着接种浓度的增加,病原的致病力变强,家蚕的僵蚕率也升高。[结论]云南省蚕区家蚕僵病病原种类呈多样性,球孢白僵菌和莱氏绿僵菌为主要病原菌,不同来源的白僵菌株对家蚕的致病力存在差异,本研究结果可为家蚕僵病的防治和僵蚕的生产提供参考依据。

两株马立克病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析

为了解国内鸡群马立克病毒(MDV)流行毒株的分子特征,采用细胞培养法对马立克病疑似病鸡抗凝血进行MDV分离,间接荧光法鉴定MDV血清型,PCR扩增分离病毒的meq和pp38两个主要致病基因,所得序列与MDV参考毒株的序列进行比对分析。结果显示,共分离鉴定出2株MDV I型毒株,分别命名为JS0316和JS0424。meq基因编码的氨基酸序列结果显示,2个MDV分离株缺乏弱毒疫苗株的特征(A71S、P194-),具有MDV强毒分离株的分子特征(D80Y、V115A、T139A、P176R和P217A)。同时,JS0316 Meq蛋白出现Q93R和V123A突变,pp38蛋白出现L98I和F240S突变,而JS0424 Meq蛋白出现P217T突变,pp38蛋白出现W67G和V210A突变。因此,2株MDV均具有国内流行强毒株的分子特征,同时存在新的基因突变。