班氏促卵助孕汤改善多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞的质量

背景:班氏促卵助孕汤改善多囊卵巢综合征卵母细胞质量的分子机制亟待完善补充。目的:探讨班氏促卵助孕汤对多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞质量的影响和分子机制。方法:21 d龄雌性昆明小鼠颈部皮下注射硫酸脱氢表雄酮构建多囊卵巢综合征模型,连续给药21 d,记录动情周期及妊娠情况,ELISA检测血清性激素水平,Annexin V染色检测卵母细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测卵母细胞内活性氧水平,免疫荧光法观察卵母细胞纺锤体及染色体情况,网络药理学及分子对接验证班氏促卵助孕汤核心有效成分与卵母细胞成熟相关因子(生长分化因子9和骨形态发生蛋白15)结合活性,实时荧光定量PCR和Western blot检测卵母细胞中生长分化因子9和骨形态发生蛋白15的mRNA及蛋白表达水平。结果与结论:①班氏促卵助孕汤中的成分(槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇)与生长分化因子9、骨形态发生蛋白15具有良好的结合活性;②班氏促卵助孕汤能恢复小鼠动情期,改善性激素紊乱和妊娠情况,降低细胞凋亡率、活性氧水平、纺锤体组装异常率、染色体丢失率(P<0.01,P<0.05),促进生长分化因子9、骨形态发生蛋白15 mRNA和蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结果表明,班氏促卵助孕汤可能通过调控生长分化因子9和骨形态发生蛋白15的基因表达,改善多囊卵巢综合征小鼠卵母细胞质量,提高生育力。

脂滴功能及其与卵母细胞成熟和胚胎发育的关系研究进展

脂滴不仅是真核细胞内贮存甘油三酯和胆固醇酯等中性脂质的重要细胞器,也是细胞代谢和细胞器质量控制的中心调控者,参与细胞能量代谢、类固醇激素合成、内质网应激、线粒体功能以及生物膜结构形成等过程的调控。目前认为脂滴合成于内质网,并以出芽的方式进入细胞质。脂滴是呈动态分布的细胞器,其数量、大小以及分布受细胞获得营养物质和代谢状态影响。众所周知,哺乳动物卵母细胞含有脂滴,且卵母细胞中含有足够数量的脂滴与卵母细胞成熟和早期胚胎发育密切相关。更重要的是,最近的研究表明,脂滴在胚胎附植着床过程中发挥了至关重要的作用,即使卵母细胞中脂滴含量较低的哺乳动物,维持适量的脂滴对早期胚胎发育也很重要。因此,本文综述了脂滴的合成与分布,分析了脂滴的主要功能,重点阐述脂滴在动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育期间的关键作用,并讨论脂滴卵母细胞和胚胎内脂滴含量与胚胎滞育持续时间的关系,以期为通过调控脂滴代谢而增强卵母细胞质量和胚胎发育能力,进而提高动物繁殖性能提供理论基础。

卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期的临床妊娠及围产期结局比较

目的:比较卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期临床妊娠及围产期结局的差异。方法:回顾性分析2011年1月至2021年6月在郑州大学第三附属医院生殖医学科接受卵裂期胚胎移植患者的临床资料。选取玻璃化冷冻卵母细胞解冻行卵胞浆内单精子注射(ICSI)后新鲜卵裂期胚胎移植周期77个(卵母细胞冷冻组),和同期利用倾向性评分1∶4匹配后得到的新鲜卵母细胞行ICSI后卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏移植周期293个(胚胎冷冻组)。比较2组移植后临床妊娠及围产期结局。结果:卵母细胞冷冻组与胚胎冷冻组临床妊娠率(50.65%vs 46.76%)、早期流产率(12.82%vs 11.68%)及活产率(37.66%vs 39.72%)差异均无统计学意义(P均>0.05),剖宫产率(79.31%vs 83.33%)、胎膜早破发生率(10.34%vs 9.65%)及妊娠期高血压疾病发生率(10.34%vs 9.65%)等差异均无统计学意义(P均>0.05),单双胎分娩早产率(18.75%vs 6.41%,46.15%vs 41.67%)、出生体重[(3449.38±485.39)g vs(3424.74±511.94)g,(2515.20±539.46)g vs(2597.08±523.44)g]差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:卵母细胞玻璃化冷冻与胚胎玻璃化冷冻移植周期临床妊娠和围产期结局相似,是一种相对安全的辅助生殖技术。

卵母细胞培养技术的研究进展

近年来,我国的不孕不育率不断升高,女性卵巢功能下降明显。卵母细胞体外培养是获取窦卵泡中未成熟的颗粒细胞-卵母细胞复合体进行体外成熟的一项技术,其在培养方式上可分为二维和三维培养,三维培养以海藻凝胶和纤维蛋白等材料构建培养环境,模拟卵母细胞的体内环境,成熟率较二维培养显著提高;在培养种类上可分为裸卵培养、颗粒细胞与卵母细胞共培养,共培养可以防止胚胎的阻滞并提高发育潜力。除卵母细胞分离培养外,还可应用卵巢组织进行体外培养,如原始卵泡体外激活,目前已有成功的临床应用案例,为卵巢早衰患者带来了希望。

卵母细胞冷冻现状

随着延缓生育趋势的逐渐上升,导致女性面临越来越多非医疗相关的生育风险。卵母细胞冷冻为女性生育力保存提供了一种选择,目前普遍采用玻璃化冷冻卵母细胞。冷冻卵母细胞既存在挑战又存在机遇,对于冷冻卵母细胞的方式方法仍旧存在缺陷,这需要生殖医学专家们共同努力来完成该技术的进一步突破。同时很多女性对年龄增加导致生育力下降的认识不足,又对辅助生殖技术可以克服这一问题有一种过于乐观的信任。所以有必要加强生育力保存相关科普,以满足大众的认知需求,提高人们对于包括冷冻卵母细胞在内的生育力保存的认知度。国家或政府也应提供相关方面的医疗保险或补贴以降低人们使用该技术的成本。

完全性大且碎裂极体卵母细胞源性胚胎FET后妊娠流产的1例病例报道

本文对1例短时受精4 h后剥除颗粒细胞均表现为不同程度大且碎裂极体的卵母细胞行全胚卵裂期冻融移植后妊娠9周流产的病例进行报道,其胚胎绒毛染色体检测结果为47,XN,+16。临床上患者所有卵母细胞均为大且碎裂极体的情况比较少见,本文结合文献分析大且碎裂极体卵母细胞的形成原因及其对受精、胚胎发育潜能和临床结局的影响。

原花青素对青春期前羔羊卵母细胞体外成熟的影响

青春期前羔羊的卵母细胞发育能力低于成年母羊的卵母细胞,这限制了幼畜体外胚胎移植(Juvenile in vitro Embryo Transfer,JIVET)技术的广泛应用。为探讨原花青素B2(Procyanidin B2,PCB2)对提高青春期前羔羊卵母细胞发育能力的影响及其机制,本研究收集了经促性腺激素刺激的4~8周龄羔羊卵母细胞,在体外成熟液中培养。在卵母细胞成熟液中添加5μg/mL PCB2作为PCB2组,未添加PCB2组为对照组,培养24 h后测定卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率,并进一步测定胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)含量、线粒体活性和线粒体膜电位水平等。结果表明:PCB2组卵母细胞第一极体排出率高于对照组(36.76%vs 31.11%,P<0.05),但卵裂率(49.17%vs 49.68%)及囊胚率(47.47%vs 54.06%)与对照组无显著差异;进一步研究发现在IVM液中添加5μg/mL PCB2降低了卵母细胞ROS水平(P<0.01),并提高了GSH水平(P<0.05)、线粒体活性(P<0.01)以及线粒体膜电位水平(P<0.05)。由此可见,在IVM过程中添加5μg/mL PCB2能有效降低青春期前羔羊卵母细胞的氧化应激,提升线粒体功能和成熟效率。

β-谷甾醇对猪卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响

旨在探索一种自然植物提取的抗氧化分子——β-谷甾醇(β-sitosterol,SITO)对猪卵母细胞体外成熟效率和早期胚胎体外发育质量的影响。本研究以在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度SITO为试验组,不添加SITO(含0.16%DMSO)的培养基为对照组,对屠宰场所得猪卵巢中收集到的卵母细胞进行体外培养,试验组浓度分别为10、20、40μmol·L~(-1),不同浓度各重复3次,每组培养卵母细胞150~200枚。培养46 h后,对卵母细胞成熟率进行统计,并收集成熟卵母细胞进行活性氧、细胞凋亡、线粒体膜电位染色以及相关基因的实时荧光定量PCR;对成熟卵母细胞进行孤雌激活,2 d后统计卵裂率,7 d后统计囊胚率,并统计囊胚细胞总数。结果发现,20μmol·L~(-1)SITO处理显著提高了猪卵母细胞的体外成熟率,且促进了孤雌激活后囊胚的形成并增加了囊胚细胞数,降低了卵母细胞中ROS含量,提高了抗氧化应激基因SOD和CAT的表达;同时,SITO降低卵母细胞的凋亡水平,增加抗凋亡基因BCL-2的表达,降低促凋亡基因Caspase 3和BAX的表达。此外,SITO可增强线粒体膜电位(ΔΨm),增加TFAM基因的表达。综上所述,本研究结果表明,在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加20μmol·L^(-1)SITO能够显著促进猪卵母细胞的体外成熟率、提高胚胎的体外发育能力和胚胎质量。

多次超数排卵对小鼠和人卵母细胞发育潜能的影响

背景:超数排卵是辅助生殖技术中常见的治疗方法。在临床实践中,一些患者需要经过多次超数排卵怀孕。目的:探讨多次超数排卵对小鼠和人卵母细胞发育潜能的影响。方法:采用动物实验和临床回顾性研究。动物实验选择90只SPF级ICR 8周龄雌性小鼠,随机分为3组,分别进行1次、3次和5次超数排卵。在临床研究中共纳入306例接受3个体外受精周期的患者,比较不同周期的获卵数和胚胎发育情况。结果与结论:①在动物实验中,多次超数排卵不影响小鼠胚胎的发育率和发育速度,且对小鼠囊胚细胞凋亡、DNA损伤、内细胞团和滋养外胚层的形成均无显著影响(P>0.05);②在临床研究中,3个周期内获得的卵母细胞数(8.60±5.04,8.58±4.87及8.38±4.63,P=0.81)和可移植胚胎数(2.42±1.99,2.40±1.92及2.64±2.00,P=0.26)均无显著差异;③对于年轻组(<35岁)和高龄组(≥35岁),胚胎质量不受超数排卵次数的影响(P>0.05);④结果显示:多次超数排卵不影响小鼠和人卵母细胞的发育潜能。

葡萄籽原花青素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本文旨在研究葡萄籽原花青素(OPC)对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。将采集的绵羊卵母细胞分为5组,对照组培养液中不添加OPC,处理组培养液中分别添加20、25、30、35μmol/L OPC,检测体外成熟24 h后卵母细胞成熟率、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、线粒体膜电位,以及卵母细胞抗氧化、卵丘扩张相关基因的表达情况。结果表明:与对照组相比,25μmol/L组卵母细胞成熟率提高,ROS水平降低(P<0.05);25μmol/L组GSH含量高于对照组及其他组(P<0.05);20μmol/L组线粒体膜电位低于对照组(P<0.05),25μmol/L组线粒体膜电位高于对照组(P<0.05);与对照组相比,25μmol/L组卵母细胞中GPX-3、SOD-2、PTX-3、HAS-2mRNA表达水平均升高(P<0.05)。由此可见,绵羊卵母细胞体外成熟培养液中添加25μmol/L OPC可提高卵母细胞体外成熟的效率。

卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1:按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个试验组:>8mm组、2～8mm组、腔前卵泡(PF)卵母细胞组和混合(将前3种卵母细胞混合)组。结果表明,卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育,同时,源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养,可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2:将源自优势卵泡(>8mm)、小卵泡(2～8mm)和混合(所有卵泡液混合)的牛卵泡液(BFF),按照10%添加到成熟培养液中,3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05),但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连,易于造成丢失。试验3:与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05),但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此,成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。

不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

微流控法制备载卵母细胞水凝胶微球及其玻璃化保存

目的通过微流控法制备载卵母细胞海藻酸钠微球,在低浓度保护剂下实现卵母细胞玻璃化保存。方法采用流动聚焦型微流控芯片,通过调整芯片结构、海藻酸钠溶液浓度和流速比,制备大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球。在低浓度低温保护剂下将微球玻璃化保存,复温后检测存活率,采用细胞松弛素B和氯化锶孤雌激活卵母细胞,与Cryotop玻璃化法对比卵母细胞存活率和卵裂率、囊胚率。结果制备的海藻酸钠微球在冷冻复温前后的体积稳定且结构完整,在将卵母细胞包封在海藻酸钠水凝胶中后,空包率低,存活率、卵裂率和囊胚率与新鲜组相比无显著差异。在低浓度低温保护剂10%DMSO+10%乙二醇(EG)+0.5 mol/L海藻糖中玻璃化冻存后卵母细胞的存活率达到92.48%,卵裂率70.80%,囊胚率20.42%,与高浓度保护剂15%DMSO+15%EG+0.5 mol/L海藻糖中Cryotop玻璃化法相比无显著性差异。结论本文设计制作了三通道内部交联芯片并用于卵母细胞玻璃化保存的微流控系统,可生成大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球,在低浓度保护剂下实现玻璃化保存,为卵母细胞玻璃化保存方法提供新思路。

褪黑素缓解双酚A诱导的猪卵母细胞氧化应激的作用机制研究

本研究旨在探究褪黑素(MT)缓解双酚A(BPA)诱导的猪卵母细胞氧化应激的作用机制。将猪未成熟的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)分为3组,其中,对照组在常规培养液中体外成熟培养44 h,BPA组在含有75μmol/L双酚A的培养液中体外成熟培养44 h,BPA+MT组的COCs先在含BPA的常规培养液中体外成熟培养18 h,再转入含10-7 mol/L MT的体外常规培养液中继续培养至44 h。成熟培养结束后,检测各组卵子成熟质量和卵子内抗氧化基因和蛋白表达等相关指标。结果显示:与对照组相比,BPA组极体率降低(P<0.05),线粒体分布不均匀(P<0.05),抗氧化酶活力下降(P<0.05),细胞成熟相关基因表达下降(P<0.05),ROS、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平上升(P<0.05),Nrf2和HO-1蛋白水平和基因表达水平上调(P<0.05)。与BPA组相比,BPA+MT组的极体率提高(P<0.05),ROS和MDA水平降低(P<0.05),抗氧化酶活力提高(P<0.05),Nrf2和HO-1的蛋白和基因表达水平下调(P<0.05)。由以上结果可知,MT通过Nrf2/HO-1通路发挥作用,减缓了BPA诱导的猪卵母细胞氧化应激损伤。

丹皮酚对大鼠卵母细胞体外成熟体系氧化应激的调控

目的 研究中药提取物丹皮酚对大鼠卵母细胞体外培养体系氧化应激的改善作用,旨在确定丹皮酚改善氧化应激作用的最佳浓度,以期优化卵母细胞的体外培养体系,提高生产效率。方法 在卵母细胞的体外培养体系中分别添加2 mmol/L、4 mmol/L、6 mmol/L、8 mmol/L、10 mmol/L的丹皮酚,研究体外成熟后卵母细胞的成熟质量和氧化应激水平。结果 添加丹皮酚均能提高卵母细胞的成熟率(P<0.05)。添加8 mmol/L的丹皮酚获得卵母细胞的GVBD率、受精率和囊胚率高于其他组(P<0.05);添加6 mmol/L、8 mmol/L和10 mmol/L组的活性氧水平较低,与2 mmol/L、4 mmol/L组具有极显著差异(P <0.01)。添加丹皮酚能够显著提高成熟卵母细胞BCL-2基因和蛋白的表达水平,降低BAX基因和Caspase-3基因和蛋白的表达水平(P<0.01)。添加8 mmol/L、10 mmol/L组较其它组差异极显著(P<0.01)。结论 在大鼠卵母细胞体外成熟液中添加8 mmol/L的丹皮酚可以提高卵母细胞的体外成熟的生产效率和质量,且能够有效改善氧化应激水平、降低卵母细胞的凋亡。

千金藤素对牛卵母细胞体外成熟中抗氧化能力的影响

为探究千金藤素(Cepharanthine,Ceph)对牛卵母细胞抗氧化能力的影响及作用机制,本实验在牛卵母细胞体外成熟培养基中添加0、10、100、500、1000μmol/L Ceph进行培养,统计第一极体排出率,筛选出Ceph的最佳浓度,根据浓度将分为对照组和Ceph处理组,通过免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)表达水平以及线粒体膜电位水平(JC-1);使用实时荧光定量PCR检测囊胚内抗氧化相关基因(SIRT-1、SOD-1、SOD-2)mRNA转录水平。结果表明:与对照组相比,添加500、1000μmol/L Ceph可显著提高牛卵母细胞第一极体排出率,而10、100μmol/L Ceph组第一极体排出率显著降低,后续采用500μmol/L Ceph用于实验;与对照组相比,添加500μmol/L Ceph显著降低了ROS水平,GSH及JC-1水平显著升高,SIRT-1、SOD-1、SOD-2 mRNA表达水平也显著升高。由此可知,在体外成熟培养基中添加500μmol/L Ceph可以缓解氧化应激损伤,维持线粒体膜电位,从而提高卵母细胞体外发育质量。

补充褪黑素的人卵母细胞体外培养成熟技术在COH周期中的应用

目的比较同一控制性超促排卵(COH)治疗周期中,体内成熟与改良技术体外培养成熟(IVM)的卵母细胞的早期胚胎发育能力及临床结局,探讨补充褪黑素的IVM技术在临床中的应用。方法收集159例患者在COH周期中的920个成熟卵母细胞进行常规体外受精(IVF/ICSI)处理,同时收集同周期中1283个未成熟卵母细胞,在添加褪黑素的改良IVM培养基中培养成熟后行ICSI处理。通过回顾性分析,比较常规助孕技术与改良IVM技术这两种方式,对辅助生殖治疗的助孕结局和妊娠结局的影响。结果与从COH周期中收集到的行常规IVF/ICSI处理的成熟卵母细胞相比,经改良IVM技术促成熟的卵母细胞的优质囊胚形成率较低。但经胚胎移植后,两种方式获得的成熟卵母细胞的临床结局包括临床妊娠率、足月产率、婴儿体长、新生儿Apgar评分,差异均无统计学意义。结论IVM可以提高从COH周期中回收的未成熟卵母细胞的卵子利用率,改善辅助生殖技术助孕患者的妊娠结局。

千金藤素对牛体外卵母细胞和早期胚胎抗凋亡能力的影响

【目的】探究千金藤素(Ceph)对牛卵母细胞及早期胚胎抗凋亡能力的影响,为提高牛体外胚胎生产效率提供参考,同时为Ceph抗癌过程中的药理作用提供新的数据。【方法】将牛卵母细胞分别在含不同浓度(0、10、100、500、1000μmol/L)Ceph的体外成熟培养液中培养,观测卵母细胞成熟率及受精后的早期胚胎发育,确定Ceph的最适浓度,并对牛卵母细胞组织蛋白酶B(CB)活性、细胞自噬相关蛋白LC3水平、凋亡相关基因Survivin和Caspase-3 mRNA表达水平及囊胚细胞凋亡率进行检测。【结果】经500μmol/L Ceph处理的牛卵母细胞成熟率及早期胚胎分裂率、囊胚率均显著高于其他组(P<0.05)。添加Ceph显著降低了牛卵母细胞CB活性和LC3水平(P<0.05),显著提高了抗凋亡相关基因Survivin mRNA表达水平(P<0.05),显著降低了促凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平及囊胚细胞凋亡率(P<0.05)。【结论】在体外胚胎生产过程中添加Ceph能够通过调控凋亡相关基因Survivin和Caspase-3的表达影响CB和LC3水平,提升牛卵母细胞抗凋亡能力和体外胚胎生产效率。

哺乳动物卵母细胞老化的相关机制研究进展

哺乳动物卵母细胞老化是一个复杂且不可逆的生物学过程,主要表现为孤雌激活和细胞凋亡。老化会引起卵母细胞发生形态结构改变和细胞器功能下降,导致卵母细胞质量下降,直接影响受精和胚胎发育的结果。目前对体外培养卵母细胞过程中老化特征、老化影响因素以及如何延缓老化等研究越来越广泛,本文将近些年卵母细胞老化特征、影响老化因素和延缓卵母细胞老化的相关研究进行综述,以期对改善卵母细胞老化及优化辅助生殖技术提供一定参考。