基于表面修饰的高灵敏度免疫分析方法检测牛奶中的卡那霉素

目的为了提高卡那霉素的检测灵敏度,将卡那霉素分子直接共价固化在酶标板上,由此开发一种直接免疫分析方法检测卡那霉素。方法本研究采用戊二醛以及聚乙二胺(polyamidoamine,PAMAM)-戊二醛两种方式,对酶标板进行表面修饰,同时通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)比较两种方式的差异,并对牛奶样本中卡那霉素进行检测。结果基于戊二醛表面修饰的ELISA检出限为0.219 ng/mL,线性范围为2.251~87.791 ng/mL;基于PAMAM-戊二醛表面修饰的ELISA检出限为0.119 ng/mL,线性范围为1.348~20.414 ng/mL。此两种方法比常规ELISA方法灵敏度分别提高5倍和10倍。将基于PAMAM-戊二醛表面修饰的ELISA应用于牛奶样本的检测,发现卡那霉素的检出率为12.5%,最高检出质量浓度为1.12 ng/mL。结论本研究采用的戊二醛以及PAMAM-戊二醛两种方式修饰酶标板后大大提高了免疫检测的灵敏度,为食品中小分子污染物的快速筛查提供了新的思路。

分光光度法测定卡那霉素的研究

在ｐＨ６．５～８．８的水溶液中，作为氨基糖甙类广谱抗生素的卡那霉素与Ｃｕ２＋离子迅速反应形成稳定的２∶１带正电荷络合物，其λｍａｘ为２５６ｎｍ，其表观ε为１．８１×１０３Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１。卡那霉素含量在１．３０～１２０ｍｇ／Ｌ范围内遵从比耳定律，并探讨了络合物的结构。该方法用于注射用硫酸卡那霉素样品中卡那霉素含量的测定，结果与常规的抗生素微生物法相比，具有简便和快速的优点。

高效液相色谱法-蒸发光散射检测器结合化学计量学方法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素A

将高效液相色谱法-蒸发光散射检测器和化学计量学方法结合起来,建立了一种新的测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素A含量的方法。考察了流动相的种类、比例以及检测器的条件等对测定的影响。实验确定的色谱条件为:C_(18)色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇:水(50:50);蒸发光散射检测器;漂移管温度50℃;增益50。实验结果表明,该方法的RSD为6.5%。根据经化学计量学方法处理后的图谱计算样品中卡那霉素A的含量为0.08g/mL。

氧化石墨烯在乳制品卡那霉素检测中的应用

持续创新和优化卡那霉素检测技术方式,有效管控乳制品抗生素污染状况,已成为提高乳制品食品安全的必然趋势。本研究利用石墨烯的生物活性、理化性质,通过制备氧化石墨烯、氧化石墨烯-碳纳米管“GO/CNT”复合材料,组装还原石墨烯/碳纳米管-纳米金(rGO/CNT-AuNPs)复合纳米材料修饰工作电极,设计出一种经济、高选择性和特异性的适配体传感器,用以快速检测乳制品中的卡那霉素。试验证明,该传感器拥有良好的特异性、灵敏度及稳定性,可以精准显示乳制品中浓度较低的卡那霉素。

复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定

目的 :解决复方卡那霉素眼药水中卡那霉素和地塞米松的含量测定问题。方法 :在复方卡那霉素眼药水中加入衍生试剂 ,使卡那霉素形成二氢吡啶衍生物 ,利用其在紫外有吸收的特点进行测定。地塞米松的测定因受到对羟基苯甲酸乙酯的干扰 ,所以采用双波长分光光度法进行测定。结果 :卡那霉素在 8～ 2 0 μg/ml范围内呈线性r=0 .9998,地塞米松在 1 2～ 2 0 μg/ml范围内呈线性r=0 .9998,卡那霉素和地塞米松的平均回收率分别为 X =99.92 % (RSD为 0 .4 0 % )和 X =99.52 % (RSD为 0 .4 2 % )。结论 :方法快速 ,简便、准确。

硫酸卡那霉素及其注射液的HPLC衍生化测定

以异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）为衍生试剂，用往前衍生化反相ＨＰＬＣ分离测定硫酸卡那霉素及其注射液。对杂质卡那霉素Ｂ采用归一化法进行了检查。

MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因均发生突变，基因突变率为92．86％；6株菌存在g妇基因突变，突变率为21．43％。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Kin存在较高的交叉耐药现象；rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志，为建立耐Am和（或）Km结核病快速检测技术提供分子基础。

HPLC-CAD法同时测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B的含量

目的:建立HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B含量的方法。方法:采用Boston Green ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.2 mol·L^(-1)三氟醋酸溶液-甲醇(95∶5)作为流动相,流速:1.0 ml·min^(-1),柱温:30℃,喷雾温度:55℃,喷雾压力:56.4 psi。结果:卡那霉素在0.385~38.500μg·ml^(-1)之间呈现良好的线性关系(r=0.999 9),检出限为0.075μg·ml^(-1),定量限为0.154μg·ml^(-1),回收率为100.97%(n=9)。卡那霉素B在0.374~37.400μg·ml^(-1)之间呈现良好的线性关系(r=1.000 0),检出限为0.075μg·ml^(-1),定量限为0.150μg·ml^(-1),回收率为100.44%(n=9)。结论:建立的HPLC-CAD测定卡那霉素和卡那霉素B含量的方法检出限低,操作简单准确,可以有效控制硫酸卡那霉素注射液的质量。

二阶导数高速脉冲极谱法用于卡那霉素的定量分析

将二阶导数高速脉冲极谱法用于卡那霉素及其制剂的定量分析,先将卡那霉素与茆三酮缩合,产生具有极谱活性的>C=0再行测定,于-0.37V(VSAg/AgCl)处出现良好的导数峰,在0.46～2.30×10^(-3)mol/L范围内,浓度与峰电流呈线性关系。检测限为4.6×10^(-8)mol/L。

HPLC-CAD法测定硫酸卡那霉素及注射液含量及有关物质

目的建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLCCAD)方法。方法采用Waters HSS T3色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.2 mol/L三氟乙酸水溶液为流动相,流速0.3m L/min,柱温30℃,电喷雾检测器的喷雾器温度为35℃。结果新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好,精密度、重复性、回收率均满足分析要求。卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好(R2>0.99),检出限可达到6.1ng。采用该方法对单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定,检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果。结论新建方法灵敏度更高、分离度更好,能检出更多杂质,可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求。

复方卡那霉素可溶性粉组分含量的测定

通过实验筛选,采用分光光度法测定复方卡那霉素可性粉盐酸多西环素含量,采用微生物效价测定法测定复方卡那霉素可溶性粉卡那霉素的含量,回收率分别为98.3%和98.4%,相关系数达到0.9993。方法简便,结果准确可靠。

金纳米微粒作探针共振瑞利散射光谱法测定卡那霉素

在一种含柠檬酸盐的溶液中,柠檬酸根阴离子自组装于带正电荷的金纳米微粒表面,使金纳米微粒成为一种被柠檬酸根包裹的带负电荷的超分子化合物.在pH4.4-6.8的弱酸性介质中,它可与质子化的卡那霉素(KANA)阳离子借静电引力、疏水作用力结合,形成粒径更大的聚集体(平均粒径从12增至20nm),这种聚集体的形成在引起金纳米的等离子体吸收带明显红移(△λ=102nm)的同时,共振瑞利散射(RRS)显著增强并且倍频散射(FDS)和二级散射(SOS)等共振非线性散射也有较大的增强,最大散射峰分别位于280nm(RRS),310nm(FDS)和480nm(SOS)处.在适当条件下,散射强度(△I)与卡那霉素的浓度成正比,其中RRS法灵敏度最高,因此金纳米微粒可作为测定卡那霉素的高灵敏RRS探针,它对卡那霉素的检出限为10.52ng·mL-1,方法有较好的选择性,可用于血液中卡那霉素的测定,文中还讨论了有关反应机理和RRS增强的原因.

卡那霉素对棉花下胚轴愈伤组织生长的影响

以三个具有不同特点的棉花新品系为试材的研究表明，卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显的抑制作用，随其浓度的增加，愈伤组织形成的频率降低，增殖的倍数减少；当浓度增加到１００ｍｇ·Ｌ－１时，愈伤组织严重褐化，其正常生长受到完全抑制；

卡那霉素对不同小麦品种的效应及其在遗传转化筛选中的应用

为建立利用卡那霉素筛选遗传转化小麦的有效体系,采用不同浓度的卡那霉素对小麦西农1376、郑麦9023、豫麦18、小偃22种子及幼苗进行筛选处理,并较为系统地研究了不同品种、不同时期及西农1376T1植株对卡那霉素的反应。结果表明,不同小麦品种幼苗期对卡那霉素的抗性存在显著基因型差异,同一品种存在不同的敏感时期和敏感浓度。西农1376幼苗的适宜筛选时期为三叶一心前,用20000 mg/L卡那霉素可对西农1376小麦转基因后代植株有效进行初步筛选。

卡那霉素对大豆生长的抑制及筛选试验研究

用 3个大豆品种作为研究材料 ,研究了卡那霉素对种子萌发、子叶节培养、茎尖和组培苗生根的抑制效应。结果表明不同的外植体对卡那霉素的反应存在较大的差异 ,用卡那霉素浸泡种子 ,浓度最好是 10 0 0ppm ,而种子在含卡那霉素培养基上萌发 ,一般为 10 0 - 2 0 0ppm效果较好 ,子叶节在生长培养时卡那霉素可采用 5 0 - 10 0ppm。而茎尖、子叶节组培苗 ,一旦放入含有卡那霉素培养基内 ,不论浓度多少 ,无一生根。不同的基因型亦稍有差异。所以在筛选转化子之前一定要进行临界浓度的筛选试验。

卡那霉素酶联免疫检测方法的建立及检测条件的优化

制备卡那霉素的多克隆抗体,建立了间接竞争ELISA方法,并对间接ELISA检测方法进行条件优化。结果表明:最佳实验条件是以PBS(0.01mol/L、pH7.4)作为包被液,以碳0.05mol/LpH9.6酸缓冲液加0.1%的酪蛋白封闭酶标板;最佳的抗体稀释液配方是PBST溶液加4%的聚乙二醇6000,溶液选取pH8.5为佳,二抗稀释度选择1:3000,标准品稀释液则选择0.01mol/LpH7.4的PBS溶液。最终,卡那霉素的IC50值为9.9ng/ml,最低检测限为1.0ng/ml,检测的线性范围为1～500ng/ml。

可视化凝胶酶联免疫吸附分析法检测牛奶中庆大霉素和卡那霉素

建立了牛奶中同步测定庆大霉素和卡那霉素的可视化凝胶ELISA方法。在凝胶检测柱的两个检测层中填充CN-Br活化的Sephrose 4B凝胶-羊抗鼠Ig G作为固相载体,加入药物的单克隆抗体与载体结合,酶标抗原和待测样本中的药物共同竞争有限的单克隆抗体,通过3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物显色定性判断药物的存在。本方法采用一步法,检测时间仅为15 min,对庆大霉素和卡那霉素的灵敏度为2.0μg/L,对牛奶中的两种药物检出限(Cut-off值)均为5μg/L。牛奶盲样比对实验表明,本方法与超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定结果相符。

卡那霉素在转基因小麦后代筛选中的应用研究

从转基因小麦后代分离群体中选择含有外源基因的目标植株是培育转基因小麦的重要环节。用卡那霉素筛选西农 1 376和西农 2 6 1 1小麦 ,结果表明 ,80 mg/L卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长 ;小麦不同基因型对卡那霉素的敏感性稍有差异 ;经 PCR检测 ,80 mg/L卡那霉素筛选出抗性苗的阳性率达到90 %。

CP基因转化的线辣椒抗卡那霉素和抗CMV特性的遗传

利用根癌土壤杆菌 ,采用叶盘法转化线辣椒 (Capsicum annuum var.longunt)优良品种陕 82 12 ,建成了能同时表达 CMV和 TMV外壳蛋白基因 (CP基因 )的 T1 代纯合系。以其自交 T2 ～ T4代 ,以及 T2 代植株与未转化陕 82 12杂交的 F1 代和 F2 代群体为试材 ,研究了抗卡那霉素和抗黄瓜花叶病毒 (CMV)特性的遗传传递规律。结果发现 ,抗卡那霉素标记基因和抗病性基因在自交和杂交各代都能稳定地高效表达 ;两者在自交各代纯合 ;在杂交 F1 代抗药性和抗病性都表现为显性 ;在杂交 F2 代 ,抗药植株对敏感植株 ,以及抗病植株对感病植株的分离比都符合 3∶ 1的理论比例。

黄瓜花粉管通道法抗虫基因导入及卡那霉素抗性筛选

研究了不同浓度卡那霉素(Km)对未转化黄瓜种子萌发及幼苗生长的影响,建立了转基因黄瓜卡那霉素抗性筛选体系。种子首先播在含Km 200 mg/L的1/2MS培养基中,能有效地抑制黄瓜幼苗生长,10 d后剪掉根系扦插移栽于蛭石中,能促使非转基因植株衰弱或死亡,有效地加速筛选。应用该筛选体系对花粉管通道法获得的抗虫转基因黄瓜T0种子进行初步筛选,获得Km抗性植株,抗性植株筛选率为1.6%,其中8.9%经PCR分子检测为阳性植株,初步证实EQKAM抗虫基因已整合到黄瓜基因组中。